Basit bir ATP ölçme tahlil ve canlı/ölü boyama yöntemi ölçmek ve Neisseria gonorrhoeae hayatta kalma ceftriaxone ile tedaviden sonra görselleştirmek için kullanılmıştır. Bu iletişim kuralı herhangi bir antibiyotik antimikrobiyal etkilerini incelemek için genişletilmiş ve minimum inhibitör konsantrasyonu antibiyotik bakteriyel biyofilmler tanımlamak için kullanılır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Nicel muayene, antibiyotik duyarlılık Neisseria gonorrhoeae toplamları kullanarak ATP-kullanımı ticari deneyleri ve canlı/ölü boyama
Bu makalede
Özet
Özet
Antibiyotik dirençli Neisseria gonorrhoeae (GC) ortaya çıkması bir dünya çapında sağlık tehdidi ve tedavi başarısız bireyler belirlemek gerektiğini vurgulamaktadır. Bu gram-negatif bakteri bel soğukluğu sadece insanlarda neden olur. Enfeksiyon sırasında form toplamları ve/veya biyofilmler yapabiliyor. Minimum inhibitör konsantrasyonu (MIC) testi için antibiyotik duyarlılık belirlemek için ve uygun tedavi tanımlamak için kullanılır. Ancak, içinde vivo ortadan kaldırılması ve laboratuvar sonuçları ile ilişkisi mekanizmasının bilinen değil. Nasıl GC toplama antibiyotik duyarlılık etkiler ve toplam boyutu ve antibiyotik duyarlılık arasındaki ilişkiyi gösterir inceliyor bir yöntem geliştirildi. GC toplamak, antibiyotik öldürmeye daha dayanıklı oldukları zaman, bakteri merkezi ile ceftriaxone tedavi daha iyi daha fazla çevre olan hayatta kalmak için. Verileri N. gonorrhoeae toplama standart agar plaka tabanlı mikrofon yöntemleri kullanarak yansıtılmamış ceftriaxone onun duyarlılık azaltabilir gösterir. Bu çalışmada kullanılan yöntem araştırmacılar bakteri duyarlılık klinik koşullarda test etmek izin verir.
Giriş
Bel soğukluğu ortak bir cinsel enfeksiyon (STI)1iletilen olduğunu. Neisseria gonorrhoeae (GC), gram-negatif bir diplococcal bakteri bu hastalık hastalığının olduğunu. Genital enfeksiyonu belirtileri ağrı idrara çıkma, genelleştirilmiş genital ağrı ve üretral akıntı sırasında neden olabilir. Enfeksiyon genellikle asemptomatik2,3,4,5ve bu genişletilmiş kolonizasyon için sağlar. Bunlar tedavi edilmezse hastalık iletim organizmanın kolaylaştırmak için potansiyel var ve bu Pelvik inflamatuar hastalığa (PID) gibi k....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. genel bakım GC suşları
- N. gonorrhoeae suşları çizgi GCK agar % 1 Kellogg18 (Tablo 1, tablo 2) derin dondurucu stokları takviyeleri ve 37 ° C % 5 CO2 16-18 h. kullanım MS11 faz-değişken Opa (MS11Opa +), hiçbir Opa (MS11ΔOpa), ifade için kuluçkaya veya kesilmiş LOS (MS11ΔLgtE).
- Dikkatlice pili negatif (koloni karanlık kenarı olmayan) veya pozitif (koloni karanlık kenarı ile) kolonilerin koloni morfolojisi19 bir diseksiyon ışık mikroskobu ve yeni GCK plaka üzerine çizgi kullanarak temel her zorlanma seç.
- 16-18 h kullanmadan önce için % 5 CO2 il....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
İki yöntem istihdam: bir ATP kullanımı tahlil ve canlı/ölü boyama tahlil. Sonuçları birlikte veya ayrı ayrı toplamları içinde bakteriyel yaşam antibiyotik tedavisinden sonra incelemek için kullanılır. ATP kullanımı tahlil S. aureus biyofilmler20,21doğru canlı bakteri ölçmek için gösterilmiştir. Burada, MS11Opa + Pil + zorlanma GC toplama rolü antibiyotik duyarlılık incelemek için kullanıldı. Sigara toplanan MS11Opa + Pil .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bakteri biyofilmler insan vücudu enfeksiyon sırasında oluşabilir. Geleneksel mikrofon test bir biyofilm bakteri ortadan kaldırmak için gerekli toplama yansıtmaz. Bir biyofilm antimicrobials etkileri test etmek için yanı sıra biyofilm biyokütle esaslı CFUs kaplama yöntemleri biyofilm yapı etkisi nedeniyle hatalı olabilir. Örneğin, kaplama yöntem biricik inşaat eğer biyofilm bozulur. Bu nedenle, elde edilen CFU canlı bakteri gerçek sayısından daha düşük olabilir. Görüntülenmesi ölü ve canlı bakteri içinde biyofilm bakteri .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
Bu eser Ulusal Sağlık Enstitüsü teşkilat ve WS AI123340 için bir hibe tarafından desteklenmiştir. L.-CW, JW, A.C., ve E.N. bölümü/Maryland Üniversitesi tarafından finanse edilen "birinci sınıf yenilik & araştırma deneyimi" programına katılmak içinde desteklenen. Fon yayımlamak için çalışma tasarım, veri toplama ve analizi, karar veya el yazması hazırlanması herhangi bir rolü yoktu. UMD CBMG Imaging Core tüm mikroskobu deneyler için anıyoruz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 100x Kellogg's eki | |||
| Agar | Amerika Birleşik Devletleri Biyolojik | A0930 | |
| BacTiter Testi | Promega | G8232 | |
| Ceftriaxone | TCI | C2226 | |
| Difco GC orta taban | BD | 228950 | |
| Ferrik nitrat, nonahidrat | Sigma-Aldrich | 254223-10G | |
| Glikoz | Termo Fisher Scientific | BP350-1 | |
| L-glutamin Kristal Toz | Fisher Scientific | BP379-100 | |
| BacLight canlı/ölü boyama | Invitrogen | L7012 | |
| MS11 Neisseria gonorrhoeae suşu | , Walter Reed Ordu Enstitüsü'nden Dr. Herman Schneider tarafından nazikçe sağlanmıştır. Araştırma | ||
| Potasyum fosfat dibazik (K2< / sub>HPO<>sub4< / sub>) | Fisher Scientific | P290-500 | |
| Potasyum fosfat monobazik (KH2< / sub>PO4< / sub>) | Fisher Scientific | BP329-1 | |
| Proteoz Peptone | BD Biosciences | 211693 | |
| Sodyum klorür (NaCl) | Fisher Scientific | S671-10 | |
| Çözünür Nişasta | Sigma-Aldrich | S9765 | |
| Tiamin pirofosfat | Sigma-Aldrich | C8754-5G | |
| Ekipman | |||
| Petri Kapları | VWR | 25384-302 | |
| 8 kuyulu lamel alt haznesi | Thermo Fisher Scientific | 155411 | |
| 96 oyuklu doku kültürü plakaları | Corning, Falcon | 3370 | |
| Biyogüvenlik Kabini (NU-425-600 Sınıf II, A2 Laminer Akışlı Biyolojik Tehlike Başlığı) | Nuaire | 32776 | |
| CO2 İnkübatör | Fisher Scientific | Model 3530 | |
| Canlı görüntüleme odası ile donatılmış konfokal mikroskop | Leica | SP5X | |
| Corning 96 Kuyulu Siyah Polistiren Mikroplaka | Corning | 3904 | |
| Glomax Aydınlatıcı | Promega | E6521 | |
| Pipet uçları (0.1-10 & mikro; L) | Thermo Fisher Scientific | 02-717-133 | |
| Pipet uçları (1000 ve mikro; L) | VWR | 83007-382 | |
| Pipet uçları (200 ve mikro; L) | VWR | 53509-007 | |
| Spektrofotometre Ultrospec 2000 UV | Pharmacia Biotech | 80-2106-00 | |
| Steril 15 ml konik tüpler | VWR | 21008-216 | |
| Steril Mikrosantrifüj Tüpleri (1.7 mL) | Sorenson BioScience | 16070 | |
| Steril polyester uçlu aplikatörler | Fisher Scientific | 23-400-122 | |
| Sonikatör | Kontes | 9110001'ye |
Kaynaklar
- CDC STD Facts. Centers for Disease Control and Prevention. , Available from: http://www.cdc.gov/std/gonnorrhea/STDFact-gonorrhea-detailed.htm (2017).
- den Heijer, C. D., et al. A comprehensive overview of urogenital, anorectal and oropharyngeal Neisseria gonorr....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
