Bu iletişim kuralı fare uzun kemik ve kemik iliği makrofajlar oluşturup Osteoklastlar makrofaj koloni uyarıcı faktör (M-CSF) ve reseptör aktivatör nükleer faktör Kappa B ligand (RANKL) kullanarak üretmek için kemik iliği yalıtım, diseksiyon içerir veya tümör nekroz faktör alfa (TNF-α) ve anti-c-fms antikor, M-CSF reseptör tarafından onların tutuklama.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Osteoklast oluşumu ve hızla çoğalmak-in Vitro Osteoklast habercisi Anti-c-fms antikor etkisi
Bu makalede
Özet
Özet
Kemik remodeling karmaşık bir süreçtir ve ifade ve rezorpsiyonu dönemleri içerir. Kemik rezorpsiyonu tarafından kemik Osteoklastlar farklı uyaranlara yanıt olarak tarafından bozuldu bir süreçtir. Osteoklast öncüleri makrofaj koloni uyarıcı faktör (M-CSF) ve reseptör aktivatör nükleer faktör Kappa B ligand (RANKL) yanıt olarak multinuclear Osteoklastlar içine ayırt etmek. Patolojik koşullarda sitokin profili farklıdır ve inflamatuar sitokinlerin karışımı içerir. Bu bölgelerde inflamatuvar mekanizmaları ile ilgili büyük miktarlarda bulunur gibi tümör nekrozis faktör alfa (TNF-α) en önemli sitokinler biridir. Hangi fare kemik iliği Osteoklastlar M-CSF ve RANKL veya daha sonra anti-c-fms antikor, reseptör doz artırarak inhibe TNF-α ile indüksiyon yoluyla oluşturmak için izole bir yöntem sağlamak amacıyla bu iletişim kuralının amacı olduğunu M-CSF. Bu deney anti-c-fms antikor inflamatuar kemik rezorpsiyonu hastalıklarında tedavi edici değerini vurgular.
Giriş
Osteoklastlar uzmanlaşmış hücrelerdir ve hematopoetik kök hücre birden çok Osteoklast öncüleri füzyonu sayesinde ayırt. Onlar romatoid artrit ve periodontal hastalık1gibi inflamatuar osteolitik hastalıklarla ilişkili patolojik kemik rezorpsiyonu katkıda ve sağlıklı kemik tadilat nedeniyle gereklidir.
Osteoclastogenesis ve Osteoklast işlevi iki anahtar faktör tarafından aracılı; makrofaj koloni uyarıcı faktör (M-CSF) ve reseptör aktivatör nükleer faktör kappa B ligand (RANKL). M-CSF ve RANKL Osteoklast farklılaşma2için önemlidir. Kemik iliği makrofajlar tüp bebek üzerinden Osteoklast oluşumu ik....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm hayvan yordamlar ve hayvan bakımı Tohoku Üniversitesi kurallara ve düzenlemelere göre yapıldı.
1. fare Hindlimb diseksiyon ve işleme
- Diseksiyon önce bir tabak α-MEM konteyner boyutuna bağlı olarak yaklaşık 50 mL ile doldurun ve Buza koyun. Tüm kemikler diseksiyon tamamlanana kadar bu bir koleksiyon kapsayıcı olarak görev yapacak. Bu ve sonraki deneyler, α-MEM içeren % 10 fetal sığır serum (FBS), 100 IU/mL penisilin G ve 100 μg/mL streptomisin kullanın.
- C57Bl/6J fare %5 isoflurane aşırı dozda inhalasyon tarafından ötenazi.
- Avuç içi ve ayak ve % 70 etanol ile iyice sprey ile deldi iğne kullanarak bir sırtüstü....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bu iletişim kuralı Osteoklast oluşumu RANKL veya TNF-α huzurunda anti-c-fms antikor etkisini değerlendirmek ve M-CSF Osteoklast öncüleri yayılması üzerindeki etkisini belirlemek için amaçtır. Bu protokol için biz güvenilir bir süreç büyük miktarlarda saf Osteoklast kültürler tarafından oluşturulduğu sağladı. Biz de farklı kültür koşullar altında Osteoklast oluşumu inhibe için uygun toplama anti-c-fms antikor test etmek için bir yol sağladı.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu çalışmada, biz anti-c-fms antikor RANKL kaynaklı Osteoklast oluşumu, TNF-α-indüklenen Osteoklast oluşumu ve M-CSF-indüklenen Osteoklast habercisi yayılması üzerindeki etkisini araştırdık. Biz anti-c-fms antikor osteoclastogenesis RANKL kaynaklı Osteoklast oluşumu, TNF-α indüklenen Osteoklast oluşumu ve M-CSF-indüklenen yaygın Osteoklast öncüleri arasında inhibisyonu için etkili miktarı farklı olduğunu fark ettik.
RANKL aracılık eder osteoclastogenesis M-CSF tüp bebek huzurunda ve sırası boş.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar ifşa gerek yok.
Teşekkürler
Bu eser kısmen JSP'ler KAKENHI tarafından desteklenen bilim promosyon (No. 16 K 11776 H. K., No 17 bin 17306 K. S., No. 16 K 20637 K. K., No. 16 K 20636 M. S., No 18 K 09862 ı. M için için için için için.) Japonya toplumdan verin.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Anti-c-Fms antikoru | AFS98, bir sıçan monoklonal, antimurin, c-Fms antikoru (IgG2a) | ||
| TNF-&alfa; | Laboratuvarımızda hazırlanan rekombinant murin TNF-&alfa. TNF-&alfa; RT-PCR ile klonlanan ve bir GST-füzyon proteini oluşturmak için bir pGEX-6P-I'ye (Amersham Biosciences, Piscataway, NJ) klonlanan cDNA fragmanı. GST-TNF-&alfa; Escherichia coli BL21 hücre hücrelerinde (Stratagene, La Jolla, CA) eksprese edildi. Hücreler denatüre olmayan koşullar altında parçalandı ve GST-TNF-&alfa; bir glutatyon-Sefaroz sütunu üzerinde saflaştırıldı. GST, üretici tarafından PreScission Protease (Amersham Biosciences) tarafından ayrıldı yönleri ve bir glutatyon-Sefaroz sütunu tarafından çıkarıldı. | ||
| RANKL | PEPROTECH | 315-11 | Rekombinant Murin sRANK Ligandı, Kaynak: E. coli |
| M-CSF | Rekombinant insan M-CSF. 1/10 hacim CMG14– 5x10 < sup> 6 < / sup> nbsp'de 12 hücre hattı kültürü süpernatanı; 10 cm'lik bir süspansiyon kültür kabındaki hücreler. | ||
| α-MEM | Wako | , L-Glutamin ve fenol kırmızısı ile | |
| Fetal Sığır Serumu | Biowest | s1820-500 | Fetal Sığır Serumu Fransız Kökenli |
| Kültür kabı | Corning | 100 mm x 20 mm stil çanak | |
| 96 kuyulu plaka | Thermofischer Scientific | Nun clon Delta yüzey | |
| Hücre sayma kiti-8 | Dojindo, Kumamoto, Japonya | ||
| Mikroplaka okuyucu | Gündoğumu UZAKTAN KUMANDA; Tekan Japonya, Kawasaki, Japonya | ||
| Hücre süzgeci | Corning | 40 & mu; m Naylon | |
| Santrifüj tüpü | Corning | 50 mL CentriStar kapağı | |
| Triton X-100 | Wako | Polioksietilen (10) Oktifenil eter |
Kaynaklar
- Crotti, T. N., Dharmapatni, A. A., Alias, E., Haynes, D. R. Osteoimmunology: Major and Costimulatory Pathway Expression Associated with Chronic Inflammatory Induced Bone Loss. Journal of Immunology Research. 2015, 281287(2015).
- Teitelbaum, S. L. Bone resorpt....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
