Method Article

Woodboring Böceği uzantıları için Tarama ve İletim Elektron Mikroskobu Örnek Hazırlama Yöntemi

DOI:

10.3791/59251

⸱

February 3rd, 2020

 ,  ,  ,  , 
1The Key Laboratory for Silviculture and Conservation of the Ministry of Education, School of Forestry, Beijing Forestry University, 2School of Forestry, Inner Mongolia Agricultural University, 3Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, 4School of Forestry, Fujian Agriculture and Forestry University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Çalışmada böcek sensillasının ultrayapısını gözlemlemek amacıyla tarama ve iletim elektron mikroskobu (sırasıyla SEM ve TEM) örnek hazırlama protokolü sunulmuştur. SEM.Floresan mikroskopide örnek deformasyonu önlemek için fiksatife ara 20 eklenmiştir.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu rapor, elektron mikroskobu gözlemlerinin her iki tip elektron mikroskobu için de chlorophorus caragana Xie & Wang (2012) adlı ekinin hazırlanmasıyla ortaya çıkan tarama ve iletim elektron mikroskobu gözlemlerini tanımlamıştır. Taramalı elektron mikroskobu (SEM) numune hazırlama protokolü örnek kimyasal fiksasyon, bir dizi etanol banyosunda dehidratasyon, kurutma ve püskürtme kaplamaya dayanıyordu. Fiksatif ve yıkama çözeltisine Tween 20 (Polioksietilen sorbitan laurate) eklenerek, odun böceğinin böcek gövde yüzeyi SEM'de daha temiz bir şekilde yıkandı. Bu çalışmanın iletim elektron mikroskobu (TEM) örneklem hazırlama, fiksasyon, etanol dehidratasyonu, reçine gömme, floresan mikroskopi ile konumlandırma, kesit ve boyama gibi bir dizi adımı içeriyordu. Tween ile Fixative 20 woodboring böceğiböcek vücut duvarı daha kolay Tween 20 olmadan olurdu daha nüfuz sağladı, ve daha sonra daha iyi vücutta ki doku ve organları sabit, böylece böcek sensilla ultrastructures net iletim elektron mikroskop gözlemler ilerlemiş. Bu hazırlık bir sonraki adım hedef sensilla konumlandırma hassasiyetini artırmak için floresan mikroskopisi kullanarak reçine blok gömülü örnekböcek sensilla konumlarını belirlemek oldu. Bu gelişmiş dilimleme doğruluğu.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Taramalı elektron mikroskobu birçok morfoloji çalışmalarında önemli bir araçtır, SEM yüzey yapıları gösterir1,2. İletim elektron mikroskobu'nun cazibesi, hücre mimarisinden organellerin ultrayapısına, makromoleküler komplekslerin ve proteinlerin yapısına kadar nanometre ölçeğinde çok çeşitli biyolojik yapıları incelemek için kullanılabilmedir. TEM iç yapılarıgösterir 3,4,5.

Coleoptera yaklaşık 182 aile ve 350.000 tür de dahil olmak üzere böceklerin en büyük grubudur. Coleopteran böceklerin ....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

DİkKAT: Reaktiflerin malzeme güvenlik veri sayfalarını kullanmadan önce danışın. Numune hazırlama sırasında kullanılan kimyasalların bir çoğu toksik, mutajenik, kanserojen ve/veya reprotoksiktir. Kişisel koruyucu ekipman (eldiven, laboratuvar önlüğü, tam uzunlukta pantolon ve kapalı ayak ayakkabıları) kullanın ve numuneyi kullanırken duman kaputunun altında çalışın.

1. SEM Örnek Hazırlama ve Görüntüleme

  1. Örnek Fiksasyon ve Temizlik
    1. C. caragana meydana gelen bir alanda çalışma, isophorone16gibi bitki çekiciler ile yemli alan tuzakları içine yetişkinler çekmek. Yetişkin C. caragana te....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tween 20 ile temizlik ve fiksatif çözelti kullanılarak, Daha temiz SEM görüntü Tween 20 olmadan gözlenmiştir(Şekil 3). Tween 20 sabitleme çözeltisi dokuiçine glutaraldehit sabitleme çözeltisi nüfuz etti. Mikrotübül yapısı açıkça görüldü. Örneğin iç yapısının TEM görüntüsü Tween 20 olmadan bulanıklaşmıştır (Şekil 4).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu makalede, odunböceği için tarama ve iletim elektron mikroskobu için bir numune hazırlama şeması sunulmuştur. Böcek ekini temsili bir çalışma konusu olarak kullanarak, geleneksel numune hazırlama yöntemlerine göre çeşitli iyileştirmeler gösterdik.

Katı yüzeyden ayrılan sıvı yağ, nesnenin yüzeyinde yeniden depolamayı azaltmak için yıkama ortamına iyi dağılabilen ve askıya alınabilen küçük damlacıklara emülsifiye edilir. Yüzey aktif madde yıkama performansı ıslaklık, geçirgenlik, emülsifiye öz.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Açıklayacak bir çıkar çatışmamız yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Pekin Tarım Meslek Yüksekokulu, Atom Enerjisi Uygulama Enstitüsü (Çin Tarım Bilimleri Akademisi), Pekin OrmanCılık Üniversitesi Biyoaraştırma Merkezi ve Profesör Shan-gan'ın cömert yardımlarını takdir ediyoruz. Zooloji Enstitüsü'nden Zhang, Çin Bilimler Akademisi. Bu araştırma, Çin Ulusal Temel Ar-Ge Programı (2017YFD0600103), Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (Grant No. 31570643, 81774015), Çin Kamu Refahı Orman Bilimsel Araştırması (201504304), İç Moğolistan tarafından desteklenmiştir. Tarım Üniversitesi Yüksek Seviyeli Yetenek Araştırma Başlangıç Planı (203206038) ve İç Moğolistan Özerk Bölgesi Yüksek Öğretim Araştırma Projesi (NJZZ18047), İç Moğolistan Özerk Bölgesi....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Anatomik lensChongqing Oto Optik
limited şirketi		1425277
Karbon yapışkan bantSPI Malzemeleri, Yapı Probları Bölümü, Inc.7311
Karbon tetraklorürSigma56-23-5
Bakırızgaralar GilderGridsG300
Disodyum hidrojen fosfatSinopharm grubu kimyasal reaktif co., LTD10039-32-4
EtanolJT Baker64-17-5
Düz gömme kalıplarıHyde Venture (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.70900
Floresan mikroskobuLEICADM2500
GlutaraldehitSigma-Aldrich111-30-8Susuz EM Sınıfı
İzoforonSigma78-59-1
Kurşun sitratSigma512-26-5
MetanolSigma67-56-1
Monobazik sodyum fosfatOnun Grup kimyasal reaktif co., LTD7558-80-7
Objektif mikrometreOlympus0-001-034
Osmiyum tetroksitSigma541-09-3
Petri kabıAldrich1998
Tıraş bıçağıGillette
ReçineMahmuzluERL4221
NeşterLianhuiGB/ T19001-2008
SEMHitachiS-3400
Silika jel kurutucuSuzhou Longhui Kurutucu Co., Ltd.112926-00-8
Küçük fırçaMartolG1220
Sodyum hidroksitSigma1310-73-2
Püskürtme iyon aletiHitachi Koki Co. Ltd., Tokyo, JaponyaE-1010
Stereo mikroskopLeicaEZ4 HD
TEMHitachiH-7500
Tween 20Tianjin Damao Kimyasal Reaktif9005-64-5
UltramikrotomLeicaUC6
Ultrasonik temizleyiciGT SonicGT-X1
Uranil asetatSigma6159-44-0

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Song, Y. Q., Dong, J. F., Sun, H. Z. Scanning Electron Microscope Technology of Insect Material. Hubei Agricultural Sciences. 52, 1064-1065 (2013).
  2. Liu, C. The develo....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Scanning Electron MicroscopyTransmission Electron MicroscopySample PreparationTween 20 FixativeEthanol DehydrationFluorescence MicroscopyUltramicrotome SectioningUranyl Acetate StainingLead Citrate StainingIon Sputtering

Related Articles