Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Rats içinde bulaşıcı esneme ölçmek için bir laboratuar yöntemi

6.8K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/59289

⸱

14 Haziran 2019

 ,  ,  , 
1Laboratorio de Ecología de la Conducta, Instituto de Fisiología, Benemérita Universídad Autónoma de Puebla Pue. Mexico, 2Facultad de Medicina, Benemérita Universidad Autónoma de Puebla Pue. Mexico

Bu makalede

Özet

Burada açıklanan yöntem, tanıdık veya tanıdık olmayan erkek fareler çiftleri içinde esneme bulaşıcı eğrileri elde etmeyi amaçlamaktadır. Açık veya opak bölmeler (veya olmadan) delikleri ile ayrılmış delikler ile kafesler görsel, olfactory veya duyusal ipuçları her iki türde esneme bulaşıcı teşvik edebilir olup olmadığını algılamak için kullanılır.

Özet

İletişim hayvan sosyal yaşamın temel bir yönüdür. Hayvanlar birbirlerini etkileyebilir ve okullarda, flocks ve Herds bir araya gelebilir. İletişim aynı zamanda cinsiyeler Kur sırasında etkileşime ve rakipler mücadele olmadan ihtilafları nasıl yerleşmek yoludur. Ancak, bir iletişim işlevinin varlığını test etmek zor olduğu bazı davranışsal desenler vardır, çünkü duyusal modalitelerin çeşitli türleri büyük olasılıkla yer almaktadır. Örneğin, bulaşıcı esneme muhtemelen görme, işitme, koku, ya da hayvanların birbirleriyle aşina olup olmadığına bağlı olarak bu duyular bir arada oluşur memeliler bir iletişmeli hareket. Bu nedenle, bu tür davranışların olası iletişim rolü hakkında hipotezler test etmek için, uygun bir yöntem katılan duyusal modalities belirlemek için gereklidir.

Burada önerilen yöntem, tanıdık ve tanıdık olmayan fareler için esneme bulaşıcı eğrileri elde etmek ve görsel ve koku duyusal modalities göreli katılımı değerlendirmek amaçlamaktadır. Yöntem, ucuz malzemeler kullanır ve bazı küçük değişiklikler ile, aynı zamanda fareler gibi diğer kemirgen türler ile kullanılabilir. Genel olarak, yöntem, bitişik taraflarda delikler olan komşu kafeslerde yer alan fareler arasındaki iletişimin önlenmesine izin veren (deliksiz veya delikler içermeyen) şeffaf bölücülerin (deliklerle veya delikler olmadan) değiştirilmesi içerir. Buna göre, dört koşul test edilebilir: koku iletişim, görsel iletişim, hem görsel hem de koku iletişim, ve ne görsel ne de koku iletişim. Fareler arasında sosyal etkileşim ortaya çıktığında, bu test koşulları doğal bir ortamda neler ortaya çıkabilir simüle. Bu bağlamda, burada önerilen yöntem, biyolojik geçerliliği endişeleri artırabilir video sunumları güveniyor geleneksel yöntemlerden daha etkilidir. Yine de, duyma ve koku ve vizyon roller bulaşıcı enfeksiyon olası rolü arasında ayrımcılık yapmaz.

Giriş

Geleneksel olarak, iletişim davranışı iki perspektiften incelenmiştir. Bir bakış açısıyla, etologlar hayvanların doğal ayarlarda davranışlarını gözlemlemek ve kaydetmek ve adaptif değeri1' i tanımak için teşebbüs. Özel anlamda veya duyular bu çalışmaların birincil faiz olmamıştır. Başka bir açıdan bakıldığında, fizyologlar, hayvanların1iletişim kuracağı mekanizmaları çözerek daha fazla ilgileniyor; Bu nedenle laboratuar çalışmaları, duyusal modalitelerin iletişim2,3' te oynadığı rolü ele almak için yöntemler sağlamıştır. Bu iki perspektif gerçekten tamamlayıcı, çünkü her iki adaptif değer ve acil mekanizmalar bilgi hayvanların sosyal yaşamda iletişim davranışları kapsamlı bir anlayış elde etmek için gerekli olduğu.

Esneme davranışı omurgaları çeşitli türler davranışsal repertuar göze çarpan bir bileşenidir4, balık primatlar kadar5. Ağız ve açık konumunun Bakımı yavaş bir açılış olarak tarif edilebilir, ağız daha hızlı kapatılması takip5. Tüm dizinin süresi türe bağlıdır; Örneğin, primatlar, primat olmayan türler6' dan daha uzun süreler için esneme. Birçok tür, insanlarla istisna olmak, erkekler daha sık dişilerden daha esneme eğilimindedir7. Bu özellik, esneme olası iletişimli fonksiyonu, esneme ve günlük frekansı düzenli desenler de fizyolojik bir fonksiyon önerebilir rağmen alt olabilir. Fareler içinde, spontan esneme, sabah ve öğleden sonra8,9meydana gelen yüksek frekans doruklarına sahip bir sirkadiyen ritim izler.

Esneme davranışının ilginç bir özelliği ise, bulaşıcı bir hareket olabilir (bir davranışın serbest bırakılması uyarıcı, aynı şekilde davranan başka bir hayvan olur10) omurates çeşitli türler11,12, 13,14,15,16, kuşlar dahil17 ve kemirgenler18. Ayrıca, son kanıtlar bulaşıcı esneme bir iletişim rolü yansıtabilir göstermiştir, çünkü bir sıçan esneme başka bir fizyolojik durumunu etkileyebilir zaman koku ipuçları maruz19. Ancak, olup olmadığını esneme bir iletişim rolü hala tartışma altında20,21, ve bulaşıcı esneme analiz bu sorunu çözmek için önemli bir ilk adımdır.

Öte yandan, bulaşıcı esneme diğer hayvanların Perspektifler ile empati bir hayvanın yeteneği ile bağlantılı olmuştur; Bu nedenle, yakından ilgili bireyler daha bulaşıcı hastalık göstermek için muhtemeldir4. Bu hipotez, hayvanların video12,13üzerinde esneme uyaranlara sunuldukları laboratuar koşullarında sıklıkla test edilmiştir; Bu nedenle, bulaşıcı sadece görsel ipuçları aracılığıyla ortaya çıkabilir. Diğer araştırmalar, hayvan gruplarını kullanarak daha doğal koşullarda esneme bulaşma değerlendirmiştir14,15. Bunun önemli bir sorunu, sosyal etkileşimler genellikle duyusal modalitelerin kombinasyonlarını kullanarak iletilmiş olan ipuçları ve değişim sinyallerine yanıt verimidir. Kendi kombine etkileri belirli bir davranış dahil gerçek duyu disentangling her zaman kolay bir görev değildir. Genellikle, araştırmacılar farmakolojik veya cerrahi olarak belirli bir anlamda bir hayvanın kullanımı engel, daha sonra ilgili davranış bu anlamda rolünü anlamak2,3,18,22. Neyse ki, sadece fiziksel engelleri ya izin veya hayvanların23,24,25, böylece daha fazla biyolojik geçerlilik elde arasında iletişimi engelleyen kullanılan başka yöntemler vardır.

Burada önerilen yöntem, sosyal bir ortamda tanıdık ve tanıdık olmayan fareler içinde bulaşıcı esneme çalışması için özel olarak tasarlanmıştır. Empatik hipotezi göre, eski grup bulaşıcı esneme daha duyarlı olmalıdır. Yöntem hayvanların cerrahi veya farmakolojik olarak herhangi bir duyu yoksun gerektirmez. Bunun yerine, çukurları bitişik kafeslerde fareler yerleştirerek ve fiziksel olarak veya delikler olmadan açık veya opak bölücüler kullanarak iletişim engelleme çalışır. Bu nedenle, dört test koşulu incelenebilir: (1) koku iletişimi (OC, delikli opak bölücü), (2) görsel iletişim (VC, perforasyonlu net bölücü), (3) görsel ve koku iletişimi (VOC, delikli açık bölücü), ve (4) ne görsel ya da koku iletişim (nvoc, perforasyonlu opak bölücü). Bu nedenle, araştırmacılar, olfactory, görsel ve bir ölçüde, esneme bulaşıcı işitsel ipuçlarını göreceli katkıları karşılaştırabilirsiniz. Bu yaklaşım yeni değildir, benzer yöntemler kertenkele23 ve fareler26gibi hayvanların belirli iletişim davranışlarında yer alan duyuları izole etmek için kullanılmıştır. Aslında, Gallup ve meslektaşları27 budgerigars bulaşıcı esneme görsel ipuçlarının rolünü göstermek için benzer bir yöntem kullandık. Bu yöntemlerin başlıca özellikleri, sosyal bir bağlamda simülasyon ve hayvanların üzerine verilen minimal stres. Ayrıca, etkileşen hayvanların kullanımı sonuçların biyolojik geçerliliğini arttırır.

Bulaşıcı esneme25,28ölçmek için çeşitli yolları vardır. Dr. Stephen E. G. Lea (kişisel iletişim, 2015) bize sayısal olarak daha önce Primatologlar tarafından istihdam bir yöntem adapte oldu13,14 burada kullanılan verilerin daha önceki bir analiz için18. Bu protokolde sunulan daha geniş bir uygulama yelpazesi ile bu yöntemin gelişmiş bir sürümüdür. Bu bir sıçan 's esniyor toplam sayısını ağırlama oluşur, içinde ve belirli bir zaman penceresinin dışında, gözlem süresi içinde ve zaman penceresinin dışında esniyor karşılık gelen oranı ile.

Örneğin, bu fareler A ve B 12 dakika gözlemlenmiştir kabul edilir, onların esneme en yakın dakikada kaydedilir ve 3 dk zaman pencere bulaşıcı esneme ölçmek için ayarlanır. Sonra, bu fareler her biri için esniyor aşağıdaki sıraları kabul edilir: sıçan A (0, 0, 0, 1, 0, 0, 2, 0, 0, 0, 2, 1) ve sıçan B (0, 1, 1, 0, 1, 1, 0, 0, 0, 0,0, 3). Her bir sayı (0-3) her min puan esniyor sayısına karşılık geldiğini unutulmamalıdır. Fare A için, dakika 1, 10 ve 11 (kalın tip sayılar) sırasında, sıçan B önceki 3 dakika içinde (seçilen zaman penceresi) veya o dakika içinde esneme değildir. O dakikalar içinde, sıçan A Toplam 2 kez esnyor. Bu nedenle, herhangi bir esneme uyarıcı olmadan sıçan A esneme oranı (non-Post-esneme esneme oranı) 2/3 (i.e., 0,67 yawns/min). Kalan 9 dakika içinde, sıçan B aynı dakika ya da 3 önceki dakika en az bir kez esneye. Rat a bu 9 dakika içinde dört kez toplam esniyor. Bu nedenle, bir esneme uyarıcı (Post-esneme esneme oranı) yanıt olarak sıçan a esneme oranı 4/9 (yani, 0,44 yawns/min). Sıçan B için aynı prosedürün uygulanması, 2/3 (örneğin, 0,66) ve sonrası esneme esneme oranı 5/9 (0,55) olmayan bir post-esneme esneme oranı verir.

Öte yandan, esneme bir dakika en yakın ondalık kaydedildiğinde, esneme bulaşıcı bir ayarlanabilir Post-esneme zaman neden olacaktır. Örneğin, aşağıdaki esneme süreleri, a ve b fareler için 12 dakika gözlem süresi üzerinden kaydedildiyse: sıçan a (2,3, 5,1, 5,8, 10,4, 10,8, 11,1) ve Rat B (1,2, 2,4, 4,5, 5,1, 11,2, 11,6, 11,8). Sıçan A için, hangi sıçan B son 3 dk aralığı içinde 0 ila 1,2 dk ve 8,1 ila 11,2 dk (yani, 3,1 dk), hangi toplam verir içinde esneme değil zaman dönemleri 4,3 dakika olmayan-Post-esneme zaman. Bu zaman sırasında sıçan A esniyor üç (kalın tip sayılar), bu yüzden non-Post-esneme esneme oranı 3/4.3 (i.e., 0,69) ise, post-esneme esneme oranı 3/7.7 (yani, 0,38; payda 12-4.3 dakika). Benzer şekilde, sıçan B için, hangi sıçan a son 3 dk aralığı içinde 0 ila 2,3 dk ve 8,8 dan 10,4 dakika içinde esneme değil zaman dönemleri, hangi toplam verir 3,9 dk. Bu dönemler içinde sıçan B esniyor sayısı bir, bu nedenle olmayan-sonrası-esneme esneme oranı 1/3.9 (i.e., 0,25). Buna göre, post-esneme esneme oranı 6/8.1 (örn., 0,74).

Davranışlardaki yakın bir maç, bir salgının varlığını göstermek için ideal bir ölçüt olmakla beraber, bir bireyin neye katılmaları, bir uyarıcıya reaksiyon zamanı, zaman içinde davranışların dağılımı (örneğin, esneme bölümler ortaya çıkabilir), ve zaman deneysel ayarı tüm türler farklılıkları yükselmesine boyunca uyum sağlamasına için, zor benzersiz bir zaman penceresi kullanmak için yapma. Bu nedenle, araştırmacılar, sonuçlar28' i karşılaştırırken sorunlar yaratan saniye5 ' ten birkaç dakika11' e kadar değişen zaman pencereleri kullanmış olabilir. Bu nedenle, bir dizi zaman pencereleri için yukarıda açıklanan prosedür tekrarlamak için önerilen esneme enfeksiyon eğrileri elde etmek ve türler arasında esneme bulaşıcı eğrileri karşılaştırmak.

Eşdeğer esneme bulaşıcı eğriler, gözlem döneminde her sıçan için gözlenen esniyor sayısını rasgele dağıtarak karşılaştırılabilir. Böylece, önerilen yöntem esneme bulaşma ölçmek için iki tür kontroller sunar: (1) zaman penceresinin dışında meydana gelen esneme oranı (non-Post-esneme zaman) ve (2) yapay esneme bulaşıcı eğrisi esneme sayısının rasgele dağılımı elde. Bu nedenle, bu yaklaşım esneme bulaşıcı analiz etmek için bu pencere25dışında meydana gelen bir tek zaman penceresi içinde esneme yüzdesi veya sıklığı karşılaştırarak gibi diğer prosedürlerden ileri bir adımdır, dikkate almadan gerçek kez çerçeveleri. Yöntem bir R tabanlı program tarafından tamamlanır29 uygun ve objektif bir veya daha fazla zaman pencereleri için bulaşıcı esneme olasılığını hesaplamak.

Bu yöntemin kullanışlılığını ve R tabanlı programın avantajlarını göstermek için, önceden yayımlanmış bir çalışmada18 ' den oluşan bir veri kümesi kullanılır. Deneysel durum, tanıdık veya tanıdık olmayan bir duruma ayrılan 144 erkek fareler oluşur. Her deneysel koşulda fareler dokuz çift dört alt gruba bölünmüştür ve yukarıda açıklanan dört test durumlarında herhangi maruz. Her deneysel durumda ve test durumunda fareler esneme davranışları daha sonra 60 dk bir süre içinde kaydedildi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Deneysel protokoller ve Hayvancılık kurumsal yönergelere uygun olarak yürütülmüştür.

1. malzemeler

  1. Malzeme tablosundayöntemi uygulamak için kullanılan malzemelerin tam bir listesini bulun. Şekil 1 ' i kullanın ve ters T şeklinde bir masa, gözlem kafesi ve kafes bölücüler oluşturmak için uzman tavsiyesi isteyin. Keskin aletler ve potansiyel olarak tehlikeli malzemelerin kullanımı için güvenlik göstergelerini takip edin.
  2. İki demiryolu gibi ahşap çubukları (45 cm uzunluğunda, birbirinden 0,6 cm ayrılır) üst ve bir ağaç parçasının ortasında (100 cm x 45 cm x 1,5 cm) yapıştırarak ters T şeklindeki bir tablo yapın. Sonra, demiryolu benzeri çubuklar arasında dikey olarak ikinci bir ağaç (50 cm x 45 cm x 0,6 cm) yerleştirin. Bu ikinci ahşap parçasının, bir tarafta bulunan fareler çifti, diğer çifti karşı tarafta görmesini önler (Şekil 1).
  3. Sekiz gözlem kafesleri oluşturmak için cam ve akrilik kullanın. Her bir kafes (19 cm genişliğinde, 19 cm uzunluğunda, 10 cm yüksekliğinde, 3 mm kalınlığında), kenarlarından birinin ortasında üç satırda düzenlenmiş 24 adet eşit uzak delik (5 mm çap) bulunduğundan emin olun. Akrilik (3 mm kalınlığında) bu tarafı olun ve 0,7 cm karşı tarafın yüksekliğini kısaltmak sıçan nefes izin vermek.
    1. Her gözlem kafesi, 60 dk gözlem döneminde, sıçan yetiştirme ve kendini rahatsız edici önlemek için akrilik yapılmış bir sürgülü kapak olduğundan emin olun.
  4. Akrilik dört bölücüler (19 cm genişliğinde, 30 cm yüksekliğinde, 3 mm kalınlığında) olun. Her biri açık bölücü ve bir opak bölücü olan gözlem kafeslerine uyan 24 delik (5 mm çapında) matkap.
  5. Yawns oluşumunu kaydetmek için önceden veri sayfalarını hazırlayın. Her veri sayfasının başlığına, gözlemci adının, deneysel koşul (yani, tanıdık veya tanıdık olmayan fareler), ilgili test durumu (OC, VC, VOC, NVOC), tarih ve gözlem ilk ve son süreleri dahil. İki sütuna, her sıçan üst kısmında yazılmış sayısı ile, fareler esneme davranışını kaydetmek için veri sayfasının geri kalanı bölmek.

2. prosedür

  1. Ev 144, plastik kafeslerde (ev kafesleri) dört grupta erkek fareler, onlar kadar 2,5 ay yaş ulaşıncaya kadar sütten. Onlar hormonal döngüleri nedeniyle davranış daha fazla varyasyon göstermek eğilimindedir, çünkü kadın fareler kullanmayın, hangi test durumunun etkileri ile karıştırılabilir. Her kafeste fareler kardeş olmadığından emin olun.
    Not: tüm fareler birlikte elde etmek zor olabilir. Bu durumda, her test durumu30deneysel durumda bir kez temsil böylece en az 8 tanıdık fareler ve 8 tanıdık olmayan fareler blokları oluşturun.
  2. Fareler tanımlamak için, bir ticari marker kullanarak kuyruklarda sembolik sayılar ile işaretleyin. Örneğin, noktalar ve çizgiler (örn. 1 numara için bir nokta ve 4 numara için bir satır) birleştirerek 1 ile 4 arasındaki sayıları temsil eder. Farklı renkler kullanarak tanıdık ve tanıdık olmayan fareler belirleyin.
    Not: hayvan tesisi personeli tarafından sağlanan güvenlik yönlerinin ardından fareler ele ve deneyler yapılacaktır kurum laboratuar hayvanların doğru kullanımı ile ilgili öneriler uymak.
  3. Rasgele hangi ev kafesleri tanıdık fareler grubu ev ve tanıdık olmayan grup ev olacak seçin. Örneğin, dört ev kafeslerinde yaşayan 16 kullanılabilir fareler olduğunu varsayalım: sayı ev kafesleri 1 için 4, sonra R kullanın (http://cran.r-project.org/at indir) aşağıdaki gibi [istemi (>)] sonra:
    > örnek (4, 4)
    [1] 4 3 2 1
    1. Ev kafesleri 4 ve 3 ' te tanıdık (veya tanıdık olmayan) fareler gruplandırın ve ev kafesleri 2 ve 1 ' de tanıdık olmayan (veya tanıdık) fareleri gruplandırın. Hayvan tesisi personelinin her kafesin Kimliğini koruduğu ve fareler tarafından hayvan tesislerinde bulunan diğer tüm farelerle aynı şekilde işlediğini emin olun.
    2. R programı yeniden kullanın ve rasgele her deneysel durumda her çifti oluşturmak için fareler seçin. Tanıdık fareler her çifti fareler aynı ev kafesi kaynaklanan emin olun, ve tersi bilindik grupta çiftleri için doğru olduğundan emin olun. Rasgele her deneysel durumda her test durumu için sıçan çiftleri seçin.
  4. Test oturumu başına sekiz olası test durumlarında (dört her tanıdık ve tanıdık olmayan fareler için) iki günde iki test seansı gerçekleştirin (örn. 60 min gözlem süresi). İki test seanslarını ardışık olarak 3 saat içinde gerçekleştirin.
    Not: tüm test oturumları (günde dört çift sıçan) ya da sabah veya öğleden sonra herhangi bir şaşırtıcı etkenleri önlemek için yürütmek emin olun. Denemenin ardışık iki gün boyunca tam bir çoğaltır (sekiz test durumu) çalıştırın.
    1. Deneme her çoğaltır için rasgele bir sırada test durumları kullandığınızdan emin olun. Örneğin, her test durumunu tanımlamak için 1 ile 8 arasındaki sayıları kullanın, ardından R 'yi aşağıdaki gibi kullanın:
      > örnek (8, 8)
      [1] 8 7 4 6 5 1 2 3
    2. Test durumları 8 ve 7 oturum 1, test durumları 4 ve 6 oturumu test etmek için test etmek için tahsis 2, vb. Sonra, rasgele her sıçan çifti (test durumu) yerleştirilecektir ters T şeklinde tablonun yan seçin.
  5. Denemenin ikinci bir çoğaltılması (örn. blok) için aynı yordamı (2,3 adımları, 2.4.2) yineleyin.
    Not: çalışmanın amacı, bir sosyal durumun (yani, iki etkileşen sıçan) esneme frekansında etkilerini test etmek ise, dört test durumlarında her biri için bir kontrol olarak boş bir gözlem kafesi yanında bir gözetleme kafesi yerleştirilen bir sıçan kullanın. Sekiz sıçan bir kontrol grubu için her test durumu için bu deneme 2x gerçekleştirin.
  6. Hayvan tesisinden gözlem odasına ilk dört sıçan aktararak test oturumu kurmak, onlar için kalacak 15 dakika yeni çevreye gelmesini. Fareleri bireysel kafeslerde taşıma ve taşıma sırasında ve gözlem odasında birbirlerinden ayrı tutun.
    Not: hayvan tesisi personeli tarafından sağlanan hayvanların taşınması için güvenlik talimatlarını Izleyin ve laboratuvardaki hayvanlarla çalışmak için belirtilen giysileri kullanın. Onlar gözlem odasında iken fareler yiyecek ve su erişimi olmayacaktır.
  7. İklimlendirme süresi geçtikten sonra, tersine çevrilmiş T şeklindeki masayı daha büyük bir dikdörtgen tabloya yerleştirin. Gözlemler yaparken odayı yeterince aydınlaten bir tavan lambası olduğundan emin olun.
  8. Her gözlem kafesi altına filtre kağıdı koyun ve ters T şeklinde tablonun her tarafında çiftleri içinde kafesleri yerleştirin. Her kafes çifti arasında ilgili bölücü konumlandırın.
    Not: filtre kağıdı, kafesleri temizlemeyi kolaylaştırır ve fareler kaymadan hareket ettirebilir kaba bir yüzey sağlar.
  9. Stratejik olarak her bir sıçan çifti esneme davranışını her kayıtları gibi iki dijital kameralar yerleştirin. Kameralar güvenli bir şekilde tripodlar sabit ve doğru gözlem kafeslerine odaklı olduğundan emin olun. Aynı anda fareler davranışını izlemek için bir masaüstü bilgisayara kameralar bağlayın.
    Not: deneysel oturumları kalıcı olarak arşivlemek için dijital bilgileri flash sürücülerde saklayın. Yüksek depolama kapasitesine sahip Flash sürücüler kullanın.
  10. İklimlendirme döneminin ardından, daha önce belirlenen tahsisat uyarınca fareleri gözlem kafeslerine yerleştirin. Kamera otomatik odağı ayarlayın ve bir kronometre ile aynı anda video kaydını başlatın. 60 min gözlem döneminin sonunda video kaydını durdurun.
    Not: denemeler, test oturumu sırasında odanın dışında olabilir ve uzaktan gözlemlenirken, bir kişinin gözlem odasında (deneysel ayardan mümkün olduğunca uzağa), fareler davranışlarını izlerken test oturumunun kesintisiz olarak devam etmesini sağlayın.
  11. Gözlem bittikten sonra, fareler hayvan tesislerinde onların ev kafesleri dönün. Hayvan tesisi personeline, fareler tekrar yiyecek ve suya erişebilmesini isteyin. Zehirli olmayan bir deterjan kullanarak gözlem kafesleri iyice temizleyin ve günün ikinci ve son test seanslarını gerçekleştirmek için deneysel seti hazırlayın.
    Not: bir sonraki sıçan çifti davranışını etkileyebilir gözlem kafesleri yerleştirilen fareler tarafından sol herhangi bir koku kaldırmak için ahşap temiz test.
  12. Bir tüm oluşum örnekleme yöntemini kullanarak esneme belirlemek ve kaydetmek için atanan tedaviler için kısmen kör bir iki gönüllüyü eğitmek. Gözlemcilerin, giriş bölümünde açıklanan esneme tanımını kullandığınızdan emin olun.
  13. Herhangi bir standart oynatma sistemi kullanarak bir bilgisayar ekranında geri oynatma ve her videoyu proje. Gözlemci her videoyu görüntülemek ve gözlemlemek ve daha önce hazırlanmış veri sayfalarını kullanarak esneme davranışını kaydetmek için, sonra onu/onu gözlemlemek ve esneme ölçmek yeteneğini artırmak için daha yavaş hızlarda videoları incelemek için izin isteyin.
    1. Aşağıdaki benzer bir gösterim sistemi kullanarak esneme puanı gözlemciler isteyin: bir esneme oluşumunu temsil etmek için bir üst simge olarak yazılmış dakika ile dikey çizgiler kullanın (örn., | 3 | | 6 | | 9, dakika 3 bir esneme gösteren, iki dakikada 6 ve bir esneme 9 dakika içinde esneme). Bir dizi olarak esneme puanı (örneğin, 1.2, 2,2, 3,2, 5,0, 5,8) daha büyük hassasiyetle kaydetmek için (dakika bir ondalık basamak yuvarlanır).
    2. Alternatif olarak, doğrudan standart veri toplama programları kullanarak bir bilgisayara video verileri girin. Gözlemci bu tür programlarla tanışmış emin olun.
      Not: gerekirse, gözlemci her videoyu birden fazla oturumda görüntülemesine izin verir. Bir gözlemci, bir deney bloğuna karşılık gelen tüm videoları görüntülerinden emin olun. İki farklı gözlemci bu videoları inceledi, onların yeteneklerini gözlemlemek ve esneme kayıt farklılıkları test durumların etkilerini tutacak bir risk olabilir. Bu esneme aynı şekilde açıklamalı emin olmak için videoların% 10-20% üzerinde farklı gözlemci arasında gözlemci içi güvenilirlik puanı önemlidir.

3. veri işleme

  1. Veri sayfasından bir e-tabloya kadar her bir sıçan içinde geçici dizi esniyor transscribe. Her sıçan için kısa başlığa sahip bir sütun olduğundan emin olun (örn. fr1. l ve fr1. r, sırasıyla sol ve sağ taraftaki ilk tanıdık fareler çiftini gösterir). Boş hücreleri 0 veya NA ile doldurarak tüm sütunların aynı uzunlukta olduğundan emin olun (aşağıya bakın).
    Not: verileri işlemek, bulaşıcı esneme ölçmek ve bulaşıcı esneme eğrileri elde etmek için aşağıdaki adımları tam olarak anlamak için ek bir belge olarak sağlanan genel kılavuzu kullanın.
    1. Eğer esneme en yakın dakikaya kaydedildiyse, ilgili her dakikada esniyor sayısını yazın ve belirli bir dakikada hiçbir esneme oluştuğunda hücreleri doldurmak için 0 (hiçbir esneme) kullanın. Çalışma sayfasını bir metin dosyası (. txt) olarak kaydedin.
    2. Eğer esneme bir dakika en yakın ondalık olarak kaydedilmiş ise, sıra üst aşağı yazın ve "na" sütunların boş alanları doldurmak için kullanın (Rats) hangi esniyor (satırlar) sayısının daha düşük bir r için kaydedilen esniyor en fazla sayı (satır) ile sütun daha düşüktür tesisinde. Çalışma sayfasını bir metin dosyası (. txt) olarak kaydedin.
      Not: R boş hücrelerle çalışma yeteneğine sahip olduğu gibi çalışma sayfası farklı uzunlukları sütunlarla kaydedilebilir. Eksik verileri işlemek için R tarafından sağlanan yardım seçeneklerini kullanın.
  2. Başlat R. verileri daha önce bulunduğu dosyadan Içe aktarın.
  3. Program kodlarını uzantıyla kaydedin ". R "(ek malzeme olarak sağlanan), daha sonra belirli program kodunu indirin (genel kılavuza bakın) ister esnniler tamsayılar veya kesirli sayılar olarak kaydedildi bağlı. Her sıçan çifti ve zaman diliminin istenilen sayısı için programı çalıştırın.
    1. Şimdi her sıçan (genel kılavuzuna bakın) esniyor sayısının rasgele bir dağılım kullanarak, tekrar programı çalıştırın. Tüm deneysel koşullar (yani, tanıdık ve tanıdık olmayan fareler) ve/veya tüm test durumları için aynı adımları izleyin (adım 3,3 için 3.3.1). Genel kılavuzda belirtildiği gibi devam edin ve sonuçları Excel 'e dışa aktarın.
      Not: daha önce kaydedilmiş bir programı almak yerine, yukarıda önerilen bir metin düzenleyicisi kullanarak, kopyalayın ve doğrudan R 's çalışma alanına program yapıştırın.
  4. Esneme bulaşıcı eğrileri oluşturmak için, daha önce bir elektronik tabloya kaydedilmiş verileri kullanın. Her sıçan çifti, zaman penceresi ve test durumu için enfeksiyon oranlarından bulaşıcı olmayan oranları çıkarın. Gözlenen verilerin ve yapay (rasgele dağıtılmış) verilerin analizlerini ayırın.
    1. Ardından, her zaman penceresi için güven aralıklarını (CI) hesaplayın ve bir Bootstrap yordamını kullanarak test durumu yapın (genel kılavuza bakın). Tanıdık ve tanıdık olmayan fareler için analizleri ayırın. Ardından, her deneysel koşul için dört test durumundan yapay verileri birleştirin ve bir Bootstrap prosedürü kullanarak her zaman penceresi için CI 'yı hesaplayın.
    2. Ardından, her test durumu ve deneysel koşul için grafikler oluşturun (bkz. Şekil 2 ve Şekil 3). Son olarak, test durumları arasında esneme bulaşıcı yoğunluğunu karşılaştırmak için birden fazla regresyon analizi gerçekleştirin (aşağıya bakın).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Fareler, sık esneme için seçilmiş olan Sprague-Dawley fareler daha önce üretilen bir alt çizgi seçildi (yaklaşık 22 saat başına esniyor31). Ancak, dokuz çift aşina olmayan ve dokuz çift tanıdık erkek fareler (arasında 2,5 ve 3 ay yaş) test durumu başına yaklaşık olarak esneme 12 saat başına kez, ortalama18. Bu nedenle, test durumları esneme davranışı kısmen engellenmiş esneme bulaşıcı ölçmek için.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Başarılı sonuçlar elde etmek için dikkate alınmalıdır yönteminde kritik adımlar vardır. Tanıdık sıçanlar, en az 1,5 ay boyunca, ağladıktan sonra ve denemeleri çalıştırmadan önce ev kafeslerini paylaşmalıdır. Ancak, tanıdık olmayan fareler ayrı ev kafesleri içinde yaşamalıdır. Her iki durumda da, fareler çiftleri farklı litterlerden gelmelidir ama mümkün olduğunca yaşlarda benzer olmalıdır. Gözlem kafesleri ile ilgili olarak, onların delikler bölücülerde bu maç olmalıdır, çünkü bu fareler arasında koku temas garanti etmek...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar hiç bir ilgi çatışması bildirmiyor.

Teşekkürler

A. M. kısmen Vicerrectoría de Docencia, Benemérita Universidad Autónoma de Puebla tarafından finanse edilmiştir. Özellikle hayvan tesisi "Claude Bernard" kadrosuyla ateş için fareler kullanımı için borçlanmış bulunuyoruz. Biz bu makalenin erken sürümlerinde onların yorum için anonim hakemler teşekkür ederiz. Sunum, daha az sert ve daha dengeli onların düşünceli yorumlar nedeniyle

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Akrilik bölücülerEl yapımıMevcut değilBiri şeffaf diğeri opak olmak üzere iki bölücünün her biri 24 delikli olacaktır. Biri açık diğeri opak olan diğer iki bölücüde delik olmayacaktır. İnşaat detayları için ana metne bakınız.
R tabanlı bir programolan Benemé rita Universidad Autó noma de PueblaMevcut değilBu, sıçanlarda esneme bulaşmasını değerlendirmek için kullanılan programdır. Programın nasıl kullanıldığı hakkında bilgi için ana metne bakın.
Veri sayfalarıKullanıcı bunları detaylandırabilirMevcut değilBu formlar, gözlemcinin video kayıtlarını izleyerek esneme davranışının sıklığını kaydetmesi için kullanılacaktır. Alternatif olarak, ana metinde verilen önerilere uymanız koşuluyla bir not defteri kullanılabilir.
Masaüstü bilgisayarHerhangi bir üreticiMevcut değilBilgisayarın, esneme davranışının video kayıtlarını rahatça işleyebilen bir ekran kartına sahip olduğundan emin olun.
Dijital video kameralarHerhangi bir üreticiMevcut değilHer bir fare çiftinin esneme davranışını videoya kaydetmek için kullanılacaklar; deney oturumu başına 2 çift sıçan olacak.
Flash sürücüHerhangi bir yapımcıMevcut değilHer deney oturumu 60 dakika sürecektir ve bu nedenle video kaydını saklamak için yeterli belleğe ihtiyacınız olacaktır.
Cam kafeslerEl İşiMevcut değilHer kafes (19 X 19 X 10 cm yükseklik), bir kenarının ortasında üç sıra oluşturan 24 deliğe (0,5 cm çapında) sahip olacaktır. Yapıları hakkında daha fazla ayrıntı için ana metne bakın. Bunlardan birinin kazara kırılması ihtimaline karşı fazladan bir kafes imal edilmesi tavsiye edilir.
İşaretleyicilerSharpie veya başka bir yapımcıMevcut değilFareleri numaralandırmak için kalıcı işaretler. Farenin kuyruğunda boyama sembollerini kullanmanın bir yolunu görmek için ana metne bakın.
KalemlerHerhangi bir yapımcıMevcut değilGözlemci tarafından esneme sıklığını kaydetmek için kullanılırlar. Gözlemcinin daha önce esneme davranışını tanımak ve video oynatıcı sistemini çalıştırmak için eğitilmiş olması önemlidir.
R yazılımıR Geliştirme Çekirdek EkibiMevcut değilR'yi şu adresten indirin: http://cran.r-project.org/  
Ray benzeri ahşap çubuklarEl yapımıMevcut değilDikdörtgen ahşap levhanın ortasına sabitlenecekler ve ikinci bir ahşap levhanın yerleştirildiği bir ray oluşturacaklar. İnşaat için ek talimatlar için ana metne bakın.
Dikdörtgen tablaHerhangi bir yapıcıMevcut değilBu, esneme davranışının gözlemlenmesi için ters T şeklindeki masanın yerleştirileceği masadır (yaklaşık 2 x 1 m).
Sprague-Dawley erkek sıçanlarHerhangi bir yerel laboratuvar hayvanı tedarikçisiMevcut değilHer grup için, tanıdık ve tanıdık olmayan sıçanlar için test durumu başına dokuz çift erkek sıçan gereklidir, çünkü bu örneklem büyüklüğü ile esneme sıklığında var olabilecek bireyler arası varyasyon, verilere yapılan istatistiksel analizden çıkarılan sonuçları ciddi şekilde etkilemeyecektir.      
Elektronik tablo yazılımıMicrosoftKullanılamazExcel, başlangıçta veri sayfalarına kaydedilen esneme kayıtlarını depolamak için kullanılan yazılım olacaktır. Transkripsiyonu yapmanın önerilen yolu hakkında talimatlar için ana metni gözden geçirin.
Kare filtre kağıtlarıHerhangi bir yapıcıMevcut değilKafesin tabanını kaplamak için kullanılırlar.
TripodlarHerhangi bir yapımcıMevcut değilVideo kameraları her bir gözlem kafesi çiftinin önüne sabitlemek için kullanılacaktır.
Ahşap Ters T şeklinde masaEl yapımıMevcut değilNasıl yapıldığını görmek için ana metindeki talimatları okuyun. Tercih edilirse ahşaba göre farklı bir malzeme kullanılabilir. Herhangi bir malzemenin, farelerin iletişim için kullanabileceği ultrasonların iletilmesine mümkün olduğunca dirençli olduğundan emin olun.  

Kaynaklar

  1. Cézilly, F. A. History of Behavioural Ecology. Behavioural Ecology. Danchin, E., Giraldeau, L. A., Cézilly, F. , Oxford University Press. 3-27 (2008).
  2. Medina, L. M., Garcia, C. M., Urbina, A. F., Manjarrez, J., Moyaho, A. Female vibration discourages male courtship behaviour in the Amarillo fish (Girardinichthys multiradiatus). Behavioural Processes. 100, 163-168 (2013).
  3. Mekdara, P. J., Schwalbe, M. A., Coughlin, L. L., Tytell, E. D. The effects of lateral line ablation and regeneration in schooling giant danios. Journal of Experimental Biology. 221 (8), 175166(2018).
  4. Walusinski, O. Contagious Yawning. Encyclopedia of Animal Cognition. Vonk, J., Shackelford, T. K. , Springer Nature. Switzerland. 1-5 (2018).
  5. Baenninger, R. Some comparative aspects of yawning in Bettasplendens, Homosapiens, Pantheraleo, and Papio sphinx. Journal of Comparative Psychology. 101 (4), 349-354 (1987).
  6. Gallup, A. C., Church, A. M., Pelegrino, A. J. Yawn duration predicts brain weight and cortical neuron number in mammals. Biology Letters. 12, 20160545(2016).
  7. Baenninger, R. On yawning and its functions. Psychonomic Bulletin and Review. 4 (2), 198-207 (1997).
  8. Anías, J., Holmgren, B., Urbá-Holmgren, R., Eguíbar, J. R. Circadian variation of yawning behavior. Acta Neurobiologiae Experimentalis. 44 (4), 179-186 (1984).
  9. Holmgren, B., et al. Food anticipatory yawning rhythm in the rat. Acta Neurobiologiae Experimentalis. 51 (3-4), 97-105 (1991).
  10. Byrne, R. W. The evolution of intelligence. Behaviour and Evolution. Slater, P. J. B., Halliday, T. R. , Cambridge University Press. Cambridge. 223-265 (1994).
  11. Provine, R. R. Yawning as a stereotyped action pattern and releasing stimulus. Ethology. 72 (2), 109-122 (1986).
  12. Provine, R. R. Faces as releasers of contagious yawning: An approach to face detection using normal human subjects. Bulletin of the Psychonomic Society. 27 (3), 211-214 (1989).
  13. Anderson, J. R., Myowa-Yamakoshi, M., Matsuzawa, T. Contagious yawning in chimpanzees. Proceedings of the Royal Society B: Biological Sciences. 271 (Suppl 6), S468-S470 (2004).
  14. Palagi, E., Leone, A., Mancini, G., Ferrari, P. F. Contagious yawning in gelada baboons as a possible expression of empathy. Proceedings of the National Academy of Sciences. 106 (46), 19262-19267 (2009).
  15. Romero, T., Ito, M., Saito, A., Hasegawa, T. Social modulation of contagious yawning in wolves. PLoS One. 9 (8), e105963(2014).
  16. Yonezawa, T., Sato, K., Uchida, M., Matsuki, N., Yamazaki, A. Presence of contagious yawning in sheep. Animal Science Journal. 88 (1), 195-200 (2017).
  17. Miller, M. L., Gallup, A. C., Vogel, A. R., Vicario, S. M., Clark, A. B. Evidence for contagious behaviors in budgerigars (Melopsittacus undulatus): an observational study of yawning and stretching. Behavioral Process. 89 (3), 264-270 (2012).
  18. Moyaho, A., Rivas-Zamudio, X., Ugarte, A., Eguíbar, J. R., Valencia, J. Smell facilitates auditory contagious yawning in stranger rats. Animal Cognition. 18 (1), 279-290 (2015).
  19. Moyaho, A., Flores Urbina, A., Monjaraz Guzmán, E., Walusinski, O. Yawning: a cue and a signal. Heliyon. 3 (1), e00437(2017).
  20. Gallup, A. C. Why do we yawn? Primitive versus derived features. Neuroscience&BiobehavioralReviews. 35, 765-769 (2011).
  21. Gallup, A. C., Clark, A. B. Commentary: Yawning, acute stressors, and arousal reduction in Nazca booby adults and nestlings. Frontiers in Psychology. 6, 1654(2015).
  22. Fentress, J. C. Development of grooming in mice with amputated forelimbs. Science. 179 (4074), 704-705 (1973).
  23. Nicoletto, P. F. The roles of vision and the chemical senses in predatory behavior of the skink, Scincella lateralis. Journal of Herpetology. 19 (4), 487-491 (1985).
  24. Fehér, O., Wang, H., Saar, S., Mitra, P. P., Tchernichovski, O. De novo establishment of wild-type song culture in the zebra finch. Nature. 459 (7246), 564-568 (2009).
  25. Kapitány, R., Nielsen, M. Are yawns really contagious? A critique and quantification of yawn contagion. Adaptive Human Behavior Physiology. 3 (2), 134-155 (2017).
  26. Langford, D. J., et al. Social modulation of pain as evidence for empathy in mice. Science. 312 (5782), 1967-1970 (2006).
  27. Gallup, A. C., Swartwood, L., Militello, J., Sackett, S. Experimental evidence of contagious yawning in budgerigars (Melopsittacus undulatus). Animal Cognition. 18, 1051-1058 (2015).
  28. Campbell, M. W., de Waal, F. B. Methodological Problems in the Study of Contagious Yawning. The mystery of yawning in physiology and disease. Walusinski, O. , Karger Publishers. Basel. 120-127 (2010).
  29. R Development Core Team. R: A language and environment for statistical computing. , R Foundation for Statistical Computing. Vienna, Austria. http://www.R-project.org (2009).
  30. Moyaho, A., Beristain-Castillo, E. Experimental Design: Basic Concepts. Encyclopedia of Animal Behavior. Choe, J. C. 3, Second Edition, Academic Press. 471-479 (2019).
  31. Urbá-Holmgren, R., et al. Genotypic dependency of spontaneous yawning frequency in the rat. Behavioral Brain Research. 40 (1), 29-35 (1990).
  32. Smith, M. L., Hostetler, C. M., Heinricher, M. M., Ryabinin, A. E. Social transfer of pain in mice. Science Advances. 2, e1600855(2016).
  33. Joly-Mascheroni, R. M., Senju, A., Shepherd, A. J. Dogs catch human yawns. Biology Letters. 4 (5), 446-448 (2008).
  34. Barthalmus, G. T., Zielinski, W. J. Xenopus skin mucus induces oral dyskinesias that promote escape from snakes. Pharmacology Biochemistry and Behavior. 30 (4), 957-959 (1988).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

S an DavranKokuyla leti imG rsel leti imG zlem KafesleriVideo KaydVeri AnaliziR ProgramlamaEsneme Bula ma E rileriDuyusal Modaliteler
Rats içinde bulaşıcı esneme ölçmek için bir laboratuar yöntemi
Bize ulaşın
Kütüphaneye tavsiye et

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.