Bu çalışma, bir hücre süspansiyon kültürü çay (Camellia sinensis L.) bu böcek ilaçları gibi tüm bitki tarafından alınabilir dış bileşiklerin metabolizmasını incelemek için kullanılabilir yaprakları türetilen kurulması için bir protokol sunuyor.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Çay (Camellia sinensis L.) türetilmiştir yeni kurulan hücre süspansiyon kültürü altı sistemik Böcek Ilacı metabolizması üzerinde çalışma Yaprak -ları
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Çay bitkinin in vitro dokularında kullanarak böcek ilacı metabolizmasını incelemek için bir platform geliştirilmiştir. Steril çay fidanları yaprakları Murashige ve Skoog üzerinde gevşek nasır oluşturmak için indüklenen edildi (MS) bitki hormonları ile bazal medya 2, 4-dichlorophenoxyasetic asit (2, 4-D, 1,0 mg l-1) ve Kinetin (kt, 0,1 mg l-1). Callus, her biri 28 gün süren 3 veya 4 turdan sonra kuruldu. Loose nasır (yaklaşık 3 g) daha sonra aynı bitki hormonları içeren B5 sıvı medya içine aşı ve 25 ± 1 °c karanlıkta bir sallayarak kuluçk (120 rpm) kültürlü oldu. 3 − 4 alt kültürden sonra, 1:1 ve 1:2 (süspansiyon anne sıvısı: taze orta) arasında değişen bir alt kültür oranıyla çay yapraklarından türetilen bir hücre süspansiyonu kuruldu. Bu platformu kullanarak, altı böcek öldürücüler (5 μg mL-1 her thiaetoxam, imidacloprid, acetayiprid, imidaclothiz, dimethoate, ve omethoate) çay yaprağı türeyen hücre süspansiyon kültürü içine eklenmiştir. Böcek öldürücülerinin metabolizması sıvı kromatografi ve gaz kromatografi kullanılarak izleniyordu. Çay hücresi süspansiyonu kültürünün kullanışlılığını doğrulamak için, tedavi edilen hücre kültürlerinde ve bozulmamış bitkilerin içinde bulunan thiaminetoxan ve dimethoate metabolitleri kitle spektrometresi kullanılarak karşılaştırıldı. Tedavi edilen çay hücresi kültürlerinde, thiametoksin yedi metabolitleri ve dimethoate iki metabolitleri bulundu, tedavi edilen bozulmamış bitkiler iken, thiametokam sadece iki metabolitleri ve bir dimethoate bulundu. Bir hücre süspansiyonunun kullanımı, özellikle çay gibi zor bir matris için, bozulmamış çay bitkilerin kullanımına kıyasla metabolik analizini basitleştirmiştir.
Giriş
Çay dünya1,2en çok tüketilen alkolsüz içeceklerin biridir. Çay yaprakları ve odunsu çok yıllık Camellia sinensis L. çay bitkileri büyük tarlaları yetiştirilen ve çok sayıda böcek zararlıları için duyarlı olan tomurcukları üretilmektedir3,4. Organophosphorus ve egemenliğinize böcek ilaçları genellikle sistemik böcek öldürücüler olarak kullanılır5 whiteflies gibi zararlıları çay bitkileri korumak için, yaprak Hoppers, ve bazı lepidopteran türler5/6. Uygulamadan so....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. çay nasır kültürü
Not: steril yaprakları ilk araştırma grubu17geliştirilen içinde vitro-yetiştirilen bağlanırlar hatları türetilmiştir. Bölüm 5 ' e kadar olan tüm prosedürler, bir kuluçte kültür zamanı dışında steril bir laminar akış kaputunda yürütülmüştür.
- İki medyanın pH 'Sını (Murashige ve Skoog [MS] bazal orta ve Gamborg 'un B5 sıvı orta) 5,8 için otoklavlama öncesinde (121 °C, 20 dk) ayarlayın.
- Makas kullanarak steril bir yaprak orta ven boyunca Cut, ve daha sonra bir petri çanak yaklaşık 0,3 cm x 0,3 cm küçük parçalar halinde her yarısını alt bölümlere.
- Steril Method (küçük yap....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Alan yetiştirilen çay ağaçları hasat yaprakları ve steril bir ortamda içinde vitro yetiştirilen çay fidanları gelen yaprakları gelen nasır indüksiyon kontaminasyon ölçümü ile karşılaştırıldığında, Browning, ve indüksiyon sonra 28 MS medya ekimi gün ( Şekil 1a). Callus büyüme 20, 37, 62 ve 90 gün Kültür (Şekil 1B) kaydedildi. İn vitro yetiştirilen yapraklardan elde edilen Nasır, yetiştirmenin tüm 90 gün boyunca alan yetiştirilen y.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu makalede, explants seçimi, hücre viability belirlenmesi ve yüksek metabolik ile bir çay hücresi süspansiyon kültürünün kurulması da dahil olmak üzere, çay bitki dokusu pestisit metabolizması bir model kurulması ayrıntılı süreci sunar Etkinlik. Bir bitki dokusunun herhangi bir parçası sterilize edilmiş bir ortamda nasır başlatmak için kullanılabilir25. Çay yaprakları bu çalışmada nasır başlatma için seçildi, sadece çünkü yaprakları daha az zemin altında parçaları daha kontamine eğilimindedir, am.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.
Teşekkürler
Bu çalışma ulusal anahtar araştırma & geliştirme programı (2016YFD0200900) Çin, Çin Ulusal Doğal bilimsel Vakfı (No. 31772076 ve No. 31270728), Çin doktora sonrası Bilim Vakfı (2018M630700) ve açık Fonu tarafından destekleniyordu Çay tesisi biyoloji ve kullanım devlet anahtar Laboratuvarı (SKLTOF20180111).
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Asetamiprid (% 99.8) | Dr. Ehrenstorfer | 46717 | CAS No: 135410-20-7 |
| Asetonitril (CAN, %99.9) | Tedia | AS1122-801 | CAS No: 75-05-8 |
| Agar | Solarbio Bilim ve Teknoloji | A8190 | CAS No: 9002-18-0 |
| Clothianidin (% 99.8) | Dr. Ehrenstorfer | 525 | CAS No: 210880-92-5 |
| Dimetoat (% 98.5) | Dr. Ehrenstorfer | 109217 | CAS No: 60-51-5 |
| Imidacloprid (% 99.8) | Dr. Ehrenstorfer | 91029 | CAS No: 138261-41-3 |
| Imidaclothiz (% 99.5) | Toronto Research Chemical | I275000 | CAS No: 105843-36-5 |
| Kinetin (KT, >98.0%) | Solarbio Bilim & Teknoloji | K8010 | CAS No: 525-79-1 |
| Omethoate (% 98.5) | Dr. Ehrenstorfer | 105491 | CAS No: 1113-02-6 |
| Polivinilpolipirolidon (PVPP) | Solarbio Bilim ve Teknoloji | P8070 | CAS No: 25249-54-1 |
| Sükroz | Tocris Bioscience | 5511 | CAS No: 57-50-1 |
| Thiamethoxam (% 99.8) | Dr. Ehrenstorfer | 20625 | CAS No: 153719-23-4 |
| Trifeniltetrazolyum Klorür (TTC,% 98.0) | Solarbio Science & Teknoloji | T8170 | CAS No: 298-96-4 |
| 2,4-Diklorofenoksiasetik Asit (2,4-D, %>98.0) | Guangzhou Saiguo Biotech | D8100 | CAS No: 94-75-7 |
| kiral kolon | Agilent CYCLOSIL-B | 112-6632 | Kromatografi kolonu (30 m & kez; 0.25 mm & kez; 0.25 & mu; m) |
| Gaz kromatografisi (GC) | Shimadu | 2010-Plus | Alev Fotometrik Dedektörü (FPD) ile Eşleştirilmiş |
| Yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC) | Agilent | 1260 | Ultraviyole dedektörü (UV) ile eşleştirilmişHSS |
| T3 C18 sütunu | Sular | 186003539 | Kromatografi sütunu (100 mm ve kez; 2,1 mm ve kez; 1,8 & mu; m |
| ) Ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi (UPLC) | Agilent | 1290-6545 | Tandem dört kutuplu uçuş süresi kütle spektrometresi (QTOF) |
| Ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi (UPLC) | Orbitrap kütle spektrometresine bağlı | Thermo Scientific | Ultimate 3000-Q Eksaktif Odak |
Kaynaklar
- Zhao, Y., et al. Tentative identification, quantitation, and principal component analysis of green pu-erh, green, and white teas using UPLC/DAD/MS. Food Chemistry. 126 (3), 1269-1277 (2011).
- Alcazar, A., et al.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
