Yöntem makalesi

Çay (Camellia sinensis L.) türetilmiştir yeni kurulan hücre süspansiyon kültürü altı sistemik Böcek Ilacı metabolizması üzerinde çalışma Yaprak -ları

DOI:

10.3791/59312

⸱

15 Haziran 2019

 ,  ,  ,  ,  , 
1State Key Laboratory of Tea Plant Biology and Utilization, School of Tea and Food Science & Technology, Anhui Province Key Lab of Analysis and Detection for Food Safety, 2School of Resource & Environment, Anhui Agricultural University, Key Laboratory of Agri-food Safety of Anhui Province

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, bir hücre süspansiyon kültürü çay (Camellia sinensis L.) bu böcek ilaçları gibi tüm bitki tarafından alınabilir dış bileşiklerin metabolizmasını incelemek için kullanılabilir yaprakları türetilen kurulması için bir protokol sunuyor.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Çay bitkinin in vitro dokularında kullanarak böcek ilacı metabolizmasını incelemek için bir platform geliştirilmiştir. Steril çay fidanları yaprakları Murashige ve Skoog üzerinde gevşek nasır oluşturmak için indüklenen edildi (MS) bitki hormonları ile bazal medya 2, 4-dichlorophenoxyasetic asit (2, 4-D, 1,0 mg l-1) ve Kinetin (kt, 0,1 mg l-1). Callus, her biri 28 gün süren 3 veya 4 turdan sonra kuruldu. Loose nasır (yaklaşık 3 g) daha sonra aynı bitki hormonları içeren B5 sıvı medya içine aşı ve 25 ± 1 °c karanlıkta bir sallayarak kuluçk (120 rpm) kültürlü oldu. 3 − 4 alt kültürden sonra, 1:1 ve 1:2 (süspansiyon anne sıvısı: taze orta) arasında değişen bir alt kültür oranıyla çay yapraklarından türetilen bir hücre süspansiyonu kuruldu. Bu platformu kullanarak, altı böcek öldürücüler (5 μg mL-1 her thiaetoxam, imidacloprid, acetayiprid, imidaclothiz, dimethoate, ve omethoate) çay yaprağı türeyen hücre süspansiyon kültürü içine eklenmiştir. Böcek öldürücülerinin metabolizması sıvı kromatografi ve gaz kromatografi kullanılarak izleniyordu. Çay hücresi süspansiyonu kültürünün kullanışlılığını doğrulamak için, tedavi edilen hücre kültürlerinde ve bozulmamış bitkilerin içinde bulunan thiaminetoxan ve dimethoate metabolitleri kitle spektrometresi kullanılarak karşılaştırıldı. Tedavi edilen çay hücresi kültürlerinde, thiametoksin yedi metabolitleri ve dimethoate iki metabolitleri bulundu, tedavi edilen bozulmamış bitkiler iken, thiametokam sadece iki metabolitleri ve bir dimethoate bulundu. Bir hücre süspansiyonunun kullanımı, özellikle çay gibi zor bir matris için, bozulmamış çay bitkilerin kullanımına kıyasla metabolik analizini basitleştirmiştir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Çay dünya1,2en çok tüketilen alkolsüz içeceklerin biridir. Çay yaprakları ve odunsu çok yıllık Camellia sinensis L. çay bitkileri büyük tarlaları yetiştirilen ve çok sayıda böcek zararlıları için duyarlı olan tomurcukları üretilmektedir3,4. Organophosphorus ve egemenliğinize böcek ilaçları genellikle sistemik böcek öldürücüler olarak kullanılır5 whiteflies gibi zararlıları çay bitkileri korumak için, yaprak Hoppers, ve bazı lepidopteran türler5/6. Uygulamadan sonra, bu böcek öldürücüler bitki içine emilir veya transloke. Tesis içinde, bu sistemik böcek öldürücüler hidroliz, oksidasyon veya bitki enzimlerinin azaltma reaksiyonları yoluyla dönüştürülebilir. Bu dönüşüm ürünleri daha Polar ve üst bileşiklerin daha az toksik olabilir. Ancak, bazı organofosfat için, bazı ürünlerin bioactivities daha yüksektir. Örneğin, acephate daha toksik methasidophos içinde metabolize edilir8,9, ve omethoate içine dimethoate10,11. Bitki metabolik çalışmalar bu nedenle bir bitki içinde bir pestisit kaderini belirlemek için önemlidir12.

Bitki dokusu kültürler pestisit metabolizmasını araştırmak için yararlı bir platform olduğu kanıtlanmıştır, tespit metabolitleri bozulmamış bitkiler bulunan benzer ile13,14,15. Doku kültürlerinin kullanımı, özellikle hücre süspansiyon kültürler, çeşitli avantajları vardır. Öncelikle, deneyler mikroorganizmaların serbest yapılabilir, böylece pestisit dönüşümü veya mikroplar tarafından bozulması müdahalesi kaçınarak. İkincisi, doku kültürü her zaman kullanım için tutarlı malzemeler sağlar. Üçüncüsü, metabolitleri bozulmamış bitkilerin daha doku kültürlerinden ayıklamak için daha kolay, ve doku kültürler genellikle daha az interring bileşikleri ve bileşiklerin daha düşük karmaşıklık var. Son olarak, doku kültürler daha kolay tek bir deneme16pestisit metabolizması bir dizi karşılaştırmak için kullanılabilir.

Bu çalışmada, steril-yetiştirilen çay bağlanırlar yapraklarından türetilen bir hücre süspansiyonu başarıyla kuruldu. Daha sonra çay hücresi süspansiyon kültürü, altı sistemik böcek öldürücülerine ilişkin dağılma davranışlarını karşılaştırmak için kullanılmıştır.

Bu ayrıntılı protokol, araştırmacılar bir bitki dokusu kültür platformu çay Ksenobiyotiklerin metabolik kaderi incelemek için yararlı kurabilir, böylece bazı rehberlik sağlamak için tasarlanmıştır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. çay nasır kültürü

Not: steril yaprakları ilk araştırma grubu17geliştirilen içinde vitro-yetiştirilen bağlanırlar hatları türetilmiştir. Bölüm 5 ' e kadar olan tüm prosedürler, bir kuluçte kültür zamanı dışında steril bir laminar akış kaputunda yürütülmüştür.

  1. İki medyanın pH 'Sını (Murashige ve Skoog [MS] bazal orta ve Gamborg 'un B5 sıvı orta) 5,8 için otoklavlama öncesinde (121 °C, 20 dk) ayarlayın.
  2. Makas kullanarak steril bir yaprak orta ven boyunca Cut, ve daha sonra bir petri çanak yaklaşık 0,3 cm x 0,3 cm küçük parçalar halinde her yarısını alt bölümlere.
  3. Steril Method (küçük yaprak parçaları) bitki hormonları 2, 4-D (1,0 mg l-1) ve KT (0,1 mg l-1) içeren MS bazal medya üzerine yerleştirin. Altı Method 100 ml MS bazal medya içeren bir 300 ml Flask yerleştirilebilir.
  4. Karanlık 25 °c sabit sıcaklıkta Yukarıdaki yaprak Method kültürü. 28 gün sonra, indüklenen nasır ilk nesil seçin ve taze Flask (bir alt kültür) transfer. 3 − 4 alt kültürden sonra gevşek ve kayrak nasır kazanın.

2. çay hücresi süspansiyon kültürü

  1. Steril koşullarda steril bir cerrahi bıçak kullanarak katı ortamdan küçük parçalara (0,5 − 2 mm aralığında) kadar güçlü, soğuk ve gevşek aramaları keser.
  2. Küçük arama parçaları yaklaşık 3 gr ağırlığında. 2, 4-D (1,0 mg l-1) ve KT (0,1 mg l-1) ile tamamlayıcı 20 ml B5 sıvı medya içeren bir 150 ml Flask içine nasır yerleştirin.
  3. Karanlık 120 RPM 'de bir sallayarak inkübörü içinde sabit bir sıcaklıkta (25 ± 1 °C) sıvı hücre süspansiyon kültür.
  4. 7 ila 10 gün sonra, kültür şişeler kaldırmak ve onları birkaç dakika stand izin.
  5. Taze orta için alt kültür için tohum malzemesi olarak tüm süpernatant alın (taze orta için süspansiyon anne sıvı alt kültür oranı 1:1 ve 1:2 arasında değişmektedir). Çöktürülmüş, büyük nasırlarını çıkarın.
  6. Her biri 28 gün 3 − 4 alt kültür döngüsünden sonra son iyi yetiştirilen hücre süspansiyonu kültürünü elde edersiniz.

3. hücre canlılığı Triphenyl tetrazolyum klorür tahlil

  1. 100 °c ' de canlı hücrelerden oluşan bir numuneyi, canlılığı boyama öncesinde kontrol hücresi olarak 10 dakika boyunca öldür.
  2. 6000 x g'de 8 dakika boyunca tüm hücre süspansiyonu kültürünü santrifüjle 2,5 ml fosfat-tamponlu tuz (PBS) tampon (pH 7,3) hücrelerinde askıya almadan önce süpernatant çıkarın ve el ile 1 dakika sallayın.
  3. % 0.4 Triphenyl tetrazolyum klorür (TTC) çözeltisi 2,5 ml ekleyin ve tekrar elle sallayın.
  4. Karışımı, ayakta bulunan bir kuluçk (30 °C) içinde 1 saat boyunca kulvatın.

4. böcek öldürücüler ile çay hücresi süspansiyon kültürlerinin tedavi ve örnekleme

  1. Dört neonicotinoidin (thiametoxam) 400 μL filtre sterilize edilmiş stok çözeltisi (500 μg ml-1) bir kısım ekleyin acetayiprid, imidacloprid, ve imidaclothiz) veya iki organophosp, (dimethoate ve omethoate) hücre süspansiyon kültürlerine, Sıra -sıyla.
    Not: amaç ksenobiyotik davranışları karşılaştırmak için, farklı bileşikleri test etmek için hücre süspansiyonları aynı anne toplu kullanın.
  2. Sabit sıcaklıkta (25 ± 1 °C) böcek öldürücülerle hücre süspansiyonlarının örneklerine ve kuluçlan hızı (120 rpm) sallama. Örnekleri alın (bkz. Adım 4,3 veya 4,4) 0, 3, 5 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70 ve 75 gün.
  3. Bir neonicotinoid içeren bir örnek test etmek için, homojen hücre kültürünün 1 ml kısım kaldırmak, bir 1,5 ml plastik santrifüj tüp içine yerleştirin ve 2 dakika için 4000 x g Santrifüjü.
    1. Yüksek performanslı sıvı kromatografi-ultraviyole (HPLC-UV) ve ultra yüksek performanslı sıvı kromatografi-dört ayaklı zaman-uçuş (UPLC-QTOF) kütlesi ile analizden önce 0,22-μm gözenek boyutunda filtre membranı aracılığıyla Süpernatantları geçirin spektrometri (malzeme tablosu).
  4. Bir Organophosphate içeren bir örnek test etmek için, hücre kültürünün bir 500 μL kısım kaldırmak ve bir 35 ml santrifüj tüp veya bir 1,5 ml plastik santrifüj tüp içine yerleştirin (neonicotinoid gibi ikinci örnek hazırlayın).
    1. 0,1 gr sodyum klorür ve 5 mL aseton/etil asetat (3:7, v/v), 500 μL numunelerin 35 mL Santrifüjlü tüpüne ekleyin.
    2. 1 dakika karışımları Vortex ve sonra onları 10 dakika dinlenmesine izin.
    3. 2,5 mL 'yi 10 mL 'lik cam tüpüne götürün ve 40 °C ' de azot evaporatör kullanarak yakın kuruluğu Buharlaştırıcı olarak yerleştirin.
    4. 1 mL aseton, 1 dk için Vortex ile kalıntı çözülür, gaz kromatografi-alev fotometrik dedektör (GC-FPD) tarafından analiz önce bir 0,22-μm filtre membranı üzerinden geçirin.

5. böcek öldürücüler ile bozulmamış çay bitkinin numune hazırlanması

Not: bozulmamış çay bitki deneme bir hidroponik sistemde bir besin çözeltisi 50 mL yetiştirilen çay fidanları kullanarak yapılmıştır (30 NH4+, 10 No3-, 3,1 PO4-, 40 K+, 20 CA2 +, 25 mg2 +, 0,35 Fe2 +, 0,1 B 3 +, 1,0 MN2 +, 0,1 Zn2 +, 0,025 cu2 +, 0,05 Mo+, ve 10 Al3 +, mg L-1)18. Bir deneysel sera, Anhui tarımsal Üniversitesi 'nde 20 °C ' de hafif karanlık bir döngüye (12 saat ışık ve 12 saat karanlığa) sahipti.

  1. 15 gün boyunca 4 L plastik tencerede beş bitki koyun.
  2. 0 ppm (kontrol) veya 100 ppm tiaminetoxam veya dimethoate plastik tencere, sırasıyla ekleyin.
  3. 19perokside daldırmak dışında, önceki yönteme göre bozulmamış bitki örneği hazırlamak ve sonra doğru bir kitle spektrum için kütle spektrometresi ile analiz.

6. enstrüman Analizi

  1. Neonicotinoidlerin metabolik davranışının HPLC analizi
    1. Bir HPLC-UV kullanın (malzeme tablosu) 254 nm bir dalga boyu thiasetoxam ve acetayiprid içeriği ve metabolik ürünleri algılamak için, ve Imidacloprid ve imidaclothiz de 270 Nm örneklerde Bölüm 4,3.
      Not: HPLC-UV durumu önceki çalışma19ile aynıydı.
  2. Organofosfatların metabolik davranışının GC Analizi
    1. (Malzeme tablosu) bir kiral sütun kullanarak bir GC-FPD tarafından Bölüm 4,4 örneklerinde dimethoate ve omethoate içeriğini algılar.
    2. Azot taşıyıcı gaz olarak kullanın ve 1,0 mL min-1akış hızını ayarlayın.
    3. İlk sıcaklığı 120 °C ' ye ayarlayın ve 5 dakika tutun. sıcaklığı 150 °C ' de 30 °C dk-1 ' e yükseltin ve 3 dakika tutun. 10 °c Min-1 ' e 170 °C ' ye kadar artış ve 7 dakika tutun. Son olarak 30 °C Min-1 ' e 210 °c ' ye yükseltir ve sonra 5 dakika tutun.
    4. Enjeksiyon sıcaklığını 200 ° c 'ye ayırısız modda ayarlayın; Dedektör sıcaklığını 250 °C ' ye ayarlayın.
    5. Enjeksiyon hacmini 1 μL olarak ayarlayın.
  3. UPLC-QTOF hücre kültüründe böcek ilacı metabolitleri Analizi
    1. Bir C18 sütun (malzeme tablosu) Ile UPLC-QTOF kullanarak hücre kültüründe (Bölüm 4,3 örnekleri) böcek öldürücülerin metabolitleri algılayın.
    2. Akış hızını 0,2 mL min-1olarak ayarlayın. Enjeksiyon hacmini 10 μL olarak ayarlayın.
    3. Neonicotinoid tedavi numuneleri için, ilk mobil aşamasını% 85 A (5 mM amonyum Format suyu) ve% 15 B (Asetonitril) olarak ayarlayın. 10 dk üzerinde,% 38 için mobil faz B artış ve% 15 geri dönmek 1 dakika, 9 dakika tutun.
    4. Organofosfat tedavi örnekleri için, ilk mobil faz ayarlayın 55% A (0,1% formik asit suyu) ve 45% B (acetonitrile). Üzerinde 5 dk, artış mobil faz B için 70%, sonra geri dönün 45% B üzerinde 0,5 dk, tutmak için 2,5 dk.
    5. QTOF işlem parametrelerini aşağıdaki gibi ayarlayın: gaz sıcaklığı, 325 °C; kurutma gazı (Azot), 10 L min-1; Kılıf gaz sıcaklığı, 350 °C; Kılıf gaz akışı, 11 L min-1; kapiller voltaj, 4000 V; Meme gerilimi, 1000 V; fragmentor voltaj, 100 egemenliğinize böcek ve 110 v için organofosfor böcek öldürücüler için v; Skimmer voltaj, 65 V; pozitif iyon modunda çalışma.
    6. Cihazı tam tarama spektrumuna ve hedef MS/MS moduna ayarlayın.
    7. Doğru kütle araçlarını kullanarak verileri işleme; MS/MS ek açıklamanın yanı sıra literatür12,15,20,21,22ile hiçbir standart ürün ile metabolitleri Infer.
  4. Bozulmamış bitki ekstresi içinde böcek ilacı metabolitleri UPLC-Orbitrap Analizi
    1. UPLC-Orbitrap kütle spektrometresi (malzeme tablosu) kullanarak bozulmamış Bitki ekstresinin böcek ilaçlarının metabolitlerini algılayın.
    2. Kütle spektrometresi (malzeme tablosu) çalışma parametrelerini aşağıdaki gibi ayarlayın: kılıf gaz basıncı, 35 ARB; gaz sıcaklığı, 300 °C; Meme gerilimi, 3,5 KV; kapiller sıcaklığı, 350 °C.
    3. UPLC-QTOF hücre kültürünün analizi için yukarıdaki (Steps 6.3.3 ve 6.3.4) olarak elüsyon programlarını ayarlayın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Alan yetiştirilen çay ağaçları hasat yaprakları ve steril bir ortamda içinde vitro yetiştirilen çay fidanları gelen yaprakları gelen nasır indüksiyon kontaminasyon ölçümü ile karşılaştırıldığında, Browning, ve indüksiyon sonra 28 MS medya ekimi gün ( Şekil 1a). Callus büyüme 20, 37, 62 ve 90 gün Kültür (Şekil 1B) kaydedildi. İn vitro yetiştirilen yapraklardan elde edilen Nasır, yetiştirmenin tüm 90 gün boyunca alan yetiştirilen y...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu makalede, explants seçimi, hücre viability belirlenmesi ve yüksek metabolik ile bir çay hücresi süspansiyon kültürünün kurulması da dahil olmak üzere, çay bitki dokusu pestisit metabolizması bir model kurulması ayrıntılı süreci sunar Etkinlik. Bir bitki dokusunun herhangi bir parçası sterilize edilmiş bir ortamda nasır başlatmak için kullanılabilir25. Çay yaprakları bu çalışmada nasır başlatma için seçildi, sadece çünkü yaprakları daha az zemin altında parçaları daha kontamine eğilimindedir, am...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma ulusal anahtar araştırma & geliştirme programı (2016YFD0200900) Çin, Çin Ulusal Doğal bilimsel Vakfı (No. 31772076 ve No. 31270728), Çin doktora sonrası Bilim Vakfı (2018M630700) ve açık Fonu tarafından destekleniyordu Çay tesisi biyoloji ve kullanım devlet anahtar Laboratuvarı (SKLTOF20180111).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Asetamiprid (% 99.8)Dr. Ehrenstorfer46717CAS No: 135410-20-7
Asetonitril (CAN, %99.9)TediaAS1122-801CAS No: 75-05-8
AgarSolarbio Bilim ve TeknolojiA8190CAS No: 9002-18-0
Clothianidin (% 99.8)Dr. Ehrenstorfer525CAS No: 210880-92-5
Dimetoat (% 98.5)Dr. Ehrenstorfer109217CAS No: 60-51-5
Imidacloprid (% 99.8)Dr. Ehrenstorfer91029CAS No: 138261-41-3
Imidaclothiz (% 99.5)Toronto Research ChemicalI275000CAS No: 105843-36-5
Kinetin (KT, >98.0%)Solarbio Bilim & TeknolojiK8010CAS No: 525-79-1
Omethoate (% 98.5)Dr. Ehrenstorfer105491CAS No: 1113-02-6
Polivinilpolipirolidon (PVPP)Solarbio Bilim ve TeknolojiP8070CAS No: 25249-54-1
SükrozTocris Bioscience5511CAS No: 57-50-1
Thiamethoxam (% 99.8)Dr. Ehrenstorfer20625CAS No: 153719-23-4
Trifeniltetrazolyum Klorür (TTC,% 98.0)Solarbio Science & TeknolojiT8170CAS No: 298-96-4
2,4-Diklorofenoksiasetik Asit (2,4-D, %>98.0)Guangzhou Saiguo BiotechD8100CAS No: 94-75-7
kiral kolonAgilent CYCLOSIL-B112-6632Kromatografi kolonu (30 m & kez; 0.25 mm & kez; 0.25 & mu; m)
Gaz kromatografisi (GC)Shimadu2010-PlusAlev Fotometrik Dedektörü (FPD) ile Eşleştirilmiş   
Yüksek performanslı sıvı kromatografisi (HPLC)Agilent1260Ultraviyole dedektörü (UV) ile eşleştirilmişHSS
T3 C18 sütunuSular186003539Kromatografi sütunu (100 mm ve kez; 2,1 mm ve kez; 1,8 & mu; m
) Ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi (UPLC)Agilent1290-6545Tandem dört kutuplu uçuş süresi kütle spektrometresi (QTOF)
Ultra yüksek performanslı sıvı kromatografisi (UPLC)Orbitrap kütle spektrometresine bağlıThermo ScientificUltimate 3000-Q Eksaktif Odak

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zhao, Y., et al. Tentative identification, quantitation, and principal component analysis of green pu-erh, green, and white teas using UPLC/DAD/MS. Food Chemistry. 126 (3), 1269-1277 (2011).
  2. Alcazar, A., et al. Differentiation of green, white, black, Oolong, and Pu-erh teas according to their free amino acids content. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55 (15), 5960-5965 (2007).
  3. Kopjar, M., Tadic´, M., Pilizˇota, V. Phenol content and antioxidant activity of green, yellow and black tea leaves. Chemical and Biological Technologies in Agriculture. 2 (1), 1-6 (2015).
  4. Chen, H., Yin, P., Wang, Q., Jiang, Y., Liu, X. A modified QuEChERS sample preparation method for the analysis of 70 pesticide residues in tea using gas chromatography-tandem mass spectrometry. Food Analytical Methods. 7 (8), 1577-1587 (2014).
  5. Hou, R. Y., et al. Alteration of the Nonsystemic Behavior of the Pesticide Ferbam on Tea Leaves by Engineered Gold Nanoparticles. Environmental Science & Technology. 50 (12), 6216-6223 (2016).
  6. Abdel-Gawad, H., Mahdy, F., Hashad, A., Elgemeie, G. H. Fate of C-14-Ethion insecticide in the presence of deltamethrin and dimilin pesticides in cotton seeds and oils, removal of ethion residues in oils, and bioavailability of its bound residues to experimental animals. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 62 (51), 12287-12293 (2014).
  7. Fang, Q., et al. Degradation Dynamics and Dietary Risk Assessments of Two Neonicotinoid Insecticides during Lonicerajaponica Planting, Drying, and Tea Brewing Processes. Journal of Agricultural and Food. 65 (8), 1483-1488 (2017).
  8. Pan, R., et al. Dissipation pattern, processing factors, and safety evaluation for dimethoate and its metabolite (omethoate) in tea (Camellia sinensis). PloS One. 10 (9), e0138309(2015).
  9. Pavlic, M., Haidekker, A., Grubwieser, P., Rabl, W. Fatal intoxication with omethoate. International Journal of Legal Medicine. 116 (4), 238-241 (2002).
  10. Mohapatra, S., Ahuja, A. K., Deepa, M., Sharma, D. Residues of acephate and its metabolite methamidophos in/on mango fruit (Mangifera indica L.). Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology. 86 (1), 101-104 (2011).
  11. Phugare, S. S., Gaikwad, Y. B., Jadhav, J. P. Biodegradation of acephate using a developed bacterial consortium and toxicological analysis using earthworms (Lumbricus terrestris) as a model animal. International Biodeterioration & Biodegradation. 69, 1-9 (2012).
  12. Ford, K. A., Casida, J. E. Comparative metabolism and pharmacokinetics of seven neonicotinoid insecticides in spinach. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 56 (21), 10168-10175 (2008).
  13. Frear, D. S., Swanson, H. R. Metabolism of cisanilide (cis-2,5-Dimethyl-1-Pyrrolidinecarboxanilide) by Excised Leaves and Cell Suspension Cultures of Carrot and Cotton. Pesticide Biochemistry and Physiology. 5, 73-80 (1975).
  14. Sandermann, H. Jr, Scheel, D., Trenck, T. H. V. D. Use of plant cell cultures to study the metabolism of environmental chemicals. Ecotoxicology and Environmental Safety. 8 (2), 167-182 (1984).
  15. Karmakar, R., Bhattacharya, R., Kulshrestha, G. Comparative metabolite profiling of the insecticide thiamethoxam in plant and cell suspension culture of tomato. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 57 (14), 6369-6374 (2009).
  16. Lichtner, F. Phloem mobility of crop protection products. Australian Journal of Plant Physiology. 27, 609-614 (2000).
  17. Sun, J., et al. Shoot basal ends as novel explants for in vitro plantlet regeneration in an elite clone of tea. Journal of Horticultural Science & Biotechnology. 87 (1), 71-76 (2012).
  18. Meng, M. T., et al. Uptake, Translocation, Metabolism, and Distribution of Glyphosate in Nontarget Tea Plant (Camellia sinensis L). Journal of Agricultural and Food Chemistry. (65), 7638-7646 (2017).
  19. Hou, R. Y., et al. Effective Extraction Method for Determination of Neonicotinoid Residues in Tea. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 61, 12565-12571 (2013).
  20. Karmakar, R., Kulshrestha, G. Persistence, metabolism and safety evaluation of thiamethoxam in tomato crop. Pest Management Science. 65 (8), 931-937 (2009).
  21. Dauterman, W. C., Viado, G. B., Casida, J. E., O'Brien, R. D. Persistence of Dimethoate and Metabolites Following Foliar Application to Plants. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 8 (2), 115-119 (1960).
  22. Lucier, G. W., Menzer, R. E. Nature of oxidative metabolites of dimethoate formed in rats, liver microsomes, and bean plants. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 18 (4), 698-704 (1970).
  23. Yang, G. W. Construction of Camellia sinensis Cell Suspension Culture and Primary Study on Kineties. , College of Food Science and Nutrition Engineering. China Agricultural University. (2004).
  24. Jiao, W., et al. Comparison of the Metabolic Behaviors of Six Systemic Insecticides in a Newly Established Cell Suspension Culture Derived from Tea (L.) Leaves. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 66, 8593-8601 (2018).
  25. Mustafa, N. R., Winter, D. W., Iren, F. V., Verpoorte, R. Initiation, growth and cryopreservation of plant cell suspension cultures. Nature Protocols. 6, 715-742 (2011).
  26. Zhong, J. J., Bai, Y., Wang, S. J. Effects of plant growth regulators on cell growth and ginsenoside saponin production by suspension cultures of Panax quinquefolium. Journal of Biotechnology. 45, 227-234 (1996).
  27. Grover, A., et al. Production of monoterpenoids and aroma compounds from cell suspension cultures of Camellia sinensis. Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 108, 323-331 (2012).
  28. Lei, P. D., et al. Prevent Browning of Axillary Buds in vitro Culture of Camellia sinensis. Chinese Agricultural Science Bulletin. 28, 190-193 (2012).
  29. Hou, X., Guo, W. The effect of various nitrogen sources on the growth and nitrate assimilation indicator of suspension roselle cell. Guihaia. 18, 169-172 (1998).
  30. Shimabukuro, R. H., Walsh, W. C. Xenobiotic Metabolism in Plants: In vitro Tissue, Organ, and Isolated Cell Techniques. ACS Symposium Series. 97 (1), 3-34 (1979).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

ay H cre S spansiyonunsektisit MetabolizmasBitki H cre K lt rS v KromatografisiGaz KromatografisiK tle SpektrometrisiKallus nd ksiyonuPestisit AnaliziH cre Canl lSteril Bitkicikler

İlgili makaleler