Method Article

Sinaptik çeşitlilik bütün hücreli yama-kelepçe Elektrofizyoloji kullanarak değerlendirilmesi

DOI:

10.3791/59461

⸱

April 23rd, 2019

 , 
1Neuroscience Program, Schulich School of Medicine and Dentistry, University of Western Ontario, 2Robarts Research Institute, Schulich School of Medicine and Dentistry, University of Western Ontario, 3Department of Physiology and Pharmacology, Schulich School of Medicine and Dentistry, University of Western Ontario

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, Bütün hücre yama kelepçe Elektrofizyoloji akut beyin dilimler halinde kullanarak fonksiyonel sinaptik çeşitlilik değerlendirmek için bir iletişim kuralı mevcut.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Merkezi sinir sistemi nöronlar bir çift sık sık birden çok sinaptik kişiler ve/veya fonksiyonel nörotransmitter yayın siteleri (sinaptik çeşitlilik) oluşturur. Sinaptik plastik ve değişiklikler geliştirme boyunca ve sinaptik iletimi etkinliği için önemli bir belirleyici olmak farklı fizyolojik koşullarda olduğunu. Burada, Bütün hücre yama kelepçe Elektrofizyoloji akut beyin dilimler halinde kullanarak belirli bir postsinaptik nöron üzerine sonlandırma sinapslarda çokluğu derecesini tahmin etmek için deneyler anahat. Özellikle, Gerilim Tipi Kelepçe kayıt spontan eksitatör postsinaptik akımları (sEPSCs) genliği ve minyatür eksitatör postsinaptik akımları (mEPSCs) arasında fark karşılaştırmak için kullanılır. Bu yöntem arkasında çeşitlilik gösteren afferent girişleri her sinaptik temas oluşur zaman uyumlu sürümü nedeniyle büyük, Aksiyon potansiyeli bağımlı sEPSCs gösterecektir teoridir. Buna ek olarak, (zaman uyumsuz olan) aksiyon potansiyeli bağımsız yayın daha küçük genlik mEPSCs oluşturur. Bu makalede birtakım deneyler ve analizler sinaptik çeşitlilik varlığını karakterize için özetliyor ve teknik sınırlamaları ve gereksinimleri verilmektedir. Bu teknik vivo etkiler sinaptik kişiler farklı beyin bölgeleri'organizasyonu nasıl farklı davranış, farmakolojik ya da çevresel müdahaleleri araştırmak için uygulanabilir.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sinaptik iletimi nöronlar arasındaki iletişim için temel bir mekanizmadır ve dolayısıyla, beyin işlev. Sinaptik iletimi aynı zamanda değişken ve onun etkinliğini de yanıt düzenleyici sinyaller1gibi bir etkinlik bağlı şekilde değiştirebilirsiniz. Böylece, sinaptik fonksiyon incelenmesi nörolojik araştırma anahtar bir odağı olmuştur. Bütün hücre yama kelepçe Elektrofizyoloji anlamak, tasarlayarak Deneysel Tasarımlar ve veri analizleri, derinlemesine biyofiziksel ve moleküler mekanizmaları sinaptik iletimi için bize sağlar çok yönlü bir tekniktir. Yaygın olarak kullanılan bir yaklaşım, belki teknik ve kavramı sayesinde, minyatür eksitatör/inhibitö....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm hayvan deneyleri hayvan bakımı Komitesi, University of Western Ontario'dan uygun olarak hayvan bakım kuralları (AUP #2014-031) Kanada Konseyi tarafından onaylanır.

1. çözümler

  1. Çözüm Dilimleme
    1. Dilimleme çözüm kompozisyon için Tablo 1 ' e bakın.
    2. 20 x hisse senedi çözüm önceden hazırlamak ve 4 ° C'de 1 ay için saklayın.
    3. 1 x Dilimleme çözüm, NaHCO3, glikoz ve sukroz GKD2O içinde dağıtılması ve 20 x hisse senedi ekleyin. OSMOLARİTE 315-320 mOsm arasında olduğundan emin olun ve çözüm en fazla 1 hafta 4 ° C'de depolayın
    4. İki kadehler çö....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yukarıdaki Protokolü fare hipotalamik nöronlar örnek olarak kullanarak sinaptik çeşitlilik derecesini incelemek için bütün hücreli yama kelepçe Elektrofizyoloji kullanarak bir yöntem açıklanır. Bu dilim hazırlama tekniği bir şişmiş membran veya çekirdek (şekil 1) sahip olmayan sağlıklı hücrelerin verim. İletişim kuralı her adımda doku ve kalite kayıtları sağlığı için önemlidir.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Başarılı yama kelepçe Elektrofizyoloji deneme için bir önemli şart sağlıklı dilimleri/hücre almaktır. Bizim açıklanan protokol PVN nöronlar içeren hipotalamik dilimler için optimize edilmiştir. Diğer beyin alanları gerektirebilir çözümleri ve dilimleme yöntemleri21,22,23,24değiştiren. Kayıt için yalnızca hücre özellikleri membran direnç gibi sürekli izleyerek istikrarlı kayıtları kabul önemlidi.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ifşa yoktur

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

JS Ontario lisansüstü öğrenim bursu aldım. W.I. zihinsel sağlık araştırma Kanada'dan yeni bir araştırmacı bursu aldı. Bu eser hibe W.I için Doğa Bilimleri ve mühendislik Araştırma Konseyi Kanada (06106-2015 RGPIN) ve Kanada Enstitüsü Sağlık Araştırma (PJT 148707) tarafından desteklenen işletim.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
1 mL şırıngaBD309659
10 bıçaklıFisher Scientific / diğerleri35698
22 bıçaklıVWR / diğerleri21909-626
22 & mu; M şırınga filtreleriMilipore09-719-000
Adson forecepsHarvard Instruments72-8547
Açılı keskin makasHarvard Instruments72-8437
ClampexMolecular DevicespClamp 10
Çift kenarlı bıçakVWR74-0002
Filtre kağıdıSigma/diğerleri1001090
İnce boya fırçasıFisher / çeşitli15-183-35 / çeşitli
Gaz Dispersiyon TüpüVWRLG-8680-120
IsofluranFresenius Kabi / diğerleriM60303
Krazy tutkalçeşitliçeşitli
Mini analizSynaptosoftMiniAnalysis 6
OsmomoterWescor IncModel 5600
ParafilmSigmaPM-996
Pastör pipetiVWR14672-200
ph metreMettler ToledoFE20-ATC
Kauçuk ampulVWR82024-550
Neşter sapı No. 3Harvard Instruments72-8350
Neşter kolu No. 4Harvard Instruments72-8356
Tek kenarlı bıçakVWR55411-050
Vibratom dilimleyiciLeicaVT1200S
Su Arıtma SistemiMilliporeMilli-Q Academic A10
Kuyu plakası kapağıFisher / çeşitli07-201-590 / çeşitli
Kimyasallar / reaktifler< / güçlü>
4-APSigma275875
BAPTAmoleküler problarıB1204
CaCl2< / sub> * 2H < sub>2< / sub>OSigmaC7902
CdCl < sub>2< / sub>sigma202908
DNQXTocris189
EGTASigmaE3889
glikozSigmaG5767
HEPESSigmaH3375
K2-ATPSigmaA8937
KClSigmaP9333
K-glukonatSigmaG4500
MgCl < alt > 2 < / alt > * 6H < alt > 2 < / alt >OSigmaM2670
Moleküler biyoloji sınıfı suSigmaW4502-1L
Na3< / sub>GTPSigmaG8877
NaClBioshopSOD001.1
Na-glukonatSigmaS2054
NaH2< / sub>PO4< / sub>Sigma71504
NaHCO3< / sub>SigmaS6014
PikrotoksinsigmaP1675
SrClSigma255521
sükrozBioshopSUC507.1
TTXAlamone LabsT-550
yDGGTocris6729-55-1

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Abbott, L. F., Nelson, S. B. Synaptic plasticity: taming the beast. Nature Neuroscience. 3 (Supp), 1178-1183 (2000).
  2. Hsia, A. Y., Malenka, R. C., Nicoll, R. A. Development of Excitatory Circuitry in the Hippocampus. Journal of Neurophysiology. 79 (4), 2013-2024 (1998).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Synaptic MultiplicityWhole cell Patch clampSpontaneous EPSCsMiniature EPSCsAction Potential dependent ReleaseTTX Cadmium BlockadeStrontium ACSF ApplicationGamma DGG Antagonist TestAfferent Stimulation ProtocolAccess Resistance Monitoring

Related Articles