Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Fare karaciğerinde safra kanalı yoğunluğu belirlenmesi

6.6K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/59587

⸱

30 Nisan 2019

 , 
1Program in Developmental Biology, Baylor College of Medicine, 2Medical Scientist Training Program (MSTP), Baylor College of Medicine, 3Department of Molecular and Human Genetics, Baylor College of Medicine

Bu makalede

Özet

Fare karaciğerinde safra kanalı yoğunluğunun doğru ölçülmesini yapmak için oldukça basit ve hassas bir yöntem sunuyoruz. Bu yöntem, genetik ve çevresel değiştiricilerin etkilerini ve biliyer hastalıklarının fare modellerinde potansiyel tedavilerin etkinliğini belirlemede yardımcı olabilir.

Özet

Mouse, safra hastalıklarının incelenmesi için geniş bir model organizma olarak kullanılır. Safra sisteminin gelişimini ve fonksiyonunu değerlendirmek için, serum kimya, histolojik analiz ve spesifik belirteçleri için immünostik dahil olmak üzere çeşitli teknikler kullanılır. Bu teknikler safra sistemi hakkında önemli bilgiler sağlayabilse de, genellikle tüm karaciğer genelinde safra kanalı (BD) gelişimsel kusurları tam bir resim sunmaz. Bu kısmen safra gelişiminde önemli düşüklüğü olan hayvanlarda bile su drenajı için fare karaciğerinin sağlam yeteneği nedeniyle. Burada, mutant/transjenik farelerin tüm lobları kapsayan bölümlerde her portal ven (PV) ile ilişkili ortalama BDs sayısını hesaplamak için basit bir yöntem sunuyoruz. Bu yöntemle, ciğeri çeşitli genotürleri ve deneysel koşullar arasında karşılaştırma kolaylaştırmak için stereotifik bir şekilde monte ve kesitli. BDs, sitolatin-lekelenmiş kolanjiositlerin ışık mikroskobu ile tanımlanır ve daha sonra sayılan ve karaciğer bölümünde mevcut PVs toplam sayısına bölünmüştür. Örnek olarak, bu yöntemin vahşi tip fareler ile Alagille sendromunun fare modelini açıkça nasıl ayırt edebilmesi gerektiğini gösteriyoruz. Burada sunulan yöntem, biliyer ağacının üç boyutlu yapısını görselleştiren tekniklerin yerini alamaz. Ancak, BD gelişimini ve farelerde Ductular reaksiyon oluşumunun derecesini niceciksel olarak değerlendirmek için kolay ve doğrudan bir yol sunar.

Giriş

Safra ağacı, memeliler karaciğerinin önemli bir parçasıdır ve safra, hepatositlerden bağırsak içine geçişine izin verir. İntrahepatik safra kanalları (BDS), bipotel hepatoblastlardan çentik ve tgfβ sinyal1,2ile ayırt edilen kolanjiositlerden oluşur. Uygun belirtimi ve cholangiocytes taahhüdü ve olgun BDs içine onların montaj intrahepatik safra ağacının gelişimi için önemlidir. Karaciğer gelişimi sırasında ya da organ rejenerasyonu üzerine büyüdükçe, safra sistemi uygun karaciğer drenaj sağlamak için karaciğerde geliştirilmesi gerekir. Dahası, bir dizi sendromli ve sendromic olmayan hastalıklar intrahepatik BDs3' ün salılarına neden olur. Buna ek olarak, akut ve kronik karaciğer hastalıklarının bir dizi karaciğerde sözde Ductular reaksiyonlara yol açtı, bu biliyer işaretçileri ifade ama mutlaka biliyer hücrelerinden veya formu ortaya çıkmaz hücrelerin önemli sayıda varlığı olarak tanımlanır Patent BDs4. Multisistem bozukluğu olan Alagille Sendromu (algs), çentik ligand jagged1 (JAG1) kötü BD oluşumu ve kolestaz5,6' da oluşan haployetmezlik. Laboratuvarımız, daha önce oluşturulan Jag1 heterozigot fare hattı7 ' nin algs8' de BD yetersizlik 'nin hayvan modeli olduğunu göstermiştir. ALGS bu fare modelinde, kolanjiositler hala mevcut. Ancak, Olgun, patent BDs8içine birleşme taahhüt başarısız. Bu nedenle, BD yetersizlik bir model içinde karaciğer Analizi belirgin varlığı veya kololgiocytes yokluğunda daha fazla gerektirir. Hangi olgun BDs karaciğer mevcut derecesi doğru değerlendirmek önemlidir.

Anatomik patolojide, BD 'nin%9' unda var olup olmadığını değerlendirmek için nicel Yöntemler kabul edilmektedir. Örneğin, insan hastalarında algs üzerinde çalışmalar genellikle karaciğer biyopsisi başına en az 10 Portal gemileri analiz ederek BD portalı ven (PV) oranı ölçmek9,10. Şekil ve patent BDS genel varlığı veya yokluğu analizi, serum kimya ile birlikte, fareler içinde BD gelişimi hakkında değerli bilgiler sağlayabilir11,12,13. Ancak, fareler, serum bilirubin seviye8' de sadece mütevazı bir artış Ile BDS önemli sayıda kaybedebilir. Buna göre, PV başına mevcut olan BD 'lerin sayısını değerlendiren bir nicel Yöntem, farelerde BD yetersizlik derecesini daha doğrudan ölçmek sağlayabilir. Son zamanlarda yapılan bir raporda, PV başına tüm karaciğer lobları boyunca BD 'lerin sayısını ölçülebilir ve Jag1 +/– Animals8' de BD-PV oranındaki önemli bir azalma bildirdi. Analizimiz sırasında, inflamatuar reaksiyon ve Ductular reaksiyonları derecesine rağmen önemli bir varyasyona karşın, BD 'ye PV oranı çok değişkenlik göstermez8. Dahası, BD 'nin PV oranlarının ölçülmesi, Jag1 +/– hayvanların glikosyltransferaz geni Poglut1 bir kopyasını kaldırmanın BD yetersizlik8' i önemli ölçüde iyileştirebilmemizi sağladı. Bir Jag1 +/+ arka planda, vasküler pürüzsüz kas hücrelerinde Poglut1 koşullu kaybı, BD numaralarının ilerici bir artışla sonuçlanır, bu da mütevazı (% 20-30) P7 ama yetişkinler8önemli olur. Yine bu teknik, P7 'de bile bu hayvanlarda BD yoğunluğundaki artışın istatistiksel olarak önemli olduğunu göstermemize izin verdi. Not: Bu genotipteki artan BD yoğunluğu dört aydır, reçine döküm analizi ile de doğrulandı. 8 bu gözlemler ve farklı algs fare modellerinde BD yoğunluğu ölçülen diğer raporlar14,15 çeşitli mutant biliyer kusurları analiz etmek için genel stratejisine bu yöntemi birleştirmek için bize istenir ve transjenik fareler.

Burada, karaciğer hastalığının fare modellerinde BD yetersizlik derecesini incelemek için kullanılabilecek basit bir teknik ayrıntılarıyla (Şekil 1). Bu yöntemle, cholangiocyte işaretçiler Sito (CK) 8 ve CK19 (bundan sonra geniş spektrumlu CK, wsCK) ile birlikte boyama, fare karaciğerinde BDs ve uncorporated cholangiocytes görselleştirilmesi için kullanılır. Alfa-pürüzsüz Kas aksini (αSMA) karşı bir antikor etiket gemiler için boyama eklenir. Tüm karaciğer lob 'lar kapsayan bir bölümde BD PV oranı sistematik Analizi her genotip için çok sayıda PV analiz edilmesini sağlar. Yöntemimiz 2D görüntülerde BDs ve PV 'lerin ölçülmesi üzerine bağlı olduğundan, belirli bir mutasyonun safra ağacının 3D yapısında veya küçük safra kanallarının bütünlüğünü incelemek için uygun değildir. Yine de, müfettişlerin fareyle biliyer gelişimini değerlendirmek için basit ve objektif bir strateji sağlar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm hayvanlar, kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi kurallarına göre ve onaylanmış hayvan protokolleri altında Baylor Tıp Koleji 'nde bir bariyer hayvan tesisinde yer aldı.

1. fare karaciğer dokusu koleksiyonu

  1. Karaciğer hasat için fare hazırlanması
    1. Isoflurane kullanarak fareyi ötenize.
    2. Ölüm sağlamak için fare servikal çıkığı gerçekleştirin.
    3. Kaburga kafesinin yaklaşık bir santim altında bir enine kesi yapın.
    4. Karaciğerin tüm ventral yüzeyini açığa çıkarın.
  2. Fare karaciğer koleksiyonu
    1. Dikkatle, küçük makas ile, karın diğer organlara karaciğer bağlayan ligamentler üzerinden kesilmiş.
    2. Karaciğeri bağırsaktan ayırmak için ortak BD 'den kes.
    3. Dikkatle safra kesesi üzerine tutarak karaciğer kaldırmak ve hemen bir 50 ml tüp üç dörtte% 4 civarında formaldehite (PFA) ile doldurulur.

2. parafin içinde karaciğer sabitleme ve katıştırma

  1. Fiksasyon
    1. 48 h için karaciğer dokusunu 4 °C ' de% 4 PFA olarak düzeltin.
    2. 4 °C ' de 1 saat için% 70 EtOH ile dokusu yıkayın.
    3. 4 °C ' de 1 saat için% 95 EtOH ile dokusu iki kez yıkayın.
    4. 4 °C ' de 1 saat için% 100 EtOH ile dokusu iki kez yıkayın.
  2. Temizleme
    1. Karaciğer dokusunu oda sıcaklığında 30 dakika boyunca üç kez temizleme ajanı (malzeme tablosu) ile yıkayın.
      Not: Karaciğer üçüncü yıkama aşağıdaki sert hissetmek gerekir.
  3. Parafin içinde gömme
    1. 3 yıkanıyor, 30 dk için Parafin balmumu bir doku kalıp doku kaseti yerleştirin. Balmumu 60 °C ' ye önceden ısıtılmalıdır.
    2. Doku kalıbını parafin mumu ile üçe çeyrek yükseklikte doldurun ve 60 °C ' de bir Isıtma bloğuna tutun.
    3. Ventral tarafı yukarı bakacak şekilde kalıp karaciğer yerleştirin.
    4. Dikkatli bir şekilde Isıtma bloğundan kalıp çıkarın.
    5. Kalıp üzerinde kasetin üst yerleştirin ve sıcak sıvı parafin ile üst kapalı.
    6. Kalıp ve blok gece oda sıcaklığında soğutmak için izin verin.
      Not: Doku blokları artık oda sıcaklığında saklanabilir.

3. karaciğer dokusunun bölünme

  1. Bölünme bloğunun hazırlanması
    1. Kalıp blok çıkarmadan önce 5 dakika boyunca buz üzerine kalıp yerleştirin.
    2. Blok ve buz arasında bir laboratuar dokusu kağıt mevcut ile buz üzerinde blok yerleştirin.
    3. En iyi doku Dilimleme sonuçları için bölüm değil zaman buz üzerinde blok tutun.
  2. Karaciğer bloklarının bölünme
    1. Bir mikrotome kullanarak, karaciğer yüzeysel, dorsal tarafında keserek başlar. Bölümler 5 μm olmalıdır.
    2. Bölümler yamultulmuş veya katlanmış olmadığından emin olmak için bir diseksiyon mikroskop altında yüzeysel bölümler kontrol edin.
    3. Karaciğer, kaudat lob içeren bir bölümünü alın.
      Not: Bazı bloklar için, aynı doku dilimi üzerinde sol, medial, sağ ve kaudat lob olacaktır.
    4. Dört lob aynı slayt üzerinde mevcut değildir bu bloklar için, sol kadar dilim devam, medial ve sağ loblar aynı slayt üzerinde mevcut.

4. wsCK ve αSMA için immünhistokimya

  1. İmmünhistokimya için slaytların işlenmesi
    1. Analiz edilecek genotip başına bir slayt seçin.
    2. Ksilin içinde 15 dk için slayt yıkayın, 100% EtOH, 95% EtOH ve son olarak% 70 EtOH (her çözümde 3 x 5 dk).
    3. Slayt 5 dk deiyonize H2O için yıkayın.
    4. Kaydırağı antijen alma çözümüyle (Tris tabanlı, yüksek pH) batırın.
    5. 10 psi 'de 3 dakika boyunca bir basınç ocağında basınç altında ısı.
    6. Slaytın oda sıcaklığında soğumasını bekleyin (yaklaşık 35 dk).
  2. Doku bölümlerini engelleme
    1. PAP Pen kullanarak slayttaki bölümleri özetlemektedir.
    2. Uygulama fosfat-tamponlu tuz (PBS) + 0,1% iki kez, 5 dakika her bölümü kapsayacak şekilde ara.
    3. PBS + 0,3% Triton 'da 1:50 at normal keçi serumu (NGS) karıştırarak engelleme arabelleği yapın. Hem engelleme hem de primer antikor uygulaması için yeterli tampona sahip olmak için, bölüm başına 100 μL yeterlidir.
    4. Bölüm başına 100 μL engelleme çözümünü uygulayın.
    5. Engelleme çözeltisi ile kaplı slaytları 4 °C ' de 1 saat boyunca inküt.
  3. WsCK ve αSMA için boyama
    1. Seyreltilen Anti-CK8 ve anti-CK19 antikorları16 (gelişimsel çalışmalar Hybridoma Bank, Troma-ı ve TROMA-III, sırasıyla) 1:20 wsCK için leke engelleyici tampon içinde. Anti-αSMA antikor17 (malzeme tablosu) ile aynı tamponda 1:200 için seyreltin.
    2. Her bölüme üç antikorları içeren seyreltilmiş antikor çözeltisi 100 μL uygulayın.
    3. Antikor çözeltisi ile kaplı slaytları gece 4 °C ' de ele geçirin.
    4. PBS + 0,1% Triton ile slaytları üç kez, her biri 5 dakika yıkayın.
    5. Dilüt ikincil antikorlar (Anti-Rat-Alexa488 ve anti-fare-Cy5) 1:200 PBS + 0,3% Triton.
    6. Slaytlar için hem ikincil antikorları içeren ikincil antikor çözeltisi 100 μL uygulayın.
    7. Oda sıcaklığında 1 saat boyunca inküye yapın.
  4. DAPı nükleer boyama ve montaj
    1. Slaytları üç kez, her biri 5 dakika yıkayın.
    2. 100 μL DAPı (1:3000) her bölüme 10 dakika için uygulanır.
    3. Antifade montaj Orta (malzeme tablosu) slaytlara uygulayın ve doku bölümlerinin üstüne bir cam lamel magazini yerleştirin. Bir gecede 4 °C ' de slaytlar bırakın. Ertesi gün slaytları mühürleyin.
    4. Slaytları 4 °C ' de saklayın ve 1 haftalık montaj içinde görüntü yapın.

5. BD 'lerin görüntüleme ve ölçümü

  1. Görüntüleme karaciğer bölümleri
    1. Görüntüleme öncesinde, bir laboratuar üyesinin yardımı ile numunenin genotipi için kendinizi kör. Tüm görüntüleme dosyalarının bir hayvan/örnek numarasının yanı sıra genotip veya diğer özel tanımlama bilgilerinden yoksun olduğundan emin olun.
    2. Bir floresan mikroskop kullanarak, her bölümün 1x yakınlaştırma 20X görüntüleri almak ve karaciğer genelinde her PV görüntülenmiş emin olun. Sol, medial, sağ ve kaudat lob 'lar içerir.
      Not: Genellikle karaciğer boyutuna bağlı olarak hayvan başına 60-90 Portal yolları bulabilirsiniz.
    3. PV 'leri kimlik olarak görmek için Xsma artı wsCK boyama arayın. ΑSMA pozitif ancak wsCK boyama eksikliği yapıları Portal yapıları değildir.
  2. BD 'lerin tanımlanması ve sayımı
    1. Aşağıdaki sütunlara sahip bir elektronik tablo oluşturun: hayvan/örnek numarası, görüntü numarası, PVs sayısı ve BDs sayısı.
    2. Her görüntüden geçerek, görüntü başına PVs sayısını belirleyin ve kaydedin.
    3. Her görüntüde, tanımlanabilen bir lümen çevreleyen (wsCK +) kolanjiositlerin varlığı ile patent BD 'Leri tanımlayın. Yapılar farklı olmalıdır ve diğer wsCK + hücrelerden mesenyme tarafından ayrılır.
    4. Her patent BD ve görüntü numarası ile aynı sütunda yer saymak.
    5. Bir PV alınan her görüntü için bunu.
    6. Karaciğer örneğinde tüm PV 'lerin ve tüm BDs 'nin toplamını hesaplayın.
    7. Karaciğer numunesi için BD-PV oranını hesaplayın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Daha önce Jag1 +/– ANIMALS, algs8' in fare modeli olarak biliyer kusurları belgeledik. BD-PV oranını belirlemek için, P30 fare ciğeri ve CK8 ve CK19 (wsCK) için onları ortak olarak lekelenmiş, vasküler Marker αSMA ile birlikte. Daha sonra her karaciğer lobları tüm PVs görüntülenmiş. Şekil 2a'da gösterildiği gibi, PV 'Leri bitişik wsCK boyama (ok uçları) olan αsma-vitray olarak tanımlamıştır. WsCK olmayan αSMA-lekeli yapılar me...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Farelerde BD gelişimi ve onarımının incelenmesi, kolestatik bozuklukların patogenezi ve mekanizmasının incelenmesi konusunda önemli bir araçtır. Buna ek olarak, yeni tedavilerin geliştirilmesi kısmen tekrarlanabilir ve tercihen ölçülebilir fenotip kurulması üzerine bağlıdır. Fare modellerinde mevcut fenotipleme genellikle serum kimya, karaciğer histolojisi ve hücre tipi spesifik işaretçileri için immünostatik içerir. Bu teknikler biliyer sisteminin yapısı ve işlevi hakkında değerli bilgiler oluştursa da, belirli bir gene...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarlar ilgi çatışması yok.

Teşekkürler

Yazarlar Sağlık Ulusal Enstitüleri (NıH) (R01 GM084135 ve R01 DK109982), bir pilot/fizibilite Ödülü Teksas Tıp Merkezi sindirim hastalığı Merkezi NıH P30 DK56338 altında destek kabul ve bir Alagille Sendromu Hızlandırıcı Ödülü Tıp Vakfı.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
İzothesia (İzofluran)Henry Schein11695-6776-2
KurutucuBel-Art16-800-552
%10 PFAElektron Mikroskobu Bilimleri15712
50 mL tüpThermoScientific339653
%70 EtanolDecon Laboratuvarları2401
%95 EtanolDecon Laboratuvarlar2801
%100 EtanolDecon Laboratuvarları2701
HistoChoiceVWR Yaşam BilimleriH103-4Ltemizleme maddesi
Omnisette Doku KasetiFisher HealthCare15-197-710E
MacrosetteSimportM512
Paraplast X-TRAMcCormick Bilimsel39503002Parrafin
Doku KalıbıFisher Scientific62528-32
MikrotomMikromHM 325
Superfrost Plus Mikroskop SlaytlarıFisher Scientific12-550-15
KsilenFisher ScientificC8H10
Tris Bazlı Antijen AlmaVektör LaboratuvarlarıH-3301
Basınç OcakAnında PotLux Mini
Mini Pap KalemYaşam Teknolojileri8877
Polioksietilen 20 Sorbitan Monolaurat (Tween-20)JT BakerX251-07
Oktil Fenol Etoksilat (Triton-X-100)JT BakerX198-07
Normal Keçi SerumuJackson İmmünoresearch005-000-121
anti-CK8Gelişimsel Çalışmalar Hibridoma BankasıTROMA-IAntikor Kayıt Kimliği AB531826
anti-CK19Gelişimsel Çalışmalar Hibridoma BankasıTROMA-IIIAntikor Kayıt Kimliği AB2133570
anti-&alfa;SMASigma AldrichA2547, Klon 1A4
anti-sıçan-Alexa488ThermoFisherA21208
anti-fare-Cy5Jackson İmmünoresearch715-175-151
DAPIVektör LaboratuvarlarıH-1000
22 x 50 mm2 mikro kapak camıVWR Yaşam Bilimleri48393 059
Floresan MikroskobuLeicaDMI6000 B
Kimwipes KimtechScience05511
VECTASHIELDVektör LaboratuvarlarıH-1000Antifade Montaj Ortamı

Kaynaklar

  1. Zong, Y., et al. Notch signaling controls liver development by regulating biliary differentiation. Development. 136 (10), 1727-1739 (2009).
  2. Clotman, F., et al. Control of liver cell fate decision by a gradient of TGFβ signaling modulated by Onecut transcription factors. Genes & Development. 19 (16), 1849-1854 (2005).
  3. Karpen, S. J. Update on the etiologies and management of neonatal cholestasis. Clin Perinatol. 29 (1), 159-180 (2002).
  4. Roskams, T. A., et al. Nomenclature of the finer branches of the biliary tree: canals, ductules, and ductular reactions in human livers. Hepatology. 39 (6), 1739-1745 (2004).
  5. Oda, T., et al. Mutations in the human Jagged1 gene are responsible for Alagille syndrome. Nature Genetics. 16 (3), 235(1997).
  6. Li, L., et al. Alagille syndrome is caused by mutations in human Jagged1, which encodes a ligand for Notch1. Nature Genetics. 16 (3), 243(1997).
  7. Xue, Y., et al. Embryonic lethality and vascular defects in mice lacking the Notch ligand Jagged1. Human Molecular Genetics. 8 (5), 723-730 (1999).
  8. Thakurdas, S. M., et al. Jagged1 heterozygosity in mice results in a congenital cholangiopathy which is reversed by concomitant deletion of one copy of Poglut1 (Rumi). Hepatology. 63 (2), 550-565 (2016).
  9. Hadchouel, M. Paucity of interlobular bile ducts. Seminars in Diagnostic Pathology. 9 (1), 24-30 (1992).
  10. Emerick, K. M., et al. Features of Alagille syndrome in 92 patients: frequency and relation to prognosis. Hepatology. 29 (3), 822-829 (1999).
  11. Poncy, A., et al. Transcription factors SOX4 and SOX9 cooperatively control development of bile ducts. Dev Biol. 404 (2), 136-148 (2015).
  12. Hofmann, J. J., et al. Jagged1 in the portal vein mesenchyme regulates intrahepatic bile duct development: insights into Alagille syndrome. Development. 137 (23), 4061-4072 (2010).
  13. McCright, B., Lozier, J., Gridley, T. A mouse model of Alagille syndrome: Notch2 as a genetic modifier of Jag1 haploinsufficiency. Development. 129 (4), 1075-1082 (2002).
  14. Andersson, E. R., et al. Mouse Model of Alagille Syndrome and Mechanisms of Jagged1 Missense Mutations. Gastroenterology. 154 (4), 1080-1095 (2018).
  15. Loomes, K. M., et al. Bile duct proliferation in liver-specific Jag1 conditional knockout mice: effects of gene dosage. Hepatology. 45 (2), 323-330 (2007).
  16. Brulet, P., Babinet, C., Kemler, R., Jacob, F. Monoclonal antibodies against trophectoderm-specific markers during mouse blastocyst formation. Proc Natl Acad Sci U S A. 77 (7), 4113-4117 (1980).
  17. Skalli, O., et al. A monoclonal antibody against alpha-smooth muscle actin: a new probe for smooth muscle differentiation. J Cell Biol. 103 (6 Pt 2), 2787-2796 (1986).
  18. Kamath, B. M., et al. A longitudinal study to identify laboratory predictors of liver disease outcome in Alagille syndrome. Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition. 50 (5), 526(2010).
  19. Mouzaki, M., et al. Early life predictive markers of liver disease outcome in an International, Multicentre Cohort of children with Alagille syndrome. Liver International. 36 (5), 755-760 (2016).
  20. Shiojiri, N. Development and differentiation of bile ducts in the mammalian liver. Microsc Res Tech. 39 (4), 328-335 (1997).
  21. Crawford, J. M. Development of the intrahepatic biliary tree. Semin Liver Dis. 22 (3), 213-226 (2002).
  22. Kaneko, K., Kamimoto, K., Miyajima, A., Itoh, T. Adaptive remodeling of the biliary architecture underlies liver homeostasis. Hepatology. 61 (6), 2056-2066 (2015).
  23. Schaub, J. R., et al. De novo formation of the biliary system by TGFbeta-mediated hepatocyte transdifferentiation. Nature. 557 (7704), 247-251 (2018).
  24. Sparks, E. E., Huppert, K. A., Brown, M. A., Washington, M. K., Huppert, S. S. Notch signaling regulates formation of the three-dimensional architecture of intrahepatic bile ducts in mice. Hepatology. 51 (4), 1391-1400 (2010).
  25. Tanimizu, N., et al. Intrahepatic bile ducts are developed through formation of homogeneous continuous luminal network and its dynamic rearrangement in mice. Hepatology. 64 (1), 175-188 (2016).
  26. Walter, T. J., Sparks, E. E., Huppert, S. S. 3-dimensional resin casting and imaging of mouse portal vein or intrahepatic bile duct system. J Vis Exp. (68), e4272(2012).
  27. Popper, H., Kent, G., Stein, R. Ductular cell reaction in the liver in hepatic injury. J Mt Sinai Hosp N Y. 24 (5), 551-556 (1957).
  28. Yimlamai, D., et al. Hippo pathway activity influences liver cell fate. Cell. 157 (6), 1324-1338 (2014).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Portal Ven OranıFare Karaciğer Kesit Almaİmmünohistokimyasal BoyamaSitokeratin Alpha-SMASafra Kanalı TanımlamaKaraciğer Dokusu FiksasyonuParafin Gömme YöntemiMikrotom ile Kesit AlmaFloresan Mikroskopi Görüntüleme
Fare karaciğerinde safra kanalı yoğunluğu belirlenmesi
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.