Yöntem makalesi

Fare karaciğerinde safra kanalı yoğunluğu belirlenmesi

DOI:

10.3791/59587

⸱

30 Nisan 2019

 , 
1Program in Developmental Biology, Baylor College of Medicine, 2Medical Scientist Training Program (MSTP), Baylor College of Medicine, 3Department of Molecular and Human Genetics, Baylor College of Medicine

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fare karaciğerinde safra kanalı yoğunluğunun doğru ölçülmesini yapmak için oldukça basit ve hassas bir yöntem sunuyoruz. Bu yöntem, genetik ve çevresel değiştiricilerin etkilerini ve biliyer hastalıklarının fare modellerinde potansiyel tedavilerin etkinliğini belirlemede yardımcı olabilir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mouse, safra hastalıklarının incelenmesi için geniş bir model organizma olarak kullanılır. Safra sisteminin gelişimini ve fonksiyonunu değerlendirmek için, serum kimya, histolojik analiz ve spesifik belirteçleri için immünostik dahil olmak üzere çeşitli teknikler kullanılır. Bu teknikler safra sistemi hakkında önemli bilgiler sağlayabilse de, genellikle tüm karaciğer genelinde safra kanalı (BD) gelişimsel kusurları tam bir resim sunmaz. Bu kısmen safra gelişiminde önemli düşüklüğü olan hayvanlarda bile su drenajı için fare karaciğerinin sağlam yeteneği nedeniyle. Burada, mutant/transjenik farelerin tüm lobları kapsayan bölümlerde her portal ven (PV) ile ilişkili ortalama BDs sayısını hesaplamak için basit bir yöntem sunuyoruz. Bu yöntemle, ciğeri çeşitli genotürleri ve deneysel koşullar arasında karşılaştırma kolaylaştırmak için stereotifik bir şekilde monte ve kesitli. BDs, sitolatin-lekelenmiş kolanjiositlerin ışık mikroskobu ile tanımlanır ve daha sonra sayılan ve karaciğer bölümünde mevcut PVs toplam sayısına bölünmüştür. Örnek olarak, bu yöntemin vahşi tip fareler ile Alagille sendromunun fare modelini açıkça nasıl ayırt edebilmesi gerektiğini gösteriyoruz. Burada sunulan yöntem, biliyer ağacının üç boyutlu yapısını görselleştiren tekniklerin yerini alamaz. Ancak, BD gelişimini ve farelerde Ductular reaksiyon oluşumunun derecesini niceciksel olarak değerlendirmek için kolay ve doğrudan bir yol sunar.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Safra ağacı, memeliler karaciğerinin önemli bir parçasıdır ve safra, hepatositlerden bağırsak içine geçişine izin verir. İntrahepatik safra kanalları (BDS), bipotel hepatoblastlardan çentik ve tgfβ sinyal1,2ile ayırt edilen kolanjiositlerden oluşur. Uygun belirtimi ve cholangiocytes taahhüdü ve olgun BDs içine onların montaj intrahepatik safra ağacının gelişimi için önemlidir. Karaciğer gelişimi sırasında ya da organ rejenerasyonu üzerine büyüdükçe, safra sistemi uygun karaciğer drenaj sağlamak için karaciğerde geliştirilmesi gerekir. Dahası, bir dizi sendromli ve sendromic olmayan hastalıklar intrahepatik BDs....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm hayvanlar, kurumsal hayvan bakımı ve kullanım Komitesi kurallarına göre ve onaylanmış hayvan protokolleri altında Baylor Tıp Koleji 'nde bir bariyer hayvan tesisinde yer aldı.

1. fare karaciğer dokusu koleksiyonu

  1. Karaciğer hasat için fare hazırlanması
    1. Isoflurane kullanarak fareyi ötenize.
    2. Ölüm sağlamak için fare servikal çıkığı gerçekleştirin.
    3. Kaburga kafesinin yaklaşık bir santim altında bir enine kesi yapın.
    4. Karaciğerin tüm ventral yüzeyini açığa çıkarın.
  2. Fare karaciğer koleksiyonu
    1. Dikkatle, küçük makas ile, karın ....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Daha önce Jag1 +/– ANIMALS, algs8' in fare modeli olarak biliyer kusurları belgeledik. BD-PV oranını belirlemek için, P30 fare ciğeri ve CK8 ve CK19 (wsCK) için onları ortak olarak lekelenmiş, vasküler Marker αSMA ile birlikte. Daha sonra her karaciğer lobları tüm PVs görüntülenmiş. Şekil 2a'da gösterildiği gibi, PV 'Leri bitişik wsCK boyama (ok uçları) olan αsma-vitray olarak tanımlamıştır. WsCK olmayan αSMA-lekeli yapılar me.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Farelerde BD gelişimi ve onarımının incelenmesi, kolestatik bozuklukların patogenezi ve mekanizmasının incelenmesi konusunda önemli bir araçtır. Buna ek olarak, yeni tedavilerin geliştirilmesi kısmen tekrarlanabilir ve tercihen ölçülebilir fenotip kurulması üzerine bağlıdır. Fare modellerinde mevcut fenotipleme genellikle serum kimya, karaciğer histolojisi ve hücre tipi spesifik işaretçileri için immünostatik içerir. Bu teknikler biliyer sisteminin yapısı ve işlevi hakkında değerli bilgiler oluştursa da, belirli bir gene.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar ilgi çatışması yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar Sağlık Ulusal Enstitüleri (NıH) (R01 GM084135 ve R01 DK109982), bir pilot/fizibilite Ödülü Teksas Tıp Merkezi sindirim hastalığı Merkezi NıH P30 DK56338 altında destek kabul ve bir Alagille Sendromu Hızlandırıcı Ödülü Tıp Vakfı.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
İzothesia (İzofluran)Henry Schein11695-6776-2
KurutucuBel-Art16-800-552
%10 PFAElektron Mikroskobu Bilimleri15712
50 mL tüpThermoScientific339653
%70 EtanolDecon Laboratuvarları2401
%95 EtanolDecon Laboratuvarlar2801
%100 EtanolDecon Laboratuvarları2701
HistoChoiceVWR Yaşam BilimleriH103-4Ltemizleme maddesi
Omnisette Doku KasetiFisher HealthCare15-197-710E
MacrosetteSimportM512
Paraplast X-TRAMcCormick Bilimsel39503002Parrafin
Doku KalıbıFisher Scientific62528-32
MikrotomMikromHM 325
Superfrost Plus Mikroskop SlaytlarıFisher Scientific12-550-15
KsilenFisher ScientificC8H10
Tris Bazlı Antijen AlmaVektör LaboratuvarlarıH-3301
Basınç OcakAnında PotLux Mini
Mini Pap KalemYaşam Teknolojileri8877
Polioksietilen 20 Sorbitan Monolaurat (Tween-20)JT BakerX251-07
Oktil Fenol Etoksilat (Triton-X-100)JT BakerX198-07
Normal Keçi SerumuJackson İmmünoresearch005-000-121
anti-CK8Gelişimsel Çalışmalar Hibridoma BankasıTROMA-IAntikor Kayıt Kimliği AB531826
anti-CK19Gelişimsel Çalışmalar Hibridoma BankasıTROMA-IIIAntikor Kayıt Kimliği AB2133570
anti-&alfa;SMASigma AldrichA2547, Klon 1A4
anti-sıçan-Alexa488ThermoFisherA21208
anti-fare-Cy5Jackson İmmünoresearch715-175-151
DAPIVektör LaboratuvarlarıH-1000
22 x 50 mm2 mikro kapak camıVWR Yaşam Bilimleri48393 059
Floresan MikroskobuLeicaDMI6000 B
Kimwipes KimtechScience05511
VECTASHIELDVektör LaboratuvarlarıH-1000Antifade Montaj Ortamı

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zong, Y., et al. Notch signaling controls liver development by regulating biliary differentiation. Development. 136 (10), 1727-1739 (2009).
  2. Clotman, F., et al. Control of liver cell fate decision b....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Portal Ven OranFare Karaci er Kesit Almamm nohistokimyasal BoyamaSitokeratin Alpha SMASafra Kanal Tan mlamaKaraci er Dokusu FiksasyonuParafin G mme Y ntemiMikrotom ile Kesit AlmaFloresan Mikroskopi G r nt leme

İlgili makaleler