Dalak hücre biyoloji ve nakli bağışıklık eğitimi için vascularized heterotopik dalak transplantasyonunun fare modeli

Jiao-Jing Wang; Longhui Qiu; Ramiro Fernandez; Xin Yi Yeap; Charlie  Xiaoying Lin; Zheng  Jenny Zhang

doi:10.3791/59616

Method Article

Dalak hücre biyoloji ve nakli bağışıklık eğitimi için vascularized heterotopik dalak transplantasyonunun fare modeli

DOI:

10.3791/59616

⸱

June 11th, 2019

Jiao-Jing Wang*¹ , Longhui Qiu*¹ , Ramiro Fernandez² , Xin Yi Yeap¹ , Charlie Xiaoying Lin³ , Zheng Jenny Zhang¹^,²

¹Comprehensive Transplant Center, Northwestern University, ²Department of surgery, Feinberg School of Medicine, Northwestern University, ³Weinberg art and science college, Northwestern University

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, dalak hücrelerin kaderi ve uzun ömürlü çalışmasında güçlü bir araç olarak hizmet veren, farklı dalak mekanizmaları olan vaskülarized heterotopik dalak transplantasyonunun bir fare modelinin cerrahi adımlarını ayrıntılarıyla araştırabilir. hastalık progresyonunda hücre nüfusa ve nakli bağışıklık.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dalak, bağışıklık ve hematopoetik sistemlerin homeostazı 'te kritik bir rol oynayan benzersiz bir lenfoid organıdır. Ne olursa olsun çökelme nedenleri splenektomi geçirmiş hastalar ezici bir sonrası splenektomi enfeksiyon geliştirmek ve derin venöz tromboz ve malignite riskleri artan deneyim eğilimli. Son zamanlarda, epidemiyolojik çalışmalar splenektomi kardiyovasküler hastalıkların oluşumu ile ilişkili olabileceğini belirtti, dalak fizyolojik fonksiyonları henüz tam olarak tanınmadı düşündürmektedir. Burada, sadece farklı biyolojik süreçlerde splenik immün hücre alt setlerinin fonksiyon ve davranışsal aktivitesini incelemek için kullanılabilecek değil, aynı zamanda test etmek için güçlü bir araç olabilir vaskülarize heterotopik dalak nakli, bir fare modeli tanıtmak bazı hastalıklarda dalak nakli terapötik potansiyeli. Bu modelin Ana cerrahi adımlar donör dalak hasat içerir, alıcı yerli dalak kaldırılması, ve dalak greft revaskülarizasyon. Konjenik fare suşları (örn., CD 45.1/CD 45.2 arka planlar ile fareler) kullanarak, syngeneic transplantasyondan sonra, hem donör türetilen splenik lenfositler ve miyeloid hücreler, ameliyat sonrası gün olarak erken olarak greft dışına göç ederek böylece benzersiz bir Chimera üreten alıcı hücrelerinin birden fazla tür akını. Nispeten zorlu tekniklere rağmen, bu prosedür >% 90 başarı oranı ile yapılabilir. Bu model, sürekli devlet sırasında ve dalak nakli takiben bir hastalık ayarında, böylece dalak türevi bağışıklık hücrelerinin farklı rolünü keşfetmek için büyük bir fırsat sunan, kaderin, uzun ömürlü ve splenanositlerin fonksiyonunu izleme sağlar farklı hastalık süreçleri.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dalak vücutta en büyük ikincil lenfoid organ ve bağışıklık ve hematopoetik sistemlerde kritik öneme sahiptir. Fonksiyonları öncelikle iki morfolojik ayrı bölmeler, kırmızı hamuru ve beyaz hamuru¹tarafından gerçekleştirilir. Kırmızı selüloz, venöz sinüslerin ve retiküler liflerden, retiküler hücrelerden ve ilişkili makrofajlardan oluşan splenik kabloların üç boyutlu meshişidir. Bu eşsiz yapı, kırmızı hamuru, yabancı maddeleri ve eski veya hasarlı eritrositleri kaldıran etkili bir kan filtresi olarak hareket etmesini sağlar. Beyaz hamuru foliküller, marjinal bölge ve periarteriolar lenfoid Kılıf (PALS) içerir ve antijen bindirme ve işleme, lenfos....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada tüm prosedürler ve hayvan kullanımı Northwestern Üniversitesi Iç hayvan bakımı ve kullanım Komitesi (ıABUC) tarafından onaylanmış protokollere göre yapılmıştır. Bu çalışmada, 8 ila 10 hafta eski erkek CD 45.2 ve CD 45.1 fareler (hem BALB/c arka planda, Jackson laboratuvarından) dalak bağış ve alıcılar olarak kullanılan, sırasıyla syngeneic dalak transplantasyon modelleri oluşturmak için. Tüm hayvanlar Northwestern Üniversitesi hayvan tesislerinde steril ortamda yer aldı. Göz yağlayıcısı, kuruluğu önlemek için anestezinin sonrası tüm farelere uygulandı.

1. cerrahi hazırlık, Anestezizasyon ve Analgesia rejimi

Cerrahi pl....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fare dalak nakli tüm prosedür deneyimli mikrocerrahlar tarafından 90 dk içinde tamamlanabilir. Laboratuvarımız farelerde 100 üzerinde dalak nakli gerçekleştirdi. Başarı oranı her iki alıcı fare ve dalak greft sonrası ameliyat günü (POD) 1 veya POD 7 (bizim çalışma uç noktası) hayatta kalma tarafından tanımlanan% 90 üzerinde. Dalak greftinin hayatta kalması, splenanositlerin makroskopik görünümü ve akış sitometri analizi ile doğrulandı. Deneyimimize dayanarak, akış sitometri Analizi (canlı.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Çekici kanıtlar, dalak türevi monositlerin ateroskleroz¹⁹, akut iskemik beyin²⁰ veya akciğer hasarı¹⁸gibi steril inflamatuar süreçlerde önemli bir rol oynarlar, hem de miyokard I/R yaralanma ve remodeling²¹^,²²^,²³. Bu raporlar, kalp-damar hastalığının önemli bir (özellikle de bir numaralı katil küresel olduğu verilen) bir çok kronik hastalıklarda dalağın altı.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar Northwestern Üniversitesi kapsamlı nakil merkezi ve kaynak ve finansman desteği için Feinberg Tıp araştırma çekirdekleri programı teşekkür ederiz. Özellikle, akış Cytometri ve histoloji Hizmetleri Northwestern Üniversitesi akış sitometri çekirdek tesis ve fare histolojisi ve phenotyping Laboratuvarı tarafından, sırasıyla, her ikisi de NCı P30 tarafından desteklenmektedir-CA060553 Robert H verilir Lurie kapsamlı Kanser Merkezi. Bu taslağı düzeltmek için Bay Nate Esparza 'ya teşekkür ederiz.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
Name	Company	Catalog Number
Ketamin	Wyeth	206205-01
Xylazine	Lloyd Laboratories	139-236
Heparin çözeltisi	Abraxis Farmasötik Ürünler	504031
Enjeksiyon sınıfı normal salin	Hospira Inc.	NDC 0409-4888-20
%70 Etanol	Pharmco Ürünleri A.Ş.
ThermoCare Küçük Hayvan Yoğun Bakım Sistemi	Thermocare, Inc.
Adson Forseps	Roboz Cerrahi Aletler	RS-5230
Derf İğne Tutucu	Roboz Cerrahi Aletler	RS-7822
Ekstra İnce Mikro Diseksiyon Makası	Roboz Cerrahi Aletler	RS-5881
Mikro klipsli	Roboz Cerrahi Aletler	RS-5420
7-0 ipek	Braintree Bilimsel	SUT-S 103
11-0 naylon 4 mm (3/8) iğne üzerinde	Sharpoint DR4	AK-2119
Ms CD45.2 antikoru	BD Bioscience	553772
Ms CD45.1 antikoru	BD Bioscience	553776
Ms CD11b antikoru	BD Bioscience	557657
Ms B220 antikoru	BD Bioscience	553089
Ms Ly6C antikor	eBioscience	48-5932-80
Ms Ly6G antikoru	BD Bioscience	561236
Ms F4/80 antikoru	BD Bioscience	565614
Ms CD11c antikoru	BD Bioscience	558079
Ms CD3 antikoru	eBioscience	48-0032-82
Ms CD4 antikoru	BD Bioscience	552051
Bayan CD8 antikoru	BD Bioscience	563786
CANLI/ÖLÜ&ticaret; Sabitlenebilir Menekşe Ölü Hücre Leke	Kiti Thermo Fisher	L34955

111000140

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Cesta, M. F. Normal structure, function, and histology of the spleen. Toxicologic Pathology. 34 (5), 455-465 (2006).
Mebius, R. E., Kraal, G. Structure and function of the spleen. Nature Reviews Immunology. 5 (8), 606-616 (2005).
Misiakos, E. P., Bagias, G., Li....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Dalak hücre biyoloji ve nakli bağışıklık eğitimi için vascularized heterotopik dalak transplantasyonunun fare modeli

In This Article

Summary

Abstract

Introduction

Protocol

Results

Discussion

Disclosures

Acknowledgements

Materials

References

Reprints and Permissions

Tags

Related Articles