Method Article

Sıçanda Median Sinir Rejenerasyonunun Değerlendirilmesinde Fonksiyonel ve Fizyolojik Yöntemler

DOI:

10.3791/59767

⸱

April 18th, 2020

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Anatomy Department, NOVA Medical School, 2Plastic and Reconstructive Surgery Department and Burn Unit, Centro Hospitalar de Lisboa Central, 3Physics Department, Faculty of Sciences and Technology, LIBPhys, 4Glycoimmunology, CEDOC, NOVA Medical School, 5UCIBIO, Life Sciences Department, Faculty of Sciences and Technology, Universidade NOVA de Lisboa, 6Tissue Repair Unit, CEDOC, NOVA Medical School, 7Pathology Department, Centro Hospitalar de Lisboa Central

* These authors contributed equally

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sunulan median sinir farklı üretmek için bir protokoldür (MN) lezyonlar ve sıçan da onarım. Ayrıca, protokol çeşitli noninvaziv davranış testleri ve fizyolojik ölçümler kullanarak sinirfonksiyonel kurtarma değerlendirmek için nasıl gösterir.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu araştırmanın temel amacı, sıçanda farklı median sinir (MN) lezyonlarının nasıl oluşturulup onarılabildiğini göstermektir. Ayrıca postoperatif fizyoterapisimüle etmek için farklı yöntemler sunulmuştur. Multipl standart stratejiler periferik sinir lezyonu ve onarımı bir MN modeli kullanarak motor ve duyusal iyileşme değerlendirmek için kullanılır, böylece sonuçların kolay karşılaştırılması na izin. MN yaralanması geçiren sıçanlara ameliyat sonrası fizyoterapi benzeri bir ortam sağlamak için çeşitli seçenekler mevcuttur. Son olarak, kağıt çeşitli noninvaziv testler (yani, kavrama testi, pin dikmek testi, merdiven basamak yürüme testi, ip tırmanma testi ve yürüme izi analizi) ve fizyolojik ölçümler (kızılötesi termografi, elektroneuromyography, fleksiyon gücü değerlendirmesi ve fleksör carpi radialis kas ağırlığı tayini) kullanarak MN kurtarma değerlendirmek için bir yöntem sağlar. Bu nedenle, bu model özellikle insan türüne sonuçların ekstrapolasyon kolaylaştıran, bir klinik senaryo çoğaltmak için uygun görünüyor.

Siyatik sinir periferik sinir araştırmalarında en çok çalışılan sinir olmasına rağmen, sıçan MN analizi çeşitli avantajlar sunar. Örneğin, MN lezyon çalışmalarında eklem kontraktürlerinin insidansı ve etkilenen ekstremitenin otosakatlanma sıklığı azalmaktadır. Ayrıca, MN kas kitleleri ile kaplı değildir, onun diseksiyon daha kolay siyatik sinir daha yapma. Buna ek olarak, MN kurtarma daha erken gözlenir, MN siyatik sinir daha kısa olduğu için. Ayrıca, MN kolulnar sinir paralel bir yol vardır. Bu nedenle, ulnar sinir kolayca MN yaralanmaları onarmak için sinir grefti olarak kullanılabilir. Son olarak, sıçanlarda MN ön bacak ta bulunur, insan üst ekstremite benzer; insanlarda, üst ekstremite en periferik sinir lezyonları sitedir.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Periferik sinir lezyonları travma, enfeksiyon, vaskülit, otoimmünite, malignite ve/veya radyoterapi sonucu düzenli olarak ortaya çıkar1,2. Ne yazık ki, periferik sinir onarımklinik öngörülemeyen ve sık sık hayal kırıklığı sonuçları sunmaya devam ediyor3,4. Etkilenen4,5,,6,7' nin beklentisini iyileştirmek için hala önemli ölçüde temel ve çevirisel araştırmalara ihtiyaç duyulduğu konusunda yaygın bir fikir birliği vardır.

Sıçan MN insanların büyük benzerlikler gösterir8,9 ( Şekil1). Aksiller bölgede brakiyal pleksus kaynaklanan, Bu sinir kol medial yönü içine iner, dirsek ulaşan, ve önkol ventral bölmesi kasların çoğunluğu na dallanma. MN ele ulaşır, burada thenar kasları ve ilk iki lumbrikal kasları innerve yanı sıra sıçan ın el derisinin bir parçası9 (Şekil 1).

Sıçan MN kullanarak, yeterli insanlarda periferik sinir lezyonları çoğaltmakmümkündür 10,11,12. Bu sinir alışılmış kullanılan siyatik sinir göre çeşitli potansiyel araştırma avantajları vardır. MN sıçanların ön ekstremite sinde yer aldığından (insan üst ekstremitelerine benzer), pelvik ekstremitenin önemli bir kısmını innerve eden siyatik sinirle karşılaştırıldığında, farenin sağlığı üzerinde çok daha küçük bir etkiyle deneysel olarak zarar görebilir13. Ayrıca, insanlarda en klinik lezyonlar üst ekstremite oluşur, hangi sıçan forelimb karşılık gelir10,11,12,14,15,16.

Bu kağıt sıçanda farklı tipte MN lezyonlarının nasıl üretilebildiğini göstermektedir. Ayrıca postoperatif fizyoterapisimüle etmek için farklı yollar sunulmaktadır. Son olarak, MN fonksiyonel kurtarma değerlendirmek için testler açıklanmıştır. Periferik sinir lezyonu ve onarımının MN modelini kullanarak motor ve duyusal iyileşmeyi değerlendirmek için birden fazla standart strateji mevcuttur, böylece sonuçların kolay bir şekilde karşılaştırılmasına izin verilir. MN modeli özellikle klinik senaryoyu çoğaltmak için uygundur, insan türüne sonuçların ekstrapolasyonunu kolaylaştırır.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hayvan denekleri ile ilgili tüm prosedürler Nova Üniversitesi Tıp Fakültesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi ve Etik Komitesi tarafından onaylandı, Lizbon, Portekiz (08/2012/CEFCM).

1. Median sinir cerrahisi

NOT: Ameliyat sırasında aseptik tekniği uygulayın. Kişisel koruyucu aletler (PPE) kullanın ve steril bir cerrahi gece elbisesi giymek17. Ameliyat tan önce gerekli tüm cerrahi aletleri otoklav (Malzeme Tablosu'nabakın).

  1. 12 haftalık Wistar faresi kullan. Ameliyattan 7 gün önce 12 saat açık-koyu döngüile onlara reklam libitum yiyecek ve su sağlayın. Anestezi den önce, gerekli anestezi miktarını belirlemek için sıçan tartın.
  2. Ketamin (40-80 mg/kg vücut ağırlığı) ve ksilazin (5-10 mg/kg vücut ağırlığı) karışımının intraperitoneal enjeksiyonu ile sıçananestezi. Bir parmak tutam yanıt eksikliği ve tüm prosedür boyunca solunum hızı gözlemleyerek anestezi derinliği kontrol edin18,19. 110 döngü/dk veya parmak sıkışmasına motor yanıt18,20üzerinde bir solunum hızı gözlenirse ek analjezi sağlayın.
  3. Preemptive analjezi sağlamak için 1 mg/kg meloksikam deri altı enjekteedin20,21.
  4. Ameliyat sırasında kornea aşınmasını önlemek için, her iki göze de oftalmik jel uygulayın.
  5. Sağdaki medial yönü üzerinde saç kaldırmak için bir tüy dökücü krem kullanın. Bir kez yapılır, krem17kaldırmak için sıcak tuzlu ile yıkayın.
  6. Bir ısıtma yastığı üzerinde supine pozisyonda sıçan lay. Ameliyat bölgesinin üzerine iyot veya klorheksidin bazlı cerrahi scrub uygulayın. En az 15 s bekletin ve sonra etanol ile silin. Uygulamayı 3x tekrarlayın. Ameliyata başlamadan önce fırçalamanın ciltle en az 2 dakika boyunca temas halinde olduğundan emin olun.
    NOT: Cerrahi bölge enfeksiyonunu önlemek için alternatif protokoller için araştırma biriminizdeki enfeksiyon kontrol yetkilisine başvurun19.
  7. Drape cerrahi alan17.
    NOT: Tüm prosedürleri sıkı aseptik koşullar altında gerçekleştirin19.
  8. Bir sayı 15 neşter bıçak kullanarak, derin fasyal düzleme sağ kol ve pektoral bölgenin medial yönü cilt eğim. Dikkatle bir elektrikli kateter kullanarak herhangi bir kanayan damarları cauterize.
  9. Dikkatle kasları kapsayan beyazımsı bir kılıf olarak sunar brakiyal fasya bölmek, bir termokopery veya künt makas bir çift kullanarak, kol medial yönü vasküler ve sinir yapılarına zarar vermemeye özen.
  10. Pektoralis majör kas terminal ekleme altında künt bir makas bir çift açın, altta yatan aksilla arter ve ven uzak bu kas kızdırmak için, yanı sıra brakiyal pleksus terminal dalları.
  11. Bir elektrik kedtrasyon ile pektoralis büyük kas ekleme bölün. Maruz ve bölüm pektoralis minör kas.
  12. Künt brakiyal damarlardan Ve dirsek kadar aksiller bölgeden başlayarak ulnar sinir den MN incelemek. Bu brakiyal pleksus farklı terminal dalları maruz sağlar, yani median, ulnar, radyal, aksiller ve musculocutaneous sinirler(Şekil 2).
  13. Aşağıda açıklandığı gibi farklı deney gruplarını ayırın.
    1. Sadece MN'yi inceleyerek Sham grubunu oluşturun.
    2. Bir numara 5 mikrocerrahi forseps veya benzer bir alet22,23kullanarak 15 s için kolun orta kısmında MN sıkıştırarak Crush grubu oluşturun.
    3. Koldaki MN'nin orta kısmından 10 mm uzunluğunda bir segmenti çıkarmak için bir çift mikrocerrahi makas kullanarak Eksizyon grubunu oluşturun. Aksonal büyümeyi önlemek için 8/0 Naylon sütür ile sinirproksimal kütük ligate.
    4. Graft grubunu ikinci adımda açıklanan MN'nin 10 mm uzunluğundaki segmentini kullanarak ve 180° döndürerek oluşturun. Kesilen 10/0 Naylon dikişleri kullanarak kesitli MN'nin proksimal ve distal kütüklerini sinir greftine dikin.
  14. Kesilen 5/0 Naylon dikişleri kullanarak cilt yarasını kapatın10,24.
  15. 3günboyunca sıçanlar reklam libitum için kullanılabilir hale 50 mL plastik su şişelerinde 4.48 mg /mL konsantrasyonelde etmek için musluk suyu25 43 mL ile karışık kiraz aromalı asetaminofen 7 mL ile postoperatif analjezi sağlayın.

2. Barınma ve fizyoterapi

  1. Egzersiz ayarlarına daha kolay ve daha hızlı adaptasyon sağlamak için farelerin ameliyattan 2-4 hafta önce fizyoterapi cihazlarıyla temas almasına izin verin. Egzersizleri aşağıda belirtilen prosedürleri izleyerek gerçekleştirin.
  2. Günde bir kez, bireysel bir fizyoterapi küre içinde her sıçan yerleştirin ve daha sonra birkaç engel ile bir odada küre yerleştirin. Fare ambulate ve yarım saat boyunca serbestçe oda keşfetmek sağlar.
  3. Onları egzersiz yardımcı olmak için dahil çalışan tekerlekler ile yalnız kafeslerde tek tek fareler House.
  4. 4-5 hayvandan oluşan gruplar oluşturur ve bu grupları kişiselleştirilmiş kafeslerde barındırın. Merdivenler, halatlar, çalışan tekerlekler ve diğer çevresel zenginleştirme öğeleri ni ekleyerek kafesleri kişiselleştirin.
  5. Ameliyattan bir gün sonra bireysel fareleri kişiselleştirilmiş kafeslere geri döndürün.
  6. Ameliyattan 3 gün sonra fizyoterapi egzersizlerine devam edin.

3. Fonksiyonel testler

  1. Fonksiyonel testleri gerçekleştirmeye başlamadan bir hafta önce, pozitif takviye olarak kullanılmak üzere gıda davranır ile sıçanlar aşina. Her testin başarıyla tamamlanmasından sonra, ameliyat öncesi ve sonrası bu takviyeyi sağlayın. 3 haftalık ilk eğitim süresinden sonra, ameliyattan 1 hafta sonra tüm testlere devam edin.
  2. Fareler doğal olarak daha aktif olduğunda, akşamları testleri gerçekleştirin. Ameliyattan 1 hafta sonra devam testleri.
  3. Bir ızgara üzerinde sıçan yerleştirerek Kavrama Testi gerçekleştirin ve kuyruğundan asansör, onun ön pençeleri ile ızgara kapmak izin11,26. Sıçan her iki forepaws ile ızgara kapmak eğer bir "Pozitif" puanı atayın. Sıçan yaralı pençe ile ızgara kapmak değilse bir "Negatif" puan atayın.
    NOT: Pozitif Kavrama Testi, MN'nin motor bileşeninin16,27' de çalıştığını gösterir.
  4. Pin Prick Testi28,29gerçekleştirin.
    1. 4 mm x 4 mm kare ızgara desenli plastik bir platform yapın. 21 cm uzunluğunda metalik çerçeve ile bu ızgara için destek sağlayın.
    2. Fareyi platforma yerleştirin ve ızgarayı 15,5 cm x 15,5 cm x 11 cm şeffaf plastik kutu ile kaplayın. Normal aktiviteler (örn. keşif ve büyük bakım) dinleyene kadar birkaç dakika bekleyin.
    3. Fare sabit ve dört pençeleri üzerinde duran test başlatın.
    4. Bir ayna yardımıyla, bir anesteziölçer (örneğin, 25 g bükme kuvveti ile 4 numaralı Von Frey saç) örgü ile ekleyin ve MN cilt bölgesinde forepaw palmar yönü dürtmek (Şekil 1). Her değerlendirmeden sonra birkaç saniye bekleyerek, alternatif olarak her forepaw üzerinde değerlendirme 5x tekrarlayın.
    5. Doğru değerlendirme için Von Frey filament30 bükme kontrol edin. Skor çekilme yanıtları aşağıdaki gibi: "0" hiçbir çekilme yanıt için, "1" sıçan yavaş yavaş filament pençe kaldırırsa, "2" sıçan hızlı uyarıcı yanıt ve pençe kaldırır veya pençe yalar.
      NOT: Filamentin ambülasyonu ve ısırması gözlenirse uyarıcıyı tekrarlar, çünkü bunlar belirsiz yanıtlar olarak kabul edilir.
  5. Eğitim
    NOT: Düşük ışıklı bir ortamda akşam ameliyat yapmadan önce 3 hafta boyunca günlük fareler tren. Eğitim seansları özellikle halat tırmanma, merdiven basamak ve yürüyüş parçaları testleri için tavsiye edilir. Bu ip tırmanma testi, merdiven basamak ve son olarak yürüyüş parçaları testi ile başlayan, daha önce sunulan sırayla yapılabilir. Yeni bir testten önce aynı hayvana birkaç dakika dinlenme izni verin.
    1. İlk hafta boyunca, merdiven / halat / koridor son üçte, kutunun girişine yakın fare yerleştirin. Hayvanı, kuyruğunun ucunu hafifçe dokunarak ve/veya çekerek kutu nun açılmasına doğru hareket etmesini şart landırın. Testi tekrarlamadan önce fareye bir gıda ikramı yapın ve kutuya girdikten sonra birkaç saniye dinlenmeye izin verin. 5 gün boyunca her gün 5x tekrarlayın.
    2. İkinci hafta boyunca, merdiven / halat / koridor ikinci üçte hayvan yerleştirin 3.5.1 adımları tekrarlayın.
    3. Üçüncü hafta boyunca, kutunun girişinin karşı tarafına, merdiven / halat / koridor alt fare yerleştirin. Adımları 3.5.1'de tekrarlayın, ancak hayvanı testi doğru tamamladığında ödüllendirin.
  6. Merdiven Basamak Testini gerçekleştirin.
    NOT: Bu test forelimb mukavemetinin değerlendirilmesi, adımatma, yerleştirme ve koordinasyon31için kullanılır.
    1. Fareyi merdivenin dibine yerleştirin (120 cm x 9 cm x 2 cm, 18 adım 1,5 cm kalınlığında, aralıklı 4 cm arayla) ve farenin kuyruğuna hafifçe dokunun. Merdivenin 10° eğimde yerleştirildiğinden ve koyu ahşap 31,5 cm x 35 cm x 35 cm'lik bir kutuüzerinde 13,20 cm x 11 cm'lik bir açıklığa yol açtığından emin olun.
    2. Fare merdiveni tırmanmaya başladığında zamanlayıcıyı başlatın ve farenin snout kutusunun girişinde geçtikten sonra zamanlayıcıdurdurun.
    3. Zamanı kaydedin ve her biri en az 1 dk aralıkla ayrılan test 3x'i tekrarlayın.
  7. Halat Tırmanışı
    NOT: Bu test, MN kurtarma32bağlıdır kavrama gücü, değerlendirmek için kullanılır.
    1. Halat altına sıçan koyun ve yavaşça kuyruğuna dokunarak tırmanmaya ikna. Hayvan tırmanmaya başladığında zamanlayıcıyı başlatın ve farelerin sonunun platformun girişinden geçtiği anda onu durdurun.
    2. Her test için, fare halata tırmanırken platforma tırmanmak için geçen süreyi ve yaralı pençenin kayma sayısını kaydedin. Hayvan görev sırasında tereddüt etmezse veya tırmanmayı durdurmazsa testi geçerli olarak düşünün. Görevi doğru yaptıktan sonra fareye atıştırmalık bir atıştırma sağlayın.
    3. Zamanı kaydedin ve her biri en az 1 dakikalık bir aralıkla ayrılan test 3x'i tekrarlayın.
  8. Yürüyüş Parçaları
    NOT: Bu test forelimb motor kurtarma33,34değerlendirilmesi için kullanılır.
    1. 16,5 cm yüksekliğinde, x 8,7 cm genişliğinde x 43 cm uzunluğunda kapalı bir geçitten oluşan bir aparat ayarlayın. Bunun siyah ahşap 23 cm x 36 cm x 28 cm'lik bir kutunun duvarlarında dikdörtgen 8,8 cm x 8,2 cm açıkolmasını sağlayın. Kutunun girişini hızla kapatmak için dikey bir sürgülü kapı ekleyin. Sıçan33,34almak için kullanılacak çıkarılabilir bir üst ekleyin.
    2. Koridorun zeminine bir parça grafik kağıdı yerleştirin. Kuyruğundan sıçan kapmak ve metilen mavisi batırılmış bir boyama fırçası tutun sağlar. Kutunun içinde yürümek yapmak için koridorun girişinde sıçan yerleştirin. Grafik kağıdını koridorun zemininden çıkarın ve her iki forepaws iyi bir temsili izlenim elde edilene kadar testi tekrarlayın.
    3. Elde edilen baskılar, net ardışık forepaw baskılar ile birini seçin, bir tiff veya jpeg biçiminde fotoğraf ve açık erişim yazılımı FIJI35kullanarak aşağıdaki parametreleri ölçmek.
      NOT: İlk olarak, grafik kağıdındaki işaretleri kullanarak her görüntüyü kalibre edin (Analiz | Ölçeği ayarlama) İkinci, her görüntüyü 8 bit formatına dönüştürün (Resim | Türü | 8-bit). Daha sonra, pençe baskısını seçmek için Dikdörtgen Seçim Aracı'nı kullanın. Resmin bu bölümünü kırpma (Resim | Kırpma). Her resimde, pençe baskılarını vurgulayın ve görüntüyü eşleyerek arka planı kaldırın (Resim | Ayarla | Eşik).
      1. Pençe gösterim alanını ölçerek duruş faktörlerini ölçün. Pati baskısını seçmek için Dikdörtgen Seçim Aracı'nı kullanın ve Control + Mtuşuna basın.
      2. Pençe gösteriminin en uzun uzunluğunu ölçerek yazdırma uzunluğu faktörünü ölçün (3.8.3.2-3.8.3.6 adımları için, en uzak iki noktayı seçmek için Düz Çizgi Seçim Aracı'nı kullanın ve Control + Mtuşuna basın).
      3. Pençe gösteriminin en geniş genişliğini ölçerek parmak yayma faktörünün ölçün.
      4. İkinci ve üçüncü parmaklar arasındaki en geniş genişliği ölçerek ara parmak yayma faktörlerini ölçün.
      5. Belirli bir tarafta ki ardışık pençe gösterimlerinin homolog noktaları arasındaki mesafeyi ölçerek adım uzunluğunu ölçün.
      6. Pençe gösteriminin merkezi kısmı ile hareket yönü arasındaki dik mesafeyi ölçerek desteğin tabanını ölçün29,33,36.
        NOT: Son iki ölçüleri iki çift ardışık ikili pençe gösterimi 33 olarakgerçekleştirin.

4. Fizyolojik ölçümler

  1. Kızılötesi Termografi (IRT)37,,38,39.
    1. Ölçümlerin yapılacağı odanın sıcaklığının 0,1 °C termal çözünürlüğe sahip normal bir dijital hidrotermometre kullanılarak 18 °C-25 °C arasında olduğundan emin olun. Önemli Bir ısı kaynağının (örn. bilgisayarlar veya buzdolapları) bulunmadığından emin olun.
    2. Değerlendirmeden önce fareleri değerlendirme odasına 2 saat getirerek alıştırın. Deneye başlamadan önce, fareyi yukarıda açıklandığı gibi anestezi edin (adım 1.3-1.6) veya kurumun protokolünü izleyerek. Denemeyi başlatmadan önce bir parmak tutamının yanıtının eksikliğini kontrol edin.
    3. Kızılötesi termografik kamerayı satın alınmadan 15 dakika önce açın ve değerlendirmeler sırasında kapatmayın. Kameranın emissivity parametresini farenin derisinin (ε = 0,98)37,40,41ile eşleşecek şekilde ayarlayın.
    4. Bir polietilen sünger ile temiz ve istikrarlı bir yüzeye onun dorsum üzerinde sıçan yerleştirin. Yansıtıcı malzemeler ve diğer olası eşya kaynakları olmadığından emin olun. Çift yüz tutkal bant ile supination onun forepaws dikkatle düzeltin. Tüm değerlendirmeler sırasında farenin merkezi sıcaklığını izlemek için rektumun içine 2 cm dijital termometre yerleştirin.
    5. Termografik kamerayı 90° açıda ve sıçandan 30 cm uzakta tutun. Kamerayı tüm hayvanın vücuduna odakla. 30 s arayla üç kızılötesi termografi görüntüleri elde edin.
    6. Edinilen termogramları bir bilgisayara aktarın ve analiz yazılımını kullanarak analiz edin. Her iki forepaws plantar yüzeyinin sıcaklığını, örneğin ilk metakarpal ayak yastığının merkezinde, MN'nin plantar bölgesinde sabit bir dikdörtgen ilgi alanı (örneğin, 9 x 11 piksel) kullanarak tanımlayın (Şekil 1). Ücretsiz FLIR Tools yazılımını kullanarak, üzerine çift tıklayarak termografiyi seçin. Soldaki araçlar çubuğunda "Kutu ölçüm aracı ekle" düğmesini seçin ve her iki forepaws plantar alanı üzerinde 9*11 piksellik bir dikdörtgen çizin. Dikdörtgenin boyutunu piksel olarak ayarlarken doğrulanabilir. Her iki ön planda da yap. Görüntünün sağ tarafında maksimum, minimum ve ortalama sıcaklıkları bulabilirsiniz.
    7. Daha önce çizilen YG üzerinde, sağ tıklatın ve dışa aktarma seçin. Ortalama, maksimum ve minimum sıcaklıklar ve YG'nin sıcaklık matrisi sonra .csv belgesine aktarılır. Bu veriler daha sonra veri analizi yazılımı kullanılarak incelenebilir.
  2. Elektroneuromiyografik (ENMG) Değerlendirmesi
    1. Bir elektrik uyarıcısı ayarlayın. Bir çift tek kullanımlık akupunktur iğnesini (0,25 mm x 25 mm) ihmal edilebilir bir empedans [<1 Ω]) ve 25 mm arasında bantlayarak uyarım için elektrotlar oluşturun. Şimdi uyarıcı ve elektrot bir veri toplama birimine gelen sinyalleri almak ve bilgisayar yazılımı ile işlenebilir dijital sinyaller dönüştürmek için bağlayın.
    2. Aynı odada değerlendirmeler ivecetti ve her zaman aynı kontrollü çevre koşulları altında42,43,44. Farelerin veri edinimi başlamadan önce derinden anestezi olduğundan emin olmak için ön pençesini sıkıştırın.
      NOT: Derin anestezi, sıçanların spontan gönüllü ve/veya istemsiz hareketleri ile ilişkili değişkenliği en aza indirmek için son derece önemlidir43.
    3. MN'yi 1.8-1.13 adımlarında açıklandığı gibi cerrahi mikroskop altında her iki tarafta ortaya çıkar. Bir ventral orta hat kesi ile önkol içine brakiyal kesiler uzatmak için bir numara 15 neşter bıçak kullanın.
    4. Iris makas kullanarak örten antebrakial fasyayı künt bir şekilde ayırarak fleksör digitorum sublimis kaslarının yüzeysel yönünü ortaya çıkar. Sinyal zemin fişini bağlamak için sol arka bacak quadriceps femoris kas zemin iğne sokul.
    5. Sağ ön patinile başlayın ve kayıt elektrotlarını ön patininin fleksör digitorum sublimis kas göbeğine ve MN'deki lezyon bölgesine uyarım elektrot proksimaline yerleştirin. Bu elektrotları tuzlu ile nemlendirin.
    6. Yazılımın aşağıdaki gibi ayarlandığından emin olun: kanal giriş portu 1 (CH1) – 0-10 V uyarıcı; ve kanal giriş portu 2 (CH2) - EMG 30-1.000 Hz. 10 mV'lik bir stimülasyon genliği seçerek başlayın ve 50 kHz'lik bileşik kas etki potansiyellerini 40.000 ms süreyle CMAPs numune oranını kaydedin. Sol pençe42,43,,44için aynı tekrarlayın.
      NOT: Sinyal 1000x'e yükseltilir ve 30-1.000 Hz bandı kullanılarak filtrelenir. Stimülasyon çıkışı 1 ms 42,43,44süresi ile tek bir nabız için ayarlanır.44
    7. Kayıt aygıtı yazılımında kaydedilen dosyayı açın.
      NOT: Varsayılan olarak, ekran kırmızı üst çekme pencereleri gösterecektir, uyarıcı darbeler, ve mavi kayıt cihazı ENMGs altında. Yatay kaydırma çubuğunun zaman ölçeğinin altına kaydırılması, tam kaydın görüntülenmesine olanak tanır. İki ana araç, Zoom aracı ve I-Beam aracı,panelin sağ alt tarafında bulunmaktadır. Yakınlaştırma aracınıkullanarak, CMAP'ların görselleştirilmesini optimize etmek ve grafikleri keşfetmek mümkündür. Görselleştirme ekranına iyi bir uyum sağlamak için, yakınlaştırma sonra ekranı ayarlamak için gerekli olabilir. Bunu yapmak için Ekran| Otomatik Ölçekdalga formları. I-Beam aracı grafiklerin belirli alanlarının seçimine ve istenilen ölçümlerin performansına olanak tanır. Grafiklerin üstünde, ölçümlerin görüntülendiği üç küçük pencere vardır. P-P, seçilen alanın volt cinsinden (hem uyarıcı kaydında hem de ENMG'lerde) ortalama genlik değerini gösterirken, Delta-T bu seçimin zaman aralığını gösterir.
    8. Bileşik kas eylem potansiyelinden parametreleri ölçün (CMPAs, Tablo 1'deaçıklanan) yazılım fişinden homonymous ölçüm araçları kullanarak "Araç Kutusu MUAP'ların denetimsiz sınıflandırılması ve EMG eylem potansiyelleri için"45.
    9. Her sıçan için, cmaps genliği daha fazla artmaz sonra stimülasyon gerilimi en az değeri belirlemek. 0,05 mV'lik bir uyarıcıdan başlayın ve 0,05 mV'lik artımlı gerilimlerde art arda artan uyaranlar verin.
    10. Supramaximal stimülasyon değeri elde etmek için bu voltajın %20 üzerinde bir uyarıcı uygulayın.
    11. İkinci değer belirlendikten ve ilgili uyarıcı uygulandıktan sonra, sonraki CMAPs parametrelerini kaydedin.
  3. Fleksiyon mukavemeti değerlendirmesi
    1. Adım 4.2'deki gibi MN'yi elektriksel olarak uyarmak için aynı uyarıcı ve stimülasyon elektrotlarını kullanın. Giriş kanalı CH1'i uyarıcı (0-10 V) olarak ayarlayın ve 1 ms süresi ve 1 Hz frekansı olan darbeler ile 30 s'lik uyaran süresi için çıkış ayarlarını ayarlayın. D = 0,001 N çözünürlüğe sahip bir dinamometreyi bilgisayara bağla.
      NOT: Daha önce bilgisayara yüklenen ve dinamometre46'yabağlanan yazılım kullanılarak her zaman (N/s) kuvvet çizimi oluşturarak verilerin gerçek zamanlı görselleştirilmesi elde edilebilir.
    2. 4.1.4 adımda açıklandığı gibi fareyi yerleştirin. Her iki forepaws ikinci interosseous boşluk üzerinden 5/0 ipek dikiş döngü yerleştirin. Dikiş halkasını dinamometrenin kancasına ve ön patacının dinamometreye aşırı zorlanma koymadan hizalanmasına bağlı.
    3. Dinamometre okumalarında sahte hareket girişimlerini önlemek için kontralateral pençeyi bantla düzeltin.
    4. SIFIR düğmesine tıklayarak dinamometreyi sıfıra ayarlayın.
    5. Gerilim düğümayarlayarak 1,5 V bir supramaximal genlik stimülasyon için uyarıcı ayarlayın.
    6. PC'de AFH-01 yazılımını açın. Ayırıcı "Cihazı" açın ve FH5cihazını seçin. Yeni bir dosya oluşturun ("Measurements1" varsayılan olarak verilen addır) ve dosyayı yeniden adlandırın.
    7. Elektrot'u MN'nin proksimal kısmına yerleştirin, programın alt kısmındaki play'e tıklayın, dinamometrenin çekmesini 30 s'e kaydedin.
    8. Elde edilen değerleri bir veri çözümleme yazılımına aktarın. Her değerlendirme için güç x zaman grafiği için maksimum ve ortalama kuvvet değerlerini ve eğrinin altındaki alanı (AUC) hesaplayın.
    9. Sol ön pençe için tekrarlayın.
  4. Kas ağırlığı
    1. Genel anestezi altında sıçanlar ötanazi exsanguination47,48.
    2. Her iki önkoldan fleksör carpi radialis kas hasat, bir sayı 15 neşter bıçak kullanarak, distal tendon ekleme kadar kökeni kas diseksiyon.
    3. Hassas bir ölçek9,49ile kasları tartın.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Toplam 34 sıçan rastgele aşağıdaki gruplara ayrıldı: Sham (n = 17), Eksizyon (n = 17) ve Sinir Grefti (n = 10) operasyon için. Tüm sıçanlar ameliyattan ve ameliyat sonrası dönemden olaysız bir şekilde kurtuldular. Ameliyattan bir hafta sonra ve sonraki 100 gün boyunca tüm hayvanlarda haftada bir kez yukarıda açıklanan fonksiyonel testler yapıldı. Bu testlerin her birinin temsili sonuçları aşağıda açıklanmıştır.

Kavrama Testi

Kavrama testinde pozitif yanıt alan sıçanların yüzdesi Şam grubu için en yüksek tiyatuoldu. Bu değer Crush ve Sinir Grefti gruplarından sıçanlarda zaman içinde giderek artmıştır(Şekil 3).

Pin Prick Testi

Sham grubundan sıçanlar, Nerve Graft grubundaki sıçanlara göre kümülatif iğne testinde en iyi skorlara sahipti. Her ikisi de Eksizyon grubundaki sıçanlardan daha iyi skorlara sahipti(Şekil 4).

Merdiven Koşu Testi

Farelerin merdiven koşu testindeki hızı, MN lezyonuna gönderilen sıçanlardan daha yüksekti. İkincisi arasında, merdiven çalıştırmak için zaman mn kurtarma paralel olarak azalma eğilimindedir (Şekil 5).

Halat Testi

Merdiven koşu testinde olduğu gibi, farelerin halata tırmanmaya götürdüklerinin sham grubunda mn'nin yaralandığı gruplara göre daha kısa olduğu görüldü. Bu testte farelerin hızı MN'nin iyileşmesine izin verildiğinde artmıştır(Şekil 6).

Yürüyüş Parkuru Analizi

Yürüyüş parkurlarının analizi, pati izlerinin morfolojisinde değişiklikler gösterme eğilimindedir (Şekil 7). Bu değişiklikler genellikle daha segmental sinir lezyonları50daha ezici yaralanmalarda belirgin idi .

Kızılötesi Termografi

Ameliyattan sonraki ilk 30 gün içinde forepaws arasındaki sıcaklık farklarını incelerken termografi yararlı oldu. Eksizyon grubundakiler gibi daha ağır yaralı MN'li sıçanlarda sıcaklık farklılıkları daha belirgindi(Şekil 8 ve Şekil 9).

Elektronöromiyografi

Tablo 1, farklı deney grupları için temsili sonuçlar vererek elektronnöromiyografi ölçümlerinin biyolojik önemini özetlemektedir. Elektronnöromiyografi ile çeşitli desenler gözlendi. Normal bir CMAP, Sham grubundan bir sıçanın tipik bir imiş, polipazik bir KMAP ise Crush ve Sinir Greft gruplarında olduğu gibi MN'nin değişken derecede lezyonile ilişkili idi(Şekil 10). Eksizyon grubunda KSTs gözlenmedi.

Bilek Fleksiyon Mukavemeti

Bilek fleksiyonu esas olarak MN'ye bağlı olduğu göz önüne alındığında, bu test bu sinirin bölgesinde motor iyileşmesini değerlendirmek için kullanılmıştır. Kurtarma maksimal olduğunda bilek fleksiyon mukavemeti normale en yakındı (Şekil 11).

Kas Ağırlığı ve Morfolojisi

Fleksör carpis radialis kas ağırlığı ve morfolojisi MN kurtarma bağımlı idi, Bu kas sadece MN tarafından innerve olarak9,10. Böylece Şam grubunda normal ağırlık ve morfoloji gözlendi. Crush, Sinir Greftive Eksizyon gruplarında kilo ve kas trophismi kaybı gözlendi (Şekil 12).

figure-results-1
Şekil 1: Sıçan median sinir anatomisi şematik gösterimi.
(1) Sıçan beyninde median sinirin kökeni ve sonlandırılması (yeşil alan = primer motor alan; mavi alan = birincil duyusal alan). (2) C7 segment seviyesinde omuriliğin enine kesiti; (3) Aksiller sinir; (4) Kasülokutanöz sinir; (5) Radyal sinir; (6) Median sinir; (7) Ulnar sinir; (8) Kolun medial kutanöz dalı; (9) Önkolun medial kutanöz dalı; (10) Aksiller arter; (11) Brakiyal arter; (12) Median arter; (13) Yüzeysel radial arter; (14) Ulnar arter; (15) Median sinirin motor dalı nın pronator teres muscle'a; (16) Median sinirin motor dalı fleksör karpis radialis kas; (17) Median sinirin motor dalı fleksör digitorum superficialis kas; (18) Median sinirin motor dalı fleksör digitorum profundus kas; (19) Median sinirin duyusal dalı ile narbölgeye; (20) İlk interosseous alanın ortak palmar arter; (21) İlk basamak radyal palmar dijital arter; (22) Median sinirin motor dalı ile narkaslara; (23) Palmar arteriyel kemer; (24) İlk basamak radyal palmar dijital sinir; (25) Ulnar palmar ilk basamak dijital sinir; (26) Üçüncü interosseous alanın ortak palmar arter; (27) Median sinirin ilk üç lumbrikkas terminal bölümlerinin motor dalları; (28) Ulnar palmar ikinci, üçüncü ve dördüncü basamak dijital sinirler; (29) Ulnar palmar dijital arterler dördüncü ve beşinci basamak; (30) İkinci, üçüncü ve dördüncü basamaklı radyal palmar dijital sinirler; (31) Beşinci basamak radyal palmar dijital arter; (32) Forepaw (mavi gölgeli bölge) median sinircilt bölgesi. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-results-2
Şekil 2: Kolun ve aksiller bölgelerdeki median sinirin cerrahi anatomisini gösteren farenin sağ ön ekstremitesinin fotoğrafı.
Cr, kranial; Ben, medial Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görmek için buraya tıklayınız.

figure-results-3
Şekil 3: Ameliyat sonrası 100 günlük bir süre içinde farklı deney grubunda pozitif kavrama testi olan sıçanların yüzdesi. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

figure-results-4
Şekil 4: Kümülatif iğne dikmek testi kullanılarak yapılan nosiception değerlendirmesi, farklı deney gruplarında kontralateral patiye normalleştirilmiş forepaw ile sonuçlanır.

figure-results-5

figure-results-6

figure-results-7

figure-results-8

figure-results-9

figure-results-10

figure-results-11

figure-results-12





Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu kağıt, sıçanda farklı tipte MN lezyonları oluşturmak ve onarmak için bir protokol sunar. Ayrıca, çeşitli noninvaziv davranış testleri ve fizyolojik ölçümler kullanarak bu sinirin fonksiyonel kurtarma değerlendirmek için nasıl göstermektedir.

Özellikle, bu yazıda açıklanan fonksiyonel testlerin birkaçı, yani Merdiven Koşu Testi ve Halat Testi, önemli ölçüde gıda ödülü51,52,,53elde beklentisi ile görevi gerçekleştirmek için sıçan istekli bağlıdır. Bu testlerin bu tür51,52,53bazı sıçan suşları eğitim ve tekrarlayıcı performans için daha uygun olduğu unutulmamalıdır.53 Örneğin, Lewis sıçanlar eğitim aşamasında ve daha sonra51,52,,53hem de bu testlerde kötü performans .

Sıçan konut, deneysel hayvanların fonksiyonel testlerde mevcut bazı unsurları aşina almak için izin ek olarak, doğal keşif davranışı ile uyum içinde hareket geniş özgürlük izin vermelidir19. Bu nedenle, daha yüksek hareket özgürlüğü sağlayan farklı konut biçimleri gösterilmiştir. Büyük kafesler daha sonra fonksiyonel testlerde kullanılan zenginleştirme elemanları ile kişiselleştirilmiştir (örneğin, halatlar ve merdivenler).

Tartışmalı, bu zenginleştirici elemanların yanı sıra dahil çalışan tekerlekler ve bireysel eğitim küreleri ile kafesler periferik sinir sistemi 10 ameliyat insan hastalara sunulan benzer postoperatif fizyoterapi bir form sağlar10.

Önemli ölçüde, bazı yazarlar deri altı dokuları ve kas fasyasının 15 numara neşter le temiz kesilerek kesilmesini savunsa lar da, postoperatif hematom riskini en aza indirmek için bu yapıları incelerken termokoperliğin kullanılması önerilmektedir.

Bu çok sayıda testler sıçanda periferik sinir onarım farklı yönlerini test etmek için geliştirilmiştir unutulmamalıdır, yani aksonal rejenerasyon, hedef reinnervasyon, ve fonksiyonel kurtarma, bazıları bu çalışmanın kapsamı dışında dır29,54,55,56. Örneğin, kinematik analiz29,36,55 ve histomorfometrik değerlendirme29,36,57 yaygın olarak birden fazla yazar tarafından istihdam edilmektedir. Ayrıca, bu testlerin birkaç verimlilik ve / veya tekrarlanabilirlik54maksimize etmek için varyasyonları içerir. Örneğin, mekanik algisemetri (yani, mekanik ağrılı uyaranlara yanıtların değerlendirilmesi) nitel olarak belirli bir von Frey filament kullanılarak değerlendirilebilir, bu makalede açıklandığı gibi, ya da yarı nicel olarak art arda güçlü von Frey filamentler kullanarak, ya da bir yoksunluk yanıtı gözlenene kadar artan baskılar uygulayan elektronik cihazlar kullanarak30,54.

Benzer şekilde, her ne kadar birkaç yazar sıçanda forelimb sinir onarımını değerlendirmek için yürüyüş yolu analizi ni kullansa da, diğer yazarlar tek MN lezyonlarının sıklıkla pati baskılarında tekrarlanabilir değişiklikler üretemediğini iddia etmektedir10,58,59. Ayrıca, bazı bu değişikliklerin kas kurtarma ile orantılı olmayabilir belirttiler10,60. Bu akılda tutulması, bazı araştırmacılar segmental sinir rekonstrüksiyonu sonra yerine neve lezyonlar ısken sonra iyileşme değerlendirirken esas olarak ön planda yürüyüş parça analizi kullanımınısavundular 10 ,50,61.10

Kavrama Testi yaygın MNtarafındankontrol kasların motor kurtarma değerlendirmek için kullanılır16 ,27. Bu test ile elde edilen verilerin tekdüzeliğini ve tekrarlanabilirliğini garanti etmek için Bertelli ve ark.16 tarafından önerilen köklü metodolojiyi kullanarak Kavrama Testi'nin uygulanması önerilir. Ancak, mevcut protokol rutin aşırı stres11,27önlemek için kontralateral pençe immobilize etmez farklıdır. Ayrıca diğer yazarlar, yaralanmamış pençe immobilizing sonra, nicel bir dinamometre veya ölçek27,56kullanarak Kavrama Testi değerlendirmek unutulmamalıdır. Ancak, bu kantitatif değerlendirme araştırmacı nın fare kuyruğu için uyguladığı güçten etkilenebilir26. Ayrıca, dijital fleksör kasları tarafından üretilen gücü ayırt etmek zordur (sadece sıçanm ve Kavrama Testinesnesitarafından innerve 9 ) bilek fleksörleri tarafından üretilen gücü, ulnar sinirkendiinnervasyon alır fleksör karpi ulnaris içerir 9,10,27. Amacıyla bu potansiyel önyargıları atlatmak için denemek için, Bu protokol yaygın insanlarda kas gücü sınıf için kullanılan Tıbbi Araştırma Konseyi Ölçeği benzer bir ordinal ölçek kullanır10,11,62. Alternatif olarak, diğer yazarlar video analizi ve video tabanlı puanlama sistemi11,63kullanarak kavrama ayrıntılı değerlendirme açıklanmıştır.

Siyatik sinir ile karşılaştırıldığında MN kullanmanın potansiyel bir dezavantajı, ikinci sinir ile ilgili daha büyük miktarda bilgi mevcut olmasıdır. Bu, sırayla, önceki deneysel çalışmaların daha zor46,48,,64ile MN ile elde edilen verilerin karşılaştırma yapabilirsiniz. Ayrıca, Siyatik sinir ile karşılaştırıldığında MN küçük boyutu cerrahi manipülasyon daha zor hale getirir8,12,27,56,65.

Bu yazıda açıklanan metodolojinin aksine, elektronnöromiyografi değerlendirmesi kol ve nar bölgelere yerleştirilen transkutanöz monopolar elektrotlar kullanılarak yapılabilir51. Daha az invaziv olmasına rağmen, bu yöntem kol bölgesinde ulnar sinirin kostimülması olasılığı nedeniyle potansiyel karışıklık riski taşır9,51.

Çoğu yazar sıçanda kullanılan tüm testler sonuçlar sağlamak, periferik sinir onarım faktörlerin karmaşık bir dizi bağlıdır olarak, nöron sağkalım, aksonal uzama ve budama, sinaptogenez, denervated duyu organları ve motor üniteleri başarılı yeniden yakalama ve beyin plastisite7,,10,50,66,67.

Son olarak, kemirgen modellerinin önemli bir uyarı sıçan periferik sinirlerin son organlarına çok daha yakın ve homolog insan yapılarından çok daha küçük kesit alanlarına sahip olduğu unutulmamalıdır. Ancak, bu boyut farkı kemirgenlerde daha hızlı deneysel veri garanti, ve insanlar ile karşılaştırıldığında sıçanlarda daha iyi genel sonuçlar beklenen vardır68. Nitekim, çeşitli yazarlar insanlar7,,69kemirgenler kullanarak periferik sinir onarım elde edilen deneysel verileri tahmin çalışırken bakım kullanılması gerektiği konusunda uyarıyorlar. Primat modelleri daha karşılaştırılabilir olarak kabul edilir70. Yine de, onların kullanımı vexing etik, lojistik ve bütçe kısıtlamaları71ile ilişkilidir.

Siyatik sinir periferik sinir araştırmalarında en sık kullanılan sinir olmasına rağmen, sıçan MN birden fazla avantaj sunar. Örneğin, MN lezyonlareklem kontraktürler ve etkilenen pençe otomutilation daha küçük bir insidansı ile ilişkilidir11,12,16,56. Önemli ölçüde, siyatik sinir transection sonra ototomi sıçanların% 11-70 afflicts. Bu siyatik indeksi imkansız14gibi mevcut değerlendirmeler yapabilir. Bu, sırayla, belirli bir istatistiksel güç hantal15elde etmek için gerekli hayvan sayısının tahmini yapar.

Buna ek olarak, MN siyatik sinir daha kısa olduğu gibi, sinir kurtarma ergözlenir 58,72,73,74,75,76. Ayrıca, MN kas kitleleri ile kaplı değildir, onun diseksiyon teknik olarak daha kolay siyatik sinir16daha kolay hale. Ayrıca, MN kolulnar sinir paralel bir yol vardır. Bu nedenle, ulnar sinir kolayca MN yaralanmaları onarmak için sinir grefti olarak kullanılabilir. Son olarak, insanlarda, en periferik sinir lezyonları üst ekstremitede meydana, hangi daha sıçan bu sinirin kullanımını destekler77,78.

Tartışmalı, kemirgenler deneysel hayvanlar en yaygın periferik sinir onarım alanında kullanılan48,79. Gösterildiği gibi, sıçan MN periferik sinir lezyonu ve onarım uygun bir modeldir. Aslında, birden fazla standart stratejileri motor ve duyusal kurtarma değerlendirmek için kullanılabilir, sonuçların daha kolay bir karşılaştırma izin36,46,60,80,81,82. Bu yöntemlerin çoğu noninvaziv, günlük değerlendirme için izin.

Ayrıca, fizyoterapi periferik sinir yaralanmaları kurtarma hastaların bakım standardının bir parçasıdır. Bu yazıda gösterildiği gibi, MN yaralanmaları4,,5gönderilen sıçanlara postoperatif fizyoterapi benzeri bir ortam sağlamak için birden fazla strateji vardır. Bu nedenle, bu model özellikle klinik senaryo çoğaltmak için uygundur, insan türüne sonuçların ekstrapolasyon kolaylaştıran12,27,48,56,58,83.

Bu yazıda gösterildiği gibi, sıçan MN modelinde motor ve duyusal iyileşmedeğerlendirmek için birden fazla standart stratejileri mevcuttur. Bunların çoğu sık değerlendirme sağlayan noninvaziv prosedürlerdir. Ayrıca, insan türünde en periferik sinir lezyonları üst ekstremite oluşur gibi, bahsedilen deneysel fizyoterapi ayarları daha aptly klinik bağlamda kurtarma taklit edebilir. Tartışmalı, bu daha sıçanda bu sinirin kullanımını doğrulayan, insan türüne sonuçların ekstrapolasyon kolaylaştırabilir.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Diogo Casal, Fundação Calouste Gulbenkian, Fundação Champalimaud, Ministério da Saúde e Fundação para a Ciência e Tecnologia, Portekiz sponsorluğunda Ki İleri Tıp Eğitimi Programı'ndan hibe aldı. Yazarlar Şekil 1'dekiaçıklayıcı çizim için Bay Filipe Franco'ya çok müteşekkirdir. Yazarlar, Bay Alberto Severino'nun videonun çekim ve kurgulanmasındaki teknik yardımlarına teşekkür etmek isterler. Son olarak, yazarlar hayvan edinimi ve bakımı ile ilgili tüm lojistik yönleriyle ona yardım için Bayan Sara Marques teşekkür etmek istiyorum.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
AsetaminofenAmazonhttps://www.amazon.com/Childrens-Tylenol-grape-flavor-ages/dp/B0051VVVZG
Acland kelepçeleriGüzel Bilim Araçları00398 Vhttp://www.merciansurgical.com/aclandclamps.pdf
Acland Tek Kelepçeler B-1V (Çift)Güzel Bilim Araçları396http://www.merciansurgical.com
Biyojel Cerrahi EldivenMedex Kaynağı30465https://www.medexsupply.com
BSL AnaliziBIOPAC Sistemlerihttps://www.biopac.com/
Castroviejo iğne tutucularGüzel Bilim Araçları12565-14http://s-and-t.ne
Kelepçe aplikatörüGüzel Bilim AraçlarıCAF-4http://www.merciansurgical.com/acland-clamps.pdf
Constante voltaj stimülatörüBIOPAC SistemleriSTM200https://www.biopac.com/product/constant-voltage-stimulator-unipolar-pulse/
Cutasept cilt dezenfektanıBode Chemiehttp://www.productcatalogue.bode-chemie.com/products/skin/cutasept_f.php
Dafilon 10-0G1118099http://www.bbraun.com/cps/rde/xchg/bbraun-com/hs.xsl/products.html?prid=PRID00000816
Derf İğne Tutucular 12 cm TCGüzel Bilim Araçları703DE12http://www.merciansurgical.com
Kuru ısı sterilizatörüQuirumed2432http://www.quirumed.com/pt/material-de-esterilizac-o/esterilizadores
DinamometreSAUTERFH5https://www.sauter.eu/shop/en/measuring-instruments/force-measurement/FH-S/
Elektronöromiyografi kurulumuBIOPAC SistemleriMP36https://www.biopac.com/product/biopac-student-lab-basic-systems/
Ethilon 5-0W1618http://www.farlamedical.co.uk/
FLIR YazılımıFLIR
Graeffe forseps 0,8 mm uçlar kavisliGüzel Bilim Araçları11052-10http://www.finescience.de
Grafik kağıdıAmbar
Isı Lambası HL-1Harvard Aparat727562https://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/haisku3_10001_11051_39108_-1_HAI_ProductDetail_N_37610_37611_37613
Heparin Sodyum Çözeltisi (Heparin LEO 10000IU / ml)Üniversal Eczanehttp://www.universaldrugstore.com/medications/Heparin+LEO/10000IU%2Fml
Yüksek Sıcaklık KoterliGüzel Bilim AraçlarıAA03http://www.boviemedical.com/products_aaroncauteries_high.asp
Esnek Problu Homeotermik Battaniye SistemiHarvard Aparatı507220Fhttps://www.harvardapparatus.com/webapp/wcs/stores/servlet/haisku3_10001_11051_39108_-1_HAI_ProductDetail_N_37610_37611_37613
Kızılötesi kameraFLIRE6http://www.flir.eu/instruments/e6-wifi/
Instrapac - Adson Dişli Forseps ( Ekstra İnce)Güzel Bilim Aletleri7973http://www.millermedicalsupplies.com
İris Makası 11,5 cm Eğriler EASY-CUTGüzel Bilim AraçlarıEA7613-11http://www.merciansurgical.com
Ketamin hidroklorür/ksilazin hidroklorür çözeltisiSigma- AldrichK113https://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/k113?lang=pt®ion=PT
Lacri-lube Göz Merhem 5gEkspres KimyagerLAC101Fhttp://www.expresschemist.co.uk/lacri-lube-eye-ointment-5g.html
Mayo Makas 14 cm Düz Pahlı Bıçaklar EASY-CUTGüzel Bilim AraçlarıEA7652-14http://www.merciansurgical.com
MeloksikamRecropharmaMobichttps://www.recropharma.com/product-pipeline/meloxicam
Metilen Mavisi çözeltisiSigma- Aldrichhttps://www.sigmaaldrich.com/catalog/product
Mikro Kuyumcular Forseps 11 cm düz 00108Güzel Bilim AraçlarıJF-5http://www.merciansurgical.com
Mikro Kuyumcular Forseps 11cm açılı 00109Güzel Bilim AraçlarıJFA-5bhttp://www.merciansurgical.com
Mikro ekartörGüzel Bilim AraçlarıRS-6540http://www.finescience.de
Mikro Makas Yuvarlak Saplar 15 cm DüzGüzel Bilim Aletleri67http://www.merciansurgical.com
Mikro damar genişleticiler 11 cm 0,3 mm uçlar 00124Güzel Bilim AraçlarıD-5a.2http://www.merciansurgical.com
Monosyn 5-015423BRhttp://www.mcfarlanemedical.com.au/15423BR/SUTURE-MONOSYN-5_or_0-16MM-70CM-(C0023423)-BOX_or_36/pd.php
Normal sulama için tuzlu suHospira, Inc.0409-6138-22http://www.hospira.com/en/search?q=sodium+chloride+irrigation%2C+usp&fq=contentType%3AProducts
Ameliyat mikroskobuLeica Cerrahi Mikrosistemlerhttp://www.leica-microsystems.com/products/surgical-microscopes/
Cilt Skribe Cerrahi Cilt MarkerMoore Medical31456https://www.mooremedical.com/index.cfm?/Skin-Skribe-Surgical-Skin-Marker/&PG=CTL&CS=HOM&FN=ProductDetail&PID=1740&spx=1
AperatiflerVersele-LagaKomple Crock-Berryhttp://www.versele-laga.com/en/complete/products/complete-crock-berry
Düz sivrisinek forsepGüzel Bilim Araçları91308-12http://www.finescience.de
Cerrahi ÖrtüBariyer800430http://www.molnlycke.com/surgical-drapes/
Veet Hassas Ciltlerde Tüy Dökücü Krem Aloe Vera ve E Vitamini 100 mlVeethttp://www.veet.co.uk/products/creams/creams/veet-hair-removal-cream-sensitive-skin/

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Lad, S. P., Nathan, J. K., Schubert, R. D., Boakye, M. Trends in median, ulnar, radial, and brachioplexus nerve injuries in the United States. Neurosurgery. 66 (5), 953-960 (2010).
  2. Murovic, J. A. Upper-extremity peripheral nerve injuries: a Louisiana State University Health Sciences Center literature review with comparison of the operative outcomes of 1837 Louisiana State University Health Sciences Center median, radial, and ulnar nerve lesions. Neurosurgery. 65 (4), Suppl 11-17 (2009).
  3. Dy, C. J., Isaacs, J. American Society for Surgery of the Hand surgical anatomy: nerve reconstruction Vol. 1. Dy, C. J., Isaacs, J. , American Society for Surgery of the Hand. (2017).
  4. Trehan, S. K., Model, Z., Lee, S. K. Nerve Repair and Nerve Grafting. Hand Clinics. 32 (2), 119-125 (2016).
  5. Boyd, K. U., Fox, I. K. Nerve surgery Vol. 1. Mackinnon, S. E. , Thieme. Ch. 4 75-100 (2015).
  6. Geuna, S., et al. Update on nerve repair by biological tubulization. Journal of Brachial Plexius Peripheral Nerve Injury. 9 (1), 3(2014).
  7. Sulaiman, W., Gordon, T. Neurobiology of peripheral nerve injury, regeneration, and functional recovery: from bench top research to bedside application. Ochsner Journal. 13 (1), 100-108 (2013).
  8. Angelica-Almeida, M., et al. Brachial plexus morphology and vascular supply in the wistar rat. Acta Medica Portuguesa. 26 (3), 243-250 (2013).
  9. Bertelli, J. A., Taleb, M., Saadi, A., Mira, J. C., Pecot-Dechavassine, M. The rat brachial plexus and its terminal branches: an experimental model for the study of peripheral nerve regeneration. Microsurgery. 16 (2), 77-85 (1995).
  10. Casal, D., et al. Reconstruction of a 10-mm-long median nerve gap in an ischemic environment using autologous conduits with different patterns of blood supply: A comparative study in the rat. PLoS One. 13 (4), 0195692(2018).
  11. Stößel, M., Rehra, L., Haastert-Talini, K. Reflex-based grasping, skilled forelimb reaching, and electrodiagnostic evaluation for comprehensive analysis of functional recovery-The 7-mm rat median nerve gap repair model revisited. Brain and Behavior. 7 (10), 00813(2017).
  12. Manoli, T., et al. Correlation analysis of histomorphometry and motor neurography in the median nerve rat model. Eplasty. 14, 17(2014).
  13. Ronchi, G., et al. The Median Nerve Injury Model in Pre-clinical Research - A Critical Review on Benefits and Limitations. Frontiers in Cellular Neuroscience. 13, 288(2019).
  14. Weber, R. A., Proctor, W. H., Warner, M. R., Verheyden, C. N. Autotomy and the sciatic functional index. Microsurgery. 14 (5), 323-327 (1993).
  15. Charan, J., Kantharia, N. D. How to calculate sample size in animal studies. Journal of Pharmacology & Pharmacotherapeutics. 4 (4), 303-306 (2013).
  16. Bertelli, J. A., Mira, J. C. The grasping test: a simple behavioral method for objective quantitative assessment of peripheral nerve regeneration in the rat. Journal of Neuroscience Methods. 58 (1-2), 151-155 (1995).
  17. Casal, D., et al. A Model of Free Tissue Transfer: The Rat Epigastric Free Flap. Journal of Visualized Experiments. (119), e55281(2017).
  18. Bertens, A. P. M. G., et al. Anaesthesia, analgesia and euthanasia. Principles of Laboratory Animal Science. Van Zuthphen, L. F., Baumas, V., Beymen, A. C., et al. , Elsevier. 277-311 (2001).
  19. Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. Principles of rodent surgery for the new surgeon. Journal of Visualized Experiments. (47), e2586(2011).
  20. Lee-Parritz, D. Analgesia for rodent experimental surgery. Israel Journal of Veterinary Medicine. 62 (3), 74(2007).
  21. Roughan, J. V., Flecknell, P. A. Evaluation of a short duration behaviour-based post-operative pain scoring system in rats. European Journal of Pain. 7 (5), 397-406 (2003).
  22. Bauder, A. R., Ferguson, T. A. Reproducible mouse sciatic nerve crush and subsequent assessment of regeneration by whole mount muscle analysis. Journal of Visualized Experiments. (60), e3606(2012).
  23. Ronchi, G., et al. Functional and morphological assessment of a standardized crush injury of the rat median nerve. Journal of Neuroscience Methods. 179 (1), 51-57 (2009).
  24. Matsumine, H., et al. Vascularized versus nonvascularized island median nerve grafts in the facial nerve regeneration and functional recovery of rats for facial nerve reconstruction study. Journal of Reconstructive Microsurgery. 30 (2), 127-136 (2014).
  25. Mickley, A. G., Hoxha, Z., Biada, J. M., Kenmuir, C. L., Bacik, S. E. Acetaminophen Self-administered in the Drinking Water Increases the Pain Threshold of Rats (Rattus norvegicus). Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 45 (5), 48-54 (2006).
  26. Mandillo, S., et al. Reliability, robustness, and reproducibility in mouse behavioral phenotyping: a cross-laboratory study. Physiological Genomics. 34 (3), 243-255 (2008).
  27. Papalia, I., Tos, P., Stagno d'Alcontres, F., Battiston, B., Geuna, S. On the use of the grasping test in the rat median nerve model: a re-appraisal of its efficacy for quantitative assessment of motor function recovery. Journal of Neuroscience Methods. 127 (1), 43-47 (2003).
  28. Costa, L. M., Simoes, M. J., Mauricio, A. C., Varejao, A. S. Chapter 7: Methods and protocols in peripheral nerve regeneration experimental research: part IV-kinematic gait analysis to quantify peripheral nerve regeneration in the rat. International Reviews in Neurobiology. 87, 127-139 (2009).
  29. Geuna, S., Varejao, A. S. Evaluation methods in the assessment of peripheral nerve regeneration. Journal of Neurosurgery. 109 (2), author reply 362 360-362 (2008).
  30. Howard, R. F., Hatch, D. J., Cole, T. J., Fitzgerald, M. Inflammatory pain and hypersensitivity are selectively reversed by epidural bupivacaine and are developmentally regulated. Anesthesiology. 95 (2), 421-427 (2001).
  31. Metz, G. A., Whishaw, I. Q. Cortical and subcortical lesions impair skilled walking in the ladder rung walking test: a new task to evaluate fore- and hindlimb stepping, placing, and co-ordination. Journal of Neuroscience Methods. 115 (2), 169-179 (2002).
  32. Thallmair, M., et al. Neurite growth inhibitors restrict plasticity and functional recovery following corticospinal tract lesions. Nature Neuroscience. 1 (2), 124-131 (1998).
  33. Brown, C. J., et al. Self-evaluation of walking-track measurement using a Sciatic Function Index. Microsurgery. 10 (3), 226-235 (1989).
  34. Hruska, R. E., Kennedy, S., Silbergeld, E. K. Quantitative aspects of normal locomotion in rats. Life Science. 25 (2), 171-179 (1979).
  35. Ferreira, T., Rasband, W. ImageJ user guide. ImageJ/Fiji. 1, 155-161 (2012).
  36. Dijkstra, J. R., Meek, M. F., Robinson, P. H., Gramsbergen, A. Methods to evaluate functional nerve recovery in adult rats: walking track analysis, video analysis and the withdrawal reflex. Journal of Neuroscience Methods. 96 (2), 89-96 (2000).
  37. Ludwig, N., Formenti, D., Gargano, M., Alberti, G. Skin temperature evaluation by infrared thermography: Comparison of image analysis methods. Infrared Physics & Technology. 62, 1-6 (2014).
  38. Bennett, G. J., Ochoa, J. L. Thermographic observations on rats with experimental neuropathic pain. Pain. 45 (1), 61-67 (1991).
  39. Wakisaka, S., Kajander, K. C., Bennett, G. J. Abnormal skin temperature and abnormal sympathetic vasomotor innervation in an experimental painful peripheral neuropathy. Pain. 46 (3), 299-313 (1991).
  40. Muntean, M. V., et al. Using dynamic infrared thermography to optimize color Doppler ultrasound mapping of cutaneous perforators. Medical Ultrasonography. 17 (4), 503-508 (2015).
  41. Shterenshis, M. Challenges to Global Implementation of Infrared Thermography Technology: Current Perspective. Central Asian Journal of Global Health. 6 (1), 289(2017).
  42. Wilbourn, A. J. Nerve surgery Vol. 1. Mackinnon, S. E. , Thieme. 59-74 (2015).
  43. Wu, Y., Martínez, M. ÁM., Balaguer, P. O. Electrodiagnosis in New Frontiers of Clinical Research. Turker, H. , InTech. Ch. 01 (2013).
  44. Werdin, F., et al. An improved electrophysiological method to study peripheral nerve regeneration in rats. Journal of Neuroscience Methods. 182 (1), 71-77 (2009).
  45. Sedghamiz, H., Santonocito, D. Unsupervised Detection and Classification of Motor Unit Action Potentials in Intramuscular Electromyography Signals. 2015 E-health and Bioengineering Conference IEEE. , 1-6 (2015).
  46. Hadlock, T. A., Koka, R., Vacanti, J. P., Cheney, M. L. A comparison of assessments of functional recovery in the rat. Journal of the Peripheral Nervous System. 4 (3-4), 258-264 (1999).
  47. Carstens, E., Moberg, G. P. Recognizing pain and distress in laboratory animals. Ilar Journal. 41 (2), 62-71 (2000).
  48. Tos, P., et al. Chapter 4: Methods and protocols in peripheral nerve regeneration experimental research: part I-experimental models. International Reviews in Neurobiology. 87, 47-79 (2009).
  49. Galtrey, C. M., Fawcett, J. W. Characterization of tests of functional recovery after median and ulnar nerve injury and repair in the rat forelimb. Journal of the Peripheral Nervous System. 12 (1), 11-27 (2007).
  50. Giusti, G., et al. Return of motor function after segmental nerve loss in a rat model: comparison of autogenous nerve graft, collagen conduit, and processed allograft (AxoGen). Journal of Bone and Joint Surgery American. 94 (5), 410-417 (2012).
  51. Stossel, M., Rehra, L., Haastert-Talini, K. Reflex-based grasping, skilled forelimb reaching, and electrodiagnostic evaluation for comprehensive analysis of functional recovery-The 7-mm rat median nerve gap repair model revisited. Brain and Behavior. 7 (10), 00813(2017).
  52. Nikkhah, G., Rosenthal, C., Hedrich, H. J., Samii, M. Differences in acquisition and full performance in skilled forelimb use as measured by the 'staircase test' in five rat strains. Behavioral Brain Research. 92 (1), 85-95 (1998).
  53. Whishaw, I. Q., Gorny, B., Foroud, A., Kleim, J. A. Long-Evans and Sprague-Dawley rats have similar skilled reaching success and limb representations in motor cortex but different movements: some cautionary insights into the selection of rat strains for neurobiological motor research. Behavioral Brain Research. 145 (1-2), 221-232 (2003).
  54. Navarro, X. Functional evaluation of peripheral nerve regeneration and target reinnervation in animal models: a critical overview. European Journal of Neuroscience. 43 (3), 271-286 (2016).
  55. Costa, L. M., Simões, M. J., Maurício, A. C., Varejão, A. S. P. International Review of Neurobiology. 87, Academic Press. 127-139 (2009).
  56. Ronchi, G., et al. Functional and morphological assessment of a standardized crush injury of the rat median nerve. Journal of Neuroscience Methods. 179 (1), 51-57 (2009).
  57. Raimondo, S., et al. Chapter 5: Methods and protocols in peripheral nerve regeneration experimental research: part II-morphological techniques. International Reviews in Neurobiology. 87, 81-103 (2009).
  58. Bontioti, E. K. M., Dahlin, L. B. Regeneration and functional recovery in the upper extermity of rats after various types of nerve injuries. Journal of the Peripheral Nervous System. 8, 159-168 (2003).
  59. Schönfeld, L. M., Dooley, D., Jahanshahi, A., Temel, Y., Hendrix, S. Evaluating rodent motor functions: Which tests to choose. Neuroscience & Biobehavioral Reviews. 83, 298-312 (2017).
  60. Urbancheck, M. S. Rat walking tracks do not reflect maximal muscle force capacity. Journal of Reconstructive Microsurgery. 15 (2), 143-149 (1999).
  61. Cudlip, S. A., Howe, F. A., Griffiths, J. R., Bell, B. A. Magnetic resonance neurography of peripheral nerve following experimental crush injury, and correlation with functional deficit. Journal of Neurosurgery. 96 (4), 755-759 (2002).
  62. Wang, Y., Sunitha, M., Chung, K. C. How to measure outcomes of peripheral nerve surgery. Hand Clinics. 29 (3), 349-361 (2013).
  63. Wang, H., Spinner, R. J., Sorenson, E. J., Windebank, A. J. Measurement of forelimb function by digital video motion analysis in rat nerve transection models. Journal of the Peripheral Nervous System. 13 (1), 92-102 (2008).
  64. Yanase, Y. Experimental and Clinical Reconstructive Microsurgery. Tamai, S., Usui, M., Yoshizu, T. , Springer-Verlag. Ch. 2 44-51 (2004).
  65. Barton, M. J., et al. Morphological and morphometric analysis of the distal branches of the rat brachial plexus. Italian Journal of Anatomy and Embryology. 121 (3), 240-252 (2016).
  66. Vincent, R. Adult and obstetrical brachial plexus injuries. Peripheral Nerve Surgery: Practical applications in the upper extremity. Slutsky, D. J., Hentz, V. R. , Churchill Livingstone. 299-317 (2006).
  67. Dahlin, L. B. Peripheral Nerve Surgery: Practical Applications in the Upper Extremity. Slutsky, D. J., Hentz, V. R. , Elsevier. Ch. 1 1-22 (2006).
  68. Vargel, I., et al. A comparison of various vascularization-perfusion venous nerve grafts with conventional nerve grafts in rats. Journal of Reconstructive Microsurgery. 25 (7), 425-437 (2009).
  69. Grinsell, D., Keating, C. Peripheral nerve reconstruction after injury: a review of clinical and experimental therapies. BioMed Research International. 2014, 698256(2014).
  70. Wang, D., et al. A simple model of radial nerve injury in the rhesus monkey to evaluate peripheral nerve repair. Neural Regeneration Research. 9 (10), 1041-1046 (2014).
  71. Casal, D., et al. Unconventional Perfusion Flaps in the Experimental Setting: A Systematic Review and Meta-Analysis. Plastic Reconstructive Surgery. 143 (5), 1003-1016 (2019).
  72. Bontioti, E. End-to-side nerve repair. A study in the forelimb of the rat. , PhD thesis, Lund (2005).
  73. Bodine-Fowler, S. C., Meyer, R. S., Moskovitz, A., Abrams, R., Botte, M. J. Inaccurate projection of rat soleus motoneurons: a comparison of nerve repair techniques. Muscle Nerve. 20 (1), 29-37 (1997).
  74. Valero-Cabre, A., Navarro, X. H reflex restitution and facilitation after different types of peripheral nerve injury and repair. Brain Research. 919 (2), 302-312 (2001).
  75. Wall, P. D., et al. Autotomy following peripheral nerve lesions: experimental anaesthesia dolorosa. Pain. 7 (2), 103-111 (1979).
  76. Bertelli, J. A., Taleb, M., Saadi, A., Mira, J. C., Pecot-Dechavassine, M. The rat brachial plexus and its terminal branches: an experimental model for the study of peripheral nerve regeneration. Microsurgery. 16, 77-85 (1995).
  77. Wood, M. J., Johnson, P. J., Myckatyn, T. M. Nerve Surgery Vol. 1. Mackinnon, S. E., Yee, A. , Thieme. Ch. 1 1-40 (2015).
  78. Rosberg, H. E. Epidemiology of hand injuries in a middle-sized city in southern Sweden - a retrospective study with an 8-year interval. Scandinavian Journal of Plastic and Reconstructive Surgery and Hand Surgery. 38, 347-355 (2004).
  79. Gordon, T., Borschel, G. H. The use of the rat as a model for studying peripheral nerve regeneration and sprouting after complete and partial nerve injuries. Experimental Neurology. 287, Pt 3 331-347 (2017).
  80. Bertelli, J. A., Ghizoni, M. F. Concepts of nerve regeneration and repair applied to brachial plexus reconstruction. Microsurgery. 26 (4), 230-244 (2006).
  81. Bertelli, J. A., Mira, J. C. Behavioural evaluating methods in the objective clinical assessment of motor function after experimental brachial plexus reconstruction in the rat. Journal of Neuroscience Methods. 46, 203-208 (1993).
  82. Bertelli, J. A., Mira, J. C. The grasping test: a simple behavioral method for objective quantitative assessment of peripherla nerve regeneration in the rat. Journal of Neuroscience Methods. 58 (1-2), 151-155 (1995).
  83. Ronchi, G., et al. Standardized crush injury of the mouse median nerve. Journal of Neuroscience Methods. 188 (1), 71-75 (2010).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Median Nerve RegenerationNerve Lesion ModelsPeripheral Nerve RepairFunctional Recovery TestsPhysiotherapy SimulationGrasping TestPin Prick TestLadder Rung Walking TestRope Climbing TestWalking Track Analysis

Related Articles