Yöntem makalesi

Rat ve Rabbit anevrizma modellerinde anevrizma perfüzyon ve ebeveyn arter patensinin değerlendirilmesi için floresan anjiyografi

DOI:

10.3791/59782

⸱

24 Temmuz 2019

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Neurosurgery, Kantonsspital Aarau, 2Cerebrovascular Research Group, Department for BioMedical Research (DBMR), University of Bern

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Foscein bazlı floresan video anjiyografi (FVA) kullanılarak, sıçan ve tavşanlarda yan duvar anevrizmasının anevrizma perfüzyon ve damar patinliğini verimli bir şekilde değerlendirmek için bir protokol sunuyoruz. % 92,6 pozitif tahmini değeri ile, özel bir ekipman gerektirmez basit ama çok etkili ve ekonomik bir yöntemdir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Beyin anevrizması tedavisi tam tıkanıklık elde odaklanarak, yanı sıra ana arter kan akışını korumak. Floresan sodyum ve indokyanin yeşil sırasıyla kan akımı ve damar perfüzyon durumunun gözlem sağlamak için kullanılır. Bu çalışmanın amacı, tavşan ve fareler içinde yan duvar anevrizmalarının indüksiyonu sonrasında gerçek zamanlı kan akışını, damar perfüzyon durumunu ve anevrizmaların tıkanmasını doğrulamak ve bu türlerin prosedürünü doğrulamak için FVA uygulanmadır.

20 yan duvar anevrizması, bir donör tavşanın karotis arter üzerinde deselülarize arter damar torbası sütür tarafından 10 tavşan oluşturuldu. Ayrıca 48 fareler içinde 48 mikrocerrahi yan duvar anevrizması oluşturuldu. Yaratılışın ardından bir ay içinde takip sırasında, üst arter/anevrizma kompleksi disseke ve FVA bir intravenöz floresan kullanılarak yapılmıştır (10%, 1 ml) tavşanlar bir kulak ven kateterizasyon ile enjeksiyon ve fareler femoral ven kateterizasyon Laboratuan. Anevrizmalar daha sonra hasat edildi, ve patkans makroskopik olarak değerlendirildi.

Makroskopik olarak, 14 ' ü tavşanlar içinde 16 anevrizma tamamen okcluded luminae ile hiçbir kalıntı ebeveyn arter perfüzyon gösterdi, ancak 11 (79%) FVA tarafından tespit edildi. Teknik sorunlar nedeniyle dört anevrizma dışlandı. Sıçanlarda, 48 olguda 25 ' in altında kalan anevrizma perfüzyon makroskopik olarak görülür. 23 ' ün makroskopik perfüzyon kanıtı olmadan, FVA 22 anevrizmanın (% 96) insidansı doğruladı. FVA ile ilişkili hiçbir olumsuz olay yoktu. Fluorcein kolayca uygulanabilir ve özel bir ekipman gerekmez. Tavşan ve fareler ile deneysel bir ortamda ebeveyn arter bütünlüğü ve anevrizma patens/kalıntı perfüzyon değerlendirmek için güvenli ve son derece etkili bir yöntemdir. Bir kontrast maddesi olarak floresan kullanılarak FVA, anevrizmaların ve altta yatan geminin patilliğini kontrol etmek için etkili görünüyor ve hatta atıcılık ameliyatına adapte edilebilir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Anevrizma cerrahisinde tam anevrizma obliterasyon ve ebeveyn arter bütünlüğünü kanıtlar son derece önemlidir. Doppler sonografi, konvansiyonel serebral anjiyografi (DSA), bilgisayarlı tomografi anjiyografi (CTA) veya manyetik rezonans anjiyografi (MRA)1 gibi üst arter patensinin ve anevrizma oklüzyonu onaylamak için çeşitli seçenekler vardır. 2. ancak, bu genellikle bir laboratuar ayarı mevcut değildir pahalı ve zaman alıcı yöntemlerdir. Ayrıca, onlar radyasyon pozlama veya hareket artefact önlemek için deneysel hayvanların ek sedasyon için ihtiyaç gibi ilgili yan etkileri olabilir.

Artan sayıda yeni endovasküler cihaz ortaya çıktığı için, bu tür cihazların preklinik testleri için ardışık bir ihtiyaç vardır. Ancak, bu çalışmalar genellikle otopsi sonrası analizine (örn. makro patoloji ve histoloji) ve dinamik perfüzyon hakkında bilgi eksikliğine güveniyor. Ayrıca, araştırmacı için deneysel bir cerrahi prosedür sırasında acil ve güvenilir bilgiler elde etmek için çok önemli olabilir. Floresan anjiyografi uygun maliyetli ve kolay görselleştirme tekniği1,3,4.

Bu nedenle, İndosiyanin Yeşil (ICG) video anjiyografi genellikle klinik Nöroşirürji prosedürlerinde kullanılır ve yaygın olarak5,6incelenmiştir. Floresan video anjiyografi (FVA) alternatif bir tekniktir, insan vizyonu dalga boyu aralığında bir floresan sinyal oluşturma ek avantajı ile, ve böylece uzun spektrum kızılötesi kamera olmadan çıplak gözle görülebilir 7. florürin video anjiyografi daha az sıklıkta klinik serebrovasküler cerrahide kullanılır ve deneysel ayarlarda FVA raporlarında düşük1,4.

Bu raporun amacı, sıçan ve tavşan preklinik serebrovasküler araştırmalarda FVA uygulamalarının fizibilitesini ve kapsamını göstermektir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kemirgenler bir hayvan bakım tesisinde yer aldı ve deneyler inceledi ve Bern, Isviçre Üniversitesi 'nde hayvan refahı Komitesi tarafından onaylanmış (BE 108/16) ve (BE65/16). Tüm hayvanlar, gıda ve suya ücretsiz erişim ile standart bir laboratuar diyetinde tutulur. Tüm hayvan deneyleri 3Rs (yedek, azaltma ve arıtma) dikkatli dikkate alınarak yapılmıştır. On kadın Yeni Zelanda beyaz tavşan ve 48 erkek Wistar fareler dahil edildi. ULAŞMAK kuralları kesinlikle8izledi.

Not: yirmi yan duvar anevrizması, bir donör tavşanın karotis arter üzerinde deselülarize arteriyel damar torbası sütür tarafından 10 tavşan oluşturuldu. Buna ek olarak, 48 mikrocerrahi yan duvar anevrizmaları4,9önce açıklandığı gibi 48 sıçan oluşturuldu. Anevrizma yaratılmasından 4 hafta sonra görüntüleme prosedürü ve makroskopik analiz yapıldı.

1. floresan video anjiyografi için gerekli malzemenin hazırlanması

  1. Mavi bant geçiren filtresinin üzerine bantlayarak el feneri değiştirin ( malzeme tablosunabakın), bir uyarma filtresi olarak işlev göreceksiniz. Meşale daha sonra sadece mavi ışık yaymalıdır. Filtrelenmemiş ışık sızıntısını önlemek için siyah bandı kullanın.
  2. Kamera (örneğin, mikroskop bağlı) yeşil bant geçiren filtresi ile donatın ( malzeme tablosunabakın), bir emisyon ışık filtresi olarak işlev göreceksiniz. Sadece yeşil ışık şimdi geçmesi mümkün olmalıdır.

2. İşyeri ve malzemelerin hazırlanması

  1. Dezenfektan çözeltisi ile çalışma alanını dezenfekte edin.
  2. Kontaminasyonu önlemek için masayı steril drapeler ile koruyun.
  3. Cerrahi için steril aletler kullanın.

3. ameliyat için hayvanların hazırlanması

  1. Hayvanları tartın.
  2. Anestezisi teşvik etmek ve dozu ağırlığa göre ayarlayın.
    1. Tavşaniçin, dengeli anestezi başlayın. Onların korku reaksiyonu azaltmak için enjeksiyon sırasında bir elle gözlerini Shield. Hayvanları sakinleştirici yardımcı olmak için bir levha ile kafes kapak.
    2. Enjeksiyon öncesinde% 4 isofluran ve% 96 oksijen içeren bir gaz odasındaki fareler anestezi.
  3. Anestezinin derinliğini izleyin. Hayvanların uyurken emin olmak için ayak parmakları arasında çimdik.
    1. Tavşanları sırtlarına yeniden konumlandırın. Tepki vermemelidir.
    2. Fareleriçin, kuyruklarını çimdik ve hiçbir reaksiyon gözlendiğinden emin olun.
  4. Kuruluğu önlemek için kemirgenler gözleri üzerinde merhem uygulayın. Yutulması olasılığını önlemek için rats ' dilleri dışarı çekin.
  5. Anestezinin korunması ile başlayın.
    1. Tavşan, kateterize (enjeksiyon portu Ile 22 G korumalı IV kateter, malzeme tablosunabakın) kulak ven için. Dengeli anestezinin bakımını yapın. Birden fazla eşzamanlı enjeksiyonları etkinleştirmek için üç yönlü stopkoku kullanın.
    2. Fareleriçin, enjekte 50 mg/kg ketamin hidroklorür ve 0,5 mg/kg agonistler hidroklorür intraperitoneally. Cerrahi sırasında zehirli bir ayak tutam ile anestezinin izlenmesi. Reaksiyon durumunda, ek anestezik yönetin.
  6. Hayvanları bir supin pozisyonunda tahta üzerine bantla ve kesi yerini yakından tıraş edin. Betaseptic ile bölgeyi dezenfekte edin.
    1. Tavşaniçin, özellikle steradidomastoid kas etrafında, boyun dezenfekte.
    2. Fareleriçin, mesane transvers kolon için alan dezenfekte.
  7. Cerrahi boyunca bir maske ile oksijen yönetmek ve bir Isıtma Pad ile vücut sıcaklığını korumak.

4. arter hazırlanması

  1. En iyi sonuçlar için, seçilen gemisi çevreleyen dokudan iyice incelemek9,10.
    1. Fareleriçin, tail ven (daha az invaziv, tercihen hayatta kalan hayvanlar için kullanılan) tanımlamak veya floresan enjeksiyon için bir femoral ven incelemek4,11.
      Not: tavşanlariçin, kulak ven anestezi için zaten kullanıldığı için, floresan enjeksiyon için damarların başka bir diseksiyonu gereklidir.
  2. Çevreleyen doku ile kontrastı artırmak için seçilen gemi altında beyaz bir Pad konumlandırın.
  3. Kamera, disseke arter üzerinde mikroskop monte odaklama.

5. floresan video anjiyografi

  1. Floresan sodyum (100 mg/mL, malzeme tablosunabakın) ile dolu 5 ml şırınga kapak ışık pozlama korumak için alüminyum folyo ile. Işıkları kapatın (mümkün olduğunca) ve foscein sodyum intravenöz enjekte. Fotoobleaching önlemek için karanlığa enjekte.
    1. Tavşaniçin, üç-yönlü-stopcock kateterize kulak ven içine ml/kg floresan sodyum 0,3 enjekte.
    2. Fareleriçin, bir kateter veya 25 G iğne ile femoral ven Içine 0,4 ml/kg florcein sodyum enjekte.
  2. Tüm boya enjekte edilmesini sağlamak için iğne veya kateter 0,5 mL tuz çözeltisi ile yıkayın.
  3. Modifiye edilmiş el feneri ile cerrahi alanı aydınlatın.
  4. Modifiye kamera ile filme başlayın. Enjeksiyonu yaptıktan birkaç saniye sonra kan akışı görülebilir (Şekil 1).
    Not: burada, biz kare hızı kullanılan = 50 kare/s, odak uzaklığı = 70 mm, ve F 3.4.

6. makroskopik analiz

  1. Anevrizma ve ebeveyn arter kompleksi RESECT ve makroskopik mikro-makas ile ana arter açarak ve üst arter ve anerysm 's orifis lümeni değerlendirmek tarafından makro kapsamları değerlendirmek (bkz. Şekil 1, 2)9. Anevrizmaların boyutlarını ölçün. Anevrizma-ebeveyn-arter-kompleksi daha sonra analiz için saklanabilir (örneğin, Histoloji).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Cerrahi sırasında kalp atışı ve kan basıncı izleniyor. Ortalama kalp hızı tavşanlara 193/dk, fareler içinde 196/dak idi. Tavşanların vücut ağırlığı 3,05-4.18 kg olarak değişmektedir ve fareler 335-690 g tarttı.

Biz on tavşandan sekiz dışarı FVA gerçekleştirmek başardık (Şekil 1). İki tavşandan dört anevrizma sınavı teknik zorluklar nedeniyle kamera ile kaydedilmedi. Sıçanlarda FVA ile ilgili teknik zorluklar bildirilmiştir. Ancak, FVA femoral ven delik zorlukları ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

FVA kemirgenler gemiler incelemek için umut verici ve karmaşık olmayan bir yöntemdir ve ticari cihazlar ve off-the-raf ekipmanları ile gerçekleştirilebilir. FVA, damarların doğru diseksiyona ihtiyacı olduğu için damar bütünlüğünü intraoperatif değerlendirmede gerekli olan herhangi bir cerrahi sırasında uygulanabilir.

Yazarlar, enfeksiyon, iskemi ve bölme sendromu gibi yanlışlıkla yaşanan olayların düşük riski nedeniyle arter enjeksiyonu için venöz enjeksiyon tercih12. İ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tüm yazarlar herhangi bir ilgi çakışması teyit.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, kısmen Isviçre Kantonsspital Aarau 'dan yapılan bir araştırma hibe tarafından desteklenmektedir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Tavşanlar için< / güçlü >
Alüminyum folyo
Hayvan tıraş makinesi
Siyah bant
Mavi filtreThorlabs MF475-35
Vücut sıcak plaka
KameraSony NEX-5R
Kateter22G Vasofix Güvenlik
Dezenfektan
Floresein sodyumFloresein Faure%
Glas plaka
Yeşil filtre ThorlabsMF539-43
İnkontinans pedi
İnfüzyon pompasıPerfusor Secura
Ketamin hidroklorürherhangi bir jenerik ürün
İğne25G
Oksijen Zil
Çözeltisi
Steril çarşaflar
Cerrahi aletlermikro forseps, mikro makas, künt cerrahi makas
Cerrahi mikroskopOPMI, Carl Zeiss AG, Oberkochen, Almanya
Şırınga 2ml, 5ml, 50ml
Bant
Üç musluk
Meşale ışığı
Xylazinherhangi bir jenerik ürün
Sıçanlar için< / güçlü>
Alüminyum folyo
Hayvan tıraş makinesi
Siyah bant
Mavi filtreThorlabs MF475-35
Vücut sıcak plaka
KameraSony NEX-5R
Disinfictant
Floresein sodyumFloresein Faure%
Yeşil filtreThorlabs MF539-43
İnkontinans pedi
İzofluran Ketamin
hidroklorürherhangi bir jenerik ürün
Medetomidin hidroklorürherhangi bir jenerik ürün
İğne25G
Oksijen
Zil Çözeltisi
Steril çarşaflar
Cerrahi aletlermikro forseps, mikro makas, künt cerrahi makas
Cerrahi mikroskopOPMI, Carl Zeiss AG, Oberkochen, Almanya
Şırınga 2ml, 5ml
Bant Meşale
ışığı
10 10 Plakası

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kakucs, C., Florian, I. A., Ungureanu, G., Florian, I. S. Fluorescein Angiography in Intracranial Aneurysm Surgery: A Helpful Method to Evaluate the Security of Clipping and Observe Blood Flow. World Neurosurgery. 105, 406-411 (2017).
  2. Ajiboye, N., Chalouhi, N., Starke, R. M., Zanaty, M., Bell, R. Unruptured Cerebral Aneurysms: Evaluation and Management. ScientificWorldJournal. 2015, 954954(2015).
  3. Suzuki, K., et al. Confirmation of blood flow in perforating arteries using fluorescein cerebral angiography during aneurysm surgery. Journal of Neurosurgery. 107 (1), 68-73 (2007).
  4. Gruter, B. E., et al. Fluorescence Video Angiography for Evaluation of Dynamic Perfusion Status in an Aneurysm Preclinical Experimental Setting. Operative Neurosurgery. , Hagerstown. (2019).
  5. Raabe, A., et al. Prospective evaluation of surgical microscope-integrated intraoperative near-infrared indocyanine green videoangiography during aneurysm surgery. Journal of Neurosurgery. 103 (6), 982-989 (2005).
  6. Riva, M., Amin-Hanjani, S., Giussani, C., De Witte, O., Bruneau, M. Indocyanine Green Videoangiography in Aneurysm Surgery: Systematic Review and Meta-Analysis. Neurosurgery. , (2017).
  7. Kuroda, K., et al. Intra-arterial injection fluorescein videoangiography in aneurysm surgery. Neurosurgery. 72, 2 Suppl Operative 141-150 (2013).
  8. Kilkenny, C., Browne, W. J., Cuthill, I. C., Emerson, M., Altman, D. G. Improving Bioscience Research Reporting: The ARRIVE Guidelines for Reporting Animal Research. PLOS Biology. 8 (6), 1000412(2010).
  9. Marbacher, S., et al. The Helsinki rat microsurgical sidewall aneurysm model. Journal of Visualized Experiments. (92), e51071(2014).
  10. Marbacher, S., et al. Complex bilobular, bisaccular, and broad-neck microsurgical aneurysm formation in the rabbit bifurcation model for the study of upcoming endovascular techniques. American Journal of Neuroradiology. 32 (4), 772-777 (2011).
  11. Shurey, S., et al. The rat model in microsurgery education: classical exercises and new horizons. Archives of Plastic Surgery. 41 (3), 201-208 (2014).
  12. Foster, S. D., Lyons, M. S., Runyan, C. M., Otten, E. J. A mimic of soft tissue infection: intra-arterial injection drug use producing hand swelling and digital ischemia. World Journal of Emergency Medicine. 6 (3), 233-236 (2015).
  13. Flower, R. W. Injection technique for indocyanine green and sodium fluorescein dye angiography of the eye. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 12 (12), 881-895 (1973).
  14. Yoshioka, H., et al. Advantage of microscope integrated for both indocyanine green and fluorescein videoangiography on aneurysmal surgery: case report. Neurologia medico-chirurgica (Tokyo). 54 (3), 192-195 (2014).
  15. Ichikawa, T., et al. Development of and Clinical Experience with a Simple Device for Performing Intraoperative Fluorescein Fluorescence Cerebral Angiography: Technical Notes. Neurologia medico-chirurgica. 56 (3), 141-149 (2016).
  16. Alander, J. T., et al. A review of indocyanine green fluorescent imaging in surgery. International Journal of Biomedical Imaging. 2012, 940585(2012).
  17. Lane, B., Bohnstedt, B. N., Cohen-Gadol, A. A. A prospective comparative study of microscope-integrated intraoperative fluorescein and indocyanine videoangiography for clip ligation of complex cerebral aneurysms. Journal of Neurosurgery. 122 (3), 618-626 (2015).
  18. Blair, N. P., Evans, M. A., Lesar, T. S., Zeimer, R. C. Fluorescein and fluorescein glucuronide pharmacokinetics after intravenous injection. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 27 (7), 1107-1114 (1986).
  19. Hillmann, D., et al. In vivo optical imaging of physiological responses to photostimulation in human photoreceptors. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (46), 13138-13143 (2016).
  20. Golby, A. J. Image-Guided Neurosurgery. , Elsevier Science. (2015).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Sodyum Fluoresceinndosiyanin Ye iliGer ek Zamanl Kan AkDamar Perf zyon DurumuCerrahi G rselle tirmeBant Ge iren Filtre

İlgili makaleler