Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Deneysel Çalışmalar için Deniz Pelajik Tunicate Dolioletta gegenbauri (Uljanin 1884) Yetiştiriciliği

12.2K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/59832

⸱

9 Ağustos 2019

 ,  , 
1Skidaway Institute of Oceanography, University of Georgia, 2Hampton University

Bu makalede

Özet

Doliolidler, türleri Dolioletta gegenbauride dahil olmak üzere, dünya çapında üretken kıtaaltı raf sistemlerinde bulunan ekolojik önemi küçük jelatinimsi deniz zooplankton vardır. Bu hassas organizmaları kültüre çekmenin zorluğu araştırmalarını sınırlandırıyor. Bu çalışmada doliolid Dolioletta gegenbauri'nintoplanması, yetiştirilmesi ve bakımı için yetiştirme yaklaşımlarını açıklıyoruz.

Özet

Jelatinimsi zooplanktonlar okyanus ekosistemlerinde çok önemli bir rol oynamaktadır. Ancak, genellikle onların fizyolojisi, büyüme, fecundity ve trofik etkileşimleri öncelikle metodolojik zorluklar nedeniyle araştırmak zordur, onları kültür yeteneği de dahil olmak üzere. Bu özellikle doliolid için geçerlidir, Dolioletta gegenbauri. D. gegenbauri genellikle üretken subtropikal kıta sahanlığı sistemlerinde dünya çapında, genellikle günlük birincil üretimin büyük bir kısmını tüketebilen çiçek konsantrasyonlarında görülür. Bu çalışmada, laboratuvar tabanlı çalışmaların yürütülmesi amacıyla D. gegenbauri'nin toplanması, yetiştirilmesi ve bakımı için yetiştirme yaklaşımları açıklanmaktadır. D. gegenbauri ve diğer doliolid türler sürüklenen bir gemiden eğik çekilmiş konik 202 μm örgü plankton ağları kullanılarak canlı olarak yakalanabilir. Su sıcaklığı 21 °C'nin altında olduğunda kültürler en güvenilir şekilde kurulur ve olgunlaşmamış gonozooidler, olgunlaşan phorozooidler ve büyük hemşirelerden başlar. Kültürler yavaş dönen plankton tekerleği üzerinde yuvarlak kültür kaplarında muhafaza edilebilir ve birçok nesiller boyunca doğal deniz suyunda kültürlü yosun bir diyet sürdürülür. D. gegenbaurilaboratuvar kültürleri kurmak için yeteneğiek olarak, biz toplama durumu, yosun konsantrasyonu, sıcaklık ve doğal olarak klimalı deniz suyuna maruz kalma tüm kültür için kritik olduğunu göstermektedir kurulması, büyüme, hayatta kalma ve D. gegenbauriüreme .

Giriş

Okyanustaki en büyük hayvan biyokütlesi için Zooplankton hesabı, deniz gıda ağları önemli bileşenleridir ve okyanus biyojeokimyasal döngüleri önemli roller oynamaktadır1,2. Zooplankton, organizmaların büyük bir çeşitlilik oluşan rağmen, brüt iki kategoriye ayrılabilir: birkaç ara taxa ile jelatinimsi ve jelatinsiz3,4. Jelatinimsi olmayan zooplankton ile karşılaştırıldığında, jelatinimsi zooplankton karmaşık yaşam geçmişleri nedeniyle çalışmak özellikle zordur5, ve onların hassas dokuları kolayca yakalama ve işleme sırasında zarar görür. Jelatinimsi zooplankton türleri, bu nedenle, laboratuvarda kültür üne sahip ve genellikle daha az jelatinimsi olmayantürler6 göre çalışılmıştır.

Jelatinimsi zooplankton grupları arasında, dünya okyanusunda bol ve ekolojik önemi olan thaliasyalılar vardır. Thaliaceans siparişleri Salpida, Pyrosomida ve Doliolida7içeren pelajik tunicates bir sınıfvardır. Doliolida, topluca doliolids olarak anılacaktır, subtropikal okyanusların üretken neritik bölgelerde yüksek bolluk ulaşabilirsiniz küçük varil şeklinde serbest yüzme pelajik organizmalardır. Doliolids tüm zooplankton gruplarının en bol arasındadır4,8. Süspansiyon besleyiciler olarak, doliolids filtre akımları oluşturarak ve mukus ağlarıonlarıyakalayarak su sütunundan gıda parçacıkları toplamak 9 . Taksonomtik olarak, doliolidler phylum Urochordata10'dasınıflandırılır. Koroata ataları ve deniz pelajik sistemlerinin temel bileşenleri olarak ekolojik önemine ek olarak, Thaliaceans sömürge yaşam tarihinin kökeni anlamak için önemi vardır10,11 ve evrim chordates5,7,10,12,13,14.

Doliolidlerin yaşam öyküsü karmaşıktır ve yaşam döngüleri boyunca onları kültürleme ve sürdürme nin zorluğuna katkıda bulunur. Doliolid yaşam döngüsü ve anatomi bir inceleme Godeaux ve ark15bulunabilir. Cinsel ve eşeysiz yaşam öyküsü aşamaları arasında zorunlu bir değişim içeren doliolid yaşam döngüsü Şekil1'de sunulmuştur. Yumurta ve sperm hermafrodit gonozooids tarafından üretilen, yaşam döngüsünün tek yalnız aşaması. Gonozooidler su sütununa sperm salgılar larvalara dönüşür ve yumurtalar içten döllenir ve larvaya dönüşür. Larvalar yumurtadan çıkar ve 1-2 mm'ye ulaşabilen oozooidlere metamorfoz. Oozooidler ventral stolonlarında eşeysiz tomurcuküretirler. Bu tomurcuklar stolonbırakın ve üç eşleştirilmiş satırlar halinde dize kadofor göç. Merkezi çift sıralar phorozooid, dıştaki iki çift sıra trophozooid olur. İkincisi hem hemşire ve phorozooids16,17gıda sağlar. Trophozooids o tüm iç organları kaybeder gibi beslenme ile hemşire kaynağı. Trophozooidlerin bolluğu arttıkça, hemşirenin büyüklüğü laboratuvarda 15 mm'ye ulaşabilir. Phorozooidler büyüdükçe, giderek planktonik av yutmak ve bireyler olarak serbest bırakılmadan önce boyutu ~ 1.5 mm ulaşmak17. Tek bir hemşire ömrü boyunca 100 phorozooids serbest bırakabilir18. Phorozooidler kadofordan salındıktan sonra büyümeye devam ederler ve yaşam döngüsünün ikinci sömürge evresiolurlar. Yaklaşık 5 mm boyutuna ulaştıklarında, her phorozooid ventral peduncle üzerinde bir küme gonozooid geliştirir. Bu gonozooidler ~ 1 mm uzunluğa ulaştıklarında parçacıkları yutabilirler. Gonozooidler ~ 2-3 mm boyutuna ulaştıktan sonra phorozooid serbest bırakılır ve yaşam döngüsünün tek yalnız aşaması haline gelir. Bir kez boyutu ~ 6 mm ulaşmak, gonozooids cinsel olgun17olur. Gonozooidler 9 mm veya daha uzunluğa ulaşabilirler. Gonozooidler hermafrodit, sperm aralıklı olarak serbest bırakılırken yumurtaların döllenmesi dahili olarak oluşur16,17. Gonozooid ≥ 6 mm boyutunda olduğunda, 6 döllenmiş yumurtaya kadar salgılar. Başarılı kültür, bu benzersiz yaşam öyküsü aşamalarının her birinin özel ihtiyaçlarını desteklemeyi gerektirir.

Doliolidler de dahil olmak üzere Thaliasyalıların ekolojik ve evrimsel önemi nedeniyle, bu organizmanın eşsiz biyolojisi, fizyolojisi, ekolojisi ve evrimsel tarihini anlamak için yetiştirme metodolojilerine ihtiyaç vardır19 . Doliolidler, gelişimbiyolojisi ve fonksiyonel genomik alanlarında deneysel model organizmalar olarak önemli bir vaatte bulunmaktadırlar çünkü şeffaftırlar ve muhtemelen genomları düzene sokmuşlar20,21. Ancak güvenilir yetiştirme yöntemlerinin eksikliği, laboratuvar modelleri olarak kullanışlılıklarını engellemez. Bir avuç laboratuvar kültürlü doliolidlere dayalı sonuçlar yayınlamış olsa da, bilgi yetiştirme yaklaşımlarımız ve ayrıntılı protokollerimiz daha önce yayınlanmamıştır. Deneyim yıl dayanarak, ve deneme yanılma yetiştirme girişimleri, Bu çalışmanın amacı deneyimleri gözden geçirmek ve doliolids toplama ve ekimi için protokolleri paylaşmak için, özellikle tür Dolioletta gegenbauri.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

1. D. gegenbauri yetiştirme için kültür tesisleri hazırlanması

NOT: Gerekli tüm malzeme ve ekipmanlar MalzemeTablosu'nda listelenmiştir.

  1. 1 M Sodyum Hidroksit (NaOH), 0,06 M Potasyum Permanganat (KMnO4)çözeltisi hazırlayın. Bu çözeltiyi hazırlamak için 400 g NaOH'u 10 L deiyonize suya çözün. NaOH çözeltisine 100 g KMnO4 ekleyin ve iyice karıştırın.
  2. 100 g NaHSO 3'ü 10 L deiyonize suya eriterek 0,1 M Sodyum bisülfit (NaHSO3)çözeltisi hazırlayın ve iyice karıştırın.
    DİkKAT: Bu reaktifler solunduğunda solunum sorunlarına yol açabilecek tahriş edici maddelerdir. Duman kaputu gibi iyi havalandırılan bir alana yerleştirin. Herhangi bir cilt temasından kaçının. Kullanım sırasında koruyucu eldivenler, koruyucu giysiler, göz koruması ve yüz koruması giyin.
  3. Laboratuvarda doliolid kültürleri oluşturmadan ve yetiştirmeden önce kültür kavanozlarını temizleyin ve sterilize edin.
    1. 1.9 L ve 3.8 L kültür kavanozlarını deiyonize suyla en az 3 kez durulayın. Kapaklar aşağıdaki temizleme adımlarına dahil olmadığı için vida kapaklarının kurumasını bekleyin.
    2. 1.9 ve 3.8 L cam kültür kavanozlarını NaOH/KMnO4 çözeltisi içine daldırarak temizleyin ve sterilize edin. Kavanozlar bir gecede Emmek için izin verin.
    3. Kavanozları NaOH/KMnO4 çözeltisinden çıkarın ve kavanozları sodyum bisülfit (NaHSO3)çözeltisine batırın. Kavanozlar bir gecede Emmek için izin verin.
    4. NaHSO3 çözeltisinden kavanozları çıkarın ve deiyonize su yla iyice durulayın. Kavanozların kurumasını bekleyin.
  4. Plankton tekerleği (Şekil2)sıcaklık kontrollü bir alana (çevre odasına) yerleştirin. Sıcaklığı 20 °C'ye kadar dengeleyin. Özel plankton tekerleğinin daha ayrıntılı bir açıklaması için lütfen Ek Şekil1'e bakın.

2. Fitoplankton kültürü

  1. D. gegenbauriiçin gıda olarak kullanılmak üzere Ulusal Deniz Yosun ve Mikrobiyota Merkezi (NCMA) veya diğer kaynaklardan alg kültürleri edinin. Isochrysis galbana (CCMP 1323), Rhodomonas sp (CCMP 740) ve küçük bir diatom, Thalassiosira weissflogii (CCMP 1051) dahil olmak üzere iki kamçı türlerinin karışımları NCMA elde edilmiş ve önceki laboratuvarda kullanılmıştır arka doliolids için çalışmalar başarıyla17.
  2. NCMA tarafından önerilen L1 ve L1-Si büyüme ortamı 22'yi hazırlayın.
  3. Yeni alg kültürlerini başlatmak için tedarikçi tarafından verilen talimatları uygulayın.
  4. Stok kültürlerini korumak için, titiz axenik kültür tekniklerini kullanarak, steril 55 mL cam kültür tüplerinde her iki haftada bir 0,5 mL eski yaşlanma kültürünü 25 mL taze büyüme ortamına aktarın.
    NOT: Canlı alg kültürlerini düzenli olarak aktarmadan saklamak mümkün değildir. Kültürler uzun süre kullanılmayacaksa ve kullanılmama süresi boyunca kültürlerin korunması mümkün değilse, bu ortak alg kültürlerinin orijinal kaynaklarından (örneğin, NCMA) yeniden elde edilmesi önerilir.
  5. 200 mL büyüme ortamı içeren temiz 500 mL plastik doku kültürü şişelerinde doliolidlerin beslenmesi için daha büyük hacimlerde fitoplankton hazırlayın.
    1. Fitoplankton axenic stoklardan (4 mL) 200 mL büyüme ortamına (1:50 seyreltme) inoküle.
    2. 12:12 saat açık 20 °C'de kuluçka:65-85 μE/m2soğuk beyaz ışık aydınlatması altında karanlık döngü . Aydınlatmayı en üst düzeye çıkarmak için düz kültür şişeleri lay. Yavaşça günlük kültür girdap.
    3. Kültürlerin büyümesini izlemek için bir parçacık sayacı veya mikroskop kullanarak hücrelerin konsantrasyonu belirleyin.
      NOT: Aşılamadan itibaren 7-10 gün sonra kamçılama kültürleri ~105-106 hücre/mL ve diatom kültürü ~104-105 hücre/mL içerecektir. Bu konsantrasyonlar doliolid kültürleri korumak için yeterlidir.
    4. Tüm kültür faaliyetlerini desteklemek için yeterli alg biyokütle sağlamak için her iki haftada en az yeni beslenme stokları başlatın.

3. Kültür için yabani doliolidler ve deniz suyu koleksiyonu

NOT: Toplama ve yetiştirme yaklaşımlarına genel bir bakış Şekil3'te özetlenmiştir. Özel koleksiyon plankton net ve morina sonu açıklaması Şekil4'te verilmiştir.

  1. Plankton ağları veya yerinde görüntüleme sistemleri23kullanarak tespit ederek doliolidler bulun .
    NOT: Doliolidler yüzey sularında nadiren bulunduğundan ve uzaktan algılama teknolojisi yle tespit edilemediği için, doliolidler için uygun koşulların ön koşul bilgisi ile yönlendirilen (bkz. Tartışma), doliolidlerin varlığı belirlenmelidir örneklemeden önce.
  2. Bir D. gegenbauri kültürünü başlatmak için hazırlık canlı doliolids toplamadan önce parçacık açısından zengin deniz suyu toplamak.
    1. Doliolidlerin bulunduğu bölgeden ve klorofilin en yüksek tahminlerini içeren derinlikten su toplamak için CTD rozetine veya eşdeğer ekipmana monte edilmiş Niskin şişeleri yerinde florürler tarafından tahmin edilen bir konsantrasyonuyguluyor.
      NOT: Klorofil konsantrasyonu parçacık konsantrasyonlarının bir göstergesi olarak kullanılır. Güney Atlantik Bight (SAB) orta kıta sahanlığı, yeraltı klorofil maksimum genellikle alt yakın, ama diğer yerlerde, olmayabilir.
  3. Doliolidler bulunduğunda, özel plankton ağı ve morina ucu kullanarak hasarsız doliolid zooidleri kurtarın. Ağı dağıtmadan önce, morina ucunu deniz suyuyla doldurun.
    1. Sürüklenen bir gemiden, ~15 - 25° eğik çekme açısı nı ve 15 m/dk'dan fazla olmayan dikey dağıtım ve alma hızını koruyarak su sütunundan ağı indirin ve kaldırın.
  4. Net gemiye bir kez, yavaşça aktarmak ve morina-uç içeriğini bölmek 3, 5 galon (~ 20 L) plastik kova her içeren ~ 10 L yüzey deniz suyu siteden toplanan.
    NOT: Yeni plastik kovalar doliolid toplama yaşayan önce deniz suyu gün eklenmesi ile koşullandırılmış olmalıdır. Amaç plastikten kimyasalların leaching azaltmaktır. Deniz suyu yoksa, kovaları koşullandırmak için saflaştırılmış (örneğin, Milli Q) veya zehirli kirletici içermeyen musluk suyu kullanın.
  5. Doliolid zooidleri diğer planktonlardan ayırın.
    1. Küçük gruplar halinde (~ 2 L) net çekme içeriğinden (şimdi 20 L plastik kova) 2 L cam kabına karışık planktonları aktarın.
    2. Geniş delikli cam pipet (8 mm ID x 38 cm uzunluğunda) kullanarak, doliolidlerin bulunduğu yerden Niskin şişeleri kullanılarak toplanan parçacık açısından zengin deniz suyu içeren temiz cam kültür kavanozlarına beistediğimden aktif olarak yüzen doliolid zooidleri dikkatlice sifonlayıp aktarın Yer almaktadır.
    3. Deniz suyunun yüzeyinin altındaki doliolid zooidleri yavaşça serbest bırakın.
      NOT: Gonozooidler, bağlı gelişen gonozooidler içeren phorozooidler ve ekli tropozooidiçeren hemşire aşamaları toplamak (Şekil 1).
  6. Doliolidlerin eklenmesinden sonra, 3,8 L kavanozda ~ 5 x 103 – 104 hücre/mL (~ 5x 104 – 1 x 105 hücre/mL içeren bir kültürün ~50 mL'si) son konsantrasyonuna Rhodomonas sp. kültürünü ekleyin. Bu doliolids aktif beslenen olup olmadığını belirlemek içindir. Doliolids yutmak Rhodomonas sp. ,onların sindirim sistemi renk kırmızı görünecektir. Beslenme gibi görünmeyen zooidleri çıkarın.
  7. Doliolidlerin hava-su arabiriminde mahsur kalmalarını önlemek için, kavanozları filtrelenmemiş parçacık açısından zengin deniz suyuyla doldurarak ve kavanozun üzerine (89 mm genişliğinde) plastik bir sargı yerleştirerek kültür kavanozlarında boşluktan kaçının.
    1. Aynı zamanda hayvanlara zarar verebilir hava kabarcıkları oluşturmaktan kaçının. Kapağı kavanoza dikkatlice vidalayın ve kabarcıkların mevcut olup olmadığını belirlemek için kavanozu hafifçe ters çevirin. Kabarcıklar varsa, bunları kaldırın.
    2. Kavanozlar dolduktan sonra, kavanozun dışından fazla suyu silin.
  8. Her kavanozu, kauçuk borularla kaplıdikey metal çubuklara ve paslanmaz çelik hortum kelepçesinin arasına yerleştirerek plankton tekerleğine (Şekil 2) monte edin.
    1. Kavanozun arka sının kauçuk boruya karşı yastıklı olduğundan emin olun. Vidayı ayarlayarak kavanozun etrafındaki hortum kelepçesini sıkın.
    2. Güvenli bir şekilde sabitlendikten sonra kavanozun hareket etmediğini kontrol edin. Doliolidleri süspansiyonda tutmak için kavanozların 0.3 rpm'de dönmesine izin verin.
      DİkKAT: Kavanozun çatlamasını önlemek için kavanozu aşırı sıkmamak önemlidir.
  9. Gemide, plankton tekerleğindeki kültür gemilerini 20 °C'de, laboratuvar kültür tesisine aktarılana kadar loş ışıkta muhafaza edin.
  10. Laboratuvara döndükten sonra, doliolid içeren kavanozları hazırlanan kültür tesisine aktarın. Plankton tekerleğindeki kavanozları monte edin (bkz. adım 3.8) ve kavanozların 0,3 rpm'de dönmeye devam etmesine izin verin.
    NOT: Bu çalışmada doliolidlerin tüm yetiştirmesi 20 °C'de yapılmıştır.

4. D. gegenbauri kültürlerin korunması

  1. Gemiden laboratuvara, hayvanların orijinal kavanozlarda 3 gün boyunca laboratuvar koşullarına alışmalarına izin verin.
    1. Alışma süresi boyunca, 3 gün boyunca her gün toplama alanından filtrelenmemiş partikül açısından zengin deniz suyu ile suyun% 10 değişimi için geniş bir delik cam pipet kullanın.
    2. Kavanozda birkaç copepods tutun ama diğer tüm zooplankton, büyük dışkı pelet ve doliolid filtreleme cihazı (mukus net) tıkanabilir büyük toplu parçacıklar kaldırın. Kültür erken hemşirelerden oluşuyorsa, kavanozda büyük bir gonozooid (≥ 6 mm) bulundurun.
      NOT: Hangi kopepod türlerinin kültüre dahil olduğu önemli değildir, ancak bu deneyde doliolidlerin ele geçirildiği yerden en bol bulunan türler kullanılmıştır.
  2. Alışma süresini takiben, doliolid zooidleri ve koppodları orijinal kavanozdan %80 cam elyaf filtresi (GF/F) içeren temiz bir yetiştirme kavanozuna, deniz suyunun %20'sini ve deniz suyunun %20'sini orijinal kavanozdan aktarın. 0,7 μm filtre kağıdı nominal gözenek boyutuile bir GF / F ile deniz suyu filtreleyerek filtrelenmiş deniz suyu hazırlayın.
  3. Her 3 günde bir GF/F filtrelenmiş deniz suyu ile suyun %10'u ile suyu değiştirerek ve agregaları ve dışkı peletlerini çıkararak yeni kültürü koruyun. Haftalık, adım 4.2 açıklandığı gibi yeni bir kavanoza hayvan transferi.
  4. 40 - 95 μg C/L arasındaki kültür kavanozlarında fitoplankton konsantrasyonlarını koruyarak doliolidleri besleyin.
    NOT: Bu konsantrasyonlar D. gegenbauri17için çiçek lenme koşullarını desteklediği bilinen çevre koşullarını taklit eder. Alg türlerinin karışımı yaşam evrelerine ve her kavanozdaki zooid sayısına bağlı olarak değişir. Erken yaşam aşamalarında, sadece cryptomonad yosun(Isochrysis galbana ve Rhodomonas sp.) 1:1 karışımı (karbon içeriği ile) ekleyin. Daha büyük av türleri kolayca küçük hemşirelerin beslenme cihazları tıkanabilir ve trophozooidler gelişmekte. Daha büyük hemşireleri, phorozooidleri ve gonozooidleri beslerken eşit karbon içeriğinde olan alg karışımına diatom Thalassiosira weissflogii ekleyin.
    1. Kültürlere ne sıklıkta ve ne kadar alg ekleyeceğiniz kararını yönlendirmek için beslenme öncesi ve sonrası alg konsantrasyonlarını izleyin. Kültür kavanozlarında alg konsantrasyonları nispeten seyreltik olduğundan, alg konsantrasyonları belirlemek için bir parçacık sayacı kullanın.
  5. Kalan doliolidlerin büyümek için yeterli gıdaya sahip olması için 40 – 95 gC/L alg konsantrasyonlarını korumak için yeterli zooidleri çıkarın.
    NOT: Laboratuvar koşullarında başarılı bir şekilde sürdürülmesi en zor yaşam evresi gelişen larvalar ve oozooid (erken hemşire) dir. Kültürün bu evresinde, larva ve oozooid (3,8 L kavanozda~ 20) gelişmekte olan kavanozdaki birkaç kopepoda ek olarak bir büyük gonozooid (≥ 6 mm) bulundurun.
  6. Hemşirenin kadoforsunda en az 8 trophozooid bir kez en az 4 hemşirenin yeni bir külleyici kavanoza aktarılması (Şekil1B).
    NOT: Trophozooids 20 °C'de her 1 - 2 günde bir iki katına çıkar. Trophozooidler çıplak gözle görülebilecek kadar büyüktür.
    1. Hemşireler 20 trophozooid geliştirince iki hemşireyi çıkarın.
    2. Hemşireler kendi cadophores > 30 trophozooids geliştirmek zaman bir hemşire çıkarın. Kalan hemşirenin kadoforda phorozooidler geliştirmesine izin verin.
    3. Hemşire 30 phorozooids kadar bültenleri kez hemşire çıkarın.
  7. Phorozooidler 3 mm boyutuna ulaştıktan sonra kavanozdaki hayvan sayısını azaltın.
    1. Phorozooidler büyüdüklerinde (> 5 mm) ve gonozooid kümeleri geliştiğinde dört phorozooid hariç tüm phorozooidleri çıkarın.
    2. Gonozooid kümelerinin sayısı arttığında ve beslenmeye başladığında kültürü iki phorozooidye indirin.
    3. Phorozooidler 30 gonozooid salgıladıktan sonra phorozooidleri çıkarın.
  8. Kavanoz başına 30 zooidden 2'ye gonozooid sayısını azaltın. Döllenmiş yumurtaların kavanoza salınmasına izin verin.
    1. Oozooidler geliştikten sonra kavanozda tek bir gonozooid bırakarak bir gonozooid çıkarın.
      NOT: Atılan hemşireler, phorozooidler ve gonozooidler ek kültürleri tohumlamak ve daha fazla deney yapmak için kullanılabilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Doliolidin toplanması ve kültüre alınış için açıklanan prosedürleri takiben, Şekil 3'te özetlenen D. gegenbauri , karmaşık yaşam tarihi boyunca D. gegenbauri kültürünü korumak mümkündür (Şekil 1) ve birçok nesiller için sürdürmek. Burada D. gegenbauri yetiştiriciliği tanımlansa da, bu prosedürler diğer doliolid türlerinin yetiştirilmesi için de geçerli olmalıdır.

Sağlıklı ve hasarsız doliolid zooidlerin yak...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Kültür doliolids kapasitesi son birkaç on yıl içinde kurulmuş ve çeşitli alanlarda araştırma desteklemek için kullanılmıştır. Laboratuvarlarımızda yapılan deneysel çalışmalar, beslenme ve büyümeye odaklanan en az 15 bilimsel çalışmanın yayınlanmasını desteklemiş18,26, üreme18,28, diyet6, 29, fizyoloji30, ekoloji

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların beyan etmek için hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

G.-A. dahil olmak üzere bu projeye yıllar içinde bilgi birikimine katkıda bulunan birçok kişiye müteşekkiriz. Paffenhöfer ve D. Deibel bu protokolleri ilk olarak geliştirmişlerdir. Mösyö Köster ve L. Lamboley de bu prosedürlerin geliştirilmesine önemli ölçüde katkıda bulunmuştur.  N.B. López-Figueroa ve Á.E. Rodríguez-Santiago Tablo 1'de sağlanan doliolid bolluğu tahminlerini ürettiler. Bu çalışma kısmen ABD Ulusal Bilim Vakfı ödülleri OCE 082599, 1031263 MEF, ortak projeler OCE 1459293 ve OCE 14595010 MEF ve DMG ve Ulusal Okyanus ve Atmosfer İdaresi ödülü NA16SEC4810007 DMG tarafından desteklenmiştir. R/V Savannah'nın çalışkan ve profesyonel ekibine minnettarız. Lee Ann DeLeo rakamlar hazırlanan, Charles Y. Robertson kanıtı el yazması ve, James (Jimmy) Williams plankton tekerlek üretti

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Alg kültürü tüpleri (55 mL steril tek kullanımlık cam kültür tüpleri)Herhangi birNAAlg kültürleri için
OtoklavHerhangi birNAAlg kültürleri için ekipman ve deniz suyunu sterilize etmek için
Beherler (2 L cam)AnyNASeyreltilmiş plankton net çekme içeriğini sıralamak için
Kovalar (5 galon, ~20L)Herhangi birNAPlanton ağ çekicisinin içeriğini seyreltmek için - ilk kullanımdan önce deniz suyu şartlandırılmalıdır
Damacana (20 L) Herhangi birNADeniz suyunu depolamak için
Doliolid cam kültür kavanozu (1,9 L dar ağızlı kapaklı cam kavanoz)QorpakGLC-01882Kültür
kabı Doliolid cam kültür kavanozu (3,8 L kapaklı dar ağızlı cam kavanoz)QorpakGLC-01858Kültür
Çevre Odası için Konteyner (Sıcaklık kontrollü çevre odası)AnyNAPlankton tekerleği ve kültür bakımını sağlamak
için 47 mm filtreler için filtrasyon aparatıHerhangi birNAKültürler için deniz suyunu filtrelemek için
Cam mikrofiber filtreler, 47 mmWhatman1825-047Kültürler için deniz suyunu filtrelemek için
Cam pipet (borosilikat cam pipet (cam boru), OD 10mm, ID 8 mm, duvar kalınlığı 1mm)Science CompanyNC-10894Özel kesim ve kenarlar cilalı
Hortum kelepçeleri, paslanmaz çelik, #104 (178 mm)AnyNAKültür kavanozlarını plankton çarkına tutmak için
tekerlekIsochrysis galbana suşu CCMP1323Ulusal Deniz Algleri ve Mikrobiyota Merkezi (NCMA)suş CCMP1323Doliolid kültürlerini beslemek için
L1 Medya Kiti, 50 LUlusal Deniz Algleri ve Mikrobiyota Merkezi (NCMA)MKL150LAlgleri yetiştirmek için
Lamba (Ayarlanabilir kollu floresan masa lambası)AnyNAKavanoz ve beherlerdeki doliolidleri aydınlatmak için Işıklı
sıcaklık kontrollü inkübatörAnyNAAlg kültürleri için
Mikropipetler ve steril uçlar (0-20 & mikro; L, 20-200 ve mikro; l, 200-1000  &mikro; l)Alg kültürleri içinherhangi birNA
Plankton Ağı (202 & mikro; m 0,5 m, 5:1 uzunluk) morina uç halkası ve   4 L akvaryum morina ucuSea-Gear Corporation90-50x5-200-4A/BBCanlı doliolidleri toplamak için (bkz. Şekil 4)
Plankton ÇarkıNANAÖzel yapım (bkz. Şekil 2)
Streç filmHerhangi birNADoliolit kültür kavanozlarının kapağının içini kaplamak için
Potasyum PermanganatFisher ScientificP279-500Kavanozları ve cam eşyaları
temizlemek için reaktifRhodomonas sp. suş CCMP740Ulusal Deniz Algleri ve Mikrobiyota Merkezi (NCMA)suş CCMP740Doliolit kültürlerini beslemek için
Kauçuk BoruNANAKültür kavanozlarını plankton çarkına tutmak için (tygon borudan yapılabilir)
Sodyum BisülfitFisher ScientificS654-500Kavanozları ve cam eşyaları temizlemek için reaktif
Sodyum HidroksitFisher ScientificBP359-212Kavanozları ve cam eşyaları temizlemek için reaktif
Steril serolojik pipetler (1 mL, 5 mL, 10 mL, 25 mL)Herhangi birNAAlg kültürleri için
Thalassiosira weissflogii suşu CCMP1051Ulusal Deniz Algleri ve Mikrobiyota Merkezi (NCMA)suş CCMP1051Doliolid kültürlerini beslemek için
Doku kültürü şişeleri (250 mL)Herhangi birNAAlg kültürleri için

Kaynaklar

  1. Banse, K. Zooplankton – Pivotal role in the control of ocean production. Ices Journal of Marine Science. 52 (3-4), 265-277 (1995).
  2. Wilson, S. E., Ruhl, H. A., Smith, K. L. Zooplankton fecal pellet flux in the abyssal northeast Pacific: A 15 year time-series study. Limnology and Oceanography. 58 (3), 881-892 (2013).
  3. Bode, A., Álvarez-Ossorio, M. T., Miranda, A., Ruiz-Villarreal, M. Shifts between gelatinous and crustacean plankton in a coastal upwelling region. Ices Journal of Marine Science. 70 (5), 934-942 (2013).
  4. Kiorboe, T. Zooplankton body composition. Limnology and Oceanography. 58 (5), 1843-1850 (2013).
  5. Holland, L. Z. Tunicates. Current Biology. 26 (4), R146-R152 (2016).
  6. Walters, T. L., et al. Diet and trophic interactions of a circumglobally significant gelatinous marine zooplankter, Dolioletta gegenbauri (Uljanin, 1884). Molecular Ecology. , Special Issue: Species Interactions, Ecological Networks and Community Dynamics (2018).
  7. Piette, J., Lemaire, P. Thaliaceans, the neglected pelagic relatives of ascidians: a developmental and evolutionay enigma. Quarterly Review of Biology. 90 (2), 117-145 (2015).
  8. Acuña, J. L. Pelagic tunicates: Why gelatinous? American Naturalist. 158 (1), 100-107 (2001).
  9. Alldredge, A. L., Madin, L. P. Pelagic tunicates – unique herivores in the marine plankton. Bioscience. 32 (8), 655-663 (1982).
  10. Wada, H. Evolutionary history of free-swimming and sessile lifestyles in urochordates as deduced from 18S rDNA molecular phylogeny. Molecular Biology and Evolution. 15 (9), 1189-1194 (1998).
  11. Zeng, L. Y., Jacobs, M. W., Swalla, B. J. Coloniality has evolved once in stolidobranch ascidians. Integrative and Comparative Biology. 46 (3), 255-268 (2006).
  12. Delsuc, F., Brinkmann, H., Chourrout, D., Philippe, H. Tunicates and not cephalochordates are the closest living relatives of vertebrates. Nature. 439 (7079), 965-968 (2006).
  13. Garstang, W. The morphology of the Tunicata, and its bearing on the phylogeny of the chordata. Quarterly Journal of Microscopical Science. 72 (285), 51-187 (1929).
  14. Govindarajan, A. F., Bucklin, A., Madin, L. P. A molecular phylogeny of the Thaliacea. Journal of Plankton Research. 33 (6), 843-853 (2011).
  15. Godeaux, D., Bone, Q., Braconnot, J. C. The Biology of Pelagic Tunicates. Bone, Q. , Oxford University Press. 1-24 (1998).
  16. Deibel, D., Lowen, B. A review of the life cycles and life-history adaptations of pelagic tunicates to environmental conditions). Ices Journal of Marine Science. 69 (3), 358369(2012).
  17. Paffenhöfer, G., Köster, M. From one to many: on the life cycle of Dolioletta gegenbauri Uljanin (Tunicata, Thaliacea). Journal of Plankton Research. 33 (7), 1139-1145 (2011).
  18. Paffenhöfer, G. A., Gibson, D. M. Determination of generation time and asexual fecundity of doliolids (Tunicata, Thaliacea). Journal of Plankton Research. 21 (6), 1183-1189 (1999).
  19. Conley, K. R., Lombard, F., Sutherland, K. R. Mammoth grazers on the ocean's minuteness: a review of selective feeding using mucous meshes. Proceedings of the Royal Society B-Biological Sciences. 285 (1878), (2018).
  20. Bouquet, J. M., et al. Culture optimization for the emergent zooplanktonic model organism Oikopleura dioica. Journal of Plankton Research. 31 (4), 359370(2009).
  21. Denoeud, F., et al. Plasticity of Animal Genome Architecture Unmasked by Rapid Evolution of a Pelagic Tunicate. Science. 330 (6009), 1381-1385 (2010).
  22. Harrison, P. J., Waters, R. E., Taylor, F. J. R. A broad-spectrum artificial seawater medium for coastal and open ocean phytoplankton. Journal of Phycology. 16 (1), 2835(1980).
  23. Ohman, M. D., et al. Zooglider: An autonomous vehicle for optical and acoustic sensing of zooplankton. Limnology and Oceanography-Methods. 17 (1), 69-86 (2019).
  24. Takahashi, K., et al. In situ observations of a doliolid bloom in a warm water filament using a video plankton recorder: Bloom development, fate, and effect on biogeochemical cycles and planktonic food webs. Limnology and Oceanography. 60 (5), 1763-1780 (2015).
  25. Deibel, D. The biology of pelagic tunicates. Bone, Q. , Oxford University Press. 171-186 (1998).
  26. Gibson, D. M., Paffenhöfer, G. A. Feeding and growth rates of the doliolid, Dolioletta gegenbauri Uljanin (Tunicata, Thaliacea). Journal of Plankton Research. 22 (8), 1485-1500 (2000).
  27. Haskell, A., Hofmann, E., Paffenhöfer, G., Verity, P. Modeling the effects of doliolids on the plankton community structure of the southeastern US continental shelf. Journal of Plankton Research. 21 (9), 1725-1752 (1999).
  28. Gibson, D. M., Paffenhöffer, G. A. Asexual reproduction of the doliolid, Dolioletta gegenbauri Uljanin (Tunicata, Thaliacea). Journal of Plankton Research. 24 (7), 703-712 (2002).
  29. Frischer, M. E., et al. Reliability of qPCR for quantitative gut content estimation in the circumglobally abundant pelagic tunicate Dolioletta gegenbauri (Tunicata, Thaliacea). Food Webs. 1, 7(2014).
  30. Köster, M., Paffenhöfer, G., Baker, C., Williams, J. Oxygen consumption of doliolids (Tunicata, Thaliacea). Journal of Plankton Research. 32 (2), 171-180 (2010).
  31. Paffenhöfer, G. A hypothesis on the fate of blooms of doliolids (Tunicata, Thaliacea). Journal of Plankton Research. 35 (4), 919-924 (2013).
  32. Takahashi, K., et al. Sapphirinid copepods as predators of doliolids: Their role in doliolid mortality and sinking flux. Limnology and Oceanography. 58 (6), 1972-1984 (2013).
  33. Martí-Solans, J., et al. Oikopleura dioica Culturing Made Easy: A Low-Cost Facility for an Emerging Animal Model in EvoDevo. Genesis. 53 (1), 183-193 (2015).
  34. Nishida, H. Development of the appendicularian Oikopleura dioica: Culture, genome, and cell lineages. Development Growth & Differentiation. 50, S239-S256 (2008).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Doliolid KültürüPlankton Ağı ile ÇekimCam Kavanoz SterilizasyonuAlgal Besleme ProtokolüPlankton Çarkında KültürlemeYaşam Döngüsü EvreleriSıcaklık KontrolüAlgal Konsantrasyon İzlemesiHassas Taşıma Tekniği
Deneysel Çalışmalar için Deniz Pelajik Tunicate Dolioletta gegenbauri (Uljanin 1884) Yetiştiriciliği
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.