Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Hemolymph toplama ve Metarhizyum blastosporların omurgasız patoloji çalışmalarına doğru Rhipicephalus Microplus ticks içine inoculation

6.6K görüntülenme

DOI:

10.3791/59899

1 Haziran 2019

Bu makalede

Özet

Kene hemolymph analizi, bazı patojenlerin hastalığa neden olduğu ve keneler immünolojik olarak bu enfeksiyona nasıl yanıt vereceği konusunda önemli bir bilgi kaynağını temsil eder. Bu çalışmada, mantar propagülleri aşılamak ve Rhipicephalus Microplus tıkanmış kadınlarda hemolymph toplamak gösterilmiştir.

Özet

Keneler, hematofajöz Ektoparazitleri ve Rhipicephalus mikroplus , anemi, kilo kaybı, hayvanların deri amortismanı ve aynı zamanda çeşitli patojenlerin bir vektör olarak hareket edebilir çünkü veteriner tıbbında büyük önem taşımaktadır. Bu parazitler kontrol etmek için fahis maliyetleri nedeniyle, kimyasal akaritelerin uygunsuz kullanımı nedeniyle çevreye zarar, ve geleneksel parazit karşı artan direnç, keneler alternatif kontrol, kullanımı ile Örneğin entomopatogenik mantar, ilginç bir yaklaşım olarak kabul edilmiştir. Yine de, birkaç çalışmada Tick bağışıklık sistemi bu entomopathogens mücadele nasıl davranır göstermiştir. Bu nedenle, bu protokol Entomopatojen aşı için kullanılan iki yöntem gösterilmiştir dişi ve iki teknikleri hemolymph toplama ve hemanosit hasat için kullanılır. Kene dişi vücudunda bacak eklemesinde patojenlerin aşı dişi biyolojik parametrelerin değerlendirilmesine izin verir, skutum ve başkentin arasındaki aşı, hangi sıklıkla Gené organı zarar. Dorsal hemolymph koleksiyonu bacaklardan koleksiyonundan daha yüksek hacimli iyileşme sağladı. Kene hemolymph toplama ve işleme bazı sınırlamalar dahil i) yüksek oranları hemanosit ' bozulma, ii) bozmuş midgut ile hemolymph kontaminasyonu, ve iii) düşük hemolymph ses kurtarma. Hemolymph bacak kesme yoluyla toplandığında, hemolymph bacak açılışında birikmesi için zaman alır, pıhtılaşma sürecini tercih. Buna ek olarak, ilk yöntemin gerçekleştirilmesi daha kolay kabul edilse bile, dorsal koleksiyona kıyasla bacak aracılığıyla koleksiyonda daha az hemanosit elde edilir. Entomopatogenik ajanlar tarafından aracılık edilen kenlerde bağışıklık tepkisini anlamak, patogenezini ortaya çıkarmak ve kene kontrolü için yeni hedefler geliştirmek için yardımcı olur. Burada açıklanan aşı süreçleri çok düşük teknolojik kaynaklar gerektirir ve sadece keneler patojen mikroorganizmalara maruz bırakmak için kullanılabilir. Benzer şekilde, kene hemolymph koleksiyonu birçok fizyolojik çalışmalar için ilk adımı gösterebilir.

Giriş

Sığır kene, Rhipicephalus Microplus, tropikal alanlarda Hayvancılık üzerinde büyük bir olumsuz etkisi olan bir hematofagus antiparazitik olduğunu. Bu kene, Babesia Bovis, Babesia bigeminave anaplasma obtus gibi patojenik ajanların vektörü olup, doğrudan hemofeeding hasar ile birlikte, süt ve et üretimini azaltabilir, anemi ve sonuçta ölüm neden olabilir. Bu ektoparasitin neden olduğu kayıplar Brezilya 'da yıllık 3.240.000.000 dolar olarak tahmin edildi1. Sürdürülebilir Yöntemler talep edilir ve entomopatogenik ajanların kullanımı, kimyasal akarisitlerin kullanımını azaltmak için umut verici bir alternatif ola....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bu çalışmada kullanılan keneler, bir yapay koloniden elde edildi, Rio de Janeiro Federal kırsal Üniversitesi 'nde bulunan, hangi yöntemleri omurgalı hayvanların kullanımı için Etik Komitesi tarafından onaylandı (CEUA-IV/UFRRJ #037/2014).

1. tik dişiler

  1. Kene toplama sonra, musluk suyu kullanarak kaynadı kadın yıkayın ve 0,5% (v/v) sodyum hipoklorit solüsyonu 3 dakika için bir 500 ml cam kabı alıcı, manikür hijyeni (Şekil 1), sonra kurutun tüm kadın steril kağıt havlu kullanarak (Şekil 2).
  2. Kadın homojen ağırlıklı gruplarda bölmek (her biri 20 kadın): herhangi bir ....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Bu makalede kenelere uygulanan aşı ve hemolymph toplama yöntemleri yaklaşmaktadır. Bacak uyluk ve kene dişi vücudu arasındaki aşı sonra, bazı sıvı (hemolymph) süreci sırasında salgılanan olabilir; Ancak, aşı bittiğinde, iğne ucunda veya aşı bölgesinde sıvı veya doku bulunmadığını, mantar süspansiyonun tamamen inoculated olduğundan emin olmak önemlidir. Aşı işlemi doğru şekilde gerçekleştirildiğinde, iğne ekleme kene kadınların ölümü neden olmadı. Öte yandan, entomopatogenik mantar aşı son.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Patojenlerin inoculation çalışması, çalışmada deneysel Artropod modellerinde mikroorganizmaların in vivo eylemini araştırmayı amaçladığından, çünkü patojenin ev sahibinin içinde olduğunu garanti eder. Bu teknik Ayrıca RNA parazitleri (RNAi) gibi aşılamak moleküllere de uygulanabilir. Scutum ve başkentlik arasında inoculation gerçekleştirmek için daha kolay kabul edilir ama sık zarar Gené organı, yumurtalarını zayıflatır12,13. Gené 'nin organı anatomik olarak başk.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.

Teşekkürler

Bu çalışmada Brezilya 'dan Coordenacão de Aperfeiçoamento de pessoal de nível Superior (CAPES), Finance Code 001 tarafından finanse edilmiştir. CAPES A.F. Marciano için Doktora Bursu sağladı. Biz J. Fiorotti için Doktora Bursu sağlamak için Brezilya bilimsel ve Teknolojik Kalkınma (CNPq) Ulusal Konseyi teşekkür ederiz. Bu araştırma aynı zamanda Rio de Janeiro (FAPERJ) ve CNPq devlet araştırma Carlos Chagas Filho Vakfı Hibe tarafından desteklenmektedir. V.R.E.P. Bittencourt bir CNPq araştırmacıdır.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Alkali Hipoklorit çözeltisiSigma-AldrichA1727
D-(+)-GlikozSigma-AldrichG8270-1KG
EDTASynth2706
Fetal Sığır SerumuGibco16000036
Esnek kauçukBD
Giemsa lekeSigma-Aldrich48900-500ML-F
Cam kılcalCTechGlassCT95-02
İnsülin şırıngası (iğne)BDSKU:  324910
KH2PO4Vetec60REAVET014512
Leibovitz'in L-15 kültür ortamı Gibco11415-064
MetanolSigma-Aldrich34860-1L-R
Mikroskop slaytlarıKasviK5-7105
MikrotüplerMARKAZ336769-1PAK
Na2< / sub>HPO4< / sub>Vetec60REAVET014593
NaClSigma-AldrichS7653-1KG
Neubauer odası KasviK5-0111
PenisilinGibco15140163
Proteaz inhibitörü kokteyliSigma-AldrichP2714
Tween 80Vetec60REAVET003662

Kaynaklar

  1. Grisi, L., et al. Reassessment of the potencial economic impact of cattle parasites in Brazil. Revista Brasileira de Parasitologia Veterinária. 23 (2), 150-156 (2014).
  2. Schrank, A., Vainstein, M. H. Metarhizium anisopliae enzymes and toxins. Toxicon<....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Kene İnokülasyonuEntomopatojenik MantarlarHemositlerin ToplanmasıDorsal ToplamaBacak ToplamaKapiler TüpNeubauer Kamarası