Mersin Balığı Fin ve Çene Kemiği Matrislerinden Kortizol Ekstraksiyonu

Jalil Ghassemi Nejad; Mohammad Ataallahi; Mohammad H. Salmanzadeh; Kyung T. Park; Hong G. Lee; Alireza Shoae; Atieh Rahimi; Kyung I. Sung; Kyu H. Park

doi:10.3791/59961

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Mersin Balığı Fin ve Çene Kemiği Matrislerinden Kortizol Ekstraksiyonu

7.8K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/59961

⸱

10 Eylül 2019

Jalil Ghassemi Nejad¹^,² , Mohammad Ataallahi¹ , Mohammad H. Salmanzadeh³ , Kyung T. Park³ , Hong G. Lee²^,⁴ , Alireza Shoae⁵ , Atieh Rahimi⁶ , Kyung I. Sung¹ , Kyu H. Park¹

¹College of Animal Life Sciences, Kangwon National University, ²Team of An Educational Program for Specialists in Global Animal Science, Brain Korea 21 Plus Project, Konkuk University, ³Persian Gesture, ⁴Department of Animal Science and Technology, College of Animal Bioscience and Technology, Konkuk University, ⁵Department of Animal Science, Animal Physiology, AgResearch, ⁶Faculty of Agriculture, Animal Science Department, Ferdowsi University of Mashhad

Bu makalede

Özet

Bu çalışmada mersin balığı türlerinin yüzgeci nden ve çene kemiğinden kortizol çıkarılması için bir protokol sunmuz. Fin ve çene kemiği kortizol düzeyleri, ELISA tahlilleri ile takip eden iki yıkama çözücüsi karşılaştırılarak daha fazla incelendi. Bu çalışma, yeni bir stres göstergesi olarak çene kemiği kortizol fizibilite pilot.

Özet

Bu çalışmanın amacı, iki yıkama çözücüsi (su ve izopropanol) kullanarak mersin balığı yüzgeçlerinden kortizol çıkarılması için bir teknik geliştirmek ve üç ana mersin balığı türü arasında fin kortizol düzeylerindeki farklılıkları ölçmektir. Yüzgeçler yedi beluga(Huso huso),yedi Sibirya(Acipenser baerii)ve beş sevruga(A. stellatus)olmak üzere 19 kurban mersin balığından hasat edilmiştir. Mersin balıkları İran çiftliklerinde 2 yıl (2017-2018) yetiştirildi ve Güney Kore'de kortizol ekstraksiyon analizi yapıldı (Ocak-Şubat 2019). Beş H. huso çene kemikleri de kortizol ekstraksiyonu için kullanılmıştır. Veriler SAS ortamında genel doğrusal model (GLM) yordamı kullanılarak analiz edildi. Varyasyonun intra-ve inter-assay katsayıları sırasıyla 14.15 ve 7.70 idi. Kısaca kortizol ekstraksiyon tekniği, numunelerin (300 ± 10 mg) 3 mL çözücü (ultrasaf su ve izopropanol) ile iki kez yıkanması, 80 rpm'de 2,5 dakika boyunca döndürülmesi, yıkanmış numunelerin oda sıcaklığında (22-28 °C) 7 gün boyunca havayla kurutulması, daha fazla kuruma 32 dakika boyunca 50 Hz'de boncuk çırpıcı kullanan ve toz haline getirerek kurutulmuş totoya 1,5 mL metanol (75 ± 5 mg) ve oda sıcaklığında 18 saat boyunca yavaş döndürme (40 rpm) sürekli karıştırma ile. Ekstraksiyondan sonra numuneler santrifüj (10 dk için 9.500 x g) ve 1 mL supernatant yeni bir mikrosantrifüj tüpüne (1.5 mL) aktarıldı, metanolbuharlaştırmak için 38 °C'de inkübe edildi ve enzime bağlı immünosorbent analizi (ELISA) ile analiz edildi. . Yüzgeç kortizol düzeylerinde türler arasında veya yıkama çözücüleri arasında yüzgeç ve çene kemiği kortizol düzeylerinde fark gözlenmedi. Bu çalışmanın sonuçları mersin balığı çene kemiği matrisinin katı matrisler için umut verici bir alternatif stres göstergesi olduğunu göstermektedir.

Giriş

Kortizol hayvan stresinin güvenilir bir göstergesidir. Kortizol ekstraksiyon stres düzeyleri ve stres genel desenleri izlemek için araştırmacılar için geçerli bir çerçeve sağlar. Örneğin, önceki çalışmalarda insanlarda çeşitli yöntemler kullanarak saç kortizol ölçümleri metodolojik doğrulama yaptık¹^,², maymunlar³^,⁴, sığır⁵, koyun⁶, ve japon balığı⁷^,⁸. Balık türlerinde pul, deri mukusu, dışkı ve kan⁹ gibi matrislerde kortizo....