Bu protokol, CD4+ T hücreleri ve sitokinlerde insan romatoid artritine daha yakın romatoid artrit modelleri oluşturmak için G6PI karışık peptidler kullanır. Yüksek saflıkta değişmez doğal katil T hücreleri (özellikle iNKT2) belirli fenotip ler ve fonksiyonlar ile in vivo indüksiyon ve in vitro saflaştırma ile benimseyici immünoterapi elde edildi.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Glukoz-6-Fosfat İzomazlarında (G6PI)-Indüklenen RA Farelerde iNKT Hücrelerinin Benimseyici İmmünoterapisi
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Romatoid artrit (RA) karmaşık kronik inflamatuar otoimmün bir hastalıktır. Hastalığın patogenezi değişmez doğal katil T (iNKT) hücreleri ile ilişkilidir. Aktif RA'lı hastalarda daha az iNKT hücresi, kusurlu hücre fonksiyonu ve Th1'in aşırı polarizasyonu mevcuttur. Bu çalışmada hGPI325-339 ve hGPI469-483 peptidlerinin karışımı kullanılarak RA hayvan modeli oluşturulmuştur. in vivo indüksiyon ve in vitro saflaştırma ile elde edilen iNKT hücreleri, evlat edinen immünoterapi için RA farelere infüzyon uymaktadır. In vivo görüntüleme sistemi (IVIS) takibi, iNKT hücrelerinin esas olarak dalak ve karaciğerde dağıtıldığını ortaya çıkardı. Hücre tedavisinden sonraki 12 gün, hastalığın ilerlemesi önemli ölçüde yavaşladı, klinik semptomlar hafifletildi, timustaki iNKT hücrelerinin bolluğu arttı, timustaki iNKT1 oranı azaldı ve TNF-α, IFN-γ ve IL-6 düzeyleri serum azalmış. iNKT hücrelerinin benimseyen immünoterapi bağışıklık hücrelerinin dengesini geri ve vücudun aşırı iltihabı düzeltti.
Giriş
Romatoid artrit (RA) kronik, progresif invazivlik ile karakterize otoimmün bir hastalıktır 0.5-1% insidansı1,2. Altta yatan patogenez, CD4+IFN-γ+ ve CD4+IL-17A+ T hücrelerinin oranında ki artış ve CD4 + IL-4+ve CD4 +CD25+FoxP3+ T hücrelerinin azalması ile kendini gösteren otoreaktif CD4+ ve CD8+ T hücrelerinin anormal çoğalmasına bağlanır. Bu nedenle, inflamatuar sitokinlerin salgıları artar, ve aşırı inflamatuar reaksiyon vücudun bağışıklık sisteminin doğal denge ve tolerans fonksiyonu yok.....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm deneysel fareler (toplam 150) sağlıklı erkek DBA/1 fareler, 6-8 haftalık (20.0 ± 1.5 g), belirli bir patojen içermeyen (SPF) ortamda yetiştirilen edildi. Modellemeden önce özel bir işlem yoktur. Deney sağlıklı bir kontrol grubu (15 fare), bir model kontrol grubu (15 fare) ve bir hücre terapi grubuna (55 fare) ayrılmıştır. Bu çalışma Hebei Üniversitesi Hayvan Refahı ve Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır.
1. Hastalık Modelinin Oluşturulması
- RA hayvan modelinin çoğaltılmı
- HG6PI 325-339 ve hG6PI 469-483 parçalarının 1,75 mg'ını tartın ve 4 °C üçlü distile suyun 5,25 mL'sinde çözün.
- Freund'un adjuvan (CFA) ha....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Modelleme sonrası artrit indeks skoru ve pençe kalınlığı artmıştır. Kontrol grubu ile karşılaştırıldığında, RA model grubunun ayak başları modellemeden 6 gün sonra, kademeli şiddetlenme ile kırmızı şişlik göstermeye başladı. 14 gün sonra, ayak bileği ekleminde kırmızı şişlik doruğa ulaştı, ardından kademeli rahatlama. Pençenin kalınlığı benzer şekilde değişmiştir (P < 0.05) (Şekil 1).
Modelleme sonrası inflamatuar hücre infiltrasyonu önemli ölçüde artm.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
iNKT hücreleri doğuştan gelen ve adaptif bağışıklığı kapatan özel T hücreleridir ve esas olarak CD4++/CD8+ timositlerden geliştirilmiştir. iNKT hücreleri farklı immündüzenleyici fonksiyonlara sahiptir ve farklı sitokinlerin doğrudan temas ve salgılanması ile diğer bağışıklık hücreleri ile etkileşim23, dendritik hücreleri etkileyen (DC), makrofajlar, nötrofiller, B hücreleri, T hücreleri, ve NK hücre farklılaşması ve gelişimi 24<.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar hiçbir finansman veya çıkar çatışması beyan.
Teşekkürler
Çalışmamız Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (NSFC) (81771755), Kolejler ve Hebei eyaleti (ZD2017009) kolejleri ve üniversitenin bilim ve teknoloji anahtar araştırma projesi ve Hebei Üniversitesi Hayvan Laboratuvarı Tıbbi Deney Merkezi tarafından desteklenmiştir. Desteklerinden dolayı minnettarız.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Alexa Fluor 647 Fare Anti-PLZF | BD | 563490 | Amerika |
| Anti-PE Mikro Boncuklar | Miltenyi | 130-048-801 | Almanya |
| Sütunları | Miltenyi | MS | Almanya |
| Kriyojenik Santrifüj | Beckman | Allegra® X-15R | Amerika |
| DiR | Thermo Fisher Scientific | D12731 | Amerika |
| Gömme Merkezi | Tianjin Havacılık Elektromekanik Co., Ltd. | BMJ-1 | Çin |
| FITC, Hamster, Anti-Fare, TCR ve beta; Zincir | BD | 553170 | Amerika |
| Akış sitometresi | BD | Accuri C6 | Amerika |
| Freund'un tam adjuvanı | Sigma | F5881 | Amerika |
| hGPI325-339 (IWYINCFGCETHAML) | Karebay Biochem | 18062202 | Çin |
| hGPI469-483 (EGNRPTNSIVFTKLT) | Karebay Biochem | 18062203 | Çin |
| In Vivo Görüntüleme Sistemi | PerkinElmer | kumpas IVIS lumina II | Amerika |
| İyonomisin Kalsiyum | Cayman | 10004974 | Amerika |
| KRN7000 | AdipoGen | AG-CN2-0013 | Amerika |
| Fare CD1d Tetramer-PE | MBL | TS-MCD-1 | Japonya |
| Fare percoll | Solarbio | P8620 | Çin |
| Optik Mikroskop | Olympus | Olympus-II | Japonya |
| PerCP-CyTM5.5 Fare anti-ROR-ϒ t | BD | 562683 | Amerika |
| PerCP-CyTM5.5 Fare anti-T-bet | BD | 561316 | Amerika |
| Boğmaca toksini | Sigma | P7208 | Amerika |
| forbol esterleri | Cayman | 10008014 | Amerika |
| Kırmızı Kan Hücresi Lizis Tamponu | BD | 555899 | Amerika |
| RPMI-1640 | Biyolojik Endüstriler | 01-100-1ACS | İsrail |
| Th1 / Th2 / Th17 sitokin kiti | BD | 560485 | Amerika |
| Ultramikrotom | Leica Leica | EM UC6 | Almanya |
Kaynaklar
- Tobón, G. J., Youinou, P., Saraux, A. The environment, geo-epidemiology, and autoimmune disease: Rheumatoid arthritis. Autoimmunity Reviews. 35 (1), 0-14 (2010).
- Cross, M., et al. The global burde....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
