Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

İnflamasyon duyarlıgeç Preterm Hipoksik-iskemik Beyin Hasarı Bir Gelincik Modeli

7K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/60131

⸱

19 Kasım 2019

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 

Bu makalede

Özet

Yöntem, p17 gelincik iltihabı duyarlı hipoksik-iskemik ve hiperoksik beyin hasarı uzun süreli inflamasyon ve oksidatif beyin hasarı geç preterm bebeklerin bir dizi deneyimli arasındaki karmaşık etkileşimi modellemek için açıklar.

Özet

Prematüritenin nörolojik sekeli olan bebeklerde terapötik müdahalelerin test edilebilen perinatal enfeksiyon ve hipoksi-iskemi (HI) klinik olarak ilgili modellere ihtiyaç vardır. Gelincikler erken insan beynini modellemek için ideal adaylardır, çünkü lissensefalik olarak doğarlar ve doğum sonrası jirensefalik beyinler geliştirirler. Doğumda gelincik beyin gelişimi 13 haftalık insan fetüsine benzer, doğum sonrası gün (P) 17 kitleri 32-36 haftalık gebelikte bir bebeğe eşdeğer olduğu kabul edilir. Biz P17 gelincik bir yaralanma modeli tarif, lipopolisakkarit uygulaması ikili serebral iskemi takip nerede, hipoksi, ve hiperoksi. Bu uzun süreli inflamasyon karmaşık etkileşimi simüle, iskemi, hipoksi, ve oksidatif stres beyin hasarı geliştirmek neonates bir dizi deneyimli. Yaralı hayvanlar, birden fazla kortikal jirik ve ilişkili sulci daralma da dahil olmak üzere beyinde morfolojik değişiklikler ile, brüt yaralanma şiddeti bir dizi görüntüler. Yaralı hayvanlar da otomatik bir podyumda yavaş refleks gelişimi, yavaş ve daha değişken hareket hızı göstermek ve açık bir alanda keşif azalmış. Bu model, inflamasyon ve HI ile ilişkili neonatal ensefalopatisi olan bebekler için putatif tedavileri test etmek, kortikal gelişimi etkileyen yaralanma mekanizmaları çalışma ve esneklik sağlayan yolları araştırmak için bir platform sağlar etkilenmemiş hayvanlar.

Giriş

Bebekleriçin terapötik müdahalelerin test edilebildiği prematürite ve perinatal hipoksi-iskemi patofizyolojisini yansıtan büyük hayvan modellerine ihtiyaç vardır. 2017 yılında, ABD'de doğan 382.726 bebeğin %9.93'ü preterm, bu bebeklerin %84'ü ise 32-36 haftalık gebelik1. Prematüre bebeklerde, viral veya bakteriyel patojenlere bağlı maternal immün aktivasyonun erken doğumu başlatabildiği, enfeksiyon veya inflamasyona perinatal maruziyet yaygındır. Postnatal olarak, preterm bebekler erken veya geç başlangıçlı sepsis yüksek risk altındadır2. Preterm bebekler de sık sık hipoksi dönemleri deneyim, hipotansiyon, ve hiperoksi o....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Prosedürler, NIH Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Rehberi'ne uygun olarak ve Washington Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmış bir protokol kapsamında gerçekleştirilmiştir.

1. Hazırlık ve LPS İdaresi

NOT: Yordamların zaman çizelgesi için Şekil 1'e bakın.

  1. İşleme başlamadan önce tüm cerrahi aletleri ve cerrahi perdeleri mühürleyin, sterilize edin ve otoklavlandırın. Steril şişelerde ameliyat öncesi ilaçlar hazırlayın. Hipoksi/hiperoksi haznedeki havayı 8-10 dakika içinde deneysel gazla değiştirmek için gerek....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

34 (n = 18 erkek, n = 16 dişi) hayvan altı çöpten hakarete maruz kalan, sekiz hayvan ($; n = 4 erkek, n = 4 kadın) yaralı grupta ikinci hipoksi döneminde (n = 5), sıcaklık yönetimi sırasında (n = 2) veya bir gece boyunca hakaretten sonra (n = 1). Yaralı grupta, 26 kurtulandan dokuzu (5) görünür brüt yaralanma vardı. Beş hayvan (n = 5 erkek) orta derecede yaralanmış, dört hayvan (n = 2 erkek, n = 2 dişi) sırasıyla brüt patoloji skorları olarak tanımlanan ağır yaralanmalara sahipti (Şekil 2

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Gelincik beyni ve insan beyni arasında paylaşılan fiziksel ve gelişimsel benzerlikler nedeniyle, gelincik giderek hem yetişkin hem de gelişimsel beyin hasarı modellemek için kullanılmaktadır. 8,9,10,11,12. Ancak, bugüne kadar yapılan araştırmalar gelincik beyninin hem ilk yaralanmaya hem de yüksek plastiklere karşı dirençli olduğunu ve davranış açıklarının gör.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Teşekkürler

Modelin geliştirilmesi Bill ve Melinda Gates Vakfı yanı sıra NIH hibe 5R21NS093154-02 (NICHD) tarafından finanse edildi.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
%80 OksijenPraxair
%9 OksijenPraxair
Emici tezgah üstü koruyucuKimtech7546
Otomatik podyumNoldus
Betadine cerrahi önlük
BupivacainePatterson Veteriner07-888-9382
Buprenorfin
KaliperleriSRA Ölçüm ÜrünleriME-CAL-FP-200200 mm aralığında, 0,01 mm çözünürlükte
Pamuk Gazlı Bez SüngerFisher Scientific22028556
Kavisli ince kanama durdurucuRobozRS-7101
Kavisli forsepsWorld Precision Instruments501215
Kavisli dikiş atma kanama durdurucuRobozRS-7111
Ethovision izleme yazılımıNoldus
Göz KayganlaştırıcıRugbyNDC 0536-1970-72
Gelincikler (Mustela putorius furo)Marshall BiosciencesOutbred (belirli bir suş yok)
FormalinFisher ScientificSF100-4%10 (Fosfat Tamponu/Sertifikalı)
Saç Kesme MakineleriConairGMT175N
İnsülin ŞırıngalarıBD3294610.3 cc 3 mm 31 G
İzofluranPiramal66794-017-25
LidokainPatterson Veteriner07-808-8202
LPSListesi BiyolojikLPS Ultra Saf # 423
Oksijen sensörüBW Gaz UyarısıGAXT-X-DL-2
Pentobarbital
Plastik hazneTellfresh196010 L; 373 x 270 x 135 mm 3< / sup>
Tuzlu Çözelti, %0,9HospiraRL-4492
Neşter bıçağıIntegra Miltex297
Neşter sapıWorld Precision Instruments500236#3, 13 cm
Steril sütürİnce Bilim Araçları18020-50Örgülü İpek, 5/0
Cerrahi klips aplikatörüGüzel Bilim Araçları12020-09
Cerrahi klips sökücüGüzel Bilim Araçları12023-00
Cerrahi örtülerMedline UnidrapeVET3000
Cerrahi eldivenlerAnsell Perry Inc5785004
Cerrahi klipslerGüzel Bilim Araçları12022-09
Termometre (rektal)YSIHassas 4000A
Termometre (su)Fisher Scientific14-648-26
Göbek bandıGrafco3031Steril
Su banyosuThermo ScientificTSCOL19 19 L

Kaynaklar

  1. Martin, J. A., Hamilton, B. E., Osterman, M. J. K., Driscoll, A. K., Drake, P. Births: Final Data for 2017. National Vital Statistics Report. 67 (8), 1-49 (2018).
  2. Vanhaesebrouck, P., et al. The EPIBEL study: outcomes to discharge from hospital for extremely preterm....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Daha fazla makale keşfet

implantation Ferret Beyin YaralanmasıHipoksik İskemik YaralanmaLPS UygulamasıKarotis Arter LigasyonuHipoksi Hiperoksi ProtokolüBeyin Ölçüm ProsedürüRefleks Testi AnaliziCatWalk Lokomosyon DeğerlendirmesiAçık Alan DavranışıKortikal Girus Daralması