Roundworm Caenorhabditis elegans belirli neuron nüfus yalıtım

Edward  M. Germany; Nataliya Zahayko; Oleh Khalimonchuk

doi:10.3791/60145

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Roundworm Caenorhabditis elegans belirli neuron nüfus yalıtım

6.2K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/60145

⸱

6 Ağustos 2019

Edward M. Germany¹ , Nataliya Zahayko¹ , Oleh Khalimonchuk¹^,²^,³^,⁴

¹Department of Biochemistry, University of Nebraska, ²Nebraska Redox Biology Center, University of Nebraska, ³Nebraska Center for Integrated Biomolecular Communication, University of Nebraska, ⁴Fred & Pamela Buffett Cancer Center, University of Nebraska Medical Center

Bu makalede

Özet

Burada, biz transgenik Caenorhabditis elegans hatları yeşil floresan protein ifade canlı nöronal hücrelerin belirli grupların basit yalıtım için bir protokol sunuyoruz. Bu yöntem, belirli nöronlara odaklanan ex vivo çalışmaların çeşitli sağlar ve daha kısa vadeli kültür için hücreleri yalıtmak için kapasitesine sahiptir.

Özet

Yaşlanma sürecinde, birçok hücre, birçok geriatrik ve patolojik koşula karşı gelen hücresel fonksiyon bozukluğu olan yüksek hasar düzeylerini birikir. Post-mitotik nöronlar yaşlanma tarafından etkilenen büyük bir hücre türünü temsil eder. Nöronal yaşlanma birden fazla memeliyen modelleri var olsa da, onlar zorlu ve kurmak için pahalıdır. Yuvarlak kurt Caenorhabditis elegans nöronal yaşlanma çalışması için güçlü bir modeldir, bu hayvanların kısa ömürlü olduğu gibi, mevcut sağlam genetik araç, ve iyi kataloglanmış sinir sistemi. Burada sunulan yöntem, transjenik yeşil floresan proteinin (GFP) ifadesine dayalı olarak belirli hücrelerin kesintisiz yalıtımına olanak sağlar. Farklı altında Gfp ifade transgenik hayvan hatları, hücre tipine özgü promotörler dış manikür kaldırmak için sindirilmiş ve hafifçe mekanik çeşitli hücre türleri içeren bulamaç üretmek için kesintiye uğrattı. Daha sonra ilgi hücreleri floresans aktif hücre sıralama yoluyla hedef olmayan hücrelerden ayrılır, veya anti-GFP-bağlantılı manyetik boncuklar tarafından. Yalıtılmış hücreler daha sonra sınırlı bir süre için kültürlü olabilir veya hemen gerçek zamanlı nicel PCR tarafından transkripsiyon analizi gibi hücreye özgü ex vivo analizler için kullanılır. Böylece, bu protokol C. elegansfarklı nöronal nüfus içinde hücreye özgü tepkiler hızlı ve sağlam analizi için izin verir.

Giriş

Geçtiğimiz birkaç yıl içinde, Metazoan model organizma Caenorhabditis elegans nöronlar, nöronal devre ve fizyolojik ve davranışsal tepkiler rol ve yaşlanma ilişkili nörodejeneratif çalışmada muazzam bir varlık olmuştur Hastalık. C. elegans benzersiz bir özelliği hayvanların şeffaf olduğunu, tüm yetişkin somatik hücrelerin soy için izin eşleştirilir¹. C. elegans da sinir sisteminin Morfoloji ve bağlantı yol açan nöronların yönetilebilir miktar liman iyi²anlaşılabilir. Sabit hücre soyluğu, kısa ömrü ve C. elegans için mevcut yüksek verimlilik genetik araçların bolluk farklı nöronal nüfus....