Yöntem makalesi

El-Tozlaşma, Mikroskopi ve Genetik Analizleri Birleştiren Kayısıda Öz ve İnter-(in)Uyumluluk İlişkilerinin Belirlenmesi

DOI:

10.3791/60241

⸱

16 Haziran 2020

 ,  ,  , 
1Unidad de Hortofruticultura, Centro de Investigación y Tecnología Agroalimentaria de Aragón (CITA), 2Instituto Agroalimentario de Aragón - IA2 (CITA-Universidad de Zaragoza), 3Instituto de Hortofruticultura Subtropical y Mediterránea La Mayora (IHSM La Mayora-UMA-CSIC)

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Flüoresan mikroskopi ile öz-genotiyon un belirlenmesini birleştiren kayısı(Prunus armeniaca L.) çeşitlerinin tozlaşma gereksinimlerini niçin pcr analizi ile s-genotipinin tanımlanması ile biraraya getiren bir metodoloji salıyoruz.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Rosaceae'de kendi kendine uyumsuzluk, esas olarak multiallelik lokus S tarafından kontrol edilen Gametofitik Kendi Kendine Uyumsuzluk Sistemi (GSI) tarafından belirlenir. Kayısıda, önemli sayıda yeni çeşidinin serbest bırakılması bilinmeyen tozlaşma gereksinimlerine sahip çeşitlerin artmasına yol açtığı ndan, öz ve inter-(in) uyumluluk ilişkilerinin belirlenmesi giderek daha önemlidir. Burada, el-polenler ve mikroskopi ile öz-(in)uyumluluğunun belirlenmesini PCR analizi ile S-genotipinin tanımlanması ile birleştiren bir metodolojiyi açıklıyoruz. Uyumluluk tespiti için, her bir çeşitten balon aşamasında çiçekler toplanmış, laboratuvarda elle tozlaşmış, sabit lenmiş ve floresan mikroskopisi altında polen tüpü davranışlarının gözlemi için anilin mavisi ile boyanmıştır. Çeşitleri arasında uyumsuzluk ilişkilerinin kurulması için, her çeşitdna genç yapraklarından elde edildi ve S-alel PCR tarafından tespit edildi. Bu yaklaşım, yeni meyve bahçeleri tasarımında uygun tozlaştırıcıları seçmek ve Üreme programlarında uygun ebeveynleri seçmek için değerli bilgiler sağlayan çeşitler arasındaki uyumsuzluk ilişkilerini açıklığa kavuşturmaya ve uyumsuzluk ilişkileri ortaya çıkarmasına olanak sağlar.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kendi kendine uyumsuzluk kendi kendine tozlaşma önlemek ve1outcrossing teşvik çiçekli bitkilerin bir stratejidir. Rosaceae'de bu mekanizma, esas olarak multiallelic locus S2tarafından kontrol edilen Gametofitik Kendi Kendine Uyumsuzluk Sistemi (GSI) tarafından belirlenir. Tarzında, RNase geni S-stylar determinant kodlar, bir RNase3, Bir F-box protein, S-polenbelirleyici belirler, SFB gen4tarafından kodlanmış iken . Kendi kendine uyumsuzluk etkileşimi ovule döllenme engelleyen tarzı boyunca polen tüpü büyüme inhibisyonu yoluyla gerçekleşir5,6.

Kayısı, bir varietal yenileme son yirmi yılda dünya çapında yer almıştır7,8. Yeni çeşitlerin önemli bir sayı bu giriş, farklı kamu ve özel üreme programlarından, bilinmeyen tozlaşma gereksinimleri ile kayısı çeşitlerinin artmasına neden olmuştur8.

Kayısıda tozlaşma gereksinimlerini belirlemek için farklı metodolojiler kullanılmıştır. Alanında, kendini-(in)uyumluluk kafesli ağaçlarda veya hadım edilmiş çiçeklerde kontrollü pollinations tarafından kurulmuş ve daha sonra meyve seti yüzdesi kayıt9,10,11,12. Buna ek olarak, kontrollü pollinations çiçek yarı-in vivo kültür ve floresan mikroskopi8altında polen tüp davranış analizi tarafından laboratuvarda yapılmıştır 8,13,14,15,16,17. Son zamanlarda, pcr analizi ve dizileme gibi moleküler teknikler, RNase ve SFB genlerinin çalışmasına dayalı uyumsuzluk ilişkilerinkarakterizasyonu izin var18,19. Kayısıda, otuz üç S-alel bildirilmiştir (S1 - S20, S22 - S30, S52, S53, Sv, Sx), kendi kendine uyumluluk ile ilgili bir alel dahil (Sc)12,18,20,21,22,23,24. Şimdiye kadar, 26 uyumsuzluk grupları S-genotip8,9,17,,25,26,27göre bu tür bıçaklanmış edilmiştir. Aynı Salellerine sahip çeşitleri birbirine uyumsuz, en az bir farklı S-alel ile ve dolayısıyla farklı uyumsuz gruplara ayrılan çeşitleri birbirine uyumludur.

Kayısı çeşitlerinin tozlaşma gereksinimlerini tanımlamak için, flüoresan mikroskobu ile öz-(in)uyumluluk tayinini, kayısı çeşitlerinde PCR analizi ile S-genotipinin tanımlanması ile birleştiren bir metodoloji yi tanımlıyoruz. Bu yaklaşım uyumsuzluk gruplarının oluşturulmasına ve tarikatlar arasındaki uyumsuzluk ilişkilerinin açıklığa kavuşturulmasına olanak sağlar.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Kendi kendine uyumluluk tayini

  1. Alandaki çiçekleri tadına var. İstenmeyen önceki tozlaşmayıFigure 1Aönlemek için, kayısı28için BBCH ölçeğinde 58.
  2. Laboratuvarda kendi kendine ve çapraz tozlaşmalara
    1. Balon aşamasında çiçek anthers çıkarın ve laboratuvar sıcaklığında kuruması için bir kağıt parçası üzerine yerleştirin.
    2. 24 saat sonra polen tanelerini ince bir örgü (0,26 mm)(Şekil 1B)kullanarak elek.
    3. Her kendi kendine tozlaşma ve çapraz tozlaşma için aynı balon aşamasında 30 çiçekten oluşan bir grubu hadım edin ve pistilleri laboratuvar sıcaklığında sudaki çiçekçi köpüğüne yerleştirin(Şekil 1C).
    4. El emasculation sonra aynı çati 24 saat çiçekpolen ile bir boya fırçası yardımıyla pistils tozlaşma. Buna ek olarak, kontrol olarak uyumlu bir tozlaştırıcı çiçeklerinden polen ile her çeşit pistils başka bir dizi tozlaşma (Şekil 1D).
    5. 72 saat sonra, etanol/asetik asit (3:1) fiksatif çözeltisi içinde, 4 °C29'daen az 24 saat boyunca pistilleri düzeltin. Daha sonra fiksatif atın ve örneklertamamen çözelti içinde batırılmış olduğundan emin% 75 etanol ekleyin. Numuneler bu çözeltide 4 °C'de8,17,30,,31,32kullanıma kadar saklanabilir.
  3. İn vitro polen çimlenmesi ile polen canlılığının değerlendirilmesi
    1. Çimlenme ortamını hazırlamak için, ağırlık 25 g sakaroz, 0.075 g borik asit (H3BO3)ve 0.075 g kalsiyum nitrat (Ca(NO3)2)33.
    2. 250 mL distile su içinde orta bileşenleri ekleyin ve tamamen çözünür.
    3. 2 g agarose ekleyerek ortamı katılatın ve girdap ile karıştırın.
    4. Bir pH metre kullanarak ortamın pH'ını kontrol edin ve NaOH veya HCl çözeltisi ile değeri 7.0 olarak ayarlayın.
    5. Otoklav karışımı orta sterilize etmek.
    6. Otoklavlama sonra, orta soğutun ve steril bir laminar akış başlık Petri yemekleri içine dağıtmak.
    7. Katılaşmış polen çimlenme ortamında kontrollü polenler için kullanılan aynı çeşitlerin polen tanelerini dağıtır ve 24 saat6'dansonra mikroskop altında gözlemleyin.
      NOT: Laminar akış başlığını sterilize etmek için yüzeyi %70 etanol ile temizleyin ve 10 dakika boyunca UV lambasını açın.
    8. Petri yemeklerini kullanıma kadar 4 °C'de buzdolabında saklayın.
  4. Mikroskopi gözlemleri
    1. Pistilleri 1 saat boyunca distile suyla üç kez yıkayın ve 4 °C'de %5 sodyum sülfit bırakın. 24 saat sonra, 1 kg/cm2 sodyum sülfit 10 dakika boyunca dokuları yumuşatmak için onları otoklav34.
    2. Bir cam slayt üzerinde otoklavlı pistils yerleştirin ve, bir neşter yardımıyla, polen tüpleri daha iyi bir görselleştirme elde etmek için yumurtalık etrafında trichomes kaldırın. Daha sonra pistibir camla ezin.
    3. %0.1 (v/v) anilin mavisi lekesini hazırlayın: 0,1 mL'lik anilin mavisinin 0,1 mL'lik 0,1 N potasyum fosfat tribasic karışımını (K3PO4). Polen tüpü büyümesi sırasında kalkoz depozisyonlarını lekelemek için preparatların üzerine bir damla aniline mavisi uygulayın.
    4. 340-380 bandpass ve 425 longpass filtreleri kullanarak UV epifloresans ile bir mikroskop ile tarzı boyunca polen tüpleri gözlemleyin.

2. DNA çıkarma

  1. Örnek 2-3 ilkbaharda alanda yaprakları. Elde edilen DNA eski yapraklara göre fenolik bileşiklerin daha yüksek kalite ve daha düşük seviyelerde olduğundan, genç evrelerde yaprakların örnekalınması tavsiye edilir.
  2. Ticari olarak kullanılabilen bir kitte açıklanan adımları izleyerek Genomik DNA ayıklayın (Bkz. Malzeme Tablosu).
  3. UV-vis spektrofotometre (260 nm) kullanarak DNA konsantrasyonlarının miktarını ve kalitesini analiz edin.

3. S-alel tanımlama

  1. PCR Reaksiyonlarının Ayarlanması
    1. Her DNA çıkarma örneğinin distile suyunda 50 ng/μL seyreltme hazırlayın.
    2. PCR reaktiflerini yavaşça eritin ve buzda tutun. DNA polimeraz'ı ihtiyaç duyulana kadar dondurucuda bırakın.
    3. Astarların farklı kombinasyonlarını kullanarak amplifikasyon reaksiyonlarını hazırlayın. Tablo 1'dekibileşenleri birleştirerek PCR reaksiyon karışımıoluşturun. Vortex PCR reaksiyonu iyi karıştırın ve PCR plaka her kuyuya astar farklı kombinasyonları için belirtilen hacmi dağıtmak. Daha sonra, her kuyuda 1 μL DNA seyreltme ekleyin.
    4. PCR plakasını termocycler'a yerleştirin ve Tablo 1'degösterilen ilgili PCR programını çalıştırın.
  2. Güçlendirilmiş parçaları analiz edin. PCR amplifiye parçaları analiz etmek için başlıca iki farklı yolu vardır: kapiller elektroforezi (CE) floresan etiketli astarlar ile veya etiketli olmayan astar ile agarose jel elektroforez amfisi görselleştirmek gibi.
    1. Kılcal Elektroforez
      1. Yükleme tamponu hazırlamak için 35 μL deiyonize formamid'i 0,45 μL etiketli boyutlandırma standardı ile karıştırın. Girdap reaktif iyi karıştırmak ve daha sonra okuyucu plaka kuyusuna 35,5 μL dağıtmak.
      2. Kuyuya 1 μL PCR ürün ekleyin. Buna ek olarak, su buharlaşmasını önlemek için mineral yağ bir damla ekleyin.
      3. Ayırma plakasını ayırma tamponu ekleyerek hazırlayın.
      4. Gen analizörüyle birlikte verilen ticari yazılımı kullanın (bkz. Malzemeler Tablosu). Yeni bir örnek plaka oluşturun ve örnek adları plakadaki tüm kuyulara kaydedin.
      5. Çözümleme yöntemini seçin. Bu durumda, numuneleri 120 s için 90 °C'de denatüre, 30 s için 2,0 kV enjekte edin ve 35 dk için 6,0 kV'da ayırın.
      6. İki plakayı gen analizörüne yerleştirin. Kılcal damar dizisini distile suyla doldurun.
      7. Patentli lineer poliakrilamid (LPA) jeli yükleyin. Son olarak, Çalıştır'ıtıklatın.
    2. Jel Elektroforez
      1. 150 mL'lik 1x TAE (Tris-asetat-EDTA) elektroforezinde 150 mL'lik moleküler biyoloji sınıfı agarose 1.5 g ekleyerek %1 agarose jel (40 mM Tris, 20 mM asetik asit ve pH 8.0'da 1 mM EDTA) hazırlayın. 2-3 dk mikrodalga ısıtma ile agarose çözünür.
      2. DNA'yı görselleştirmek için, bir nükleik asit lekesi 4 μL ekleyin (Bkz. Malzemeler Tablosu) ve hafifçe karıştırın.
      3. Bir jel tepsiiçine, merdivenler, kontroller ve numuneler için yeterli kuyular ile bir jel tarak ekleyin. Sonra, jel tepsinin ortasına yavaş yavaş karışımı dökün ve kabarcıklar kaçının.
      4. Jel tamamen katılaşmış kadar oda sıcaklığında 30-45 dakika boyunca jel soğumasını bekleyin. Elektroforez odasında jel tanıtın, jel tarak çıkarın ve jel kapsayacak kadar 1x TAE tampon ile oda doldurun.
        NOT: Jelin yerleşimini kontrol edin. Negatif yüklü DNA katota doğru göç ettiği için kuyular negatif kutbuna yakın yerleştirilmelidir.
      5. PCR ürünlerine 5 μL yükleme tamponu (%0,1 (v/v) bromofenol mavisi ekleyin ve iyice karıştırın.
      6. Bantların boyutunu tahmin etmek için 5 μL DNA moleküler ağırlık merdiveni yükleyin (bkz. Malzeme Tablosu).
      7. Numuneleri jelin ek kuyularına yükleyin.
      8. Tüm numuneler ve DNA moleküler ağırlık merdiveni yüklendikten sonra jeli 90 V'de 1-1,5 saat çalıştırın, ta ki mavi boya hattı jelin uzunluğunun yaklaşık %75'ine kadar.
      9. Nükleik asitler için bir transilluminator bantları görselleştirin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kayısıda tozlaşma çalışmaları, antezten bir gün önce geç balon evresinde çiçek kullanılmasını gerektirir (Şekil 1A). Çiçek yapıları neredeyse olgun olduğundan bu aşama hem polen hem de pistil koleksiyon için en uygun evre olarak kabul edilir, ancak anher ayrılması henüz gerçekleşmemiştir. Kapalı yaprakları dış polen taşıyan böceklerin gelişini engellediği için, bu sadece aynı çiçekten değil, diğer çiçeklerden de istenmeyen polenlerin karışmasını önler. Polen taneleri, daha ö...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Geleneksel olarak, en ticari kayısı Avrupa çeşitleri kendi kendine uyumlu36edildi. Bununla birlikte, son yıllarda üreme programlarında ebeveyn olarak Kuzey Amerika kendini uyumsuz çeşitlerin kullanımı bilinmeyen tozlaşma gereksinimleri7ile yeni kendini uyumsuz çeşitlerin artan sayıda serbest bırakılması ile sonuçlandı7 ,8,37. Bu nedenle kayısı çeşitlerinde öz ve inter-(in) uyumluluk ilişkilerinin belirlen...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu araştırma Ministerio de Ciencia, Innovación y Universidades-European Development Fund, Avrupa Birliği (AGL2016-77267-R ve AGL2015-74071-JIN) tarafından finanse edilmiştir; Instituto Nacional de Investigación y Tecnología Agraria y Alimentaria (RFP2015-00015-00, RTA2017-00003-00); Gobierno de Aragón-Avrupa Sosyal Fonu, Avrupa Birliği (Grupo Consolidado A12_17R), Fundación Biodiversidad ve Agroseguro S.A.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Agarose D1 Düşük EEOConda8010.22
BIOTAQ DNA Polimeraz kitiBiolineBIO-21060
Parlak alan mikroskobuLeica MicrosystemsDM2500
CEQ Sistem YazılımıBeckman Coulter
DNeasy Plant Mini KitQIAGEN69106
dNTP Seti, 4 x 25 ve mikro; molBiolineBIO-39025
GenomeLab DNA Boyutu Standart Kiti - 400Beckman Coulter608098
Ayırma TamponuBeckman Coulter608012
GenomeLab Ayırma Jeli LPA-1Beckman Coulter391438
100bpBiolineBIO-33029
HyperLadder 1kbBiolineBIO-33025
Görüntü Analiz SistemiLeica Microsystems
Moleküler Görüntüleyici VersaDoc MP 4000 sistemi Bio-Rad170-8640
NanoDrop Bir SpektrofotometreThermo Fisher Scientific13-400-518
pH-Metre BASIC 20Crison
Phusion  Yüksek Kaliteli PCR KitiThermo Fisher ScientificF553S
Güç Paketi P 25 TBiometra
Primer İleriİzojen Yaşam Bilimleri
Astarı Tersİzojen Yaşam Bilimleri
Miktar Bir YazılımBio-Rad
Stereoskopik mikroskopLeica MicrosystemsMZ-16
Alt Hücre GTBio-Rad
SYBR Güvenli DNA Jel LekeThermo Fisher ScientificS33102
T100 Termal DöngüleyiciBio-Rad1861096
Taq DNA PolimerazQIAGEN201203
Dikey Stand OtoklavJP Selecta
GenomeLab GeXP Genetik Analiz Sistemi Beckman Coulter GenomeLab HyperLadder

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Silva, N. F., Goring, D. R. Mechanisms of self-incompatibility in flowering plants. Cellular and Molecular Life Sciences. 58, 1988-2007 (2001).
  2. Charlesworth, D., Vekemans, X., Castric, V., Glémin, S. Plant self-incompatibility systems: A molecular evolutionary perspective. New phytologist. 168, 61-69 (2005).
  3. Tao, R., et al. Identification of stylar RNases associated with gametophytic self-incompatibility in almond (Prunus dulcis). Plant and Cell Physiology. 38, 304-311 (1997).
  4. Ushijima, K., et al. Structural and transcriptional analysis of the self-incompatibility locus of almond: Identification of a pollen-expressed F-box gene with haplotype-specific polymorphism. The Plant cell. 15, 771-781 (2003).
  5. Bedinger, P. A., Broz, A. K., Tovar-Mendez, A., McClure, B. Pollen-Pistil Interactions and Their Role in Mate Selection. Plant Physiology. 173, 79-90 (2017).
  6. Guerra, M. E., Rodrigo, J. Japanese plum pollination: A review. Scientia Horticulturae. 197, 674-686 (2015).
  7. Zhebentyayeva, T., Ledbetter, C., Burgos, L., Llacer, G. Apricot. Fruit Breeding. Badenes, M. L., Byrne, D. , Springer. Boston, MA. 415-458 (2012).
  8. Herrera, S., Lora, J., Hormaza, J. I., Herrero, M., Rodrigo, J. Optimizing Production in the New Generation of Apricot Cultivars: Self-incompatibility, S-RNase Allele Identification, and Incompatibility Group Assignment. Frontiers in Plant Science. 9, 527(2018).
  9. Egea, J., Burgos, L. Detecting Cross-incompatibility of Three North American Apricot Cultivars and Establishing the First Incompatibility Group in Apricot. Journal of the American Society for Horticultural Science. 121, 1002-1005 (1996).
  10. Rodrigo, J., Herrero, M. Effects of pre-blossom temperatures on flower development and fruit set in apricot. Scientia Horticulturae. 92, 125-135 (2002).
  11. Julian, C., Herrero, M., Rodrigo, J. Flower bud differentiation and development in fruiting and non-fruiting shoots in relation to fruit set in apricot (Prunus armeniaca). Trees. 24, 833-841 (2010).
  12. Muñoz-Sanz, J. V., Zuriaga, E., López, I., Badenes, M. L., Romero, C. Self-(in)compatibility in apricot germplasm is controlled by two major loci, S and M. BMC Plant Biology. 17, 82(2017).
  13. Burgos, L., Berenguer, T., Egea, J. Self- and Cross-compatibility among Apricot Cultivars. HortScience. 28, 148-150 (1993).
  14. Rodrigo, J., Herrero, M. Evaluation of pollination as the cause of erratic fruit set in apricot "Moniqui". Journal of Horticultural Science. 71, 801-805 (1996).
  15. Milatović, D., Nikolić, D., Krška, B. Testing of self-(in)compatibility in apricot cultivars from European breeding programmes. Horticultural Science. 40 (2), 65-71 (2013).
  16. Milatović, D., Nikolić, D., Fotirić-Aksić, M., Radović, A. Testing of self-(in)compatibility in apricot cultivars using fluorescence microscopy. Acta Scientiarum Polonorum, Hortorum Cultus. 12 (6), 103-113 (2013).
  17. Herrera, S., Rodrigo, J., Hormaza, J. I., Lora, J. Identification of Self-Incompatibility Alleles by Specific PCR Analysis and S-RNase Sequencing in Apricot. Int J Mol Sci. 19, 3612(2018).
  18. Romero, C., et al. Analysis of the S-locus structure in Prunus armeniaca L. Identification of S-haplotype specific S-RNase and F-box genes. Plant Molecular Biology. 56, 145-157 (2004).
  19. Halász, J., Pedryc, A., Hegedus, A. Origin and dissemination of the pollen-part mutated SC haplotype which confers self-compatibility in apricot (Prunus armeniaca). New Phytologist. 176, 792-803 (2007).
  20. Halász, J., Hegedus, A., Hermán, R., Stefanovits-Bányai, É, Pedryc, A. New self-incompatibility alleles in apricot (Prunus armeniaca L.) revealed by stylar ribonuclease assay and S-PCR analysis. Euphytica. 145, 57-66 (2005).
  21. Vilanova, S., Romero, C., Llacer, G., Badenes, M. L., Burgos, L. Identification of Self-(in)compatibility Alleles in Apricot by PCR and Sequence Analysis. Journal of the American Society for Horticultural Science. 130, 893-898 (2005).
  22. Feng, J., et al. Detection and transcript expression of S-RNase gene associated with self-incompatibility in apricot (Prunus armeniaca L.). Molecular Biology Reports. 33, 215-221 (2006).
  23. Zhang, L., et al. Identification of self-incompatibility (S-) genotypes of Chinese apricot cultivars. Euphytica. 160, 241-248 (2008).
  24. Wu, J., et al. Identification of S-haplotype-specific S-RNase and SFB alleles in native Chinese apricot (Prunus armeniaca L). Journal of Horticultural Science and Biotechnology. 84, 645-652 (2009).
  25. Szabó, Z., Nyéki, J. Blossoming, fructification and combination of apricot varieties. Acta Horticulturae. 293, 295-302 (1991).
  26. Halász, J., Pedryc, A., Ercisli, S., Yilmaz, K. U., Hegedűs, A. S-genotyping supports the genetic relationships between Turkish and Hungarian apricot germplasm. Journal of the American Society for Horticultural Science. 135, 410-417 (2010).
  27. Lachkar, A., et al. Identification of self-(in)compatibility S-alleles and new cross-incompatibility groups in Tunisian apricot (Prunus armeniaca L.) cultivars. The Journal of Horticultural Science and Biotechnology. 88, 497-501 (2013).
  28. Pérez-Pastor, A., Ruiz-Sánchez, M. C., Domingo, R., Torrecillas, A. Growth and phenological stages of Búlida apricot trees in South-East. Agronomie. 24, 93-100 (2004).
  29. Williams, J. H., Friedman, W. E., Arnold, M. L. Developmental selection within the angiosperm style: using gamete DNA to visualize interspecific pollen competition. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 96, 9201-9206 (1999).
  30. Julian, C., Herrero, M., Rodrigo, J. Anther meiosis time is related to winter cold temperatures in apricot (Prunus armeniaca L.). Environmental and Experimental Botany. 100, 20-25 (2014).
  31. Guerra, M. E., López-Corrales, M., Wünsch, A., Rodrigo, J. Lack of Fruit Set Caused by Ovule Degeneration in Japanese Plum. Journal of the American Society for Horticultural Science. 136 (6), 375-381 (2011).
  32. Guerra, M. E., Wünsch, A., López-Corrales, M., Rodrigo, J. Flower Emasculation as the Cause for Lack of Fruit Set in Japanese Plum Crosses. Journal of the American Society for Horticultural Science. 135 (6), 556-562 (2010).
  33. Hormaza, J. I., Pinney, K., Polito, V. S. Correlation in the tolerance to ozone between sporophytes and male gametophytes of several fruit and nut tree species (Rosaceae). Sexual Plant Reproduction. 9, 44-48 (1996).
  34. Alcaraz, M. L., Hormaza, J. I., Rodrigo, J. Pistil Starch Reserves at Anthesis Correlate with Final Flower Fate in Avocado (Persea americana). PLOS ONE. 8 (10), 78467(2013).
  35. Tao, R., et al. Molecular typing of S-alleles through Identification, Characterization and cDNA cloning for S-RNases in Sweet Cherry. Journal of the American Society for Horticultural Science. 124, 224-233 (1999).
  36. Burgos, L., et al. The self-compatibility trait of the main apricot cultivars and new selections from breeding programmes. Journal of Horticultural Science. 72, 147-154 (1997).
  37. Hormaza, J. I., Yamane, H., Rodrigo, J. Apricot. Genome Mapping and Molecular Breeding in Plants, Volume 4 Fruits and Nuts. Kole, C. , Springer. New York, NY. 171-187 (2007).
  38. Benmoussa, H., Ghrab, M., Ben Mimoun, M., Luedeling, E. Chilling and heat requirements for local and foreign almond (Prunus dulcis Mill.) cultivars in a warm Mediterranean location based on 30 years of phenology records. Agricultural and Forest Meteorology. 239, 34-46 (2017).
  39. Rodrigo, J., Herrero, M., Hormaza, J. I. Pistil traits and flower fate in apricot (Prunus armeniaca). Annals of Applied Biology. 154, 365-375 (2009).
  40. Williams, R. R. Techniques used in fruit-set experiments. Towards Regulated Cropping. Williams, R. R., Wilson, D. , Grower Books. London. 57-61 (1970).
  41. Sutherland, B. G., Robbins, T. P., Tobutt, K. R. Primers amplifying a range of Prunus S-alleles. Plant Breeding. 123, 582-584 (2004).
  42. Murray, M. G., Thompson, W. F. Rapid isolation of high molecular weight plant DNA. Nucleic Acids Research. 8, 4321-4325 (1980).
  43. Porebski, S., Bailey, L. G., Baum, B. R. Modification of a CTAB DNA Extraction Protocol for Plants Containing High Polysaccharide and Polyphenol Components. Plant Molecular Biology Reporter. 15 (1), 8-15 (1997).
  44. Rogers, S. O., Bendich, A. J. Extraction of DNA from milligram amounts of fresh, herbarium and mummified plant tissues. Plant Molecular Biology. 5 (2), 69-76 (1985).
  45. Hormaza, J. I. Molecular characterization and similarity relationships among apricot (Prunus armeniaca L.) genotypes using simple sequence repeats. Theoretical and Applied Genetics. 104, 321-328 (2002).
  46. Sonneveld, T., Tobutt, K. R., Robbins, T. P. Allele-specific PCR detection of sweet cherry self-incompatibility (S) alleles S1 to S16 using consensus and allele-specific primers. Theoretical and Applied Genetics. 107, 1059-1070 (2003).
  47. Hegedus, A., Lénárt, J., Halász, J. Sexual incompatibility in Rosaceae fruit tree species: molecular interactions and evolutionary dynamics. Biologia Plantarum. 56 (2), 201-209 (2012).
  48. Fernández i Martí, A., Gradziel, T. M., Socias i Company, R. Methylation of the Sf locus in almond is associated with S-RNase loss of function. Plant Molecular Biology. 86, 681-689 (2014).
  49. Company, R. S. i, Kodad, O., Martí, A. F. i, Alonso, J. M. Mutations conferring self-compatibility in Prunus species: From deletions and insertions to epigenetic alterations. Scientia Horticulturae. 192, 125-131 (2015).
  50. Boskovic, R., Tobutt, K. R. Correlation of stylar ribonuclease zymograms with incompatibility alleles in sweet cherry. Euphytica. 90, 245-250 (1996).
  51. Cachi, A. M., Wünsch, A. S-genotyping of sweet cherry varieties from Spain and S-locus diversity in Europe. Euphytica. 197 (2), 229-236 (2014).
  52. Zuriaga, E., et al. An S-locus Independent Pollen Factor Confers Self-Compatibility in "Katy" Apricot. PLoS ONE. 8 (1), 53947(2013).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Self IncompatibilityHand PollinationFluorescence MicroscopyPCR AnalysisS Allele IdentificationCapillary ElectrophoresisAniline Blue StainingPollen Tube GrowthIncompatibility GroupsApricot Cultivars

İlgili makaleler