Yöntem makalesi

Fare Beyninin Meynert'in Nükleus Bazalisinde Kolinerjik Lif Uzunluğunun Stereoolojik Tahmini

DOI:

10.3791/60405

⸱

5 Şubat 2020

 ,  , 
1Laboratory for Alzheimer's Disease and Aging Research, Kansas City Veterans Affairs Medical Center, 2Department of Neurology, University of Kansas Medical Center, 3Department of Molecular and Integrative Physiology, University of Kansas Medical Center, 4The University of Kansas Alzheimer's Disease Center

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bir beyin bölgesinin üç boyutlu yapısı içinde nöronal lif uzunluğu belirli nöronal yapısal bütünlüğü veya dejenerasyon ölçmek için güvenilir bir parametredir. Bu makalede, farelerde Meynert'in çekirdek bazalisi içindeki kolinerjik lif uzunluğunu ölçmek için stereoolojik bir niceliksel leştirme yöntemi örnek olarak açıklanır.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Çeşitli beyin bölgelerinde kolinerjik veya diğer nöronal aksonların uzunluğu genellikle bölgenin özel fonksiyonu ile ilişkilidir. Stereoloji çeşitli beyin yapılarının nöronal profillerini ölçmek için yararlı bir yöntemdir. Burada bazal ön beynin Meynert (NBM) çekirdeğindeki kolinerjik liflerin toplam uzunluğunu tahmin etmek için yazılım tabanlı stereoloji protokolü salıyoruz. Yöntem uzunluk tahminleri için bir uzay topu sondası kullanır. Kolinerjik lifler kolin asetiltransferaz tarafından görselleştirilmiştir (ChAT) horseradish peroksidaz-diaminobenzidin ile immünboyama (HRP-DAB) algılama sistemi. Boyama protokolü, stereoloji yazılımı kullanılarak çeşitli beyin bölgelerinde lif ve hücre sayısı tahmini için de geçerlidir. Stereoloji protokolü cholinoceptive lifler, dopaminerjik / katekolaminerik lifler, serotonerjik lifler, astrosit süreçleri, hatta vasküler profiller gibi herhangi bir lineer profillerin tahmini için kullanılabilir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Beyindeki sinir liflerinin uzunluğu ve/veya yoğunluğunun nicel tahminleri nöropatolojik çalışmaların önemli parametreleridir. Çeşitli beyin bölgelerinde kolinerjik uzunluğu, dopaminerjik, ve serotonerjik aksonlar genellikle bölgenin belirli fonksiyonları ile ilişkilidir. Bu aksonların dağılımı genellikle heterojen olduğundan, tasarım tabanlı stereoloji örnekleme sırasında önyargıönlemek için kullanılır. Stereolojiuzay topu sondası ilgi bir bölgede nöronal lifler gibi çizgi benzeri yapıların verimli ve güvenilir önlemler sağlamak için tasarlanmıştır1. Sonda, sondanın yüzeyi ile çizgi kesişmelerini ölçmek için dokuya sistematik olarak empoze edilen sanal bir küre yapar. Analiz için dokuya küre sondaları koymak mümkün olmadığından, ticari olarak kullanılabilen yazılım sanal üç boyutlu (3D) bir küre sağlar, bu da temelde küre sondasının yüzeyini temsil eden çeşitli çaplarda eşmerkezli daireler dizisidir.

Selektif kolinerjik nörodejenerasyon Alzheimer hastalığının tutarlı özelliklerinden biridir (AD)2,3,4. Disfonksiyonel kolinerjik iletim AD bilişsel gerileme için bir etken olarak kabul edilir. Kolinerjik disfonksiyon da Parkinson gibi diğer birçok ruhsal bozukluklar belirgindir, bağımlılık, ve şizofreni. Kolinerjik nörodejenerasyon farklı yönleri hayvan modellerinde incelenir (örneğin, asetilkolin azalma5, ChAT protein6, amiloid plaklar çevresinde kolinerjik lif nörodejenerasyon6, ve kolinerjik lifler ve sinaptik varisleri azalma7,8). Lif dejenerasyonu nöronal kayıp daha erken yer olduğuna inanılmaktadır, kolinerjik nöronal kaybı her zaman çalışmalarda gözlenmez çünkü. Kolinerjik nöronların çoğu bazal ön beyin ve beyin sapı, ve korteksler ve hipokampus gibi çeşitli beyin bölgelerine aksonlar proje. NBM bazal ön beyin de bulunan ve AD yaygın olarak etkilenen beyin bölgelerinden biri olarak bulundu.

Stereolojinin fraksiyonator yöntemi, bir dokunun birden fazla düzeyde sistematik olarak rastgele örneklemesi üzerine kuruludur. Kesit örnekleme fraksiyonu (SSF), stereolojinin fraksiyonator yöntemi için bölümlerin bilgisayar tabanlı olmayan sistematik örneklemesidir. Alan örnekleme fraksiyonu (ASF), bu bölümdeki ilgi alanının bir bölümünün fraksiyonudur. Kalınlık örnekleme fraksiyonu (TSF) bir bölümün kalınlığının kesirasyonudur. Uzay topu sondası, kesirli yerlerde 3Boyutlu bir küredeki ilgi profillerini ölçmemizi sağlıyor. Burada prosedürleri göstermek için fare beyninin NBM kolinerjik liflerin toplam uzunluğu tahmin etmek için bir uzay topu sondası kullanın. Mevcut protokol doku işleme hakkında ayrıntılı bilgi sağlar, stereoloji için örnekleme yöntemleri, ChAT antikor kullanarak immünohistokimyasal boyama, ve tarafsız stereoloji fare beyninin NBM kolinerjik lif uzunluğu ve lif yoğunluğu tahmin etmek.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu hayvanların kullanımı için tüm prosedürler Kansas City Gaziler İşleri Tıp Merkezi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır. Deneylerde İsveç mutantı beta-amiloid öncüprotein (APPswe) ve C57/BL6 WT çöpleri aşırı eksprese eden on sekiz aylık fareler kullanıldı. O ve ark.8'deüreme ve genotipleme nin ayrıntıları verilmiştir.

1. Perfüzyon ve doku işleme

  1. Ketamin (100 mg/kg) ve ksilazin (10 mg/kg) ile intraperitoneal enjeksiyon kullanarak fareleranestezi. Devam etmeden önce yanıt eksikliğini doğrulamakiçin parmak parmaklarını kıstırın.
  2. 0.1M Dulbecco fosfat tamponlu salin (DPBS) ve ardından 0,1 M fosfat tamponu (PB) ile ~50 mL buz soğuktranskardiyol perfuse10.
    DİkKAT: PFA toksiktir. PfA ile çalışırken kişisel koruyucu ekipman (PPE) kullanın.
  3. 24 saat boyunca postfixasyon için beyni10'u çıkarın ve 0,1 M PB'de %4 PFA'ya batırın.
  4. Bir gecede 0,1 DPBS'de %15 sakaroz çözeltisine ve 4 °C'de 48 saat boyunca 0,1 M DPBS'de %30 sakaroz çözeltisine değiştirin.
  5. Sakaroz çözeltisinden dokuyu çıkarın ve -20 °C'lik bir sıcaklığa ayarlanmış bir kriyotom odasında dondurun. Dondurulmuş numuneler kesit edilinceye kadar -80 °C'de kapalı tüplerde saklanabilir.
  6. Dokuları optimum kesme sıcaklığına gömme ortamına yerleştirin (bkz. Malzemeler Tablosu)ve numune diskine monte edin. Bir kriyotom kullanarak koronal düzlemde seri 30 μm kalınlığında kesin ve dolayısıyla kriyoprotektif solüsyon (%30 gliserol, %30 etilen glikol, %40 DPBS) ile dolu 24 kuyu kültür plakasında tüm bölümleri toplayın; Şekil 1A-C). -20 °C'lik bir dondurucuda saklayın.
    NOT: Daha kalın kesitler (örn. 50 μm) mümkün olduğunda tercih edilir. Bölümlerin kesme sırasına göre tutulduğundan ve tüm bölümlerin tamamen kriyoprotektif olduğundan emin olun. Bir 96 kuyu plakası bölümleri toplamak için 24 kuyu plakaları alternatif olarak kullanılabilir.
  7. Buharlaşmayı ve kurumayı önlemek için kuyuları plaka lı ile kaplayın. Plakaları daha fazla kullanıma kadar -20 °C'de saklayın. -20 °C'de depolanan kesitler ChAT immünohistokimyası için birkaç ay stabildir.

2. IHC için sistematik kesit seçimi

NOT: Kabul edilebilir bir hata katsayısı (CE) elde etmek için gereken toplam bölüm sayısını bilmek için bir pilot çalışma yapılmalıdır. CE değeri, örnekleme yordamındaki toplam hata miktarının ifadesidir. En düşük değer en az hatayı temsil eder ve 0,1'den düşük bir CE değeri burada kullanılan yazılım tarafından kabul edilebilir kabul edilir (bkz. Malzeme Tablosu)11.

  1. Morfolojik özellikleri Franklin ve Paxinos gibi standart bir fare beyin atlası ile karşılaştırarak her beyin için ilk ve son bölümleri tanımlayın. NBM bregma -0.0mm başlar ve -1.6 mm biter. Bu nedenle, yaklaşık 50 bölüm NBM içerir. Toplam kesit sayısı stereoloji sırasında gerekli parametrelerden biridir. Her8 bölümden birinin seçimi (SSF = 1/8) analiz için toplam 6-7 bölüm vermiş ve pilot çalışmamızda hem hacim tahmini hem de lif uzunluğu tahmini için kabul edilebilir bir CE vermiştir.
  2. İlk sekiz bölümden biriyle rasgele başlayın ve daha sonra nbm içeren son arka bölüme kadar her8 bölümden birini sistematik olarak örnekleyerek(Şekil 1C)alın.

3. İmmünohistokimya

  1. Kriyoprolü bölümleri kriyoprotektif oda sıcaklığına ve ardından 0.1M fosfat tamponuna (PB) 6 kuyu plakasına aktarın.
  2. PB'de 3x yıkayın.
  3. 15 dakika boyunca metanol% 0.3 H2O2 inkübün.
  4. Tris-tamponlu salin (TBS) 3x yıkayın.
  5. 30 dk için TBS% 0.25 Triton X-100 inkübat.
  6. 30 dakika boyunca TBS'de %0.1 Triton X-100'de %10 normal sığır serumu (NBS) ile blok.
  7. TBS'de 1:1.000 klor anti-insan ChAT primer antikorseyreltme (Bkz. Malzeme Tablosu)ile %0,1 Triton X-100 ve 4 °C'de 48 saat için %1 NBS ile inkübat.
  8. Oda sıcaklığında TBS'de 3x yıkayın. Oda sıcaklığında daha fazla kuluçka ve yıkama gerçekleştirin.
  9. Biyotinylated sığır anti-keçi ikincil antikor ile kuluçka (Malzemeler Tablosubakınız) için 1 saat.
  10. TBS'de 3x yıkayın.
  11. Avidin-biotin-peroksidaz kompleksi ile kuluçka (Malzeme Tablosubakınız).
  12. TBS'de 3x yıkayın.
  13. Üreticinin tavsiyelerine göre gelişmiş bir DAB peroksidaz substrat çözeltisi (Bkz. Malzeme Tablosu)kullanılarak geliştirin.
    DİkKAT: DAB şüpheli bir karsinojendir. Temas ve teneffüs ile toksiktir. DAB ile çalışırken PPE'yi kullanın.
  14. Bölümü birkaç kez distile suile yıkayın ve Tris pH = 7.6'da saklayın.
  15. Jelatinize slaytlar üzerinde bölümleri monte edin. Bir dokudan tüm kesitler aynı slaytüzerine konulabilir. Hava bölümleri kurutun, 5 dk her biri için 2x kurutun 70%, %90, %95 ve %100 etanol, ve sonra iki 10 dk ksilen yıkama ile bölümleri temizleyin. Montaj ortamını kullanarak bölümleri coverslip (bkz. Malzeme Tablosu).
    NOT: Dehidratasyon ve temizleme işleminin süresi bölümlerin kalınlığını etkiler. Bu nedenle, tüm bölümler için aynı koşullar kullanılmalıdır. Bu çalışmada son kalınlığın ortalama değeri 21.11 ± 0.45 m idi.
  16. Duman kaputundaki bölümleri kurumaya devam edin. Kuru kesitler stereoloji için hazırdır.

4. Stereoloji

NOT: Kullanılan mikroskop ve yazılım için Malzeme Tablosuna bakınız. Sayısal diyafram açıklığı (NA) > 1.2 ile daldırma hedefi yararlı olacaktır ve gerekirse kullanılmalıdır. Slaytlar genotip veya tedavi grubuna göre gruplandırılmalı ve kodlanmalıdır. Bir çalışma için tam stereoloji aynı kişi tarafından yapılmalıdır ve stereoloji gerçekleştiren kişi bireysel slaytlar veya grup incelenen 1 ,12,13kimliğini kör olmalıdır.

  1. Yazılımda yeni bir çalışma açın. (Dosya > Yeni Çalışma). A 'Çalışma Başlatma' iletişim kutusu açılır. Çok düzeyli (Kesir Tabanlı)kullanarak çalışma bilgilerini doldurun (Şekil 2A).
  2. Birim iletişim kutusunu açacak parametreleraltında 'Birim' düğmesine çift tıklayın. İlgi çekici özelliği ni adlandırın ve 'Bölge Nokta Sayma' sondasını seçin. İleri'yitıklatın.
  3. Bir sonraki parametreye çift tıklayın, 'Uzunluk'.
    1. Özelliğin adını belirt (örneğin,'L') 'Küre' sondasını seçin ve İleri'yitıklatın.
  4. Ardından, 'ÖrnekBaşlatma ' kutusunu açacak olan 'Çalışma Başlatma' iletişim kutusunu tıklatın. Servis talebi bilgilerini doldurun. Çalışmaya başlamadan önce gruplar kodlanmalıdır. Toplam bölüm sayısı, ilgi alanını içeren son bölüme ilgi alanını içeren ilk bölümden başlayarak başlayan bölüm sayısıdır (bkz. adım 2.1). IHC boyama için her 8bölüm den seçildiğinden, bölüm örnekleme aralığı sekizdir.
  5. Sonraki'ni tıklatarak, bölge seçimi ve hacim tahmini için otomatik olarak en düşük büyütmeyi ayarlayan 'Sonda Başlatma' iletişim kutusunu açar. Ayarları onaylayın ve seçilen alt büyütmede ilgi alanının tanımlanıp tanımlanamayabileceğini kontrol edin. 'Hacim'e çift tıklayın ve bölge hacim fraksiyonu için nokta başına 50.000 μm3 doldurun. Bitti'yitıklatın.
  6. Nesne (Yüksek) Büyütmealtında, 63x veya 100x olarak Uzunluk ayarlayın. Uzunluk-Küre iletişim kutusunu açmak ve kürenin çapını 10 μm olarak ayarlamak için 'Uzunluk' düğmesine çift tıklayın.
    NOT: Koruma bölgesi bölümlerin gerçek kalınlığına göre belirlenmelidir. Operatör herhangi bir hasar önlemek için birden fazla sitede bölümlerin kalınlığını kontrol etmelidir. Gerekirse, koruma bölgesi kalınlığını kesit kalınlığına göre ayarlayın.
  7. Çerçeve alanı, çerçeve yüksekliği, koruma bölgesi ve çerçeve aralığı için uygun değerleri ayarlayın.
    NOT: Bu değerler çalışma bölgesindeki nesne profillerinin (liflerin) heterojenliğine bağlıdır. 400 μm2çerçeve alanı, 10 μm çerçeve yüksekliği, 2 μm koruma alanı ve 300 μm çerçeve aralığı NBM'de lif uzunluğu tahmini için kabul edilebilir CE değerleri sağlar. Bir sonraki vakaya gitmeden önce bu değerlerle bir pilot çalışma yapılmalıdır.
  8. Her adımdan sonra yazılım tarafından sağlanan yönergeleri izleyin. Yönergeler bir iletişim kutusu olarak ve/veya ekranın alt kısmında görünür.
  9. Bölüm 1'i ekleyin.
  10. Düşük büyütmede (5x), NBM etrafında rasgele bir sınır oluşturarak ilgi bölgesini tanımlayın. Video penceresinin sol köşesindeki İleri düğmesini tıklatın. Talimatları izleyin ve tüm yeşil noktaları NBM olduğunu onaylayın. Puanlar, noktalara tıklayarak dahil edilebilir veya hariç tutulabilir.
    NOT: NBM çevresinde kesin, belirlenmiş bir sınır yoktur. Seçim çoğunlukla araştırmacı olarak tanımlanır. NBM ChAT + kolinerjik nöronlar iç kapsül görülebilir (ic) ve globus pallidus (GP). Bu protokolde, ChAT + kolinerjik nöronlar ve projeksiyonları (lifler) ve bütün GP ile ic NBM dahildir (Şekil 1D).
  11. Talimatları izleyin ve mevcut fraksiyonda lif ölçümleri için 63x değiştirin. Ekranda 'Kesit Kalınlığı' iletişim kutusu görüntülenir. Bölümün gerçek kalınlığını ölçmek için bölümün üst ve alt yüzeyini ayarlayın. Manuel Z ekseni hareketi kullanılmalıdır. Bitti'yetıklayın.
    NOT: Bölgede lif yoksa, bir sonraki kesir konumuna gitmek için adım atlanabilir.
  12. Z eksenini bölümün çerçeve yüksekliğinde yukarıdan aşağıya doğru yavaşça hareket ettirin ve sanal küre sondasının yüzeyinde kesişen tüm lifleri işaretleyin(Şekil 3). Bittiğinde, sonraki konuma gitmek için İleri'yi tıklatın.
  13. Tüm kesirleri tamamladıktan sonra, yazılım sonraki bölümü eklemek isteyecektir. Doku altı veya yedi bölümü için 4.9-4.12 adımlarını tekrarlayın.
    1. Sonunda, yazılım CE değerlerini gösteren durum için bir sonuç oluşturur (Şekil 4). CE kabul edilebilirse, bir sonraki davaya devam edin. Dosya > Yeni Servis Talebi. CE kabul edilemezse(Şekil 4A),yazılım bazı parametreleri değiştirmek için öneriler sağlar. Çoğu durumda, çerçeve aralığının azaltılması CE değerlerini kabul edilebilir bir aralıkta düşürür(Şekil 4B).
  14. Tüm servis taleplerini tamamladıktan sonra, her servis talebi ve grup için sonuç oluşturun (Dosya > Sonuçlar).

5. Analiz ve istatistik

  1. Yazılım, her örnek ve her grup için veri sağlar. Yazılımın kendisi SSF, ASF ve TSF gibi kesirleri hesaplar ve referans bölgesindeki liflerin toplam referans hacmini (VREF)ve toplam uzunluk (L) sağlar (bu durumda, NBM)(Şekil 4B). Verileri dışa aktarın ve grup çözümlemesi arasında tercih edilen istatistiksel yazılıma kaydedin veya kopyalayın. Tablo 1, istatistiksel analiz için tipik sonuç verilerini gösterir. Toplam lif uzunluğunu referans hacmiyle bölerek lif yoğunluğunu (Lv) analiz edin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Temsil sonuçları Tablo 1 ve Şekil 5'tegösterilmiştir. APPswe grubu (APP) olarak deşifre edilen C Grubu, yabani tip (WILD) çöplerine göre önemli ölçüde daha düşük lif uzunluğuna(Şekil 5B) ve lif uzunluğu yoğunluğuna(Şekil 5C)sahipti. Sonuçlar, analiz edilen iki grup arasında NBM hacminde anlamlı bir fark olmadığını göstermiştir(Şekil 5A)...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada bir uzay topu (küre) sondası kullanarak NBM kolinerjik liflerin yoğunluğunu tahmin etmek için bir yöntem göstermektedir. Bu sonda, ilgi bölgesindeki toplam lif uzunluğunu tahmin ediyor. Toplam uzunluk lif yoğunluğu elde etmek için bölgenin hacmine bölünebilir. Bölgenin hacmini tahmin etmek için Cavalieri nokta sayımı yöntemi kullanılmıştır. Cavalieri puan sayımı yöntemi, herhangi bir bölge için 3B referans hacminin tarafsız ve verimli bir tahmincisidir. Yöntem, noktaları (alan kesirlerini temsil eden) sayarak ve d...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma W.Z.S.'ye Tıbbi Araştırma ve Geliştirme Servisi, Gazi İşleri Dairesi (Merit Review 1I01 BX001067-01A2), Alzheimer Derneği (NPSPAD-11-202149) ve Midwest Biyomedikal kaynaklarından gelen bağışlarla desteklenmiştir. Araştırma Vakfı.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
ABC kitiVektör LaboratuvarlarıPK6100
Anti-ChAT AntikoruMillipore, MA, ABDAB144P
Sığır anti-keçi IgG-BSantacruz BiyoteknolojiSC-2347
Sığır Serumu, YetişkinSigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABDB9433
KriyostatLieca Microsystems, Buffalo Grove, IL, ABD
Dulbecco'nun Fosfat Tamponlu TuzluSigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABDD5652
Etilen GlikolSigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABD324558
GliserolSigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABDG2025
Hidrojen PeroksitSigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABDH1009
Immpact-DAB kitiVektör LaboratuvarlarıSK4105Geliştirilmiş DAB peroksidaz substrat çözeltisi
KetaminWestward Pharmaceuticals, NJ, ABD0143-9509-01
MikroskopLieca Microsystems, Buffalo Grove, IL, ABDAF6000Motorlu sahne ve IMI-tech renkli dijital kamera ile donatılmıştır
Optimum kesme sıcaklığı (OCT) gömme ortamıElektron Mikroskobu Bilimleri, PA, ABD62550-12
ParaformaldehitSigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABDP6148
Permount montaj ortamıElektron Mikroskobu Bilimleri, PA, ABD17986-01
Stereologer YazılımıStereoloji Kaynak Merkezi, Inc. St. Petersburg, FL, ABDStereologer2000Bir Dell Masaüstü bilgisayara yüklenmiştir.
Triton X-100Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABDT8787
Trizma TabanıSigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABDT1503Tris tabanı
Trizma hidroklorürSigma-Aldrich, St. Louis, MO, ABDT5941Tris hidroklorür
KsilazinBayer, Leverkusen, AlmanyaRompun
Xylenes, Histolojik sınıfSigma-Aldrich, St. Louis, MO534056

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Mouton, P. R., Gokhale, A. M., Ward, N. L., West, M. J. Stereological length estimation using spherical probes. Journal of Microscopy. 206, Pt 1 54-64 (2002).
  2. Whitehouse, P. J., Price, D. L., Clark, A. W., Long Coyle, J. T., DeLong, M. R. Alzheimer disease: evidence for selective loss of cholinergic neurons in the nucleus basalis. Annals of Neurology. 10 (2), 122-126 (1981).
  3. Davies, P., Maloney, A. J. Selective loss of central cholinergic neurons in Alzheimer's disease. The Lancet. 2 (8000), 1403(1976).
  4. Bartus, R. T., Dean, R. L., Beer, B., Lippa, A. S. The cholinergic hypothesis of geriatric memory dysfunction. Science. 217 (4558), 408-414 (1982).
  5. Savonenko, A. Episodic-like memory deficits in the APPswe/PS1dE9 mouse model of Alzheimer's disease: relationships to beta-amyloid deposition and neurotransmitter abnormalities. Neurobiology of Disease. 18 (3), 602-617 (2005).
  6. Perez, S. E., Dar, S., Ikonomovic, M. D., DeKosky, S. T., Mufson, E. J. Cholinergic forebrain degeneration in the APPswe/PS1DeltaE9 transgenic mouse. Neurobiology of Disease. 28 (1), 3-15 (2007).
  7. Stokin, G. B. Axonopathy and transport deficits early in the pathogenesis of Alzheimer's disease. Science. 307 (5713), 1282-1288 (2005).
  8. He, M. GRK5 Deficiency Leads to Selective Basal Forebrain Cholinergic Neuronal Vulnerability. Scientific Reports. 6, 26116(2016).
  9. JoVE Science Education Database. Lab Animal Research. Anesthesia Induction and Maintenance. Journal of Visualized Experiments. , Cambridge, MA. (2019).
  10. Gage, G. J., Kipke, D. R., Shain, W. Whole animal perfusion fixation for rodents. Journal of Visualized Experiments. (65), e3564(2012).
  11. Mouton, P. R. Unbiased Stereology-A Concise Guide. , Johns Hopkins University Press. (2011).
  12. West, M. J. Getting started in stereology. Cold Spring Harbor Protocols. 2013 (4), 287-297 (2013).
  13. West, M. J. Space Balls Revisited: Stereological Estimates of Length With Virtual Isotropic Surface Probes. Frontiers in Neuroanatomy. 12, 49(2018).
  14. Nikolajsen, G. N., Kotynski, K. A., Jensen, M. S., West, M. J. Quantitative analysis of the capillary network of aged APPswe/PS1dE9 transgenic mice. Neurobiology of Aging. 36 (11), 2954-2962 (2015).
  15. Gutierrez-Jimenez, E. Disturbances in the control of capillary flow in an aged APP(swe)/PS1DeltaE9 model of Alzheimer's disease. Neurobiology of Aging. 62, 82-94 (2018).
  16. Gundersen, H. J., Jensen, E. B., Kieu, K., Nielsen, J. The efficiency of systematic sampling in stereology--reconsidered. Journal of Microscopy. 193, Pt 3 199-211 (1999).
  17. Zhang, Y. Quantitative study of the capillaries within the white matter of the Tg2576 mouse model of Alzheimer's disease. Brain and Behavior. 9 (4), 01268(2019).
  18. McNeal, D. W. Unbiased Stereological Analysis of Reactive Astrogliosis to Estimate Age-Associated Cerebral White Matter Injury. Journal of Neuropathology Experimental Neurology. 75 (6), 539-554 (2016).
  19. Liu, Y. Passive (amyloid-beta) immunotherapy attenuates monoaminergic axonal degeneration in the AbetaPPswe/PS1dE9 mice. Journal of Alzheimer's Disease. 23 (2), 271-279 (2011).
  20. Gagnon, D. Evidence for Sprouting of Dopamine and Serotonin Axons in the Pallidum of Parkinsonian Monkeys. Frontiers of Neuroanatomy. 12, 38(2018).
  21. Boncristiano, S. Cholinergic changes in the APP23 transgenic mouse model of cerebral amyloidosis. Journal of Neuroscience. 22 (8), 3234-3243 (2002).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Nucleus Basalis MeynertSpace Ball ProbChAT mmunboyamaHRP DAB DeteksiyonuStereoloji Yaz l mFiber Uzunlu u TahminiLineer Profil TahminiN rodejeneratif De i im Tespiti

İlgili makaleler