Method Article

Çin Hamster Yumurtalık Hücre Yetiştiriciliğinde Yüksek İş-İş BulaMetli Otomatik Mikro-Biyoreaktörler Kullanılarak Proses Optimizasyonu

DOI:

10.3791/60577

⸱

May 18th, 2020

 ,  ,  , 
1Institute for Technical Chemistry, Gottfried-Wilhelm-Leibniz Universität Hannover

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Burada, otomatik bir mikro-biyoreaktörde deney tasarımı ve ardından hücre hasadı ve protein nicelemi nin bir Protein A sütunu kullanılarak çalıştırılaması için ayrıntılı bir prosedür saklıyız.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Biyoproseslerin istenilen ürünlerin verimini artırmak için optimizasyonu biyofarmasötik endüstrisinde önem taşımaktadır. Bu, gerinim seçimi ve biyoproses parametreleri geliştirilerek elde edilebilir. Shake şişeleri bu amaçla kullanılmıştır. Ancak, pH ve çözünmüş oksijen (DO) gibi proses parametrelerini kontrol etme yeteneğinden yoksundurlar. Bu sınırlama otomatik bir mikro-biyoreaktör yardımıyla aşılabilir. Bu biyoreaktörler daha büyük ölçekte ekimi taklit. Bu sistemin en önemli avantajlarından biri, Deneme Tasarımı'nın (DOE) yazılıma entegre sidir. Bu tümleştirme, birden çok işlem parametresini aynı anda çeşitlendirebileceğiniz bir tasarım oluşturulmasını sağlar. Kritik proses parametreleri ve optimum biyoproses koşulları yazılım içinde analiz edilebilir. Burada sunulan çalışmanın odak noktası, kullanıcıyı yazılımda proses tasarımı ve DOE'nin ekim eki ile dahil edilen adımlarla tanıştırmaktır.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Küresel biyofarmasötik pazarı 2018 yılında 250 milyar doların üzerinde ydi ve sürekli olarak1milyar abd doları hızla genişlemektedir. İlaç şirketleri küçük moleküler ilaçlar üretmekten rekombinant proteinler gibi biyoteknolojik olarak üretilen terapötiklere geçiyorlar. Bu tek başına fazla 150 milyar dolar1gelir sorumludur. Memeli hücreleri artık bu farmasötik rekombinant proteinlerin üretimi için yaygın olarak kullanılmaktadır. Mevcut dönemde, memeli hücreleri tarafından üretilen 68 onaylı ürünler arasında, 57 Çin Hamster yumurtalık hücreleri tarafından üretilmektedir (CHO)2. CHO hücreleri özellik....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Kültür Öncesi Prosedürü

NOT: Bu protokol için 1 x 107 hücre/mL canlı hücre konsantrasyonu olan rekombinant CHO DG44 hücreleri kullanılmaktadır.

  1. 1,2 mL hücre içeren şişeyi oda sıcaklığına kadar eritin ve hücre süspansiyonuna hemen 10 mL soğuk tohum lu orta içeren 15 mL konik santrifüj tüpüne aktarın.
  2. Konik santrifüj tüpünü 190 x g ve oda sıcaklığında 5 dakika santrifüj edin ve süpernatantı atın.
  3. 500 mL'lik bir çırpıda tohum ortamının 150 mL'sini 36,8 °C'ye ısıtın.
  4. Önceden ısıtılmış tohum orta 10 mL hücre pelet yavaşça yeniden askıya ve sallamak şişesi içine hücre....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada yapılan ekime genel bir bakış Şekil 2'desunulmuştur.

figure-results-1
Şekil 2: Kültür istasyonlarındaki pH ve karıştırıcı hız profillerini test etmek için deneysel koşulların şematik gösterimi. Şekil aynı zamanda gemileri yerleştirmek için doğru düzeni temsil eder.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Verimi artırmak için sürecin optimizasyonu biyofarmasötik endüstrisinde çok önemlidir. Shake şişeleri potansiyel olarak zorlanma nın taranması için kullanılabilir; ancak, pH ve DO gibi proses parametrelerinin izlenmesi şişelerde kullanılamaz. Mikro-biyoreaktörler, sürecin sürekli izlenmesine ve kontrol altına alabilmesine olanak sağladıkları için avantaja sahiptirler. Mikro-biyoreaktör bu kontrol döngüleri de daha büyük ölçekli benzer bir durum sağlamak ve böylece, daha büyük ölçekli biyoreaktörler karşılaştırılabilir so.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar Bundesministerium für Bildung und Forschung (BMBF), Federal Eğitim ve Araştırma Bakanlığı, Almanya ve Sartorius Stedim Biotech GmbH, Almanya Biyoİşleme ekibi, destek için teşekkür etmek istiyorum.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
1 mL tek kullanımlık pipet uçları, sterilizeSartorius Stedim Biotech GmbHA-0040
200 mM L-glutaminCorning, Merck25-005-CV
24 Kuyu derin kuyu plakalarıSartorius Stedim Biotech GmbHA-0038
5 mL tek kullanımlık pipet uçları, sterilizeSartorius Stedim Biotech GmbHA-0039
ambr 15 otomatik mikrobiyoreaktör sistemiSartorius Stedim Biotech GmbH001-2804
ambr 15 Hücre Kültürü 24 Tek Kullanımlık Biyoreaktörler - SpargedSartorius Stedim Biotech GmbH001-1B86
Köpük Önleyici C EmülsiyonuSigma-Aldrich, MerckA8011
Şişe Üstü Steril filtreCorning, MerckCLS4314740.1 & mu; m gözenek boyutu
CEDEX Deterjan (%3 Mukozol)Roche Innovatis AG05-650-658-001
Hücre sayacıRoche Innovatis AG05-650-216-001CEDEX HiRes
CHO DG44 hücre hattıCellca, Sartorius Stedim Biotech GmbH
CHOKO Feed Media A (FMA)Sigma-Aldrich, MerckCR80025
CHOKO Feed Media B (FMB)Sigma-Aldrich, MerckCR80026
CHOKO Üretim OrtamıSigma-Aldrich, MerckCR80027
CHOKO Stok Kültürü MeiumSigma-Aldrich, MerckCR80028
Chromaster yüksek basınçlı sıvı kromatografi sistemiVWR Uluslararası
Konik Santrifüj tüpüCorning, MerckSIAL0790
EtanolMerck
GlisinCarl Roth56-40-6
HPLC ŞişeleriVWR InternationalSUPLSU860181
PBSSigma-Aldrich, MerckP4417
Protein A SütunuThermo Fisher Scientific1502226POROS™ Bir 1.7  mL
Sodyum klorürSigma-Aldrich, Merck7647-14-5
Sodyum fosfat dibazik susuzSigma-Aldrich, Merck7558-79-4
Tripan MavisiVWR UluslararasıVWRVK940
YSIYSI Inc2900DYSI 2900 Seç
1070179026

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Langer, E. S. 15th Annual report and survey of Biopharmaceutical Manufacturing Capacity and Production: A study of Biotherapeutical Developers and Contract Manufacturing Organizations. Bioplan Associates. , Available from: http://bioplanassociates.com/wp-content/uploads/2018/07/15thAnnualBiomfgReport_TABLEOFCONTENTS-LR.pdf (2019).
  2. Walsh, G. Biopharmaceutical benchmarks 2018.....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Automated Micro BioreactorDesign of ExperimentChinese Hamster OvaryProcess OptimizationBioprocess ParametersDOE SoftwareCell CultureStirring RPMDissolved OxygenpH Control

Related Articles