Bu protokol, lazer kesim nörovasküler implantlar kullanılarak kanla temas eden cihazların kapsamlı bir hemouyumluluk değerlendirmesini açıklamaktadır. Taze, heparinize insan kanı ile bir akış döngüsü modeli kan akışını taklit etmek için uygulanır. Perfüzyon sonrası çeşitli hematolojik belirteçler analiz edilir ve test edilen cihazların hemokompatibilite değerlendirmesi için kan alındıktan sonra doğrudan elde edilen değerlerle karşılaştırılır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
İnsan Kan Akışını Taklit Eden Akış Döngüsü Modelinde Kanla Temas Eden İmplantların Hemokomuuyum Testi
Bu makalede
Özet
Özet
Tıbbi cihazların (örneğin, vasküler greftler, stentler ve kardiyak kateterler) vücudun dolaşım sisteminde kalan geçici veya kalıcı amaçlarla giderek artan kullanımı, bu cihazların neden olduğu olası hematolojik komplikasyonları (örn. kan bileşenlerinin aktivasyonu ve imhası) değerlendiren güvenilir ve multiparametrik bir yaklaşım gerektirir. Kanla temas eden implantların kapsamlı in vitro hemouyumluluk testi, invivo uygulamada başarılı olması nın ilk adımıdır. Bu nedenle, Klinik uygulama öncesinde Uluslararası Standardizasyon Örgütü 10993-4 'e (ISO 10993-4) göre kapsamlı analiz zorunludur. Sunulan akış döngüsü stentlerin hemostatik performansını analiz etmek için hassas bir modeli açıklar (bu durumda, nörovasküler) ve yan etkileri ortaya. Taze insan tam kan ve nazik kan örnekleme kullanımı kan preaktivasyonu önlemek için gereklidir. Kan, test numunesini içeren heparinize bir tüp ile 37 °C'de 150 mL/dk hızda 60 dakika peristaltik pompa kullanılarak geçirilir. Perfüzyon öncesi ve sonrası hematolojik belirteçler (örn. lökositlerin aktivasyonunu gösteren kan hücre sayısı, hemoglobin, hematokrit ve plazmatik belirteçler (polimorfonükleer [PMN]-elastaz), trombositler (β-tromboglobulin [β-TG]), koagülasyon sistemi (thombin-antitrombin III [TAT]) ve ardan ardeksi (SC5b-9) olarak analiz edilir. Sonuç olarak, klinik uygulama öncesinde stentlerin ve diğer kanla temas eden cihazların kapsamlı hemouyumluluk testi için gerekli ve güvenilir bir model salıyoruz.
Giriş
İmplantların ve biyomalzemelerin insan kanıyla etkileşime giren in vivo uygulaması, hemostatik sistemin çeşitli belirteçlerinin araştırılmasına odaklanan yoğun klinik öncesi testler gerektirir. Uluslararası Standardizasyon Örgütü 10993-4 (ISO 10993-4) kanla temas eden cihazların (yani stent ve vasküler greftlerin) değerlendirilmesi için temel ilkeleri belirtir ve cihaz tasarımını, klinik yararını ve gerekli malzemeleri1olarak değerlendirir.
İnsan kanı, lökositler (beyaz kan hücreleri [WBCs]), eritrositler (kırmızı kan hücreleri [RBCs]) ve trombositler gibi çeşitli plazma proteinlerive hücreler....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Kan örnekleme prosedürü Tuebingen Üniversitesi Tıp Fakültesi Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır (proje tanımlama kodu: 270/2010BO1). Tüm konular katılımdan önce dahil edilmesi için yazılı, bilgilendirilmiş onay verilir.
1. Heparin yüklü Monovettes hazırlanması
- Seyreltilmemiş heparini (5.000 IU/mL) sodyum klorürle karıştırın (NaCl, %0.9) 15 IU/mL heparin konsantrasyonu ile bir çözelti hazırlayın.
- Kan örneklemesi sonrası 1,5 IU/mL son heparin konsantrasyonu elde etmek için her nötr monovette (9 mL) seyreltilmiş heparin çözeltisinin 900 μL'sini ekleyin. Donör başına üç monovet ve üç yedek monovette hazırlayın ve heparin....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Kısaca özetlenebilir, insan tam kan heparin yüklü monovettes sonra toplandı ve hücre sayımları temel düzeylerini değerlendirmek için kullanılan yanı sıra plazmatik hemouyumluluk belirteçleri.
Daha sonra nörovasküler implant örneklerini içeren tüp dolduruldu ve kan peristaltik pompa kullanılarak 150 mL/dk ve 37 °C'de 60 dk boyunca perfüzyon yapıldı. Yine tüm gruplarda hücre sayısı analiz edildi ve plazma örnekleri ELISA analizleri için hazırlandı (Şekil 1). Kan hüc.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Sunulan protokol, insan kan akışını taklit eden bir kesme akışı modelinde ISO 10993-4 uyarınca kanla temas eden implantların hemouyumluluk testi için kapsamlı ve güvenilir bir yöntemi tanımlar. Bu çalışma lazer kesim nörovasküler implantların test dayanmaktadır ama çeşitli örnekler ile yapılabilir. Sonuçlar, bu yöntemin kan hücresi sayısı, çeşitli hemokompatibilite belirteçlerinin yaygınlığı ve kan teması sonrası cihaz yüzeyinin mikroskobik görselleştirmesi gibi çeşitli parametrelerin geniş analizini sağladığını gösterme.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Teşekkürler
Taramalı elektron mikroskobu performansı için, Üniversite Hastanesi Tuebingen Tıbbi Malzeme Bilimi ve Teknolojisi bölümünden Ernst Schweizer'a teşekkür ederiz. Araştırma, Ulusal Sürdürülebilirlik Programı II (Project BIOCEV-FAR LQ1604) kapsamında Cr'nin Eğitim, Gençlik ve Spor Bakanlığı ve Çek Bilim Vakfı'nın 18-01163S projesi tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| aqua ad iniectabilia | Fresenius-Kabi, Bad-Homburg, Almanya | 1088813 | |
| beta-TG ELISA | Diagnostica Stago, Düsseldorf, Almanya | 00950 | |
| Santrifüj Rotana 460 R | Andreas Hettich, Tuttlingen, | Almanya-Citrat | |
| monovettes (1.4 mL) | Sarstedt, Nü mbrecht, Almanya | 6,16,68,001 | |
| CTAD monovet (2.7 mL) | BD Biosciences, Heidelberg, Almanya | 367562 | |
| EDTA monovet (1.2 mL) | Sarstedt, Nü mbrecht, Almanya | 6,16,62,001 | |
| Etanol p.A. (1000 mL) | AppliChem, Darmstadt, Almanya | 1,31,08,61,611 | |
| Gluteraldehit (suda % 25) | SERVA Elektroforez, Heidelberg, Almanya | 23114.01 | |
| Ension tüpleri için heparin kaplama | Ension, Pittsburgh, | ||
| (25.000 IE/ 5 mL) | LEO Pharma, Neu-Isenburg, Almanya | PZN 15261203 | |
| Çok Plakalı Okuyucu Mithras LB 940 | Berthold, Bad Wildbad, | Almanya-NaCl | |
| %0,9Fresenius-Kabi | , Bad-Homburg, Almanya | 1312813 | |
| Nötr monovetler (9 mL) | Sarstedt, Nü mbrecht, Almanya | 2,10,63,001 | |
| PBS tamponu (Ca2+/Mg2+ olmadan) | Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Almanya | 70011044 | |
| Peristaltik pompa ISM444B | Cole Parmer, Wertheim, Almanya | 3475 | |
| Pipet (100 ve mikro; L) | Eppendorf, Wesseling-Berzdorf, Almanya | 3124000075 | |
| Pipet (1000 & mikro; L) | Eppendorf, Wesseling-Berzdorf, Almanya | 3123000063 | |
| Plastik kap (100 mL) | Sarstedt, Nü mbrecht, Almanya | 7,55,62,300 | |
| PMN-Elastase ELISA | Demeditec Diagnostics, Kiel Almanya | DEH3311 | |
| Polivinil klorür tüpü | Saint-Gobain Performance Plastics Inc., Courbevoie | Fransa-Reaksiyon | |
| Tüpleri (1.5 mL) | Eppendorf, Wesseling-Berzdorf, Almanya | 30123328 | |
| nörovasküler lazer kesim implantlar | Acandis GmbH, Pforzheim | 01-0011x | |
| SC5b-9 ELISA | TECOmedical, Buende, Almanya | A029 | |
| Taramalı elektron mikroskobu | Cambridge Instruments, Cambridge, | İngiltere-Sızdırmazlık | |
| bandı (96 kuyulu plaka) | Thermo Fisher Scientific, Darmstadt, Almanya | 15036 | |
| Şırınga 10/12 mL Norm-Ject | Henke-Sass-Wolf, Tuttlingen, Almanya | 10080010 | |
| TAT mikro kiti | Siemens Healthcare, Marburg, Almanya | OWMG15 | |
| Su Banyosu Tipi 1083 | Gesellschaft fü r Labortechnik, Burgwedel, Almanya | - |
Kaynaklar
- ISO. Biological evaluation of medical devices. , ISO 10993-4 (2002).
- Weber, M., et al. Blood-Contacting Biomaterials: In Vitro Evaluation of the Hemocompatibility. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 6, 99(2018).
- Li, Y., Boraschi, D.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
