Burada, biri hücresel ve sitokin yara iyileştirici yanıtlarını değerlendirmek, diğeri ise yara kapatma oranını ölçmek için tasarlanmış iki murine yara iyileşmesi modeli tanımlanmıştır. Bu yöntemler, kötü yara iyileşmesiçeşitli yönlerini mekanizmaları belirlemek için diyabet gibi karmaşık hastalık modelleri ile kullanılabilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Dorsal Subkutan Polivinil Alkol Sünger İmplantasyonu ve Eksizyonal Kuyruk Deri Yara Modelleri kullanılarak Akut Yara İyileşmesinin Değerlendirilmesi.
Bu makalede
Özet
Özet
Yara iyileşmesi inflamasyon, granülasyon doku oluşumu, fibrozis ve çözünürlük düzenli ilerlemesini gerektiren karmaşık bir süreçtir. Murine modelleri bu süreçlere değerli mekanistik bilgiler sağlar; ancak, tek bir model tamamen yara iyileşme yanıtı tüm yönleriyle adresleri. Bunun yerine, yara iyileşmesi farklı yönlerini ele almak için birden fazla model kullanmak idealdir. Burada yara iyileşmesi yanıtının farklı yönlerini ele alan iki farklı yöntem tanımlanmıştır. İlk modelde polivinil alkol süngerleri fare dorsum boyunca deri altı implante edilir. Sünger alımının ardından hücreler mekanik bozulma ile izole edilebilir ve sıvılar santrifüj ile çıkarılabilir, böylece akut yara ortamında hücresel ve sitokin yanıtlarının ayrıntılı bir karakterizasyonuna olanak sağlar. Bu modelin bir sınırlama yara kapatma oranını değerlendirmek için yetersizlik tir. Bunun için kuyruk derisi eksizyonu modeli kullanılmaktadır. Bu modelde, kuyruk derisinin 10 mm x 3 mm dikdörtgen parçası, kuyruk tabanına yakın, sırt yüzeyi boyunca çıkar. Bu model kolayca iyileşme oranlarını belirlemek için planimetrik analiz için fotoğraflanabilir ve histolojik analiz için excised olabilir. Tanımlanan her iki yöntem de genetik olarak değiştirilmiş fare suşlarında veya yara iyileşme mekanizmalarını açıklamak için diyabet, yaşlanma veya sekonder enfeksiyon gibi komorbid durum modelleri ile birlikte kullanılabilir.
Giriş
Yara iyileşme süreçlerini incelemek için birçok murine model sistemleri vardır, her biri belirli avantajları ve sınırlamaları sahip1,2. Aşağıdaki yöntemler, her biri yara iyileşmesi yanıtının belirli bir yönünü ele alan ve yaralanmaya yanıttaki tedirginliklerin neden ve etkisini belirlemek için kullanılabilen iki murine yara modeli sunar. Yara iyileşme süreci farklı evrelerde gerçekleşir. İlk aşama inflamatuardır, trombositlerin hızlı akını ile karakterize, nötrofiller, ve monositler / makrofajlar, yanı sıra proinflamatuar sitokinler ve kemokinler üretimi. İltihapın çözülmesinden sonra, profibrotik ve proanjio....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Burada açıklanan tüm hayvan çalışmaları Brown Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmış ve Ulusal Sağlık Enstitüleri Hayvanların Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu uyarınca yürütülmüştür. NOT: Videoda, cerrahi örtü gösteri amacıyla atlanmıştır.
1. PVA süngerlerinin deri altı implantasyonu
- 8 mm x 8 mm x 4 mm adet PVA sünger levhakesmek için makas kullanın. PVA sünger parçalarını steril 1x PBS'ye batırarak bir kabın içinde yeniden sulayın.
- Otoklav 1x PBS içinde sünger sterilize etmek ve tamamen serin. Otoklavlı süngerleri steril 1x PBS'de 4 °C'de saklayın.
- Cerrahi implantasyon gerçe....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
PVA sünger implantasyonu sonrası sistemik inflamatuar yanıt
PVA sünger implantasyon cerrahisi, yaralanmadan 1 gün sonra plazmada IL-6 indüksiyonu ile gösterildiği gibi sistemik inflamatuar yanıt üretti(Şekil 2A). TNF-α ve IL-1β gibi diğer proinflamatuar sitokinlerin yanı sıra CCL2 ve CXCL1 dahil olmak üzere bir dizi kemokin ler pva sonrası ilk 7 gün içinde sistemsel olarak indüklenmiştir ve başka bir yerde26,30tan.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu makalede, akut yara iyileşmesi yanıtının değerlendirilmesini sağlayan iki çekilebilir murine yara modeli açıklanmaktadır. İlk yöntem dorsal deri altı alana PVA süngerlerin cerrahi implantasyonu içerir. Bu yaklaşım, izole süngerlerden elde edilen çok sayıda hücre ve yara sıvısı miktarı nedeniyle hücresel yara iyileşmesi yanıtını incelemek için biyopsi bazlı yara modellerine göre belirgin bir avantaj sağlar. Bu işlemin başarılı bir şekilde uygulanabı için, kesi çevresindeki deriyi iyice temizleyerek steril bir cerrahi a.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Teşekkürler
Yazarlar Kevin Carlson Brown Üniversitesi Akış Sitometri ve Sıralama Tesisi danışma ve akış sitometri deneyleri ile yardım için teşekkür etmek istiyorum. Şekil 1B ve C'deki görüntüler BioRender ile oluşturulmuştur. Kayla Lee ve Gregory Serpa fotoğrafyardım için teşekkür edilir. Bu çalışma aşağıdaki hibeler tarafından desteklenmiştir: Savunma İleri Araştırma Projeleri Ajansı (DARPA) YFAA15 D15AP00100, Yeni Gelişen Yeni Bilim Ödülü Dekan Alanları (Brown Üniversitesi), Ulusal Kalp Akciğer ve Kan Enstitüsü (NHLBI) 1R01HL126887-01A1, Ulusal Çevre Bilimleri Enstitüsü (NIES) T32-ES7272 (Çevre Patolojisi Eğitimi) ve Brown Üniversitesi Araştırma Tohum Ödülü.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 10x Fosfat Tamponlu Tuzlu | Fisher Scientific | BP3991 | |
| 15 mL santrifüj tüpleri, Olympus | Genesee | 28-103 | |
| 1x HBSS (+Kalsiyum, +Magnezyum, vb.; Fenol Kırmızısı) | ThermoFisher Scientific | 14025076 | |
| 5ml Şırınga | BD | 309646 | |
| Anti-fare CD45.2-APC Fire750 | BioLegend | 109852 | Klon 104 |
| Anti-fare F4/80-eFluor660 | ThermoFisher Scientific | 50-4801-82 | Klon BM8 |
| Anti-fare Ly6C-FITC | BD Biosciences | 553104 | Klon AL-21 |
| Anti-fare Ly6G-PerCP-eFluor710 | ThermoFisher Scientific | 46-9668-82 | Klon 1A8-Ly6g |
| Anti-fare Siglec-F-APC-R700 | BD Biosciences | 565183 | Klonu E50-2440 |
| Autoclip Paslanmaz Çelik Yara Klipsi Uygulayıcı | Braintree Scientific | NC9021392 | |
| Autoclip Paslanmaz Çelik Yara Klipsleri, 9mm | Braintree Scientific | NC9334081 | |
| Blender Çantası, 80 mL | Fisher Scientific | 14258201 | |
| Kültür Tüpü, 16 mL, 17x100 | Genesee Scientific | 21-130 | |
| Fetal Sığır Serumu - Standart | ThermoFisher Scientific | 10437028 | |
| Sabitlenebilir Canlılık Boyası eFluor506 | ThermoFisher Scientific | 65-0866-14 | |
| Hepes Çözeltisi, 1M | Genesee Scientific | 25-534 | |
| ImageJ Yazılımı | NIH | ||
| Penisilin-Streptomisin (5000 U/mL) | ThermoFisher Scientific | 15070-063 | |
| Polivinil alkol süngeri - geniş gözenek boyutu | Ivalon/PVA Unlimited | www.sponge-pva.com | |
| Povidon-iyot çözeltisi, %10 | Fisher Scientific | 3955-16 | |
| Sprey bariyer filmi, Cavilon | 3M | 3346E | |
| Mide 80 Biomaster, 110V | Seward | 0080/000/AJ |
Kaynaklar
- Gottrup, F., Agren, M. S., Karlsmark, T. Models for use in wound healing research: a survey focusing on in vitro and in vivo adult soft tissue. Wound Repair and Regeneration: Official Publication of the Wound Healing Society [and] the European Tissue Repair Society. 8 (2), 83-96 (2000).
- Elliot, S., Wikramanayake, T.....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
