Farelerde Tekrarlanan Orotracheal Entübasyon

Laboratuvar fareinsan solunum hastalığı için ortak bir hayvan modelidir. Bu nedenle, hem tedavilerin instillasyonu hem de solunum mekaniğinin ölçümü amacıyla fare entübasyonu için yayınlanmış çeşitli yöntemler bulunmaktadır. Açıklanan prosedürlerin çoğu bir laringoskop veya fiber optik ışık^kaynağı1,^2,3,4,5,6,7gibi özel ekipman ile ağız boşluğu ile glottis görselleştirme gerektirir.^, Ancak, bu nispeten büyük bir kanül gerekli olduğunda zor olabilir, bu araştırmacının görünümünü gizlemek gibi. Limjunyawong ve ark.⁸ hangi küçük bir kutanöz kesi trakea görselleştirme için izin ventral boyun orta hattı boyunca yapılır entübasyon yöntemi ile bu endişe ele almış. İşlemin ardından kesi doku yapıştırıcısı ile kapatılır.

Sık tekrarlanan entübasyonlar gerektiren çalışmalar için, ardışık intübasyon ve bu sitenin kapatılması cilt marjları ve ventral boyun doku travması debridman gerektirir. Oral entübasyona transkutanöz trakeal görüntüleme yaklaşımının amacı, farelerde tek entübasyon olaylarının yanı sıra tekrarlanan entübasyon çalışmaları için özel olarak uygun olan rafine, noninvaziv bir teknik sunmaktır.

Burada açıklanan tüm hayvan faaliyetleri Ohio State Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır ve AAALAC onaylı tesislerde gerçekleştirilmiştir.

1. Prosedür Hazırlığı

1. Entübasyon platformunu oluştur. Uygun platform eğimini elde etmek için, üç inç (7,6 cm) 3 halkalı bağlayıcı kullanın. 15−20 cm uzunluğunda 3-0 ipek veya diğer iplik malzemesini ikiye katlayın ve bir süspansiyon halkası oluşturmak için ipliğin uçlarını bantla eğimli platformun tepesine yapıştırın (Şekil 1).
2. Uygun boyut ve uzunlukta bir kanül seçin.
   NOT: 20−30 g fare için 1−1,5 inç (2,5−3,8 cm) uzunluğunda bir kateter 18 G'ye kadar kullanılabilir. Bu çalışmada 18 haftalık dişi BALB/c ve 10 haftalık C57BL/6 fare (n = 3 her tür) kullanıldı. Opak beyaz kateter kılıfı en iyi transkutanöz görüntülemeyi sağlar.
3. Kateterin distal ucundabir kesve alın ve yuvarlak bir yontma ucu oluşturmak için aşındırıcı kağıt ile kesme yüzeyini düzleştirin. Kanülde eğimli yaklaşık 1 cm'lik hafif bir büküm yavaşça oluşturun (Şekil 2).
   NOT: Her fare için yeni bir kateter kullanılmalıdır.
4. Ketamin (5.4 mg/g vücut ağırlığı) ve intraperitoneal olarak uygulanan ksilazin (16 g/g vücut ağırlığı) ile fareyi anestezi edin.  Gözlere steril oftalmit merhem uygulayın.
   NOT: Uygun anestezik derinlik, farenin sağlam bir parmak sıkışmasına yanıt verilmemesi ile elde edilir.
5. Entübasyon platformunda, açılı yüzeyin üst kısmındaki ipek ipliğin etrafındaki üst kesici dişleri bağlayarak fareyi entübasyon platformunda supine pozisyonunda askıya alın(Şekil 3). Fare dorsal recumbency kare konumlandırılmış sonra, yavaşça kuyruk tabanını kavramak ve masaya doğru kuyruk geri çekmek. Fareyi sabitlemek için kuyruk tabanına bir bant parçası yerleştirin.
6. 30−45 s için ventral servikal bölgeye tüy dökücü krem(Tablo)uygulayın sonra kuru bir gazlı bez kullanarak servikal bölgeden tüm tüy dökücü krem çıkarın. Gerekirse başvuru işlemini tekrarlayın. Iyice tuzlu veya distile su ile cilt durulayın sonra kuru silin herhangi bir kalıntı kaldırmak için.

2. Entübasyon Prosedürü

1. Kanülün tanıtımı için ağzı yeterince açarak dili yavaşça geri çekmek için baskın olmayan elde düz, düz forseps kullanın.
   NOT: Fare diş prizi kullanılmamalıdır, çünkü bu dilin zarar görmesine neden olur.
2. Baskın el ile, hafif viraj distal olan ucu konunun ağzının çatı karşı olacak şekilde ağız içine kanül ilerlemek.
3. Dili bırakın ve kapalı çalgılardüz kenarı manubrium ulaşıncaya kadar ventral boyun boyunca caudally kaydırın. Bu hareket yanal tükürük bezleri yerinden ve trakea kapsayan kas düzleştirir. Trakea transkutan olarak beyaz bir çizgi olarak görünür (Şekil 3A). Gerekirse, kaudal yönde bir deri üzerinde gerginlik korurken bir kraniodorsal yönde forceps döndürmek yanal yerinden tükürük bezleri zirveye neden. Bu manevra trakea etrafında daha fazla kontrast oluşturur (Şekil 3B).
   NOT: Nefes borusunu çökertebileceği ve solunumu bozabileceği nden ventral boyunda aşırı güç kullanmaktan kaçının.
4. Aynı anda bilek eşzamanlı fleksiyon ile baskın el insupination tarafından kanül ventrally distal ucu olta ise kanül ilerletin.
5. Kanülün doğru yerleştirilmesi, opak kanülün trakeadaki görselleştirilmesiile gösterilir (Şekil 4B,D). Kanül, masseter kasının kökeni nin seviyesini geçtiyse ve kanülün nefes borusundaki görselleştirme onaylanmamışsa, kanülü geri alın ve manevrayı yeniden dene.
6. Kanüle bir akciğer şişirme ampulü bağlayarak ve cihazın eşzamanlı depresyonu ile torasik genişleme gözlemleyerek uygun kanül yerleşimi doğrulayın.
7. Kanül yerinden olmadan, farenin kesici kesici lerini entübasyon platformundan dikkatlice çözün. Fareyi yatay bir platforma(Malzeme Tablosu)taşıyın ve kanülü vantilatörün üzerindeki adaptöre takın. Derin enflasyon uzerine fareyi 60 s için havalandırın ve solunum direncini ölçer.

3. Kurtarma

1. Yordam tamamlandıktan sonra fareyi ısıtılmış bir platforma taşıyın. Spontan solunumu teşvik etmek için ışık altı veya kuyruk puşları ile sürekli uyarım sağlayın.
2. Ekstübasyon fare sadece çiğnemeye başladığında oluşabilir. Kavunu göbek seviyesinde tutun ve kanül deneğin ağzından tamamen çıkarılana kadar tüpü yavaşça ve fareden çekin.
   NOT: İyileşme sürecinde mümkün olduğunca uzun süre sert kanül ile hava yolu desteği sağlamak tercih edilir.
3. Bir kez extübasyon, ısı desteği ile temiz bir kurtarma kafesi için fare aktarın. Fareyi tamamen ambulatuar olana ve kurtarma tamamlanana kadar sürekli olarak izleyin.

Bazal pulmoner fonksiyonun seri takibi
On sekiz haftalık dişi BALB/c ve 10 haftalık C57BL/6 fareler (her bir türün n = 3'ü) belirtilen yöntem kullanılarak 0, 3, 10 ve 17. Her gün entübasyon sonrasında, konu % 100 oksijen(Tablo Malzemeler)ile birlikte verilen mekanik bir ventilatöre bağlandı. Solunum direnci (Rrs) 5 s için düzenlenen 25 cm H2O derin bir enflasyon sonrasında 60 s için zorunlu salınım tekniği kullanılarak ölçüldü. Fizyolojik aralıktaki Rrs değerleri ile birlikte bu sürekli nefes tutma ile ilgili hiçbir yazılım hatası kanül uygun yerleşim için ek destek sağlar. Veriler, her bir zorlanmaiçinde zaman noktaları arasında gözlenen ölçülen Rr'lerin anlamlı bir farkını ortaya koymuştur(Şekil 5). Bu zaman içinde Rrs bir artış yokluğu dört ardışık zaman noktaları üzerinde solunum sisteminde travma ile ilişkili inflamasyon eksikliği gösterir varsayılır.

İstatistiksel analiz
Tanımlayıcı istatistikler (ortalama ve standart hata) istatistiksel analiz yazılımı(Tablo)kullanılarak hesaplanmıştır. Kolmogorov-Smirnov yöntemi Gaussian veri dağıtımını doğrulamak için kullanılmıştır. Veri kümelerinin istatistiksel analizleri eşleşmemiş ANOVA tarafından yapıldı ve bir post hoc Tukey-Kramer çoklu karşılaştırma sonrası test ile. Tüm veriler ortalama ± SEM. P < 0.05 istatistiksel olarak anlamlı olarak sunulmuştur.

Şekil 1: Entübasyon platformu. Entübasyon platformu, bir süspansiyon döngüsü oluşturmak için bağlayıcının üstüne yapıştırılı ipek iplik halkası olan üç halkalı bir bağlayıcıdan oluşur. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 2: Kanül hazırlığı. (A) Hazırlanan kanülün yanal görünümü. Kateterin distal ucundaki yuvarlak yamaçtan yaklaşık 1 cm'lik oluşan nazik açıya ve kanülün açısının açıya göre yönünü unutmayın. (B) Hazırlanan kanülün Dorsoventral görünümü. Yonca'nın yuvarlak ve düzgünleştirilmiş kenarına dikkat edin. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 3: Trakeal görselleştirme. (A) Forceps ventral boyun yerleştirilir ve cilt yavaşça tükürük bezleri yerinden ve ventral orta hat (siyah ok) üzerinde beyaz bir yapı olarak trakea görselleştirme sağlamak için caudally geri çekilir. (B) Ventral boyun daki forceps'un kraniodorsal rotasyonu tükürük bezlerinin çıkıntısını oluşturur (*). Trakea tükürük bezleri (siyah ok) arasında ventral orta hat üzerinde beyaz lineer yapı olarak görselleştirilmiştir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 4: Uygun kanül yerleşimi. (A) C57BL/6 fare entübasyon platformu üzerinde bulunan kanül proksimal oral kaviteye tanıtıldı. (B) C57BL/6 fare kanül ile düzgün trakea yerleştirilir. Kanülkolayca trakea (beyaz ok) içinde beyaz yapı olarak görselolabilir unutmayın. (C) BALB/c fare entübasyon panosuna yerleştirilmiş kanül ile proksimal oral kaviteye sokuldu. (D) BALB/c fare kanülile düzgün trakea yerleştirilir. Beyaz kanül nefes borusu (siyah ok) içinde kolayca görüntülenebilir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Şekil 5: Direncin seri ölçümü. Ölçülen Rrs anlamlı farklılıklar her zorlanma içinde zaman noktaları arasında gözlenmiştir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.