Bu makalenin amacı, laboratuvar faresinin entübasyonunun rafine bir yöntemini açıklamaktır. Yöntem noninvaziv ve bu nedenle, solunum fonksiyonu ve / veya akciğer içine tedavilerin indaşseri izleme gerektiren çalışmalar için idealdir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Farelerde Tekrarlanan Orotracheal Entübasyon
Bu makalede
Özet
Özet
Literatürde fare entübasyonu için ya ağız boşluğu ndan glottisin görüntülenmesi ya da nefes borusunda kanül yerleşiminin doğrudan doğrulanması için ventral boyundaki kesi gerektiren çeşitli yöntemler açıklanmaktadır. Bu tür işlemlerle konuya bağlı göreceli zorluk veya doku travması, bir araştırmacının uzunlamasına çalışmalar yapabilmesine engel teşkil edebilir. Bu makalede, ventral boyun saç kaldırmak için bir depilatörü nardından sonra farenin fiziksel manipülasyon ne olursa olsun cilt derecesi ne olursa olsun orotracheal entübasyon için trakea transkutanöz görselleştirme izin veren bir teknik göstermektedir Pigmentasyon. Bu yöntem konuya zararsızdır ve sınırlı bir mürin anatomisi anlayışı ile kolayca elde edilir. Bu rafine yaklaşım, hastalığın ilerlemesini veya tedavilerin indatılması için gerekli olabilecek tekrarlanan entübasyonu kolaylaştırır. Bu yöntemin kullanılması, solunum yolu hastalıklarının fare modellerinde akciğer fonksiyonunu ölçmek için gerekli olan hayvan sayısının azalmasına ve teknik beceriye neden olabilir.
Giriş
Laboratuvar fareinsan solunum hastalığı için ortak bir hayvan modelidir. Bu nedenle, hem tedavilerin instillasyonu hem de solunum mekaniğinin ölçümü amacıyla fare entübasyonu için yayınlanmış çeşitli yöntemler bulunmaktadır. Açıklanan prosedürlerin çoğu bir laringoskop veya fiber optik ışıkkaynağı1,2,3,4,5,6,7gibi özel ekipman ile ağız boşluğu ile glottis görselleştirme gerektirir., Ancak, bu nispeten büyük bir kanül gerekli olduğunda zor olabilir, bu araştırmacının görünümünü gizlemek gibi. Limjunyawong ve ark.8 hangi küçük bir kutanöz kesi trakea görselleştirme için izin ventral boyun orta hattı boyunca yapılır entübasyon yöntemi ile bu endişe ele almış. İşlemin ardından kesi doku yapıştırıcısı ile kapatılır.
Sık tekrarlanan entübasyonlar gerektiren çalışmalar için, ardışık intübasyon ve bu sitenin kapatılması cilt marjları ve ventral boyun doku travması debridman gerektirir. Oral entübasyona transkutanöz trakeal görüntüleme yaklaşımının amacı, farelerde tek entübasyon olaylarının yanı sıra tekrarlanan entübasyon çalışmaları için özel olarak uygun olan rafine, noninvaziv bir teknik sunmaktır.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Burada açıklanan tüm hayvan faaliyetleri Ohio State Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır ve AAALAC onaylı tesislerde gerçekleştirilmiştir.
1. Prosedür Hazırlığı
- Entübasyon platformunu oluştur. Uygun platform eğimini elde etmek için, üç inç (7,6 cm) 3 halkalı bağlayıcı kullanın. 15−20 cm uzunluğunda 3-0 ipek veya diğer iplik malzemesini ikiye katlayın ve bir süspansiyon halkası oluşturmak için ipliğin uçlarını bantla eğimli platformun tepesine yapıştırın (Şekil 1).
- Uygun boyut ve uzunlukta bir kanül seçin.
NOT: 20−30 g fare için 1−1,5 inç (2,5−3,8 cm) uzunluğunda bir kateter 18 G'ye kadar kullanılabilir. Bu çalışmada 18 haftalık dişi BALB/c ve 10 haftalık C57BL/6 fare (n = 3 her tür) kullanıldı. Opak beyaz kateter kılıfı en iyi transkutanöz görüntülemeyi sağlar. - Kateterin distal ucundabir kesve alın ve yuvarlak bir yontma ucu oluşturmak için aşındırıcı kağıt ile kesme yüzeyini düzleştirin. Kanülde eğimli yaklaşık 1 cm'lik hafif bir büküm yavaşça oluşturun (Şekil 2).
NOT: Her fare için yeni bir kateter kullanılmalıdır. - Ketamin (5.4 mg/g vücut ağırlığı) ve intraperitoneal olarak uygulanan ksilazin (16 g/g vücut ağırlığı) ile fareyi anestezi edin. Gözlere steril oftalmit merhem uygulayın.
NOT: Uygun anestezik derinlik, farenin sağlam bir parmak sıkışmasına yanıt verilmemesi ile elde edilir. - Entübasyon platformunda, açılı yüzeyin üst kısmındaki ipek ipliğin etrafındaki üst kesici dişleri bağlayarak fareyi entübasyon platformunda supine pozisyonunda askıya alın(Şekil 3). Fare dorsal recumbency kare konumlandırılmış sonra, yavaşça kuyruk tabanını kavramak ve masaya doğru kuyruk geri çekmek. Fareyi sabitlemek için kuyruk tabanına bir bant parçası yerleştirin.
- 30−45 s için ventral servikal bölgeye tüy dökücü krem(Tablo)uygulayın sonra kuru bir gazlı bez kullanarak servikal bölgeden tüm tüy dökücü krem çıkarın. Gerekirse başvuru işlemini tekrarlayın. Iyice tuzlu veya distile su ile cilt durulayın sonra kuru silin herhangi bir kalıntı kaldırmak için.
2. Entübasyon Prosedürü
- Kanülün tanıtımı için ağzı yeterince açarak dili yavaşça geri çekmek için baskın olmayan elde düz, düz forseps kullanın.
NOT: Fare diş prizi kullanılmamalıdır, çünkü bu dilin zarar görmesine neden olur. - Baskın el ile, hafif viraj distal olan ucu konunun ağzının çatı karşı olacak şekilde ağız içine kanül ilerlemek.
- Dili bırakın ve kapalı çalgılardüz kenarı manubrium ulaşıncaya kadar ventral boyun boyunca caudally kaydırın. Bu hareket yanal tükürük bezleri yerinden ve trakea kapsayan kas düzleştirir. Trakea transkutan olarak beyaz bir çizgi olarak görünür (Şekil 3A). Gerekirse, kaudal yönde bir deri üzerinde gerginlik korurken bir kraniodorsal yönde forceps döndürmek yanal yerinden tükürük bezleri zirveye neden. Bu manevra trakea etrafında daha fazla kontrast oluşturur (Şekil 3B).
NOT: Nefes borusunu çökertebileceği ve solunumu bozabileceği nden ventral boyunda aşırı güç kullanmaktan kaçının. - Aynı anda bilek eşzamanlı fleksiyon ile baskın el insupination tarafından kanül ventrally distal ucu olta ise kanül ilerletin.
- Kanülün doğru yerleştirilmesi, opak kanülün trakeadaki görselleştirilmesiile gösterilir (Şekil 4B,D). Kanül, masseter kasının kökeni nin seviyesini geçtiyse ve kanülün nefes borusundaki görselleştirme onaylanmamışsa, kanülü geri alın ve manevrayı yeniden dene.
- Kanüle bir akciğer şişirme ampulü bağlayarak ve cihazın eşzamanlı depresyonu ile torasik genişleme gözlemleyerek uygun kanül yerleşimi doğrulayın.
- Kanül yerinden olmadan, farenin kesici kesici lerini entübasyon platformundan dikkatlice çözün. Fareyi yatay bir platforma(Malzeme Tablosu)taşıyın ve kanülü vantilatörün üzerindeki adaptöre takın. Derin enflasyon uzerine fareyi 60 s için havalandırın ve solunum direncini ölçer.
3. Kurtarma
- Yordam tamamlandıktan sonra fareyi ısıtılmış bir platforma taşıyın. Spontan solunumu teşvik etmek için ışık altı veya kuyruk puşları ile sürekli uyarım sağlayın.
- Ekstübasyon fare sadece çiğnemeye başladığında oluşabilir. Kavunu göbek seviyesinde tutun ve kanül deneğin ağzından tamamen çıkarılana kadar tüpü yavaşça ve fareden çekin.
NOT: İyileşme sürecinde mümkün olduğunca uzun süre sert kanül ile hava yolu desteği sağlamak tercih edilir. - Bir kez extübasyon, ısı desteği ile temiz bir kurtarma kafesi için fare aktarın. Fareyi tamamen ambulatuar olana ve kurtarma tamamlanana kadar sürekli olarak izleyin.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bazal pulmoner fonksiyonun seri takibi
On sekiz haftalık dişi BALB/c ve 10 haftalık C57BL/6 fareler (her bir türün n = 3'ü) belirtilen yöntem kullanılarak 0, 3, 10 ve 17. Her gün entübasyon sonrasında, konu % 100 oksijen(Tablo Malzemeler)ile birlikte verilen mekanik bir ventilatöre bağlandı. Solunum direnci (Rrs) 5 s için düzenlenen 25 cm H2O derin bir enflasyon sonrasında 60 s için zorunlu salınım tekniği kullanılarak ölçüldü. Fizyolojik aralıktaki Rrs değerleri ile birlik...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Transkutanöz trakeal görme tekniği kullanılarak entübasyon, standart deri kesi yöntemine rafine bir yaklaşım sunar. Birkaç önemli adıma özel dikkat ile, entübasyon kolayca ve hızlı bir şekilde elde edilebilir. Hayvan, entübasyon platformunda fare nin nazik bir şekilde geri çekilmesi ile dorsal recumbency'ye kare olarak yerleştirilmelidir. Bu dikey hizalama ve entübasyon için uygun konumlandırma içine hayvan genişletecektir. Buna ek olarak, tüy dökücü krem 30−45 s'den daha uzun süre hayvanın cildiile temas halinde kalmama...
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Teşekkürler
Yazarlar Lucia Rosas, Lauren Doolittle, Lisa Joseph ve Lindsey Ferguson'a teknik yardımları ve Üniversite Laboratuvarı Hayvan Kaynakları'na hayvan bakım destekleri için teşekkür ediyorlar. Bu çalışma NIH T35OD010977 ve R01-HL102469 tarafından finanse edilmektedir.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 18 G x 1 1/4" intravenöz kateter, Safelet | Fisher Scientific | # 14-841-14 | Entübasyon için kanül |
| 70 etanol, 10 L | Fisher Scientific | 25467025 | Kanül temizleme kanülü |
| Zımpara kağıdı (zımpara kağıdı) | Porter-Cable | 74001201 | Kanül hazırlama |
| AnaSed (ksilazin steril solüsyon) enjeksiyonu (100 mg / mL) | Akorn Hayvan Sağlığı | NDC # 59399-111-50 | Anestezi |
| Mavi etiketleme bandı (0,5 inç x 14 yds) | Fisher Scientific | 15966 | Entübasyon platformunda kısıtlama |
| İğnesiz örgülü ipek sütür, steril olmayan, (3-0) | Henry Schein | Madde #1007842 | Entübasyon platformu |
| Deltafaz İzotermal Ped | Braintree Scientific | 39DP | Fare termoregülasyonu ve geri kazanımı |
| Deltafaz Çalıştırma Board | Braintree Scientific | 39OP | Fare kurtarma (ekstübasyon öncesi) |
| Damıtılmış su | ThermoFisher | 15230253 | Epilasyon sonrası farenin temizlenmesi |
| Göz Makası, açılı, keskin/keskin | Harvard Aparatı | 72-8437 | Kanül hazırlama |
| FlexiVent (FX Modül 2) | Scireq | N/A | Akciğer fonksiyon verilerini kaydedin (prosedürü gerçekleştirmek için gerekli değildir, bu çalışmada prosedürü doğrulamak için kullanılır) |
| Gazlı bez süngerler | Fisher scientific | 13-761-52 | Epilasyon |
| Ağır Hizmet Tipi 3 "3 Halkalı Görünüm Bağlayıcılar | Zımba | 24690CT | Entübasyon platformu |
| Instat Yazılımı Graphpad | N/A | İstatistiksel analiz yazılımı | |
| İnsülin şırıngası (0.5 cc, U100) | Fisher Bilimsel | 329461 | Anestezi uygulaması |
| Ketamin HCl Enjeksiyonu, USP (100 mg / mL) | Llyod Laboratuvarları | Liste No. 4871 | Anestezi |
| Akciğer şişirme ampulü | Harvard Aparatı | 72-9083 | Kanül yerleşimini onaylayın |
| Mikro Forseps, Kavisli, Pürüzsüz | Harvard Aparatı | 72-0445 | Kanül görselleştirme |
| için dili geri çekin ve boyunda gerginlik oluşturunNair (epilasyon losyonu), 9 oz şişe | Church & Dwight | 42010440 | Epilasyon |
| Steril salin (% 0.9), 10 mL | Fisher Scientific | NC9054335 | Anestezi, epilasyon sonrası cildin temizlenmesi |
Kaynaklar
- Spoelstra, E. N., et al. A novel and simple method for endotracheal intubation of mice. Laboratory Animals. 41 (1), 128-135 (2007).
- Rivera, B., Miller, S. R., Brown, E. M., Price, R. E. A Novel Method for Endotracheal Intubation of Mice and Rats Used in Imaging Studies. Contemporary Topics in Laboratory Animal Science. 44 (2), 52-55 (2005).
- Sparrowe, J., Jimenez, M., Rullas, J., Martinez, A. E., Ferrer, S. Refined Intratracheal Intubation Technique in the Mouse, Complete Protocol Description for Lower Airway Models. Global Journal of Animal Scientific Research. 3 (2), 363-369 (2015).
- Deyo, D. J., Wei, J. A Novel Method of Intubation and Ventilation in Mice. Anesthesia & Analgesia. 88 (2), 179(1999).
- Vergari, A., et al. A new method of orotracheal intubation in mice. European Review for Medical and Pharmacological Sciences. 8 (3), 103-106 (2004).
- Brown, R. H., Walters, D. M., Greenberg, R. S., Mitzner, W. A method of endotracheal intubation and pulmonary functional assessment for repeated studies in mice. Journal of Applied Physiology. 87 (6), 2362-2365 (1999).
- Das, S., MacDonald, K., Chang, H. S., Mitzner, W. A Simple Method of Mouse Lung Intubation. Journal of Visualized Experiments. (73), e50318(2013).
- Limjunyawong, N., Mock, J., Mitzner, W. Instillation and Fixation Methods Useful in Mouse Lung Cancer Research. Journal of Visualized Experiments. (102), e52964(2015).
- Qin, W., Baran, U., Wang, W. Lymphatic response to depilation-induced inflammation assessed with label-free optical lymphangiography. Lasers in Surgery and Medicine. 47 (8), 669-676 (2015).
- McGovern, T. K., Robichaud, A., Fereydoonzad, L., Schuessler, T. F., Martin, J. G. Evaluation of Respiratory System Mechanics in Mice using the Forced Oscillation Technique. Journal of Visualized Experiments. (75), e50107(2013).
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
