Bu protokolün amacı, ventral tegmental alan reseptörlerini, alt bölüm dopamin salınımı için katkılarını incelemek için doğrudan manipüle etmektir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Phasic Dopamin'in Ventral Tegmental Alan Reseptör Reseptör Reseptör Düzenlemesini Değerlendirmek için Hızlı Taramalı Döngüsel Voltammetri (CIS-FSCV) ile Kombine infüzyon ve stimülasyon
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Ventral tegmental alandan (VTA) çekirdek akumbens'e phasic dopamin (DA) salınımı, ödül işleme ve pekiştirme öğreniminde önemli bir rol oynar. VTA kontrol fazsik DA sürümüne gelen çeşitli nöronal girdilerin, ödül işleme ve pekiştirme öğrenimini kontrol eden devrenin daha iyi bir resmini nasıl sağlayabileceğini anlamak. Burada, farmakolojik agonistlerin ve antagonistlerin VTA içi kanül infüzyonlarını, in vivo hızlı tarama siklik voltammetri (FSCV) ile ölçülen stimülasyon çağrılı fazik DA salınımı (kombine infüzyon ve stimülasyon veya BDT) ile birleştiren bir yöntemi açıklıyoruz. Uyuşturulmuş sıçanlarda CIS-FSCV kullanılarak, nükleus akumbens çekirdeğinde kayıt yaparken VTA'yı bir kavunla donatılmış bipolar bir elektrotla elektriksel olarak uyararak fazik bir DA yanıtı çağrılabilir. Farmakolojik agonistler veya antagonistler, belirli VTA reseptörlerinin faik DA salınımını yönlendirmedeki rollerini araştırmak için doğrudan stimülasyon bölgesinde aşılanabilir. CIS-FSCV'nin önemli bir yararı, VTA reseptör fonksiyonunun in vitro çalışmalara dayanarak in vivo olarak çalışılabilmesidir.
Giriş
Ventral tegmental bölgeden (VTA) çekirdeğe (NAc) phasic dopamin (DA) salınımı ödülle ilgili davranışlarda hayati bir rol oynar. VTA DA nöronları tonik benzeri bir ateşlemeden (3-8 Hz) patlama benzeri bir ateşlemeye (>14 Hz)1'e geçer ve bu da NAc'ta vurgulu DA salınımı üretir. VTA, tonikten patlama ateşlemeye geçişi kontrol etmek için iyi konumlandırılmış çeşitli somatodendritik reseptörleri ifade eder2,3,4,5. Bu reseptörlerden hangisinin ve ilgili girdilerinin belirlenmesi, fazik DA salınımını kontrol etmek, ödülle il....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm deneyler Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH) Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'na göre yapıldı ve hem Elizabethtown College hem de Yale Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylandı. Bu protokol CIS-FSCV kullanımının uyuşturulmuş sıçan hazırlığına özgüdür.
1. Presurgical hazırlıklar
- Elektrot çözeltisi hazırlama
- Elektrot dolum çözeltisini yapmak için, 140 mM potasyum klorür16ile 4 M potasyum asetat çözeltisi hazırlayın.
- Elektrot hazırlama
- Vakum emiş kullanarak, bir borosilikat cam kılcal damara (uzunluk = 100 m....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
CIS-FSCV, VTA N-metil-D-aspartat reseptörlerinin (NMDAR), nikotinik asetilkolin reseptörlerinin (nAChRs) ve NAc çekirdeğinde fazik DA salınımının yönlendirilmesinde miskarinik asetilkolin reseptörlerinin (mAChRs) işlevini incelemek için kullanılmıştır. Şekil 2 negatif kontrol için temsili verileri gösterir, %0,9 salin infüzyonu, öncesi (taban çizgisi) ve 9 dk postenfüzyon (salin). Şekil 2, y ekseninde potansiyel, x ekseninde zama.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
CIS-FSCV, phasic DA salınımı altında kalan VTA reseptör mekanizmalarını araştırmak için benzersiz bir fırsat sağlar. Doğru bir kayıt sağlamak için iki kritik adım vardır. İlk olarak, uyarılan DA sinyalinde çok az sürüklenme ile kararlı bir taban çizgisi kaydı elde edilmelidir. Kararlı bir kayıt oluşturma olasılığını artırmanın önemli bir yolu, elektrodun hem 60 Hz hem de 10 Hz'de (tipik olarak 60 Hz'de 15 dakika ve 10 Hz'de 10 dakika) döngü yapmak için bolca zamanı olduğundan emin olmaktır. Karbon fiber döngüye alınırken.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Teşekkürler
Çalışmalar Elizabethtown College (R.J.W, M.L. ve L.M.), NSF Graduate Fellowship (R.J.W.) ve Yale School of Medicine (N.A.) tarafından desteklendi.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Elektrot Dolum Çözeltisi / Malzemeleri< / güçlü > | |||
| Mikropipet | Dünyası Hassas Aletler | MF286-5 (28 ölçer) | |
| Potasyum Asetat | Sigma | 236497-100G | |
| Potasyum Klorür | Sigma | P3911-25G | |
| < güçlü > Elektrot Malzemeleri< / güçlü> | |||
| Karbon fiber | Thornel | T650 | |
| Elektrot çektirme | Narishige Uluslararası | PE-22 | Not: yatay çektirmeler de kullanılabilir |
| Cam kılcal | A-M sistemleri | 626000 | |
| Elektrotlar için yalıtımlı teller | Weico Tel ve Kablo Anonim Şirketi | UL 1423 | Uzunluk; 10 cm; çap, 0.4mm; ısmarlama olmalı; yalıtımlı malzeme kapsamalıdır Telin 5 cm'si |
| Işık Mikroskobu (elektrodu görüntülemek ve kesmek için) | Fischer Scientific | M3700 | |
| Pin | Phoenix Enterprises | HWS1646 | Yalıtımlı elektrot teli ve referans elektrodu üzerine lehimlenmek üzere; headstage Putty'ye bağlanır |
| Alcolin | 23922-1003 | Karbon fiberi keserken elektrot yerleştirmek için kullanılır | |
| Scalpal Blade | World Hassas Aletler | 500239 | Karbon fiberi uygun uzunlukta kesmek için |
| Gümüş Tel | Sigma | 327026-4G | |
| FSCV Donanım/Yazılım | |||
| Faraday Kafesi | U-Line | H-3618 (36" x 24" x 42") | |
| Potansiyostat | Univ. of N. Carolina, Elektronik Tesisi | ||
| Uyarıcı elektrot | PlasticsOne | MS303/2-A/SPC | sipariş verirken, kaidenin altında 22 mm'lik bir kesim talep edin |
| TarHeel HDCV Yazılımı | University of North Carolina-Chapel | Hill-a | href<="https://chem.unc.edu/critcl-main/criticl-electronics/criticl-electronics-hardware/" target="_blank"> https://chem.unc.edu/critcl-main/criticl-electronics/criticl-electronics-hardware/ sipariş bilgileri için |
| UEI breakout box | Univ. of N. Carolina, Electronics Facility | https://chem.unc.edu/critcl-main/criticl-electronics/criticl-electronics-hardware/ sipariş için bilgi | |
| UEI güç kaynağı | N. Carolina Üniversitesi, Elektronik Tesisi | https://chem.unc.edu/critcl-main/criticl-electronics/criticl-electronics-hardware/ sipariş için bilgi | |
| Stimulator Hardware | |||
| Nörolog uyaran izolatörü | Digitimer Ltd. | DS4 | Neurolog 800A |
| İnfüzyon/Stimülasyon Malzemeleri | |||
| İnfüzyon Pompası | Yeni Çağ Şırınga Pompası | NE-300 | |
| Dahili Kanül | PlastikleriBir | C315I/SPC DAHILI 33GA | |
| Mikrolitre Şırınga | Hamilton | 80308 | |
| Boru | PlastikleriBir | C313CT/ PKG BORU 023 X 050 PE50< | |
| güçlü>Cerrahi Malzemeler | |||
| Kanül Tutucu | Kopf Aletleri | 1776 P-1 | |
| Pamuk Uçlu Aplikatörler | Vitality Medical | 806 | |
| Elektrot Tutucu | Kopf Instruments | 1770 | |
| Isıtma Yastığı | Kent Scientific | RT-0501 | |
| Povidone İyot | Vitality Medical | 29906-004 | |
| Vidalar | Çalma | Kemik Ankraj Vidaları / Pkg.of 100 | 1.59 mm OD, 3.2 mm uzunluğunda |
| InVivo Metric | E255A | ile Gümüş tel referansı | |
| Vitality Medical | 441408 | ||
| Stereotax | Kopf Instruments | Model 902 (Çift Kol Çubuğu) | |
| Histolojik Malzemeler< / güçlü > | |||
| Formulin | Sigma | 1004960700 | |
| Güç kaynağı | BK Precision | 9110 | |
| Sükroz | Sigma | 80497 | |
| Tungsten mikroelektrot | MicroProbes | WE30030.5A3 | |
| < güçlü > İnfüzyonlar için ilaçlar< / güçlü> | |||
| ((2 R< / em >) -amino-5-fosfonovalerik asit | Sigma Aldrich | A5282 | |
| N-metil-D-aspartat | Sigma Aldrich | M3262 | |
| Mecamilamin hidroklorür (M9020-5mg) | Sigma Aldrich | M9020 | |
| Skopolamin hidrobromür (S0929-1g) | Sigma Aldrich | S0929 |
Kaynaklar
- Grace, A. A., Bunney, B. S. The control of firing pattern in nigral dopamine neurons: burst firing. Journal of Neuroscience. 4 (11), 2877-2890 (1984).
- Lester, D. B., et al. Midbrain acetylcholine and glutamate receptors modulate accumbal dopamin....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
