Method Article

Nitel ve Nicel Histolojik Yöntemlerle Fare Embriyolarında Konjenital Kalp Defektlerinin Analizi

DOI:

10.3791/60926

⸱

March 10th, 2020

 ,  , 
1Department of Biomedical Engineering, Michigan State University, 2Institute for Quantitative Health Sciences and Engineering, Michigan State University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokolde, konjenital kalp defektleri ile ilişkili farelerde gelişimsel fenotipleri nitel ve nicel olarak analiz etme prosedürlerini açıklıyoruz.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Konjenital kalp defektleri (KDE) insanlarda en sık görülen doğum kusuru türüdür ve tüm canlı doğumların %1'ini etkilemez. Ancak, CHD için altta yatan nedenler hala kötü anlaşılmaktadır. Gelişmekte olan fare CHD çalışması için değerli bir model oluşturmaktadır, fareler ve insanlar arasında kardiyak gelişim programları son derece korunur çünkü. Protokol, istenilen gebelik evresinde fare embriyolarının nasıl üretilebildiğini, kalbi aşağı işleme için izole etme ve koruma yöntemlerini, histoloji ile yaygın chd türlerini belirlemek için nicel yöntemlerin (örn. ventriküler septal) nasıl üretilmelerini ayrıntılı olarak açıklar. defektleri, atriyal septal defektler, patent ductus arteriosus) ve ortak kas sıkıştırma fenotiplerini ölçmek için kantitatif histomorfometri yöntemleri. Bu yöntemler, bilim adamlarının CHD'yi doğru ve tekrarlı bir şekilde ölçmelerine olanak tanıyan numune hazırlama, toplama ve analiz ile ilgili tüm adımları ifade edeyim.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

KDE'ler insanlarda en sık görülen doğum kusuru türüdür ve doğum kusuruna bağlı ölümlerin önde gelennedenidir 1,2,3,4,5,6. Yenidoğan çocukların yaklaşık% 90 ChD hayatta olmasına rağmen, sık sık hastalarınyaşamları ve sağlık sistemi7,8,9,10ağır bir yük empoze, yıllar içinde önemli morbidite ve tıbbi müdahaleler ile ilişkilidir. Tamamen genetik fakt....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu makalede atıfta bulunulan deneylerde kullanılan tüm hayvanlar Michigan State Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) hayvan bakım yönergeleri kullanılarak tedavi edildi.

1. Embriyo üretimi için C57BL6/J farelerinin zamanlı kenetlemesi

  1. Fareler üreme yaşına (6-8 hafta) ulaştıktan sonra, onları harem üreme biçiminde (yani bir erkek başına iki dişi) bir araya getirin. Öğleden sonra ya da akşam ıslah ıslahı için ayarlayın.
    NOT: Fareler genellikle 1 saat içinde ışıklar kendi konut tesisi içinde kapatıldıktan sonra içinde ürerler. Dişiler yaklaşık 6-8 aylıkken üremeden emekli olmalı ve erkekler en geç 12 ayl....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kas sıkıştırma indeksi iki farklı ortam, bir kontrol ve deneysel bir grup altında gelişen kalpler arasında karşılaştırıldı. Bu protokoller, istatistiksel analize izin veren kas dokusunun sıkıştırmasını kantitatif olarak analiz etmek için kullanılmıştır. Kas sıkıştırma deneysel olmayan koşullarda geliştirilen embriyolara göre deneysel kalplerde önemli ölçüde azalmış olduğu gösterilmiştir.

Gözlem zamanlaması yanlış görünüyorsa emb.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu protokol, embriyonik kalplerde kardiyak gelişimanalizinde yer alan teknikleri inceler. Bu yöntemin bazı sınırlamaları, pratik gerektirebilir hazırlık teknikleri için gerekli fiziksel el becerisi ve mikroskop görüntüleme ile beceri vardır. Kriyostatta elde edilen dilimler dağınıksa, hematoksilin ve eozin boyama net olmayacaktır veya mikroskopta çekilen görüntülerde kötü Aydınlatma varsa, ImageJ ile kullanılan yöntem çalışmaz. ImageJ yazılımının eşik özelliğinin bir sınırlaması, piksel değerine bağlı bir eşiğin bir ucun.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların bildirecek bir açıklamaları yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Aguirre Lab Ulusal Kalp tarafından desteklenir, Akciğer, ve Kan Enstitüsü Ulusal Sağlık Enstitüleri ödül numarası K01HL135464 altında ve Amerikan Kalp Derneği tarafından ödül numarası 19IPLOI34660342 altında.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
15 mL Konik Tüp(ler)Fisher Scientific# 1495970C
C57BL/6J FarelerJackson LabsC57BL/6J - stok 000664
Coplin Boyama Kavanozları (x6)VWR Scientific# 25457-006
Lameller 24X50MM #1.5VWR Scientific# 48393-241
Kriyostat - Leica CM3050SLeicaN/A
Diseksiyon Çanak(lar)ıFisherScientific# 50930381
Dumont #5 - İnce Forseps (x2)Güzel Bilim Araçları# 11254-20
Eozin YÇözeltisi Millipore Sigma# HT110116-500ML
Etil Alkol (Saf, 200 kanıt)Fisher Scientific# BP2818-500
Etilendiamintetraasetik asit (EDTA)Millipore Sigma# E9884-100G
EukittMillipore Sigma# 03989-100ML
İnce MakasGüzel Bilim Araçları# 14060-10
Floresan Stereo Mikroskop Leica M165 FCLeicaN / A
GlisinMillipore Sigma# 410225-250G
Graefe ForsepsGüzel Bilim Araçları# 11052-10
Graphpad Prism 8 YazılımıGraphpad
ImageJ YazılımıImageJ
KimwipesFisher Scientific# 06666A
Mayer'in hematoksilen çözeltisiMillipore Sigma# MHS16-500ML
Mikropipet uçları - p200Fisher Scientific# 02707448
Microsoft Excel YazılımıMicrosoft
OCT BileşikVWR Bilimsel# 102094-106
Olympus CkX53 MikroskopOlympus
Boya Fırçaları (en az 2)
ParaformaldehitVWR Bilimsel# 0215014601% 4 çözelti haline getirin (PBS içinde çözülmüş)
Pasteur pipetleri (ler)Fisher Scientific# 13-711-7M
Penisilin-StreptomisinThermoFisher Scientific# 15140122
Fosfat Tamponlu Salin (PBS)ThermoFisher Scientific# 70011044önce 10x'ten 1x'e seyreltin
# MS1602TS
ScaleMettler Toledo# MS105
Neşter Sapı #VWR Scientific# 10161-918
Neşter BıçaklarıVWR Scientific# 21909-612
Kare KalıpVWR Scientific# 100500-224OCT kalıpları için
SükrozMillipore Sigma# S9378-500G
Superfrost Plus SlaytlarFisher Scientific# 1255015
Cerrahi MakasGüzel Bilim Araçları# 14002-14
Tissue-Tek Accu-Edge Tek Kullanımlık Mikrotom BıçaklarıVWR Scientific# 25608-964
Seyahat ÖlçeğiAcculabVIC 5101
KsilenMillipore Sigma214736-1L
Scale Mettler Toledo# kullanmadan 3

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kathiresan, S., Srivastava, D. Genetics of human cardiovascular disease. Cell. 148 (6), 1242-1257 (2012).
  2. Sun, R., Liu, M., Lu, L., Zheng, Y., Zhang, P. Congenital Heart Disease: Causes, Diagnosis, Symptoms, and Treatments. Cell Biochemistry and Biophysics. 72

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Congenital Heart DefectsMouse EmbryosHistological MethodsTissue AnalysisHeart IsolationCryosectioningMuscle CompactionParaformaldehyde FixationImage AnalysisQuantitative Histomorphometry

Related Articles