Gut homojen özler ve immünofloresan boyama kullanılarak bu çalışmada açıklanan ex vivo tsay GI sisteminde Candida albicans hiphal morfogenez incelemek için yeni bir yöntem temsil eder. Bu yöntem bağırsakta morfogenetik geçişi düzenleyen çevresel sinyalleri araştırmak için kullanılabilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Bir Ex vivo Assay Gastrointestinal Sistemde Candida albicans Hyphal Morphogenesis Çalışma
Bu makalede
Özet
Özet
Candida albicans gastrointestinal hyphal morfogenez (GI) yolu sıkı çeşitli çevresel sinyaller tarafından kontrol edilir, ve bu fırsatçı mantar patojenin yayılması ve patogenezönemli önemli bir rol oynar. Ancak, in vivo GI sisteminde mantar hyphae görselleştirmek için yöntemler bu morfogenez sürecini kontrol çevresel sinyallerin anlaşılmasını sınırlar zordur. Burada açıklanan protokol, gut homojen özlerde hiphal morfogenezinin görselleştirilmesi için yeni bir ex vivo yöntemi göstermektedir. Bir ex vivo tsay kullanarak, Bu çalışma göstermiştir ki antibiyotik tedavi farelerden cecal içeriği, ancak tedavi edilmemiş kontrol fareler, bağırsak içeriğinde C. albicans hiphal morfogenezi teşvik. Ayrıca, antibiyotik tedavi farelerden sekal içeriğine bağırsak metabolitleri belirli gruplar geri ekleyerek farklı hiphal morfogenez ex vivo düzenler. Birlikte ele alındığında, bu protokol tanımlamak ve C. albicans hyphal morfogenez gi sisteminde kontrol çevresel sinyalleri araştırmak için yeni bir yöntem temsil eder.
Giriş
Candida albicans normalde kommensal bir fırsatçı, polimorfik mantar patojen, ancak bağışıklık tehlikeyebireylerdeyaşamı tehdit eden enfeksiyonlara neden yeteneğine sahip öldürücü bir forma morfolojik bir değişim geçirebilir 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm hayvan protokolleri Midwestern Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından57önce açıklandığı gibi onaylanmıştır. Midwestern Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi, #2894 MWU IACUC Protokolü kapsamında bu çalışmayı onayladı. MWU hayvan bakım politikaları, Laboratuvar Hayvanlarının İnsani Bakımı ve Kullanımına Ilişkin Halk Sağlığı Hizmeti (PHS) Politikası'nı ve Hayvan Refahı Yasası'nda (AWA) belirtilen politikaları izler.
1. Fareler çalışma standart protokol
- Erkek ve dişi C57BL/6J fareleri en az altı haftalık kullanın. Cefoperaz (0.5 mg/mL) ile steril su ile....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Thangamani laboratuvarı60 önceki bulgular ile birlikte bu sonuçlar C. albicans mide, ince bağırsak ve tedavi edilmemiş kontrol ve antibiyotik tedavi farelerin kalın bağırsak alınan bağırsak homojenate özleri ex vivo yetiştirilen zaman, C. albicans genellikle bir maya morfolojisi ile gelişir göstermektedir(Şekil 1B). Ancak, antibiyotik le tedavi edilen farelerden sekal ekstresinde yetiştiğinde, C. albicans kolayca morfogenez uğrar, maya ve hy.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Burada açıklanan yöntem, antibiyotik, diyet, ksenobiyotik ve terapötik etkileri nin C. albicans hyphal morfogenezi üzerindeki etkisini araştırmak için yeni bir yol sunar GI sisteminde. Sistemik enfeksiyonların çoğunluğu GI sistemi kaynaklanan olduğundan21,22,23,24,25,26,27,
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların hiçbir rakip mali çıkarları veya diğer çıkar çatışmaları var.
Teşekkürler
Yazarlar, Midwestern Üniversitesi Hücresel ve Moleküler Çekirdek Araştırma tesisinin kaynaklarını ve desteğini kabul ediyor.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 1 - 10 ve mikro; L Pipet Uçları | Fisher Scientific | 02-707-454 | Çeşitli |
| 100 - 1000 & mikro; L Pipet Uçları | Fisher Scientific | 02-707-400 | Çeşitli |
| 20 - 200 & L Pipet Uçları | Fisher Scientific | 02-707-451 | Çeşitli |
| 2-metilbütirik asit | Sigma | 193070-25G | hifal inhibitör bileşik |
| 488 keçi anti-tavşan IgG | Invitrogen (Fisher) | A11008 | IF Boyama ikincil ab |
| Agar | Fisher | BP1423-500 | YPD agar bileşeni |
| Otomatik Görüntüleme Mikroskobu | Keyence | BZX700 | |
| Candida Albicans Antikoru | İnvitrojen (Fisher) | PA1-27158 | IF Boyama primer ab |
| sefoperazon | Cayman | 16113 | antibiyotik |
| deoksikolik asit | Sigma | 30960 | hifal inhibitör bileşik |
| D-Glikoz | Fisher | D16-500 | hifal teşvik edici bileşik |
| forseps | Fisher | 08-885 | |
| laktik asit | Alfa Aesar | AAAL13242-06 | hifal inhibitör bileşik |
| litokolik asit | Sigma | L6250-10G | hifal inhibitör bileşik |
| palmitik asit | Sigma | P5585-10G | hyphal inhibitör bileşik |
| Paraformaldehit | Alfa Aesar | A11313 | IF Boyama sabitleyici |
| Fosfat tamponlu salin (PBS), 10x | Alfa Aesar | J62692 | PBS bileşeni |
| p-tolilazetik asit | SCBT | sc-257959 | hif inhibitör bileşik |
| sebasik asit | Sigma | 283258-250G | hif inhibitör bileşik |
| keskin uçlu makas | Fisher | 28301 | |
| steril Milli-Q su | N/A | N/A | Çeşitli |
| YPD Et suyu | BD Biosciences | 242810 | YPD agar bileşeni |
Kaynaklar
- Huffnagle, G. B., Noverr, M. C. The emerging world of the fungal microbiome. Trends in Microbiology. 21 (7), 334-341 (2013).
- Wisplinghoff, H., et al. Nosocomial bloodstream infections in US hospitals: analysis o....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
