Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Kritik Ekstre İskemisi Olan Anjiyoplasti Tedavisi Gören Hastalarda Lokal Dolaşımdaki Mononükleer Progenitör Hücreler Kullanılarak Amputasyonun Tahmin Edilmesi

3K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/61503

⸱

22 Eylül 2020

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Experimental Metabolism and Clinical Research Laboratory, Clinical Research Department, Division of Biomedical Research, Centro Médico Nacional 20 de Noviembre, ISSSTE, 2Vascular Surgery and Angiology Department, Centro Médico Nacional 20 de Noviembre, ISSSTE, 3Regenerative Medicine and Tissue Engineering Laboratory; Coordination of Research, Centro Médico Nacional 20 de Noviembre, ISSSTE

Bu makalede

Özet

Kritik Uzuv İskemisinde (CLI) tıkalı damarların anjiyoplastiden sonra bile alt eksüda amputasyonu oluşabilir. Mononükleer Progenitör Hücreler (MPC' ler) vasküler onarımı yansıtır. Mevcut protokol, MPC'lerin anjiyoplastiye yakın dolaşımdan nicelliğini ve endotel disfonksiyonu ile ilişkisini ve alt ektremite amputasyonunu tahmin etmeyi açıklamaktadır.

Özet

Kritik uzuv iskemisi (CLI), periferik arteriyel hastalığın ileri evresini temsil eder. Anjiyoplasti alt ekstuziteye kan akışını iyileştirir; bununla birlikte, bazı hastalar geri dönüşümsüz olarak uzuv amputasyonuna ilerler. Vasküler hasarın boyutu ve damar onarım mekanizmaları anjiyoplasti sonrası sonucu etkileyen faktörlerdir. Mononükleer Progenitör Hücreler (MPC'ler) damar hasarlarına ve onarımına, damar hastalıklarını yansıtma yeteneğine sahiptir. Mevcut protokol, anjiyoplasti bölgesine yakın damardan kan dolaşımından elde edilen MPC'lerin nicelliğinin yanı sıra endotel disfonksiyonu ile ilişkisini ve CLI'li hastalarda anjiyoplastiden sonraki 30 gün içinde uzuv amputasyonu için tahmin yeteneğini açıklamaktadır.

Giriş

Periferik Arteriyel Hastalık (PAD), kan akışının sınırlandırılması ile kronik ve ilerleyici bir damar tıkanıklığı ile karakterizedir1. Küresel ölçekte, alt uzuvların PAD'i yaşlı nüfusun yaklaşık% 10'unu etkilerken, bu tür vakaların% 7'sine kadar uzuv amputasyon2,3.

Kritik Uzuv İskemisi (CLI), PAD1'inen ciddi sunumunun temsilini temsil eder. Hastalar genellikle tıkalı arterlere atfedilebilecek istirahat, ülser veya kangren ağrısı yaşarlar; klinik prognoz elverişsiz iken ve 1 yıl boyunca% 30 uzuv amputasyon ve mortalite riski ile işaretlenmiştir3,4,5.

Anjiyoplasti, CLI'li hastalarda alt ektremiteye kan akışını geri getirebilen minimal invaziv bir endovasküler prosedürdür; bununla birlikte, bazı hastalar kaçınılmaz olarak anjiyoplasti tedavisinden sonra bile büyük uzuv amputasyonu gerektirecektir1,5. Anjiyoplasti sonrası elverişsiz sonuçların erken tanımlanması, tedavi uygulama olasılığı nedeniyle oldukça değerlidir.

Geleneksel risk faktörleri, anjiyoplasti uygulanan hastalarda majör uzuv amputasyonu için sınırlı bir tahmin yeteneği sağlayabilir6. Patofizyoloji odaklı biyobelirteçler, vasküler yaralanmaya bağlı hastalıklarda özellikle yararlı olabilecek potansiyel klinik uygulamalarla yeni yöntemleri temsil eder7. Günümüzde, aterosklerotik plak yerinde endotel onarım özelliklerine sahip hücresel popülasyonların katılımı giderek daha fazla tanınmaktadır8,9.

Mononükleer Progenitör Hücreler (MPC' ler) kemik iliğinden türetilir ve damar rejeneratif yetenekleri olan kök hücrelerin kendi yapısal ve fonksiyonel özelliklerine sahiptir. MPC'nin çoğalma, göç etme ve damar yapışması gösterme yeteneği nedeniyle; bu hücreler iskemi 10 , 11,12'ye yanıt olarak endotel onarımını yansıtmak için iyi adaylarhaline gelmiştir. Ek olarak, vasküler yaralanmanın altında kalan mekanizmalara sürekli ilgi, lokal meydana gelen biyobelirteçlerin prognostik rolünü keşfetmeye motive olmuştur, çünkü damar hasarını yansıttığı veonarım 7,13,14.

Bu çalışmanın amacı, anjiyoplasti uygulanan CLI'li hastalarda damar tıkanıklığına yakın dolaşımda olan MPC miktarının nasıl belirlendiğini tanımlamaktır; ve endotel disfonksiyonu ve uzuv amputasyon göstergeleri ile MPC'ler arasındaki ilişkinin nasıl değerlendirileceği.

Komorbiditelere ve içsel vasküler özelliklere dayalı prognoz ile karşılaştırıldığında, lokal MPC'lerin miktarı endotel disfonksiyonu ve uzuv amputasyonu ile ilgili klinik sonucu tahmin etme konusunda spesifik bir yetenek göstermektedir. Sürekli olarak, bazı çalışmalar PAD15,16ile hastaların değerlendirilmesi sırasında benzer biyobelirteçlerin prognostik rolünü tanımlamaktadır.

Önceki sonuçlara dayanarak7, burada açıklanan yöntem, alt ektöz ve koroner iskemi, inme, vaskülit, venöz tromboz ve damar yaralanması ve onarımı içeren diğerleri gibi çeşitli klinik ortamlarda olumsuz vasküler sonuçlar riski altındaki popülasyonun erken tanımlanması için yararlı olabilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Centro Médico Nacional "20 de Noviembre" ISSSTE'den kurumsal araştırma etik komitesi bu olası protokolü onayladı, tüm kayıtlı hastalar yazılı bilgilendirilmiş onay verdi.

1. Alt ektremite vasküler bloğun değerlendirilmesi, kan örneklemesi ve balon anjiyoplasti

NOT: Bu deney için kullanılan çalışma örneği, 68 yaşında ve 20 hastadan 10'unun erkek olduğu 20 diyabet hastasından oluşmaktadır. Örneğin yarısı sigara içenlerdi ve en yaygın ko-morbiditeler tip 2 diabetes mellitus, sistemik arteriyel hipertansiyon ve/veya dislipidemiydi. Örneklem yaş, cinsiyet ve yandaş hastalık için standart hale getirilmiştir. MPC'ler ve CLI arasındaki ilişki üzerindeki klinik-demografik etki nedeniyle olası önyargı göz ardı edilemedi.

  1. Uzuv iskemisinin klinik şiddetini Rutherfordsınıflandırması 13'e göre değerlendirin (bkz. Ek Tablo 1).
  2. Alt ektremite anjiyografisi, kan örneklemesi ve balon anjiyoplasti gerçekleştirin.
    1. Ameliyattan önce antikoagülan ve anestezik ilaçlar kullanın.
    2. Seçilen kasık yerindeki kan damarına 18 G'lik bir iğne yerleştirin.
    3. Bir indeksleyici yerleştirin ve esnek bir kılavuz tel ilerletin. Ardından, ilk kılavuz bir 6 Fr indirici için daha da değiştirilir.
    4. Arter yörüngesini ve damar tıkalı bölgeleri tanımlamak için floroskopik kılavuz altında kontrast ortam veya CO2'nin periyodik enjeksiyonunu kullanın (Şekil 1).
      NOT: Kontrast medya 40 cc, %0,9 tuzlu suda 1:1 seyreltilmiş veya12 psi basınçta atış başına 10 ila 20 mL'de CO 2 kullanın.
    5. Gemiye iki adet 0.014 Fr navigasyon kılavuz teli ve iki adet 0.014 Fr destek kılavuz teli tanıtın ve bunları engellenen bölgeye kadar ilerletin.
      NOT: Navigasyon için iki adet 0.014 Fr kılavuz tel (260 cm uzunluğunda) ve tek bir işlem sırasında destek için iki adet 0.014 Fr kılavuz tel (260 cm uzunluğunda) kullanılır.
    6. 5 Fr ve 3 Fr kateterleri sırayla tanıtın ve damar tıkanıklığına en yakın yerden 10 mL kan toplayın. Kan örneklerini buzda tut.
      NOT: Kateter boyutları 5 Fr ve 3 Fr olabilir ve işlem sırasında değiştirilir.
    7. Kılavuz teli tekrar ilerletin. Ardından, kateterin ucunda bulunan şişme bir balon içeren anjiyoplasti balon kateterini tanıtın. Anjiyoplasti balon kateterini ilerletin ve balonu lezyon bölgesine yerleştirin. Balonu damar duvarında bulunan blokaj plağı ile şişirerek anjiyoplastiyi gerçekleştirin. Kan akışı restorasyonu doğrulayın.
      NOT: İşlemden sonra atardamarın açık kalmasına yardımcı olmak için tıkalı bölgeye stent yerlenebilir.
    8. Bir kateter tanıtın ve damar bloğuna en yakın bölgeye ilerleyin. Anjiyoplastiden sonra 30 dakika zaman aralığında 10 mL kan toplayın. Kan örneklerini buzda tut.
      NOT: Anjiyoplasti öncesi ve sonrası kan örneklerinin toplanması, anjiyoplasti'nin MPC sayısı üzerindeki etkisini daha fazla değerlendirmek için önerilir.
    9. Floroskopik rehberlik altında tüm telleri çıkarın.
    10. Her 12 saatte bir 1 mg/kg deri altı, aspirin 100 mg, statin ve analjezi kullanarak anti-koagülasyon tedavisi de dahil olmak üzere ameliyat sonrası bakım prosedürleri sağlayın. 24 saat boyunca vasküler delinme yerinde sıkıştırın.

2. Dolaşımdaki mononükleer progenitör hücrelerin (MPC' ler) nicelleştirilmesi (Şekil 2)

  1. Taze bir 15 mL konik tüpe, toplanan kanın 6 mL'lik kısmını aktarın ve PBS ile 1:1 (v/v) seyreltin.
    NOT: Kanı toplama işleminden itibaren 1 saat içinde işleyin.
  2. Her biri 3 test tüpüne 2 mL yoğunluk degrade ortası ekleyerek yoğunluk degrade ayrımına hazırlanın. Ardından, her test tüpüne seyreltilmiş kanın 3 eşit hacimli aliquots ekleyin.
    NOT: Test tüpü maksimum kapasitesinin dörtte üçünü aşmayın.
  3. 4 °C'de 30 dakika boyunca 1.800 x g'da santrifüj. Pipet kullanarak halka olarak mevcut arayüz katmanını toplayın ve yeni bir tüpe aktarın. 2 mL PBS ekleyin ve 4 °C'de 6 dakika boyunca 1.800 x g'da döndürün. Bu MPC'ler içereceği için peleni kaydedin.
  4. MPC'ler içeren peleti, 2.3. Her yıkama için taze PBS kullanın ve 4 °C'de 2 dakika boyunca 1.800 x g'da döndürün. İşlemi 6 kez tekrarlayın.
  5. Son yıkamadan sonra, hücre peletini yeniden kullanmak için 1 mL PBS kullanın. Hücre süspansiyonunun 20 μL'sini % 0,4 trippan mavisi, 1:1 (v/v) 20 μL ile seyreltin. Hemositometre ve hafif mikroskop kullanarak hücre sayımı için bu hücre süspansiyonunun 10 μL'liğini kullanın.
  6. Aliquot 1 x 106 MPC'ler daha önce etiketlenmiş 5 mL akış sitometri tüplerinde.
    NOT: karşılık gelen izotip uyumlu kontrol antikorlarını hazırlayın.
  7. Tüpleri 4 °C'de 6 dakika boyunca 1.800 x g'da santrifüj edin. Aspirat ve üstnatant atmak.
  8. Birincil antikoru 100 μL antikor inkübasyon çözeltisinde seyreltin [1x PBS, pH 7.4, EDTA 2 mM, BSA% 0.05] ve tüpe ekleyin. 10 sn için yeniden satın ve karanlıkta 4 °C'de 20 dakika kuluçkaya yaslanın.
    NOT: Mevcut protokolde kullanılan primer antikorların son konsantrasyonları CD45 1:50, CD34 1:20, KDR 1:50, CD184 1:20, CD133 1:50 olarak belirlendi. PBS'de %4 paraformaldehitte lenfositler sabitlenerek ve numuneler 4 °C'de 24 saate kadar depolanarak protokol bu adımda durdurulabilir.
  9. 4 °C'de 2 dakika boyunca 1.800 x g'da santrifüj ve süpernatantı atın. 500 μL 1x PBS, pH 7.4, EDTA 2 mM'de yeniden biriktirin.
  10. Akış sitometrisi analizi gerçekleştirin.
    1. Arka planı izotiple eşleşen kontrol antikorlarıyla ayarlayın. Daha sonra, FSC / SSC arsasında, hücresel kalıntıları, artık granülositleri ve diğer parçacıkları dışlamaya çalışan lenfositleri seçin. Bu tür bir dağılım% 100 olarak kabul edilir.
      NOT: Lenfositler genellikle arsanın sol alt bölgesinde yayılır.
    2. Yüksek sayıda CD45 + veCD34+ içeren ortak immünofenotip içeren bir kapı kullanın. Ardından, daha önce CD45 + , CD34+'yı tanımlayan kapıyı kullanarak ve KDR (VEGFR-2)+, CD133 + veya CD184+ ekleyerek çift pozitif immünofenotipler için seçin. MPC alt nüfuslarını belirli hücre yüzeyi işaretçilerine göre tanımlayın. Geçişli olayların yüzdesi olarak raporla.
  11. MPC'lerin ana alt nüfuslarını tanımlayın. Bu çalışmada analiz edilen immünofenotipler CD45+CD34+CD133+; CD45+CD34+CD184+; CD45+CD34+CD133+CD184+; CD45+CD34+KDR+; CD45+CD34+KDR+CD133+ ve CD45+CD34+KDR+CD1847,17.
    NOT: Çalışma için bu hücre yüzey belirteçleri kullanılmıştır: CD45 (lenfositler), CD34 (endotel ve/veya vasküler hücreler), KDR (VEGFR-2) (endotel hücrelerinin zar belirteci), CD133 (endotel progenitör hücreler) ve CD184 (hematopoetik kök hücreler ve endotel hücreleri).

3. MPC'lerin endotel fonksiyonunun ve hemodinamik testin (FMD) değiştirilmesiyle ilişkisi

  1. Akış aracılı genişlemeyi (FMD), anjiyoplasti öncesi ve sonralarını belirleyin.
    1. Brakial arterin çapını ölçmek için vasküler doğrusal dönüştürücü kullanın.
    2. Sfigmomanometrenin manşetini ön koldaki ölçüm alanının üzerine yerleştirin ve sistolik kan basıncının 5 dakika boyunca 50 mmHg üzerinde insufflate edin ve söndürün.
    3. Sonraki 60 s içinde brakial arterin çapını tekrar belirleyin. FMD'yi tahmin etmek için aşağıdaki denklemi kullanın.
      NOT: 100 / bazal çapı × denklemi (%) = (geçici iskemi sonrası maksimum çap - bazal çap) kullanarak dilatasyon derecesini hesaplayın.
  2. MPC sayısını FMD'nin temel FMD değeri ve anjiyoplasti sonrası deltası ile ilişkilendirin.

4. MPC'lerin uzuv amputasyonu için prognostik yeteneği

  1. Balon anjiyoplasti ve hasta taburcu olduktan sonra, alt ektriğe kan akışının kalitesini değerlendirmek için periyodik tıbbi randevular planlayın.
  2. Anjiyoplastiden 2 hafta sonra uzuv iskemisinin klinik şiddetini değerlendirin. Rutherford sınıflandırmasına göre istirahat ağrısını, daha düşük iskemiyi ve fonksiyonel bir ayağın korunmasını değerlendirin13.
  3. Uzuv iskemisinin klinik şiddetini taban çizgisine ve takibe karşı karşılaştırın. Elverişsiz sonuç nedeniyle büyük amputasyon gerektiren vakaları tanımlayın.
  4. MPC sayısını alt ekstremitenin majör amputasyonu gerektiren hastaların oranı ile ilişkilendirin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Tıkalı arterlerden alınan kan örnekleri, anjiyoplasti için ele alınan yerde, 68 yaşında ve 20 hastadan 10'unun erkek olduğu 20 diyabet hastasından alındı. Örneklem nüfusunun yarısı sigara içenlerdi. Vasküler lezyonlar esas olarak Rutherford sınıf VI olarak puanlandı; hastalar tip 2 Diabetes Mellitus (0), hipertansiyon (p) prevalansı daha yüksekti. ve dislipidemi (U).

Alt ektremite anjiyoplasti sonrası 30 günlük klinik takip yapıldı. Anjiyoplasti sonrası taban çizgisi veya dinamiklerdeki MPC al...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Damar bloğunun hassas yerinde kan toplanması teknik zorluklar gösterebilir; bu nedenle damar bloğuna yakın bir yerde kan alma işlemi gerçekleştirdik. Aynı şekilde, vasküler plaklara yakın MPC miktarı oldukça dinamik görünmektedir ve anjiyoplasti öncesi ve sonrası varyasyonlara neden olabilir. Gözlemlerimize göre, vasküler hasar ve onarımda meydana gelen çeşitli patofizyolojik süreçleri yansıtabileceğinden, MPC sayısındaki taban çizgisi ve 30 dakika sonrası anjiyoplasti değişikliklerinin değerlendirilmesi önerilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Teşekkürler

Yazarlar, 356.2015 proje kimliği için Kurumsal Program E015'in desteğine teşekkür eder.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
BSARoche,tamponlama maddesi, stabilizatör, standart ve karıştırma için Sığır Serum Albüminini (BSA) 10735086001.
Kalibrasyon BoncuklarıMiltenyi Biotec / MACS# 130-093-607MACQuant kalibrasyon boncukları,% 0.05 sodyum azid içeren sulu çözelti içinde sağlanır. 100 teste kadar 3,5 ml
CD133 / 1 (AC133) -PEMilteny Biotec / MACS# 130-080-801içinde R-Fikoeritrin'e konjuge antikor
Miltenyi Biotec / MACS# 130-103-798Monoklonal, İzotip rekombinant insan IgG1, konjuge
CD309 (VEGFR-2 / KDR) -APCMiltenyi Biotec / MACS# 130-093-601PBS / EDTA tamponu CD34-FITC'de R-Fikoeritrin'e konjuge antikor
Miltenyi Biotec / MACS# 130-081-001Monoklonal antikor klonu AC136, CD34
CD45- VioBlueMiltenyi Biotec / MACS# 130-092-880'insınıf III epitopunu tespit ederMonoklonal CD45 Antikoru, insan konjuge
Konik TüplerThermo SCIENTIFIC# 33965115ml konik santrifüj tüpleri
Sitometri TüpleriFALCON Corning Marka# 3520525 mL Polistiren Yuvarlak Tabanlı Tüp. 12x75 tarzı. Steril.
EDTABIO-RAD#161-0729Ağır metaller, (Pb olarak) < 10 ppm, Fe< 0.01%, As< 1ppm, çözünmezler< 0.005
% Geliştirilmiş NeubauerMarkasızKatalog numarası olmadanHücre sayımı için hemositometre. (aralık 0.1000mm, 0.0025mm2)
K2 EDTA Kan Alma TüpleriBD Vacutainer# 367863Leylak plastik vakum tüpü (K2E) 10.8mg, 6 mL.
LymphoprepKök Hücre Teknolojileri01-63-12-002-ASteril ve endotoksinlerin varlığı kontrol edilir. Yoğunluk: 1.077 & plusmn; 0.001g/mL
ParaformaldehitSIGMA-ALDRICHBiyolojik numunelerin fiksasyonu, (toz, %95)
Pipet Transferi 1,3 mLCRM GlobePF1016, PF1015Transfer pipeti, sıvı transferini daha yüksek doğrulukla kolaylaştıran bir araçtır.
Test TüpleriKIMBLE CHASE45060 13100Isıya dayanıklı test tüpleri. BOYUT/KAPAK 13 x 100 mm
PBS / EDTA tamponu CD184 (CXCR4) -PE-VIO770 #SZBF0920V

Kaynaklar

  1. Serrano-Hernando, F. J., Martín-Conejero, A. Peripheral artery disease: Pathophysiology, diagnosis and treatment. Revista Española de Cardiología. 60 (9), 969-982 (2007).
  2. Agarwal, S., et al. Burden of re-admissions among patients with critical limb ischemia. Journal of the American College of Cardiology. 69 (15), 1897-1908 (2017).
  3. Kolte, D., et al. Thirty-day re-admissions after endovascular or surgical therapy for critical limb ischemia: Analysis of the 2013 to 2014 nationwide re-admissions databases. Circulation. 136 (2), 167-176 (2017).
  4. Rowlands, T. E., Donnelly, R. Medical therapy for intermittent claudication. European Journal of Vascular and Endovascular Surgery. 34, 314-321 (2007).
  5. Cronewett, J. L. Acute limb ischemia and lower extremity chronic arterial disease: Rutherford's vascular surgery (8th ed.). , Saunders Elsevier. Philadelphia, PA. (2014).
  6. Dick, F., et al. Surgical or endovascular revascularization in patients with critical limb ischemia: influence of diabetes mellitus on clinical outcome. Journal of Vascular Surgery. 45 (4), 751-761 (2007).
  7. Suárez-Cuenca, J. A., et al. Coronary circulating mononuclear progenitor cells and soluble biomarkers in the cardiovascular prognosis after coronary angioplasty. Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23 (7), 4844-4849 (2019).
  8. Franz, R., et al. Use of autologous bone marrow mononuclear cell implantation therapy as a limb salvage procedure in patients with severe peripheral arterial disease. Journal of Vascular Surgery. 50 (6), 1378-1390 (2009).
  9. Benoit, E., O'Donnell, T. F., Patel, A. N. Safety and efficacy of autologous cell therapy in critical limb ischemia: A systematic review. Cellular Transplantation. 22 (3), 545-562 (2013).
  10. Hill, J. M., et al. Circulating endothelial progenitor cells, vascular function, and cardiovascular risk. New England Journal of Medicine. 348 (7), 593-600 (2003).
  11. Schmidt-Lucke, C., et al. Reduced number of circulating endothelial progenitor cells predicts future cardiovascular events: proof of concept for the clinical importance of endogenous vascular repair. Circulation. 111 (22), 2981-2987 (2005).
  12. Smadja, D. M. Early endothelial progenitor cells in bone marrow are a biomarker of cell therapy success in patients with critical limb ischemia. Cytotherapy. 14 (2), 232-239 (2012).
  13. Kremastinos, D. T., et al. Intracoronary cyclic-GMP and cyclic-AMP during percutaneous transluminal coronary angioplasty. International Journal of Cardiology. 53 (3), 227-232 (1996).
  14. Truong, Q. A., Januzzi, J. L., Szymonifka, J., Thai, W. E., Wai, B., Lavender, Z. Coronary sinus biomarker sampling compared to peripheral venous blood for predicting outcomes in patients with severe heart failure undergoing cardiac resynchronization therapy: the BIOCRT study. Heart Rhythm. 11 (12), 2167-2175 (2014).
  15. Ding, N., et al. Fibrosis and inflammatory markers and long-term risk of peripheral artery disease: The ARIC study. Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology. 40 (9), 2322-2331 (2020).
  16. Potier, L., et al. Plasma copeptin and risk of lower-extremity amputation in Type 1 and Type 2 diabetes. Diabetes Care. 40 (12), 2290-2297 (2019).
  17. Schmidt-Lucke, C., et al. Quantification of circulating endothelial progenitor cells using the modified ISHAGE protocol. PLoS One. 5 (1), 13790(2010).
  18. Marboeuf, P., et al. Inflammation triggers colony forming endothelial cell mobilization after angioplasty in chronic lower limb ischemia. Journal of Thrombosis and Haemostasis. 6 (1), 195-197 (2008).
  19. Regueiro, A., et al. Mobilization of endothelial progenitor cells in acute cardiovascular events in the PROCELL study: Time-course after acute myocardial infarction and stroke. Journal of Molecular and Cellular Cardiology. 80, 146-155 (2015).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Akış SitometrisiYoğunluk Gradyanı SantrifüjasyonuEndotelyal DisfonksiyonEkstremite Amputasyonu ÖngörüsüRutherford SınıflandırmasıBrakiyal Arter FMDVasküler Obstrüksiyon Kan Toplama
Kritik Ekstre İskemisi Olan Anjiyoplasti Tedavisi Gören Hastalarda Lokal Dolaşımdaki Mononükleer Progenitör Hücreler Kullanılarak Amputasyonun Tahmin Edilmesi
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.