Eksozomlar, şok dalgalarının in vitro uygulaması üzerine salınır. Burada, kültürlenmiş endotel hücrelerine şok dalgalarının nasıl uygulanacağını ve ardından daha fazla araştırma için eksozomların nasıl izole edileceğini açıklıyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Eksozomlar, şok dalgalarının in vitro uygulaması üzerine salınır. Burada, kültürlenmiş endotel hücrelerine şok dalgalarının nasıl uygulanacağını ve ardından daha fazla araştırma için eksozomların nasıl izole edileceğini açıklıyoruz.
Şok dalga tedavisi, lateral epikondilit (tenisçi dirseği) ve aşil tendiniti (topuk dikeni) gibi tendinopatilerin yanı sıra iyileşmeyen yara ve kemikleri içeren ortopedik endikasyonlarda rutin olarak uygulanmaktadır. Farklı patolojilere rağmen, şok dalgası tedavisinin anjiyojenik ve antienflamatuar etkisinin kombinasyonu yumuşak doku ve kemiklerde rejenerasyona yol açar. 30 yılı aşkın klinik uygulamada herhangi bir yan etki gözlenmemiştir. Ayrıca, temel araştırmalar iskemik miyokard üzerinde rejeneratif etkileri bile ortaya çıkardı.
Önceki bir çalışmada, kültürlenmiş hücrelerin mekanik uyaranının bir eksozom salınımı yoluyla biyolojik bir tepkiye çevrildiğini gösterebilirdik. Bununla birlikte, kesin mekanizma açıklığa kavuşturulmayı beklemektedir. Şok dalgası tedavisi uygulanırken mekanik bağlantı çok önemlidir, çünkü küçük hava kabarcıkları bile şok dalgalarını emebilir. Daha önce açıklanan su banyosu yöntemi, in vitro olarak yeterli ve tekrarlanabilir şok dalgası uygulamasını garanti etmek için geçerli bir yöntemdir.
Şok dalgası uygulamasından sonra kültürlenmiş hücrelerden eksozomları izole etmek için uygulanabilir ve tekrarlanabilir bir protokol geliştirebildik. Bu nedenle, mekanotransdüksiyonun altında yatan mekanizmaların yanı sıra şok dalgası salınan eksozomların rejeneratif ve anjiyojenik potansiyelini inceleme olasılığını gösteriyoruz.
Şok dalgaları (SW), doğada kısa bir süre içinde yüksek miktarda enerji açığa çıktığında (örneğin, şimşek ile gök gürültüsü) ortaya çıkan ses basıncı dalgalarıdır. Klinik rutinde, 30 yılı aşkın bir süredir ilgili yan etkiler olmaksızın böbrek taşlarını parçalamak için litotripside şok dalgaları kullanılır 1,2. Tesadüfen, böbrek taşı parçalanmasından sonra X-ışınlarında iliak kemikte bir kalınlaşma gözlendi. Bu gözlem, kemik iyileşme bozuklukları üzerine yapılan araştırmalara temel oluşturmuş ve uzun kemik kaynamayanlarda tedaviye yol açmıştır ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
İnsan umbilikal ven endotel hücreleri Kadın Hastalıkları Bölümü'nde sezaryen ameliyatlarından elde edildi. Bu nedenle hastaların yazılı bilgilendirilmiş onamları alındı. Innsbruck Tıp Üniversitesi etik kurulundan izin verildi (no. UN4435).
NOT: Kontaminasyonu önlemek için steril bir laminer akış başlığı altında çalışın.
1. Deneyden 24 saat önce
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklanan protokolü kullanarak, insan endotel hücrelerini (HUVEC'ler) ve insan koroner arter endotel hücrelerini (CAEC'ler; PromoCell) şok dalgası tedavisine (örneğin, Orthowave 180c). Serbest bırakılan veziküller, nano izleme analizi (NTA) ile ölçüldü. Böylece, SW tedavisi üzerine mikro-parçacık salınımında bir artış gözlemleyebiliriz (Şekil 1A,B). Transmisyon elektron mikroskobu ile HUVEC'lerin salınan veziküllerinin görüntülenmesi, eksozomların karakteristik 100 nm boyutu.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Çok sayıda temel araştırma çalışmasında, şok dalga tedavisinin rejeneratif etkisi gösterilebilir ve ortopedik endikasyonlarda rutin olarak uygulanır 3,4,5. Çeşitli hayvan modellerinde, iskemik miyokard üzerindeki rejeneratif etki gösterilebilir ve CAST-HF çalışmasınınbaşlatılmasına yol açabilir 9,10. Bu randomize kontrollü çalışma, koron.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
JH ve MG, kardiyak şok dalgası tedavisini (www.heart-regeneration.com) teşvik etmeyi amaçlayan bir Innsbruck Tıp Üniversitesi yan kuruluşu olan Heart Regeneration Technologies GmbH'nin hissedarlarıdır. Diğer tüm yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yoktur.
Bu çalışma, JH ve CGT'ye sınırsız bir AUVA araştırma hibesi ile desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Hücre kültürü şişeleri | Hücre tarı | 658170 | 75 cm2 |
| toplama tüpleri – Falcon Tüp | Corning | 352070 | |
| Endotel Hücre Büyüme Ortamı-2 BulletKit | Lonza | CC-3162 | |
| Endotel Hücre Büyümesi Bazal Ortam | Lonza | CC-3121 | |
| Fetal sığır serumu | Sigma | F0804 | |
| Parafilm | Pechiney | PM996 | |
| Fosfat tamponlu tuzlu su | gibco | 14190-904 | |
| Shockwave aplikatörü | MTS | Orthowave 180c< / em> |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu makale yayımlandı
Video yakında