Yöntem makalesi

Maliyet Etkin ve Uyarlanabilir Çizilme Göçü Tsası

DOI:

10.3791/61527

⸱

30 Haziran 2020

 , 
1Department of BioMolecular Sciences, University of Mississippi

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ekipman yoğun yöntemler kullanılmadan hücre göçünün belirlenmesinde yeni bir yaklaşım sağlayan sıfırdan geçiş testini uygun maliyetli bir yöntem savuruyoruz. Bu protokolde fibroblastlar kullanılırken, ek hücre tipleri ve hücre göçü üzerindeki etkileri incelemek için uyarlanabilir ve kullanılabilir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hücre göçü hem fizyolojik hem de patolojik olayların önemli bir bileşenidir. Normal hücre göçü geliştirme ve bir bağışıklık yanıtı montaj gibi temel fonksiyonlar için gereklidir. Hücre göç süreci ile bir defekt veya değişiklik meydana geldiğinde, zararlı sonuçlar (yani, kanser metastazı, yara iyileşmesi ve skar oluşumu) olabilir. Hücre geçişinin önemi nedeniyle, uygun fiyatlı, uyarlanabilir ve tekrarlanabilir bir hücre geçiş tadına erişim olması gerekir. Ortak sıfırdan geçiş testini kullanarak, genel laboratuvar ekipmanı kullanan hücre göçlerini analiz etmek için yeni bir yaklaşım geliştirdik. Açıklanan yöntem, hızlandırılmış mikroskopi kullanılmadan belirli ilgi alanlarının yeniden yakalanmasına olanak tanıyan görsel belirteçler kullanır. Buna ek olarak, deneysel tasarımda esneklik sağlar, göç matris substrat ı değiştirmekten farmakolojik değiştiriciler eklenmesine kadar. Ayrıca, bu protokol hücre geçişi incelenirken çeşitli yöntemlertarafından dikkate alınmayan hücre geçişi alanını hesaba katmanın bir yolunu özetler. Bu yeni yaklaşım daha büyük bir kitleye bir sıfırdan göç tetkik sunuyor ve araştırmacılar için hücre göç fizyolojik ve patofizyolojik etkisini incelemek için daha büyük bir fırsat sağlayacaktır.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hücre göçü birçok fizyolojik ve patolojik olaylar için çok önemlidir. Bu gelişme sırasında gereklidir, bir bağışıklık yanıtı montaj için, ve uygun yara iyileşmesi için1,2,3. Bu hücre geçiş olaylarının çoğu fiziksel veya kimyasal sinyaller tarafından tetiklenebilir. Örneğin, bir bağışıklık yanıtı sırasında, lökositler bir kemoattractant yanıt olarak yaralanma bir siteye doğru göç edecek2. Ayrıca, lökositler de ek bağışıklık hücrelerinin göç indüklemek için sitokinler serbest bırakacaktır, yanı sıra diğer hücre tipleri, fibroblastlar gibi, yara iyileşme sürecinde yer alan, ve böylece, çok hücreli bir yanıt başlatılması4. Hücrelerin göç yeteneği uygun fizyolojik fonksiyon için gereklidir; ancak, hücre göçü kontrolsüz gittiğinde, bu olumsuz bir yanıt olabilir ve patolojik olaylara katkıda bulunmak, kronik inflamasyon gibi, vasküler hastalık, kanser metastazı, ve bozulmuş yara iyileşmesi2,3,4,5,6,7. Bozulmuş yara iyileşmesi hücre göçündeki bozukluklar nedeniyle şeker hastalarının sık görülen bir hastalığıdır ve bu bozukluklar ele alınmazsa daha fazla komplikasyona yol açabilir (örn. ampütasyon8,9). Bu çalışma, diğerleri gibi, hücre göçünün normal fizyolojik veya patolojik koşullar altında meydana geldiği süreci daha iyi anlama gereğini ortaya konmuş ve bu araştırma alanını ilerletmek için hayati önem taşımaktadır. Bunu başarmak için, bu tahlilleri yapmak için gerekli ekipmana sahip olmayan araştırmacılar için hem erişilebilir hem de uygun fiyatlı göç tahlilleri olması gerekir.

Şu anda, hücre geçişi ile ilgili konuların geniş bir yelpazede incelemek için kullanılabilir geçiş tahlilleri çeşitli vardır. Her biri hücre göçlerini etkileyen belirli alanları hedefleyen 2B ve 3B geçiş modelleri geliştirilmiştir. 3D göç modelleri genellikle hücre istilası çalışmaları ile ilişkilidir ve hücre göçü üzerinde hücre dışı matriks etkisini değerlendirmek10,11,12, 2D göç tahlilleri uygulama daha geniş bir aralığı var ve öncelikle kemotaktik göç çalışma için kullanılır, yara iyileşmesi, ve hücre göçü sırasında fonksiyonel değişiklikler13,14,15,16. Bu tahlillerin bazıları, Boyden odaları veya dışlama halkaları gibi bazı araştırmacılara bu tahlillerin kullanılabilirliğini azaltabilecek ek ekipman gerektirir. Daha uygun maliyetli tahlillerden biri, genellikle yara iyileşmesini ve hücre göçündeki genel değişiklikleri değerlendirmek için kullanılan çizik tahlilleridir14,17. Çoğu laboratuvar bir çizik teşp yapmak için donanımlı olsa da, hücre göç izlemek için kullanılan ekipman ya kullanılamaz ya da satın almak için çok pahalı olma eğilimindedir. Bu, ters mikroskop ve canlı görüntüleme sistemi gerektiren hızlandırılmış mikroskobu içerir. Bu pahalı ekipman parçaları her laboratuvar için yaygın olarak erişilebilir değildir. Bu nedenle, bu gözlem daha hazır ekipman ile hücre göçünün değerlendirilmesi sağlayan yeni bir protokol ihtiyacını vurgulamaktadır.

Burada sunulan protokol hücre göçünü değerlendirmek için yeni ve uygun fiyatlı bir yol sağlar. Bu yöntem, çizik tahlilleri ile ilişkili aynı prosedürü izler, ancak temel bilimler laboratuvar ortamında daha yaygın olarak bulunan ekipmanları kullanarak hücre göçünün incelenmesinde farklılık gösterir. Ortak ekipman kullanan bu protokol, hızlandırılmış mikroskopi kullanılmadan hücre geçişinin daha doğru belirlenmesini sağlar. Bu yöntem, geçişi belirlemenin yanı sıra, hücre geçişini büyük ölçüde etkilediği belirtilen çizilme alanındaki değişken faktörleri de hesaba kattırır. Genel olarak, hücre göçü analizi için bu yeni protokol, daha fazla laboratuvarın hücre göçü alanını keşfetmesi ve katkıda bulunması için bir fırsat sağlamaktadır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Genel hücre kültürü

  1. 1 g/L glukoz içeren Dulbecco'nun Modifiye Eagles Medium (DMEM) kültür kardiyak fibroblastları, sodyum pirüuvat, L-glutamin, ve 14.2 mM NaHCO3,14.9 mM HEPES, %15 ısı-inaktive fetal sığır serumu (FBS), %2 L-glutamin ve %0.02 antimikrobiyal reaktif (Bkz. Malzeme Tablosu)ile desteklenir ve 37 °C'de CO2 inkübatörde muhafaza edilir.
  2. 0 (P0) geçitte %90-95 birleşme ye kadar kültür kardiyak fibroblastları bulunur. Bu noktada fibroblastlar göç teşriği için kullanılan 48 kuyuluk bir plakaya bölünmeye hazırdır.

2. Geçiş plakasının hazırlanması

  1. Bir çizgi çizerek 48-iyi hücre kültür plakası hazırlayın, sarı veya açık renkli kalıcı marker kullanarak, kuyunun merkezindeaşağı. Daha sonra, kuyuyu üç ayrı ilgi alanına bölen üç karma işaret çizin. Bu bölümler görüntüleme için kullanılacaktır.
    NOT: Açık renk kalıcı bir işaretleyici kullanmak, geçiş yapan hücrelerin kolayca görüntülenmesine olanak sağlar. Siyah veya mavi gibi koyu işaretçiler, göç eden hücrelerin görselleştirilmesini engeller.
  2. Bir substrat (örneğin, kollajen) üzerinde göç değerlendirirken, belirli substrat için kullanılan talimatlar ve konsantrasyonları aşağıdaki şu anda kuyu kat.
  3. Plaka ~ 15.000-20.000 kardiyak fibroblastlar, P1, her kuyu ve kültür hücrelerine, normal mensup koşulları altında (önceki bölümde listelenen koşullar), onlar% 90-95 kesişme ulaşıncaya kadar. 24-48 saat arasında bir araya ulaşılmalıdır.
    NOT: Geçiş plakasını ayarlarken pozitif denetim (3T3 hücreleri 18 gibi bilinen bir göçmen hücresi18),negatif denetim (çizilmemiş hücreler) ve boş bir kuyu içerdiğinden emin olun.

3. Scratch geçiş tsay & fiksasyon

  1. Hücreler %90-95 birleştiğinde, steril bir P200 pipet ucu kullanarak ortamı çıkarın ve çizilmiş çizgi boyunca çizin.
    NOT: P200 pipet ucu, çizik teksi10,14,19ile birlikte kullanılan ortak pipet ucudur. Ayrıca, birden fazla deneme birden fazla çizik hatları neden olabilir gibi sadece P200 ucu ile bir geçiş yapmak.
  2. Herhangi bir bekar kardiyak fibroblastları çıkarmak için düşük serum media (%1.5 FBS) ile kuyuyu durula.
  3. Her kuyuya 500 μL düşük serum media ekleyin. Herhangi bir farmakolojik ajanlar kullanıyorsanız, şu anda ekleyin.
    NOT: Düşük serum media, hücre geçişinin oluşmasına izin verdiği/teşvik ettiği ve fibroblastların çoğalmasını önlediği için kullanılır ve bu da göç tahtının sonuçlarını çarpıtabilir20. Bu protokol için %1.5 FBS kullanılmıştır.
  4. Fibroblastları %5 CO2 kuluçka makinesinde 24 saat boyunca 37 °C'de kuluçkaya yatırmadan önce 0 saat lik görüntüler yakalayın.
    1. 20x hedefiyle ters bir mikroskop kullanarak 0 saat görüntü yakalayın. Kuyu başına iki 0 saat görüntü alın. Bu, geçiş çizgisinin daha eksiksiz bir kapsama alanı sağlar.
    2. İşaretleri (çizgi ve tireler) kullanarak, kazıkazan çizgisinin üst yarısını yakalamak için kuyuyu konumlandırın. Aynı geçiş alanının iki kez görüntülenmediğinden emin olmak için orta çizginin görüntülenmesinden kaçının, bu da sonuçları çarpıtabilir.
    3. 0 saat görüntü #1 yakalamak için görüntüleme yazılımı(Tablo Malzemeler)kullanın. Ardından plakayı kameranın görünümünde kuyunun/çizilişin alt yarısını konumlandırmak için hareket ettirin. Yine, orta çizgi yakalamaktan kaçının. Yerleştirildikten sonra, 0 saat görüntü #2(Şekil 1)yakalayın.
      NOT: Her iki 0 saat görüntüde de orta çizgiden kaçınmak, geçiş alanlarının iki kez yakalanmasını önler, bu da yapılırsa yinelenen sonuçlar üretebilir ve verileri çarpıtabilir.
  5. 24 saat kuluçkadan sonra, iyi medya kaldırmak ve 1x steril olmayan PBS (bundan böyle kullanılan tüm 1x PBS steril değildir) ile iyi yıkayın.
  6. Duman kaputunda, kuyuya %4 paraformaldehit in500 μL ekleyin ve oda sıcaklığında 10 dakika kuluçkaya yatırın (RT).
  7. Paraformaldehit çıkarın ve RT her 5 dakika için 1x PBS ile 3x yıkayın.
  8. Hücreler yıkandıktan sonra, 24 saat görüntü yakalamaya devam edin veya her kuyuya 1x PBS ekleyin ve daha sonrasına kadar 4 °C'ye yerleştirin. Hücreler 4 °C'de 1-2 hafta görüntülenmeye hazır olana kadar kalabilirler.
    1. Her kuyuya 300 μL permeabilizing çözeltisi (1x PBS ve %0,01 triton X-100) ekleyerek hücreleri permeabilize edin. RT'de 30 dakika boyunca hafif, sürekli sallanan hücreleri/plakayı kuluçkaya yatırın.
    2. Permeabilizing çözeltisi çıkarın ve% 1 Coomassie Brilliant Blue leke ekleyin (3% Coomassie Brilliant Blue, 10% asetik asit, 45% metanol, ve 45% dH2O) 10 dakika için nazik, RT sürekli sallanan.
      NOT: Plakalar hücre dışı bir matris substrat ile kaplanmışsa, göç testi yapmadan önce coomassie boyama ile kaplanmış bir plakayı test etmeyi unutmayın. Şekil 2, bir matris substratının bu tetkik ile kullanılabileceğini ve hücrelerin görselleştirilmesini etkilemediğini göstermektedir.
    3. Her biri 5 dakika boyunca sürekli sallanan RT'de 1x PBS ile kuyuları 3x yıkayın.
    4. YıkAndıktan sonra 300 μL 1x PBS ilave edilir ve 24 saat görüntü çekin.
    5. Kuyuyu 0 saat görüntüleri yakalamak için kullanılan aynı konuma getirerek 24 saat görüntü yakalayın. Bunu başarmak için, daha önce yakalanan 0 saat görüntüleri açın ve kalıcı işaretçi ile yapılan işaretlemeyi kullanarak kuyuyu aynı konuma getirin. Ortadaki çizgi ve ek çizgi işaretleri, 24 saat görüntü ile 0 saat görüntü arasındaki yakın hizalamayı vermelidir (Şekil 1).

4. 0 saat ve 24 saat görüntülerin hazırlanması

  1. Aynı kuyunun ve görüntüleme yazılımının(Malzeme Tablosu)çekilen 0 saat ve 24 saat lik görüntüleri açın.
  2. 0 saat görüntü üzerinde yeni bir katman oluşturun. Ardından, yeni katmanı tıklatın ve metnin üzerine çift tıklayarak katmanın adını "satır katmanı" olarak değiştirin.
    NOT: Bu katman, bu noktadan itibaren çizgi katmanı olarak anılacaktır.
  3. Fırça Aracı'nı (fırça simgesi) tıklatın ve boyutu 10 px ve rengi kırmızıya ayarlayın.
  4. Seçilen çizgi katmanıyla, çizilme alanını özetleyen iki ayrı çizgi çizin. Geçiş alanını işaretleyen bu çizgiler nedeniyle çizgiler hiçbir hücreye dokunmamalıdır.
  5. Aracı Taşı'yı (ok simgesi) tıklatın ve ardından Ctrl düğmesini basılı takın ve hem satır hem de arka plan katmanlarına tıklayın.
  6. 0 h görüntünün ortasına tıklayın ve bu katmanları 24 saat görüntünün ortasına sürükleyin.
  7. Şimdi 24 saat görüntü kullanarak, 0 h arka plan katmanı tıklayın ve% 50 opaklık değiştirin.
  8. Ctrl düğmesini basılı tutarak, hem 0 saat arka plan ve çizgi katmanına tıklayın ve ardından katmanları serbestçe dönüştürün(Düzenle>Serbest Dönüştür). Serbest dönüştürme yi kullanarak, 0 saat arka plan ve çizgi görüntüsünü 24 saat arka plan görüntüsüne hizala. Bu adım, 24 saat görüntüüzerinde doğru konumda geçiş alanını işaretleyen çizgileri konumlandırmak için gerekli olan 0 h ve 24 h görüntünün örtüşmeyle sonuçlanır.
  9. 0 h arka plan ve çizgi katmanlarının 24 saat arka plan görüntüsüne başarılı bir şekilde yerle bir edilmesinden sonra, 0 h arka plan katmanını silin. 0 h arka plan katmanını tıklatarak sil, ardından sağ tıklatın ve sil katmanını tıklatın.
  10. 0 h arka plan görüntüsünüsesi siler, sadece çizgiyi ve 24 saat arka plan katmanını (şimdi geçiş görüntüsü olarak adlandırılır) bırakır. Çizgi katmanı, 24 saat görüntüdeki geçiş/çizilme alanını gösterir ve geçiş hücre sayısını belirlemek için kullanılabilir.
  11. Hem photoshop dosyası hem de TIFF/JPEG olarak yeni geçiş görüntüsünü kaydedin. NOT: Bu işlemi gösteren bir temsilci rakam Şekil 3'tesunulmuştur.

5. Göç eden hücre sayısını sayma

  1. Geçiş görüntüsünü açın. Bu, TIFF/JPEG dosyalarını kabul eden bir programda yapılabilir(Malzeme Tablosu).
  2. İki kırmızı çizgiye dokunmanın yanı sıra arada bulunan hücre sayısını da sayın.
  3. Görüntü başına geçirilen hücrelerin sayısını kaydedin. Kuyu başına iki geçiş görüntüsü olacaktır ve bu değerler geçiş alanı için değerler düzeltilene kadar birleştirilmemelidir (sonraki bölümde ayrıntılı olarak).

6. Göç alanını belirleme

  1. Bölüm 5 'deki görüntüleme yazılımı programında ki geçiş çizgilerini içeren 24 saatlik görüntüyü açın (Malzeme Tablosu).
  2. Bu görüntüyü "Geçiş Alanı Görüntüsü" olarak kaydedin.
  3. Kaydolduktan sonra arka plan katmanını tıklatın, sağ tıklatın ve katmanı sil'i tıklatın. Bu, görüntüde yalnızca çizilme çizgileri bırakmalıdır (Şekil 3).
  4. Fırça Aracı'nı (fırça simgesi) kullanarak çizilme çizgileri arasındaki alanı doldurun. Fırçanın rengini geçiş için çizgiler çizmek için kullanılan renkle eşleştirin.
  5. Siyah beyaz görüntü(Image>Mode>Grayscale)oluşturmak için görüntüyü gri tonlama yla değiştirin ve ardından görüntüyü kaydedin (Şekil 4).
  6. Analiz yazılımını(Malzeme Tablosu)başlatın ve analiz yazılımı içinde "Geçiş Alanı" dosyasını açın.
  7. Geçiş satırının alanını belirlemek için Resim>Ayarla>Eşik'itıklatın. Siyah geçiş alanı kırmızıya döner ve yüzde alanı Eşik kutusunda gösterilir. Alan, görüntüde yakalanan tüm alana kıyasla göç hattının kapsadığı alanın yüzdesi olarak bildirilecektir.
  8. Geçiş satırı için yüzde alanını kaydedin ve bu değerin aynı görüntü için geçiş yapan hücre sayısıyla eşleştirdiğinden emin olun.

7. Veri analizi

  1. Çizilmeye göre göç eden hücre sayısını normalleştirin. Göç eden hücre sayısını geçiş çizgisinin yüzde alanına bölün (# geçirilen hücreler % Geçiş alanı). Bunu görüntü başına yapın, kuyu başına geçişe dayalı bir ortalama değil.
  2. Görüntü başına değerleri normale döndürtükten sonra, bir bireyi temsil eden iki görüntünün değerlerini ekleyin. Bu değer grafiksel ve istatistiksel analiz için kullanılacaktır. Eğer deneysel tasarım birden fazla kopya içeriyorsa. İstatistiksel analizden önce ortalama çoğaltma değerleri.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu yordam, çoğu laboratuvar için hem uygun maliyetli hem de kolayca uyarlanabilen hücre geçişini incelemek için yeni bir yaklaşım belgeletir. Birçok çalışma hücre göçlerini değerlendirmek için hızlandırılmış mikroskobu kullanmaktadır, ancak bu yöntem için gerekli olan ekipman birçok laboratuvar için hazır değildir. Sınır çizimi için çizgilerve çizgiler kullanmak, pahalı ekipman kullanmadan farklı zaman noktalarında belirli ilgi alanlarını yeniden yakalama olanağı sağlarken(Şekil 1 &

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sıfırdan geçiş tadına yönelik bu yeni yaklaşım, araştırmacıların hücre geçişindeki değişiklikleri incelemeleri için daha erişilebilir bir yöntem sağlar. Bu tahlil diğer çizik tahlilleri benzer bir çizik yönetmek için aynı prosedürü takip ederken, görüntüleme ve hücre göçü10doğru analizi için yeni bir yöntem sağlar. Bu yöntem, hızlandırılmış mikroskopi ve canlı hücre görüntüleme odalarının ekipman yoğun yöntemlerini kullanmak yerine, yaygın olarak kullanılan laboratuvar ekipmanlarının kullanımını a...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, ABD Ordusu Tıbbi Araştırma Ödülü #81XWH-16-1-0710, Mississippi Üniversitesi Eczacılık Fakültesi ve BiyoMoleküler Bilimler Bölümü tarafından desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
Adobe Tüm UygulamalarAdobeBu, bu protokolle kullanılan görüntüleme yazılımı olan Adobe photoshop'u içerir
Avant Pipet Uçları 200ul Bağlayıcı steril olmayanMIDSCIAVR1Uçlar sterilize etmek için otoklavlanır
AxioCam Erc 5s KameraZeiss426540-9901-000
Coomassie Brilliant Blue R-250Fisher ScientificBP101-25
Costar Düz Tabanlı Hücre Kültürü Plakaları 48Wells Fisher Scientific07-200-86
L-Glutamin, 1g/L glikoz ve sodyum piruvat içeren DMEMFisher ScientificMT10014CM
Image JNIHBu, ABD hükümeti tarafından sunulan ücretsiz bir yazılımdır ve bu protokolle kullanılan analiz yazılımıdır
ParaformaldehitFisher ScientificAC416785000
Premium ABD menşeli fetal sığır serumuYenilikçi AraştırmaIFBS-HU
PrimocinInvivoGENant-pm-2Bu, kardiyak fibroblastları kültürlemek için bu procotol ile kullanılan anitmikrobiyaldir
Zeiss Primovert MikroskopZeiss491206-0002-000
Zen Blue Edition 2.3 yazılımıZeissyazılımı kamera satın alımıyla birlikte gelir

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gilbert, S. F. Developmental biology. , Sinauer Associates, Incorporated. (1997).
  2. Luster, A. D., Alon, R., Von Andrian, U. H. Immune cell migration in inflammation: present and future therapeutic targets. Nature Immunology. 6, (2005).
  3. Yahata, Y., et al. A Novel Function of Angiotensin II in Skin Wound Healing Induction of Fibroblast and Keratinocyte Migration by Angiotensin II via Heparin-Binding Epidermal Growth Factor (EGF)-like Growth Factor-Mediated EGF Receptor Transactivation. The Journal of Biological Chemistry. 281 (19), 13209-13216 (2006).
  4. Trepat, X., Chen, Z., Jacobson, K. Cell Migration Single-Cell Migration. Comprehensive Physiology. 2 (4), (2012).
  5. Brand, S., et al. IL-22 is increased in active Crohn's disease and promotes proinflammatory gene expression and intestinal epithelial cell migration. American Journal of Physiology: Gastrointestinal and Liver Physiology. 290, 827-838 (2006).
  6. Chi, Z., Melendez, A. J. Role of Cell Adhesion Molecules and Immune-Cell Migration in the Initiation, Onset and Development of Atherosclerosis. Cell Adhesion & Migration. 1 (4), 171-175 (2007).
  7. Chen, H., Nalbantoglu, J. Ring cell migration assay identifies distinct effects of extracellular matrix proteins on cancer cell migration. BMC Research Notes. 7 (183), 1-9 (2014).
  8. Stewart, J. A., Massey, E. P., Fix, C., Zhu, J., Goldsmith, E. C., Carver, W. Temporal alterations in cardiac fibroblast function following induction of pressure overload. Cell and tissue research. 340 (1), 117-126 (2010).
  9. Darby, I. A., Laverdet, B., Bonté, F., Desmoulière, A. Fibroblasts and myofibroblasts in wound healing. Clinical, Cosmetic and Investigational Dermatology. , 7(2014).
  10. Kramer, N., et al. In vitro cell migration and invasion assays. Mutation Research - Reviews in Mutation Research. 752 (1), 10-24 (2013).
  11. Even-Ram, S., Yamada, K. M. Cell migration in 3D matrix. Current Opinion in Cell Biology. (17), 524-532 (2005).
  12. Valster, A., et al. Cell migration and invasion assays. Methods. 37, 208-215 (2005).
  13. Pijuan, J., et al. In vitro cell migration, invasion, and adhesion assays: From cell imaging to data analysis. Frontiers in Cell and Developmental Biology. 7, 1-16 (2019).
  14. Liang, C. C., Park, A. Y., Guan, J. L. In vitro scratch assay: a convenient and inexpensive method for analysis of cell migration in vitro. Nature Protocols. 2 (2), 329-333 (2007).
  15. Hulkower, K. I., Herber, R. L. Cell migration and invasion assays as tools for drug discovery. Pharmaceutics. 3 (1), 107-124 (2011).
  16. Walter, M. N. M., Wright, K. T., Fuller, H. R., MacNeil, S., Johnson, W. E. B. Mesenchymal stem cell-conditioned medium accelerates skin wound healing: An in vitro study of fibroblast and keratinocyte scratch assays. Experimental Cell Research. 316 (7), 1271-1281 (2010).
  17. Chaudhary, A., Bag, S., Barui, A., Banerjee, P., Chatterjee, J. Honey dilution impact on in vitro wound healing: Normoxic and hypoxic condition. Wound Repair and Regeneration. 23 (3), 412-422 (2015).
  18. Lipton, A., Klinger, I., Paul, D., Holleyt, R. W. Migration of Mouse 3T3 Fibroblasts in Response to a Serum Factor. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 68 (11), (1971).
  19. Ascione, F., Guarino, A. M., Calabrò, V., Guido, S., Caserta, S. A novel approach to quantify the wound closure dynamic. Experimental Cell Research. (352), 175-183 (2017).
  20. Burr, S. D., Harmon, M. B., S, J. A. The Impact of Diabetic Conditions and AGE/RAGE Signaling on Cardiac Fibroblast Migration. Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, (2020).
  21. Chang, S. S., Guo, W. H., Kim, Y., Wang, Y. L. Guidance of Cell Migration by Substrate Dimension. Biophysical Journal. 104, 313-321 (2013).
  22. Nguyen-Ngoc, K. V., et al. ECM microenvironment regulates collective migration and local dissemination in normal and malignant mammary epithelium. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (39), 2595-2604 (2012).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

H cre G AnaliziKardiyak FibroblastlarG Plakas Haz rlamaTers MikroskopiG r nt Analiz Yaz l mPhotoshop KantifikasyonuG Alan l mFarmakolojik Modifikat rlerD k Serumlu Besiyeri

İlgili makaleler