Bu makale, HaCaT hücre hattı üzerinde beş sitokin (IL-17A, IL-22, IL-1α, TNF-α, OSM) kombinasyonu kullanılarak transkripsiyon düzeyinde in vitro psoriasiform kutanöz inflamatuar model oluşturma yöntemini sunmaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
* These authors contributed equally
Bu makale, HaCaT hücre hattı üzerinde beş sitokin (IL-17A, IL-22, IL-1α, TNF-α, OSM) kombinasyonu kullanılarak transkripsiyon düzeyinde in vitro psoriasiform kutanöz inflamatuar model oluşturma yöntemini sunmaktadır.
Psoriasis, epidermal keratinositlerin anormal proliferasyonu ve farklılaşması ve inflamatuar hücrelerin infiltrasyonu ile karakterize, doğuştan gelen ve edinilmiş bağışıklık sistemlerinin aracılık ettiği yaygın bir kronik inflamatuar deri hastalığıdır. Deriye özgü keratinositler, doğuştan gelen bağışıklıkta, bağışıklık hücrelerine ve çevresel stimülasyona yanıt veren anahtar katılımcılardır ve bu nedenle sedef hastalığının immünopatogenezinde önemli bir rol oynarlar. Burada, IL-17A, IL-22, IL-1α, TNF-α ve oncostatin M dahil olmak üzere beş proinflamatuar sitokin kombinasyonu (M5 kombinasyonu) kullanarak HaCaT hücre hattı ile transkripsiyon düzeyinde psoriasiform keratinosit inflamasyonunu indüklemek için bir yöntem sunuyoruz. Sonuçlar, M5 kombinasyonunun indüklediği HaCaT hücrelerinin artmış antimikrobiyal peptit seviyeleri (BD2, S100A7, S100A8 ve S100A9), kemokin ve sitokinler (CXCL1, CXCL2, CXCL8, CCL20, IL-1β, IL-6 ve IL-18). Keratinosit farklılaşma belirteçlerinin (Keratin1, Keratin10, Filaggrin ve Loricrin) mRNA seviyeleri, sedef hastalığı benzeri keratinositlerden türetilen transkriptom verileriyle tutarlı olarak aşağı regüle edildi. Bu nedenle, burada tarif edilen yöntem, transkripsiyon düzeyinde bir in vitro psoriasiform kutanöz inflamasyon oluşturur ve psoriazisin moleküler patogenezi araştırmalarına katkıda bulunur.
Sedef hastalığı, ağırlıklı olarak epidermisi1 oluşturan keratinositleri etkileyen, hiperkeratoz ve parakeratoz ile keratinositlerin anormal derecede hızlı çoğalması ile karakterize, düzensiz bir bağışıklık tepkisi tarafından tetiklenen, bulaşıcı olmayan yaygın bir kronik inflamatuar cilt hastalığıdır. Sedef hastalığı, dünyadaki vahşi nüfusun yaklaşık% 3'ünü etkiler2. Sendromun neden olduğu kardiyovasküler hastalıklar ve metabolik sendrom dahil olmak üzere çeşitli komorbiditeler hastalık yükü daha da artmaktadır3.
Epidermis, beş keratino....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Steril koşullar altında 1'den 3'e kadar olan adımları gerçekleştirin. Tüm kültür ortamı 0.1 mg / mL penisilin ve streptomisin içeriyordu.
1. Hücre hazırlığı
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
M5 kombinasyon stimülasyonu, HaCaT hücrelerinin inflamatuar yanıtını indükledi.
HaCaT hücreleri, 24 saat boyunca M5 sitokin kombinasyonu ile veya M5 sitokin kombinasyonu olmadan uyarıldı. İmmün ve inflamatuar kemokinlerin ve antimikrobiyal peptitlerin düzenlenmesinde rol oynayan sedef hastalığı ile ilişkili genlerin mRNA ekspresyonu değerlendirildi. Nötrofil kemokinler CXCL138, CXCL239, CXCL8
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Burada tarif edilen, transkripsiyon seviyesinde in vitro psoriasiform kutanöz inflamasyon profili oluşturmak için HaCaT hücre hattına beş sitokin kombinasyonu (IL-17A, IL-22, IL-1α, TNF-α, OSM) kullanan bir yöntemdir. Bu protokol, sedef hastalığının patogenezindeki genlerin mekanizmasının yanı sıra sedef hastalığı için terapötik ilaçların taranması üzerine yapılan çalışma için uyarlanabilir. Son raporlar, lezyonel deride IL-17A ve IL22 üreten CD8 T hücrelerinin aşırı ekspresyonunun psori.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yazarlar tarafından potansiyel bir çıkar çatışması bildirilmemiştir.
Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı [81703132, 31271483, 81472650, 81673061, 81573050, 31872739 ve 81601462] tarafından desteklenmiştir.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| DMEM ve mdash; Dulbecco'nun Modifiye Kartal Orta | Gibco | 11965092 | |
| Fetal Sığır Serumu | Gibco | 10100139C | |
| HaCaT hücreleri | Çin Tip Kültür MerkeziKoleksiyon | GDC0106 | 15 nesilden az |
| İnsan IL-1 ve beta; ELISA Kiti | Beyotime | PI305 | |
| İnsan IL-6 ELISA Kiti | Beyotime | PI330 | |
| İnsan IL-8 ELISA Kiti | Beyotime | PI640 | |
| IL-1 alfa İnsan | Prospec | CYT-253 | Rekombinant protein |
| IL-17 İnsan | Prospec | CYT-250 | Rekombinant protein |
| IL-22 İnsan | Prospec | CYT-328 | Rekombinant protein |
| OSM İnsan | Prospec | CYT-231 | Rekombinant protein |
| PBS | Gibco | 10010049 | pH 7.4 |
| Penisilin-Streptomisin | Gibco | 15140163 | |
| PrimeScrip RT reaktif Kiti | TAKARA | RR047A | |
| TB Yeşil Premiks Ex | Taq TAKARA | RR420A | |
| TNF alfa İnsan | Prospec | CYT-223 | Rekombinant protein |
| TRIzo Reaktifi | Invitrogen | 15596018 | |
| Tripsin-EDTA (% 0.25), fenol kırmızısı | Gibco | 25200072 |
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Bu makale yayımlandı
Video yakında