Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Fibrin ile zenginleştirilmiş ve tPA'ya duyarlı fototrombotik inme modeli

3.5K görüntülenme

⸱

DOI:

10.3791/61740

⸱

4 Haziran 2021

 ,  , 
1Department of Anesthesiology, Taipei Veterans General Hospital, National Yang-Ming University School of Medicine, 2Department of Neuroscience, Center for Brain Immunology and Glia (BIG), University of Virginia School of Medicine

Bu makalede

Özet

Geleneksel fototrombotik inme (PTS) modelleri esas olarak doku plazminojen aktivatörü (tPA) litik tedavisine karşı yüksek dirençli yoğun trombosit agregatlarını indükler. Burada, fotoaktivasyon için trombin ve ışığa duyarlı boyanın birlikte enjekte edilmesiyle modifiye edilmiş bir murin PTS modeli tanıtıldı. Trombin ile zenginleştirilmiş PTS modeli, karışık trombosit:fibrin pıhtıları üretir ve tPA-trombolizine karşı oldukça hassastır.

Özet

İdeal bir tromboembolik inme modeli, düşük mortaliteye sahip nispeten basit cerrahi prosedürler, tutarlı bir enfarktüs boyutu ve yeri, trombositin çökelmesi: hastalardakine benzer fibrin karışımlı kan pıhtıları ve fibrinolitik tedaviye yeterli duyarlılık gibi belirli özellikler gerektirir. Gül bengal (RB) boya bazlı fototrombotik inme modeli ilk iki gereksinimi karşılar, ancak muhtemelen trombosit açısından zengin, ancak fibrin açısından fakir pıhtı bileşimi nedeniyle tPA aracılı litik tedaviye oldukça dirençlidir. Orta serebral arterin (MCA) proksimal dalına yönelik fotoaktivasyon için RB boyası (50 mg/kg) ve subtrombotik trombin dozu (80 U/kg) kombinasyonunun fibrin ile zenginleştirilmiş ve tPA'ya duyarlı pıhtılar üretebileceğini düşünüyoruz. Gerçekten de, trombin ve RB (T + RB) kombine fototromboz modeli, immün boyama ve immünoblotlarla gösterildiği gibi karışık trombosit: fibrin kan pıhtılarını tetikledi ve tutarlı enfarktüs boyutları ve konumları ile düşük mortaliteyi korudu. Ayrıca, fotoaktivasyondan sonraki 2 saat içinde intravenöz tPA (Alteplaz, 10 mg/kg) enjeksiyonu, T+RB fototrombozunda enfarktüs boyutunu önemli ölçüde azalttı. Bu nedenle, trombin ile zenginleştirilmiş fototrombotik inme modeli, yeni trombolitik tedavileri test etmek için yararlı bir deneysel model olabilir.

Giriş

Endovasküler trombektomi ve tPA aracılı tromboliz, Amerika Birleşik Devletleri'nde yılda ~ 700.000 hastayı etkileyen akut iskemik inmenin ABD Gıda ve İlaç İdaresi (FDA) onaylı iki tedavisidir1. Trombektomi uygulaması büyük damar tıkanıklığı (LVO) ile sınırlı olduğundan, tPA-tromboliz küçük damar tıkanıklıklarını hafifletebildiğinden, her ikisi de akut iskemik inme için değerli tedavilerdir2. Ayrıca, her iki tedavinin kombinasyonu (ör., inme başlangıcından sonraki 4.5 saat içinde tPA-trombolizin başlatılması, ardından trombektomi) reperfüzyonu ve fonksiyonel sonuçları iyileştirir3. Bu nedenle, trombolizi optimize etmek, trombektomi çağında bile inme araştırmaları için önemli bir hedef olmaya devam etmektedir.

Tromboembolik modeller, trombolitik tedavileri iyileştirmeyi amaçlayan klinik öncesi inme araştırmaları için önemli bir araçtır. Bunun nedeni, mekanik vasküler oklüzyon modellerinin (örneğin, intraluminal sütür MCA oklüzyonu) kan pıhtıları üretmemesi ve mekanik oklüzyonun çıkarılmasından sonra serebral kan akışının hızlı bir şekilde geri kazanılmasının aşırı derecede idealize edilmesidir 4,5. Bugüne kadar, başlıca tromboembolik modeller arasında fototromboz 6,7,8, topikal ferrik klorür (FeCl3) uygulaması9, MCA dalına trombin mikroenjeksiyonu10,11, MCA veya ortak karotis artere (CCA) ex vivo (mikro) emboli enjeksiyonu12,13,14 ve geçici hipoksi-iskemi (tHI)15,16, 17,18. Bu inme modelleri, takip eden pıhtıların histolojik bileşimi ve tPA aracılı litik tedavilere duyarlılık açısından farklılık gösterir (Tablo 1). Ayrıca kraniotominin cerrahi gereksinimi (in situ trombin enjeksiyonu ve FeCl3'ün topikal uygulaması için gereklidir), enfarktüs boyutunun ve yerinin tutarlılığı (ör., mikroembolinin CCA infüzyonu çok değişken sonuçlar verir) ve kardiyovasküler sistem üzerindeki küresel etkiler (örneğin, tHI, hipoksi kaynaklı periferik vazodilatasyonu telafi etmek için kalp atış hızını ve kalp debisini arttırır).

RB boya bazlı fototrombotik inme (PTS) modeli, basit kraniyotomi içermeyen cerrahi prosedürler, düşük mortalite (tipik olarak %5'<) ve öngörülebilir bir enfarktüs boyutu ve yeri (MCA sağlayan bölgede) dahil olmak üzere birçok çekici özelliğe sahiptir, ancak iki ana sınırlaması vardır. 8 İlk uyarı, aynı zamanda FeCl3 modeli 7,19,20'nin bir dezavantajı olan tPA aracılı trombolitik tedaviye zayıftan sıfıra yanıttır. PTS ve FeCl3 inme modellerinin ikinci uyarısı, takip eden trombüslerin az miktarda fibrin içeren yoğun paketlenmiş trombosit agregatlarından oluşmasıdır, bu sadece tPA-litik tedaviye karşı direncine yol açmakla kalmaz, aynı zamanda akut iskemik inme hastalarında karıştırılmış trombosit:fibrin trombüs modelinden de sapar21,22. Buna karşılık, in situ trombin-mikroenjeksiyon modeli esas olarak polimerize fibrin ve belirsiz bir trombosit içeriğiiçerir 10.

Yukarıdaki mantık göz önüne alındığında, inceltilmiş kafatası yoluyla MCA hedefli fotoaktivasyon için RB ve sub-trombotik trombin dozunun karışımının, ortaya çıkan trombüsteki fibrin bileşenini artırabileceğini ve tPA aracılı litik tedaviye duyarlılığı artırabileceğini varsaydık. Bu hipotezi doğruladık,23 ve burada modifiye (T+RB) fototrombotik inme modelinin ayrıntılı prosedürlerini açıklıyoruz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Bu protokol, Virginia Üniversitesi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır ve Ulusal Sağlık Enstitüleri Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'nu takip eder. Şekil 1A , bu protokolün cerrahi prosedürlerinin sırasını özetlemektedir.

1. Ameliyat kurulumu

  1. Ameliyattan en az 15 dakika önce küçük hayvan adaptörünün üzerine 37 °C sıcaklık ayarlı bir ısıtma pedi yerleştirin. Hayvan kafasının dönmesine izin veren adaptör için bir burun klipsi rulosu hazırlayın. Anestezikleri hazırlayın Ketamin (60 mg / kg) / Ksilazin (10 mg / kg).
  2. Makas, forseps, mikro iğne tutucular, kanama durdurucular, pamuklu çubuklar ve sütürler dahil olmak üzere cerrahi aletleri otoklavla sterilize edin (60 dakika boyunca 15 psi'de 121 °C). Doku tutkalı ve göz merhemi hazırlayın. Cerrahlar için 532 nm lazer koruma gözlüğünü hazırlayın.
    NOT: Bu protokol büyük bir sağkalım cerrahisi prosedürünü açıklar ve aseptik teknikler kullanılarak yapılmalıdır.
  3. Aydınlatma sistemini 532 nm lazer kaynağıyla kurun. Bir diş matkabı hazırlayın.
  4. Gül Bengal çözeltisini salin (10 mg / mL) içinde hazırlayın. Buz kovasına bir alikot sığır trombini (0.1 U / μL) yerleştirin.
  5. Ketoprofen'i (4.0 mg / kg) ameliyattan 30 dakika önce analjezi olarak fareye deri altına enjekte edin veya yerel kurumsal kılavuzlar tarafından önerilen analjezik rejimi kullanın.

2. İpsilateral ortak karotis arterin bağlanması

  1. 22 ila 30 g ağırlığındaki 10-14 haftalık erkek C57BL / 6NCrl farelerini kas içi Ketamin (60 mg / kg) ve Xylazine (10 mg / kg) enjeksiyonu ile uyuşturun.
    NOT: Serebral kan akışının izlenmesi yoluyla ipsilateral ortak karotis arterin bağlanmasını kapsayan tüm cerrahi prosedürün ~ 120 dakika sürmesi beklenmektedir. Anestezi rejimi tipik olarak tüm bu süre boyunca etkili olacaktır, ancak anestezik derinlik en az 15 dakikada bir yeniden değerlendirilmelidir. Bu prosedürleri öğrenirken anestezinin yeniden dozlanması gerekebilir.
  2. Hayvanın tamamen uyuşturulduğundan emin olmak için ayak parmağınızı sıkıştırın. CCA ligasyonu için sol boyundaki kılları ve kafatası inceltme için baştaki tüyleri tüy dökücü kremle alın.
  3. Fareyi sırtüstü pozisyonda küçük hayvan adaptörünün üzerine yerleştirin. Cildi üç alternatif povidon-iyot ve% 70 etanol ile silerek cerrahi alanı sterilize edin.
  4. Fare kafasını kulak çubuklarını kullanarak sabitleyin. Diseksiyon mikroskobu altında, orta hattın yaklaşık 0,2 cm lateralinde bir çift mikro makas ve düz forseps kullanarak 0,5 cm'lik sol servikal insizyon yapın.
  5. Sol ortak karotis arteri (LCCA) ortaya çıkarmak için yumuşak dokuyu ve fasyayı ayırmak için bir çift ince tırtıklı forseps kullanın. Bir çift ince düz forseps kullanarak sol CCA'yı vagal sinirden dikkatlice ayırın.
  6. 20 mm'lik segmentler halinde kesilmiş 5-0 ipek sütür kullanarak LCCA'nın etrafına kalıcı bir çift düğümlü sütür yerleştirin ve ardından steril yara klipsleri kullanarak yarayı kapatın.

3. MCA dalının üzerinde kafatası incelmesi ve fotoaktivasyon

  1. Fareyi küçük hayvan adaptörüne yüzüstü pozisyona çevirin. Burun klipsi rulosunu 15° döndürün. Cildi üç alternatif betadin ve% 70 etanol ile silerek cerrahi alanı sterilize edin.
  2. Göz ile kulak arasında yer alan temporalis kasını ortaya çıkarmak için sol göz ve kulak boyunca bir çift mikro makas ve düz forseps kullanarak saçlı deride 0,8 cm'lik bir kesi yapın (Şekil 1B).
  3. Diseksiyon mikroskobu altında, bir çift ince tırtıklı forseps ile sol parietal kemikte temporalis kasının kenarı boyunca 0.5 cm'lik bir kesi yapın. Mikro makasla temporalis kası üzerinde 0,3 cm'lik ikinci bir dikey kesi yapın. Parietal kemiğin ve skuamöz kemiğin kenarını ortaya çıkarmak için temporal kası geri çekin. Frontal ve parietal kemikler arasındaki koronal sütürün dönüm noktasını görselleştirdiğinizden emin olun (Şekil 1B,C).
  4. Sol MCA'yı ortaya çıkarmak için steril salin uygulayarak kafatasını nemlendirin. Skuamöz kemikteki proksimal MCA dalını bir işaretleyici kalemle işaretleyin. Pnömatik diş matkabı ile işaretli alanı çevreleyen yaklaşık 1 mm çapında bir daire çizin (hız kontrol cihazının %50'sinde çapak hızı ayarı) ve ardından alt duraya dokunmadan kafatasını yaklaşık 0.2 mm derinliğinde inceltin. Çok ince bir kemik tabakası kalana kadar delmeyi durdurun.
  5. Trombin (T, 0.1 U / μL, 80 U / kg) ve Gül bengal (RB, 10 mg / mL, 50 mg / kg) çözeltisini farenin vücut ağırlığına göre karıştırın. Örneğin, 25 g vücut ağırlığına sahip bir fare için 20 μL trombin (0.1 U / μL) ve 125 μL RB (10 mg / mL) karıştırın.
  6. T + RB çözeltisini (25 g vücut ağırlığı başına 145 μL) bir insülin şırıngası (#31G iğnesi) ile retro-orbital sinüse yavaşça enjekte edin.
    NOT: Pilot deneylerde, standart RB boya dozu (50 mg / kg) ile karıştırılmış artan trombin dozlarının mortalite oranı fotoaktivasyon açısından incelenmiştir. Mortalite 80 U/kg trombin için %0 (n=13), 120 U/kg trombin için %43 (n=7) ve hem 160 U/kg (n=5) hem de 200 U/kg trombin (n=5) için %100 idi. Bu nedenle bu model için 80 U/kg'lık bir trombin dozu seçildi. Retro-orbital sinüs T+RB enjeksiyonundan sonra orbital boşluğun yakınında yaygın kan pıhtılaşması olasılığını dışlamak için lazer benek kasılma görüntüleme de kullanıldı (Ek Şekil 1) ve ayrıca lazer aydınlatmasına maruz kalmayan kontralateral hemisferde yaygın fibrin birikimi (Ek Şekil 2).
  7. Kuruluğu önlemek için her iki göze de göz merhemi sürün.
  8. Aydınlatıcıyı 532 nm lazer ışığıyla (0,5 mW enerji ile) delinmiş alana 2 inç mesafeyle 20 dakika boyunca uygulayın. MCA'nın proksimal dalındaki aydınlatmayı bir lazer koruma gözlüğü ile görselleştirin (Şekil 1C,D).
    NOT: 532 nm aydınlatmalı MCA, gözlüğün altında kırmızı floresan gösterir. Distal MCA, 10 dakikalık aydınlatmadan sonra kaybolacaktır. 20 dakikalık aydınlatmadan sonra distal MCA akışı hala mevcutsa hayvanı hariç tutun.
  9. 20 dakika sonra lazer aydınlatmasını durdurun. Yarayı steril yara klipsleriyle kapatın.

4. İntravital görüntüleme (isteğe bağlı)

NOT: Trombüs oluşumunu in vivo olarak karakterize etmek için, fotoaktivasyon sistemi23 ile bir spin-disk konfokal ile intraviral görüntüleme kullanın.

  1. Kafatasının parietal kemiği üzerinde ~ 3 mm çapında bir kraniyal pencere yapın.
  2. Kraniyal pencereye bir kapak camı yerleştirin ve distal MCA'yı (~ 50 μm çapında) 20x suya daldırma hedefinin altına yerleştirin.
  3. Görüntülemeden 5 dakika önce DyLight488-konjuge anti-GPIbβ antikorunun (0.1 mg / kg) kuyruk damarı enjeksiyonu ile dolaşımdaki trombositi etiketleyin.
  4. Trombin (80 U / kg) ve Rose bengal (50 mg / kg) karışım solüsyonunu görüntülemeden 5 dakika önce retro-orbital ile enjekte edin.
  5. 10 μm çapında lazer ışını ile 561 nm lazer sistemi kullanarak MCA'yı fotoaktif hale getirin ve görüntüyü trombüs oluşana kadar kaydedin.

5. tPA yönetimi

  1. Anestezi uygulanmış hayvanı 37 °C'lik ılık bir ped üzerine yerleştirin. Seçilen fotoaktivasyon sonrası zaman noktasında, bir gazlı bezi ~45 °C ılık suyla ıslatın ve 1 dakika boyunca kuyruğa sarın.
  2. Rekombinant insan tPA'sını (10 mg / kg) infüzyon pompası ile 30 dakika boyunca% 50 bolus ve% 50 ile kuyruk damarından enjekte edin.
    NOT: Akut iskemik inme tedavisi için rekombinant insan tPA'sının klinik dozu 0.9 mg / kg olmasına rağmen, kemirgenlerde azalmış türler arası tPA reaktivitesini telafi etmek için daha yüksek bir doz (10 mg / kg) yaygın olarak kullanılır. Ayrıca, klinik öncesi inme modellerinde %50'sini bolus olarak ve %50'sini 30 dakika boyunca kuyruk damarından infüze ederek standart tPA uygulama protokolünü izledik.24

6. Serebral kan akışının izlenmesi (CBF)

NOT: tPA tedavisinden sonra CBF iyileşmesini doğrulamak için, iki boyutlu bir lazer benek kontrast görüntüleme sistemi15 kullanın ve fototrombozdan hemen sonra (adım 3.9) veya tPA tedavisinden 24 saat sonra kaydedin.

  1. Anestezi uygulanmış hayvanı yüzüstü pozisyona getirin ve kafatası açıkta kalacak şekilde kafa derisinde orta hat kesisi yapın.
  2. Kafatasını steril salinle nemlendirin ve ultrason jelini kafatasına nazikçe uygulayın. Jölede CBF sinyalini engelleyecek herhangi bir saç ve kabarcıktan kaçının.
  3. CBF'yi her iki serebral hemisferde lazer benekli kontrast görüntüleyici altında 10 dakika boyunca izleyin.
  4. CBF görüntüsünü kaydettikten sonra, kafa derisini doku yapıştırıcısı ile kapatın ve hayvanı kafese geri koyun.
  5. Seçilen bölgelerde CBF'yi analiz edin ve kontralateral bölgeye kıyasla CBF iyileşme yüzdesini hesaplayın.
  6. Ardından, hayvanı iyileşmesi için sıcak bir kafese geri koyun. Fareleri anesteziden kurtulana kadar 5-10 dakika izleyin. Islanan yiyecekleri kafese koyun ve hayvan bakım tesisine geri koyun.
    NOT: Yerel kurumsal kılavuzların önerdiği şekilde ameliyat sonrası analjezi sağlayın.

7. Trifenil tetrazolyum klorür (TTC) boyama ile enfarktüs hacmi ölçümü

  1. Fototrombozdan yirmi dört saat sonra, hayatta kalmama cerrahisi için yerel kurumsal yönergelere göre hayvanı derinlemesine uyuşturun.
    NOT: Tribromoetanol (avertin) 250 mg/kg'ı intraperitoneal (IP) enjeksiyon yoluyla uyguluyoruz.
  2. PBS ile transkardiyal perfüzyon gerçekleştirin, taze beyin toplayın ve% 3 agar jeli içine gömün.
  3. Beyin dilimini 1 mm kalınlığında vibratom ile bölümlere ayırın ve% 2 TTC çözeltisinde 10 dakika inkübe edin.
  4. ImageJ yazılımı ile 6 beyin diliminden toplam enfarktüs hacmini mutlak hacim olarak ölçün.
    NOT: Beyin ödemi iki nedenden dolayı sonuç ölçümü olarak kullanılmamıştır. İlk olarak, TTC boyası, ödemden daha ciddi bir sonuç olan doku canlılığını (mitokondriyal redüksiyon aktivitesi yoluyla) ölçer. İkincisi, enfarktüs ilerledikçe hem vazojenik hem de sitotoksik ödem oluşur ve standart beyin ödemi ölçüm yöntemleriyle kolayca ayırt edilemez. Bununla birlikte, kan-beyin bariyerinin (BBB) bütünlüğünü değerlendirmek için anti-immünoglobin (IgG) etiketlemesi kullandık ve hem RB hem de T + RB inme modellerinde fotoaktivasyondan 6 saat sonra karşılaştırılabilir IgG ekstravazasyonu bulduk (Ek Şekil 3).

8. Trombüs oluşumu ölçümü

NOT: Trombüs oluşumunu ölçmek için, immünokimya (IHC) ile MCA'da trombüs ölçümü için fototrombozdan 1 saat ve 2 saat sonra beyni toplayın ve immünoblot ile beyin hemisferinde fibrin ölçümü için sırasıyla.

  1. Pıhtı kompozisyonunun karakterizasyonu için IHC'yi gerçekleştirin. Beyni gece boyunca% 4 paraformaldehit ile sabitleyin ve ardından OCT yerleştirme için beyni% 30 sükroz ile kurutun.
  2. Beyni 20 μm kalınlığında sagital yönelimle bölümlere ayırın ve fibrinojen, trombosit (glikoprotein IIb), kırmızı kan hücresi (TER119) ve kan damarına (izolektin GS-IB4) karşı spesifik antikorlarla IHC'yi gerçekleştirin.
  3. Fibrinojene karşı bir antikor ile immünoblot ile beyin yarımküresinde fibrin ölçümü yapın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

İlk olarak, RB ile T + RB fototrombozunun neden olduğu kan pıhtılarındaki fibrin içeriğini karşılaştırdık. Fareler, fotoaktivasyondan 2 saat sonra fiksatiflerin transkardiyal perfüzyonu ile sakrifiye edildi ve uzunlamasına ve enine düzlemlerde MCA dalının immünofloresan boyanması için beyinler çıkarıldı. RB fototrombozunda, MCA dalı yoğun olarak CD41+ trombositler ve az miktarda fibrin ile doluydu (Şekil 2A,C). Buna karşılık, T+RB fototrombozunda MCA dalı rastgele...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

1985 yılında tanıtılan geleneksel RB fototrombotik inme, basit cerrahi prosedürler, düşük mortalite ve beyin enfarktüsünün yüksek tekrarlanabilirliği için çekici bir fokal serebral iskemi modelidir. 5 Bu modelde, fotodinamik boya RB, ışık uyarımı üzerine trombositleri hızla aktive eder ve kan damarını tıkayan yoğun agregalara yol açar 5,8,23. Bununla birlikte, RB ile indüklenen kan pıhtılarındaki az mikta...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

Bu çalışma NIH hibeleri (NS108763, NS100419, NS095064 ve HD080429'den C.Y.K.'ye; NS106592 Y.Y.S.'ye) desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
2,3,5-trifeniltetrazolyum klorür (TTC)SigmaT8877enfarktüs
4-0 Naylon monofilament sütürLOOK766Bcerrahi malzemeler
5-0 ipek sütürHarvard Aparatı624143cerrahi malzemeler
543nm lazer ışınıMelles Griot25-LGP-193-249fototromboz
yetişkin erkek farelerCharles NehriC57BL / 610 ~ 14 haftalık (22 ~ 30 g)
Fare adaptörü makine atölyesi için anestezi çubuğu, UVAcerrahi kurulum
Avertin (2, 2, 2-Tribromoetanol)SigmaT48402ötenazi
Diş matkabıDentamericaRotex 782cerrahi kurulum
Dijital mikroskopDino-LiteAM2111beyin görüntüleme
Diseksiyonu mikroskopOlympusSZ40cerrahi kurulum
İnce kavisli forseps (tırtıklı)FST11370-31cerrahi alet
İnce kavisli forseps (pürüzsüz)FST11373-12cerrahi alet
keçi anti-tavşan Alexa Fluro 488InvitrogenA11008İmmünohistokimya
Halsted-Sivrisinek kanama durdurucularFST13008-12cerrahi alet
Isıtma pedli ısı pompasıGaymarTP700cerrahi kurulum
infüzyon pompasıKD Scientific200trombolitik tedavi
31G iğneli insülin şırıngasıBD328291fototromboz
KetaminCCM, UVAanestezi
Lazer koruyucu google 532nmThorlabsLG3fototrombozu
KetoprofenCCM, UVANSAID analjezi
mikro iğne tutucularFST12060-01cerrahi alet
mikro makasFST15000-03cerrahi alet
MoorFLPI-2 kan akışı görüntüleyiciMoor780-nm lazer kaynağıLazer Benek Kontrast
Görüntüleme Fare adaptörüRWD68014cerrahi kurulum
Puralube Vet merhemFisherNC0138063göz kuruluğu önleme
Ekartör ipuçlarıKent ScientificSurgi-5014-2cerrahi kurulum
Rose BengalSigma198250fototromboz
TrombinSigmaT7513fototromboz
Doku yapıştırıcısıAbbottLaboratuvarlarıNC9855218 cerrahi malzemeler
tPAGenetechCathflo aktivaz 2mgtrombolitik tedavi
VibratomÇalma51425TTC infacrt Xylazine
CCM, UVAanestezi

Kaynaklar

  1. Lyden, P. D. Thrombolytic Therapy for Acute Stroke. 3/e. , Springer. (2015).
  2. Linfante, I., Cipolla, M. J. Improving reperfusion therapies in the era of mechanical thrombectomy. Translational Stroke Research. 7 (4), 294-302 (2016).
  3. Campbell, B. C., et al. Endovascular Therapy for Ischemic stroke with perfusion-imaging selection. The New England Journal of Medicine. 372 (11), 1009-1018 (2015).
  4. Hossmann, K. A. The two pathophysiologies of focal brain ischemia: implications for translational stroke research. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 32 (7), 1310-1316 (2012).
  5. Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke. 20 (1), 84-91 (1989).
  6. Watson, B. D., Dietrich, W. D., Busto, R., Wachtel, M. S., Ginsberg, M. D. Induction of reproducible brain infarction by photochemically initiated thrombosis. Annals of Neurology. 17 (5), 497-504 (1985).
  7. Watson, B. D., Prado, R., Veloso, A., Brunschwig, J. P., Dietrich, W. D. Cerebral blood flow restoration and reperfusion injury after ultraviolet laser-facilitated middle cerebral artery recanalization in rat thrombotic stroke. Stroke. 33 (2), 428-434 (2002).
  8. Uzdensky, A. B. Photothrombotic stroke as a model of ischemic stroke. Translational Stroke Research. 9 (5), 437-451 (2018).
  9. Karatas, H., et al. Thrombotic distal middle cerebral artery occlusion produced by topical FeCl(3) application: a novel model suitable for intravital microscopy and thrombolysis studies. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 31 (3), 1452-1460 (2011).
  10. Orset, C., et al. Mouse model of in situ thromboembolic stroke and reperfusion. Stroke. 38 (10), 2771-2778 (2007).
  11. Orset, C., et al. Efficacy of Alteplase in a mouse model of acute ischemic stroke: A retrospective pooled analysis. Stroke. 47 (5), 1312-1318 (2016).
  12. Kudo, M., Aoyama, A., Ichimori, S., Fukunaga, N. An animal model of cerebral infarction. Homologous blood clot emboli in rats. Stroke. 13 (4), 505-508 (1982).
  13. Busch, E., Kruger, K., Hossmann, K. A. Improved model of thromboembolic stroke and rt-PA induced reperfusion in the rat. Brain Research. 778 (1), 16-24 (1997).
  14. Lapchak, P. A., Araujo, D. M., Zivin, J. A. Comparison of Tenecteplase with Alteplase on clinical rating scores following small clot embolic strokes in rabbits. Experimental Neurology. 185 (1), 154-159 (2004).
  15. Sun, Y. Y., et al. Synergy of combined tPA-Edaravone therapy in experimental thrombotic stroke. PLoS One. 9 (6), 98807(2014).
  16. Sun, Y. Y., et al. Prophylactic Edaravone prevents transient hypoxic-ischemic brain injury: Implications for perioperative neuroprotection. Stroke. 46 (7), 1947-1955 (2015).
  17. Sun, Y. Y., et al. Sickle mice are sensitive to hypoxia/ischemia-induced stroke but respond to tissue-type plasminogen activator treatment. Stroke. 48 (12), 3347-3355 (2017).
  18. Sun, Y. Y., Kuan, C. Y. A thrombotic stroke model based on transient cerebral hypoxia-ischemia. Journal of Visualized Experiments. (102), e52978(2015).
  19. Pena-Martinez, C., et al. Pharmacological modulation of neutrophil extracellular traps reverses thrombotic stroke tPA (tissue-type plasminogen activator) resistance. Stroke. 50 (11), 3228-3237 (2019).
  20. Denorme, F., et al. ADAMTS13-mediated thrombolysis of t-PA-resistant occlusions in ischemic stroke in mice. Blood. 127 (19), 2337-2345 (2016).
  21. Marder, V. J., et al. Analysis of thrombi retrieved from cerebral arteries of patients with acute ischemic stroke. Stroke. 37 (8), 2086-2093 (2006).
  22. Bacigaluppi, M., Semerano, A., Gullotta, G. S., Strambo, D. Insights from thrombi retrieved in stroke due to large vessel occlusion. Journal of Cerebral Blood Flow and Metabolism. 39 (8), 1433-1451 (2019).
  23. Sun, Y. Y., et al. A murine photothrombotic stroke model with an increased fibrin content and improved responses to tPA-lytic treatment. Blood Advances. 4 (7), 1222-1231 (2020).
  24. Su, E. J., et al. Activation of PDGF-CC by tissue plasminogen activator impairs blood-brain barrier integrity during ischemic stroke. Nature Medicine. 14 (7), 731-737 (2008).
  25. Gupta, A. K., et al. Protective effects of gelsolin in acute pulmonary thromboembolism and thrombosis in the carotid artery of mice. PLoS One. 14 (4), 0215717(2019).
  26. Carroll, B. J., Piazza, G. Hypercoagulable states in arterial and venous thrombosis: When, how, and who to test. Vascular Medicine. 23 (4), 388-399 (2018).
  27. Coutts, S. B., Berge, E., Campbell, B. C., Muir, K. W., Parsons, M. W. Tenecteplase for the treatment of acute ischemic stroke: A review of completed and ongoing randomized controlled trials. International Journal of Stroke. 13 (9), 885-892 (2018).
  28. McFadyen, J. D., Schaff, M., Peter, K. Current and future antiplatelet therapies: emphasis on preserving haemostasis. Nature Reviews Cardiology. 15 (3), 181-191 (2018).
  29. Bang, O. Y., Goyal, M., Liebeskind, D. S. Collateral crculation in ischemic stroke: Assessment tools and therapeutic strategies. Stroke. 46 (11), 3302-3309 (2015).
  30. Faber, J. E., Chilian, W. M., Deindl, E., van Royen, N., Simons, M. A brief etymology of the collateral circulation. Arteriosclerosis, Thrombsis, Vascular Biology. 34 (9), 1854-1859 (2014).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Trombin Rose BengalFibrinle Zenginleştirilmiş PıhtıtPA Duyarlı ModelOrta Serebral ArterLazer Spekle Kontrastıİmmünofloresan İşaretlemeSerebral Kan Akışı İzlemiRetro-orbital EnjeksiyonProksimal MCA Dalı
Fibrin ile zenginleştirilmiş ve tPA'ya duyarlı fototrombotik inme modeli
Bize Ulaşın
Kütüphaneye Öner

Gizlilik

Kullanım Koşulları

Politikalar

Telif Hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.