Yöntem makalesi

Prepubertal Kızlarda ve Kadınlarda Doğurganlığın Korunmasını Optimize Etmek İçin Yumurtalık Dokusundan Alınan Oositlerin Dondurularak Saklanması

6.2K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/61777

⸱

23 Ekim 2020

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Développement Embryonnaire Précoce Humain et Pluripotence, Univ Montpellier, INSERM 1203, 2Département de Biologie de la Reproduction, Biologie de la Reproduction/DPI et CECOS, CHU Montpellier, Univ Montpellier, 3Centre d'AMP-CECOS, CHU Grenoble-Alpes, Univ Grenoble-Alpes

Bu makalede

Özet

Prejubertal kızlarda ve erken over yetmezliği riski taşıyan kadınlarda fertilitenin korunması için bir protokol öneriyoruz. Yumurtalık dokusunun dondurulması ve yumurtalık dokusundan alınan oositlerin dondurularak saklanmasını birleştirir. Bu strateji, güvenliği artırır ve doğurganlığın korunmasının üreme potansiyelini optimize ederek doğum şansını en üst düzeye çıkarır.

Özet

İnsan yumurtalık dokusu kriyoprezervasyonu (OTC), acil gonadotoksik tedaviler veya yumurtalık cerrahisi bağlamında prepubertal kızlarda ve erken yumurtalık yetmezliği (POI) riski taşıyan kadınlarda kadın doğurganlığını korumak için dünya çapında giderek daha fazla kullanılmaktadır. Doğurganlığın korunması zordur çünkü hasta yönetimi, doğurganlığın korunması stratejileri ve hatta teknik laboratuvar protokolleri ile ilgili bir fikir birliği yoktur, bu da her prosedürün hasta profilinin özelliklerine ve kendi risk-fayda oranına göre uyarlanması gerektiği anlamına gelir. OTC sırasında, olgun / olgunlaşmamış oositler, yumurtalık dokusu örnekleri içindeki büyük / küçük antral foliküllerden doğrudan aspire edilebilir ve / veya prepubertal kızlarda ve kadınlarda yumurtalık dokusu diseksiyonu sırasında büyüyen foliküllerden kültür ortamına salınabilir. Bu yazıda, yumurtalık dokusunun dondurulması ile yumurtalık dokusu örneklerinden alınan olgun/olgunlaşmamış oositlerin dondurulmasını birleştiren ve doğurganlığın korunmasının üreme potansiyelini artıran bir protokol sunuyoruz. Kriyoprezervasyon öncesinde, sırasında ve sonrasında yumurtalık dokusu ve oositlerin uygun şekilde toplanması, taşınması ve saklanması açıklanacaktır. Dondurularak saklanmış/çözülmüş yumurtalık dokusu örneklerinin ve oositlerin müteakip kullanımı ve güvenliği ile olgunlaşmamış oositlerin in vitro olgunlaşması için en uygun zamanlama da tartışılacaktır. Bu protokolün, doğurganlığın korunmasının tüm üreme potansiyelini arttırdığı (yani, OTC'ye ek olarak oosit vitrifikasyonu) ve ayrıca doğurganlığın korunmasının güvenliğini ve kullanımını iyileştirdiği için prepubertal kızların ve kadınların doğurganlığının korunmasında sistematik olarak kullanılmasını öneriyoruz (ör., yumurtalık greftine karşı oositlerin çözülmesi), POI riski taşıyan hastalar için başarılı doğum şansını en üst düzeye çıkarır.

Giriş

Doğurganlığın korunması alanı, erken yumurtalık yetmezliği (POI) riski taşıyan hasta sayısının artması nedeniyle son yirmi yılda büyümüştür1,2,3. Doğurganlığı korumak için mevcut mevcut tıbbi seçenekler yumurtalık dokusu kriyoprezervasyonu (OTC)4, yumurtalık stimülasyonundan sonra oosit/embriyo dondurma5, GnRH analoglarının uygulanması6 veya yumurtalık transpozisyonu7'dir. OTC, özellikle doğurganlığı korumak için şu anda mevcut olan tek seçenek olan prepubertal kızlarda ve ayrıca gonadotoksik tedavilerinin başlangıcını geciktiremeyen kadınlardadoğurganlığın korunması için büyük bir ilerlemedir 2,4.

OTC, yumurtalık korteksinin2 dış 1 mm'sinde bulunan çok sayıda ilkel folikülün korunmasına izin verir. Dondurulmuş/çözülmüş yumurtalık dokusu daha sonra greft (ortotopik veya heterotopik, otolog veya donör) ile kullanılabilir veya olgun oositler elde etmek için in vitro kültürlenebilir2. Dondurulmuş-çözülmüş prepubertal over dokusu örneklerinin greftinin ergenliği indüklediği gösterilmiştir 8,9. Kadınlarda, donmuş-çözülmüş yumurtalık korteksinin ortotopik otogreftlenmesinden sonraki üreme sonuçları güven vericidir, canlı doğum oranları doğal gebelenmelerden sonra %57,5'eulaşır 10 ve Yardımcı Üreme Teknikleri (ART) gebelerinden sonra %30 ila %70 arasındadır11. 2004 yılında donmuş/çözülmüş insan yumurtalık dokusunun ortotopik transplantasyonundan ilk canlı doğumdanbu yana12, bu teknik dünya çapında en az 130 çocuğun doğumuna izin verdi2. Greft dokusunun hormonal ve üreme fonksiyonları genellikle birkaç yıl sürer 11,13,14 ve uzun vadeli işlevselliğini doğrular.

Bununla birlikte, yumurtalık dokusu örneklerinin ototransplantasyonu, bazı hastalarda 15,16,17,18, özellikle lösemiden kurtulanlarda19 canlı malign hücrelerin yeniden ortaya çıkması için teorik bir risk taşır. Bugüne kadar, kanserden kurtulan sağlıklı kişilerde donmuş/çözülmüş yumurtalık korteksinin grefti yoluyla kanser bulaşma vakası bildirilmemiştir11, bu da yumurtalık korteksinin fibröz avasküler doğasının, kötü huylu hücrelerin yayılması için elverişsiz bir mikro ortamı temsil edebileceğini düşündürmektedir. Bununla birlikte, yumurtalık dokusu grefti hala deneysel ve zorlu bir tekniği temsil etmektedir, bu da oosit kullanımının şu anda doğurganlığı geri kazanmak için yumurtalık dokusu greftinden daha kolay ve daha güvenli bir yaklaşım olarak düşünülmesi gerektiğini göstermektedir. İlginç bir şekilde, olgunlaşmamış oositler hem prepubertal kızlarda hem dekadınlarda 16 OTC sırasında yumurtalık dokusundan kolayca alınabilir, bu da yumurtalık kortikal dokusunun dondurulmasına ek olarak doğurganlığı geri kazanma potansiyelini en üst düzeye çıkarmak için güvenilir bir kaynak olabileceğini düşündürmektedir. Bu oositler görünür antral foliküllerden ART laboratuvarında ex vivo olarak manuel olarak aspire edilebilir veya over dokusu diseksiyonu sonrası harcanan ortamlardan izole edilebilir. Alınan oositler daha sonra olgunlaşmamış bir aşamada doğrudan vitrifiye edilebilir veya in vitro maturasyon (IVM) kullanılarak vitrifikasyon adımından önce olgunlaştırılabilir20,21.

Bu yazıda, over dokusunun dondurularak saklanmasını, over dokusundan alınan matür (MII evre oositler) ve/veya immatür oositlerin (ör. Germinal Vezikül (GV) ve Metafaz I (MI) evre oositler) izolasyonu ve dondurularak saklanması ile birleştiren bir protokol önerilmiştir. Bu protokol, hem prepubertal kızlarda hem de kadınlarda doğurganlığın korunma potansiyelini en üst düzeye çıkarmak için gereken tüm özel adımları özetlemektedir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm kadınlar (18 yaş üstü), tüm reşit olmayan kızlar ve ebeveynleri, POI riski altındaki hastanın doğurganlığını korumak için bilgilendirilmiş bir onay formu imzaladı. Bu protokol fertilitenin korunması için merkezimizde rutin bir ART prosedürü olarak kabul edilmektedir. Kurumlarımızın insan araştırmaları etik kurulunun yönergelerini takip eder.

1. Kalite kontrol

  1. Dolaşımdaki anti-müllerian hormon konsantrasyonu >1 ng / mL içeren ve gonadotoksik tedaviye bağlı artmış POI riskinin varlığını gösteren 38 yaş ≤ kadın yaşını içerir. Doğurganlık koruma prosedürü için oosit vitrifikasyonu için uygun kadınları, tam olarak bilgilendirilmiş onam vermeyi engelleyen bir durumu olan kadınları veya anestezi veya cerrahiden kaynaklanan komplikasyon riski yüksek olan kadınları hariç tutun.
  2. Bu prosedürü başlatmadan önce imzalı bir hasta onayının varlığını onaylayın.
  3. İki farklı kriyoprezervasyon depolama tankında iki boş yer belirleyin. Kriyotüplerin/pipetlerin yarısı birinci depolama tankında tutulacak, kriyotüplerin/pipetlerin diğer yarısı ise bir tank arızası durumunda numunelerin tamamen kaybolma riskini en aza indirmek için diğer tankta tutulacaktır.
  4. Bu protokolde gerekli olan tüm tıbbi cihazların kullanılabilirliğini ve işlevselliğini kontrol edin. Diseksiyon basamağı için keskin düz bıçaklı ve ince bilenmiş uçlu steril cerrahi diseksiyon makası ve steril atravmatik doku forsepsleri önerilir.
  5. Tüm tıbbi cihazlar için tüm kalite kontrol adımlarına uyulup uyulmadığını kontrol edin (özellikle, sterilizasyon işlemlerinin doğrulanması ve rutin kontrolü, son kullanma tarihi/lot numarası doğrulaması ve takibi).
  6. Prosedür boyunca aseptik/steril bir ortam sağlayın ve tüm güvenlik önlemlerini dikkatli bir şekilde uygulayın.
  7. Her hasta için farklı tabaklar, pipetler ve cerrahi aletler kullanın.

2. Korumadan önceki gün

  1. Mineral yağ ile kaplanmış bir IVF ortamı içeren bir steril 60 mm IVF Petri kabı hazırlayın ve tabağı gece boyunca 37 °C'de %5O2 ve %5 CO2 atmosferinde inkübe edin. Dokudan potansiyel olarak elde edilecek kümülüs-oosit komplekslerini (COC'ler) toplamak için bu kabı kullanın (bkz. bölüm 7.2).
  2. IVF ortamı içeren bir steril 35 mm IVF Petri kabı hazırlayın ve çanağı gece boyunca 37 ° C'de% 5 O2 ve% 5 CO2 atmosferinde inkübe edin. Oosit denudasyon adımı için bu kabı kullanın (bkz. bölüm 9.1).
  3. Mineral yağ ile kaplanmış IVF ortamı içeren bir adet steril 35 mm IVF Petri kabı hazırlayın ve tabağı gece boyunca 37 °C'de %5O2 ve %5 CO2 atmosferinde inkübe edin. Desüdasyon adımından sonra oositleri toplamak için bu kabı kullanın (bkz. bölüm 9.4).

3. Yumurtalık dokusunun toplanması ve taşınması

  1. Laparoskopik cerrahiyi genel anestezi altında, göbekte konumlandırılmış 10 mm'lik bir port ve biri sol-alt kadranda ve diğeri sağda konumlandırılmış iki adet 5 mm'lik port kullanarak gerçekleştirin.
  2. Yumurtalık rezervine, her iki yumurtalığın boyutuna ve makroskopik yönüne (Şekil 1, A1-B1) ve planlanan gonadotoksik protokole dayalı olarak onkolog, cerrah ve ART ünitesinin sağlık personelinin fikir birliği kararına göre kısmi veya tam tek taraflı ooferektomi yapın. Keskin bir makas veya cerrahi zımba ile ooferektomi yapın. Korunacak yumurtalık dokusunda kollateral, elektriksel veya termal yaralanmaya neden olabilecek herhangi bir diseksiyon cihazı kullanmayın.
    NOT: Tam tek taraflı ooferektomi genellikle prepubertal kızlarda16,22 yapılırken, büyük yumurtalıkları ve/veya yüksek yumurtalık rezervi olan yetişkin hastalarda kısmi tek taraflı ooferektomi yaygın olarak gerçekleştirilebilir.

Yumurtalık diseksiyonu ve kesit alma işlemi; görüntüler yumurtalık, SAF parçaları, korteks, medulla, CL'yi gösterir.
Şekil 1: Yumurtalık dokusu kriyoprezervasyonu. Her ikisi de akut miyeloid lösemiden muzdarip prepubertal bir kızda (A, 7 yaşında hasta) ve bir kadında (B, 28 yaşında hasta) yumurtalık dokusunun dondurulması. (A1–B1) Yumurtalığın laparoskopik görünümü. (A2–B2–B3) Yumurtalık dokusunun diseksiyonu. (B4) Kortikal yumurtalık dokusu. CL: korpus luteum. SAF: küçük antral folikül. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

  1. El yapımı veya ticari bir laparoskopik numune alma torbası kullanarak yumurtalık dokusunun tahliyesini gerçekleştirin.
  2. Yumurtalık dokusunu 4 ° C'de kültür ortamı içeren steril bir tüpe koyun. Doku tamamen kültür ortamına daldırılmalıdır.
  3. En iyi sonuçlar için yumurtalık dokusunu hemen 4 ° C'de yalıtılmış bir kese içinde ART laboratuvarına taşıyın.
    NOT: Gerekirse, yumurtalık dokusu, doku kalitesini tehdit etmeden toplandıktan sonra 26 saate kadar soğuk sıcaklıklarda (yaklaşık 4 °C) laboratuvara taşınabilir23.

4. Yumurtalık dokusu hazırlığı

  1. Yumurtalık dokusunu 4 ° C'de 20 mL önceden soğutulmuş kültür ortamı içeren steril bir 90 mm IVF Petri kabına aktarın.
  2. Mikroorganizma kontaminasyonu riskini en aza indirmek için yumurtalık dokusunu içeren Petri kabını dikey laminer akışlı temiz bir tezgah üzerine yerleştirilmiş soğuk bir tabağa (4 °C'de) koyun.

5. Yumurtalık dokusu örneklerinden manuel folikül aspirasyonu

  1. Görünür antral folikülleri (yumurtalık dokusunun yüzeyinde varsa) 1 mL tek kullanımlık bir şırıngaya bağlı 21 G'lik bir şırınga iğnesi ile aspire edin.
    NOT: Bu adım yanıltıcı olabilir. Bir alternatif, diseksiyon ortamı içindeki COC'leri yumuşak bir şekilde serbest bırakmak için her görünür antral folikülü bir neşter ile nazikçe açmak ve her bir folikülün içini IVF ortamı ile durulamak olabilir.
  2. Toplanan foliküler sıvıları oda sıcaklığında 5 mL IVF kültür ortamı içeren steril bir 60 mm IVF Petri kabına yıkayın.
  3. Şırıngayı oda sıcaklığında 1 mL IVF kültür ortamı ile durulayın ve sıvıyı aynı IVF Petri kabına yıkayın. Bu adımı iki kez tekrarlayın.
  4. COC'leri ters çevrilmiş bir mikroskop altında (50x–200x büyütme) tanımlayın ve izole edin.
  5. Sağlıklı COC'leri bir pipet ile %5 O2 ve% 5 CO2 atmosferinde 37 ° C'de yağ ile kaplanmış önceden dengelenmiş IVF ortamı içeren yeni bir steril 60 mm IVF Petri kabına aktarın.
    NOT: Sağlıklı COC'ler yarı saydam bir oosit içerir. Kahverengi renkli bir oosit sunan atretik COC'leri atın.
  6. IVF Petri kabını inkübatörde 37 °C'de %5O2 ve %5 CO2 atmosferinde denudasyon aşamasına kadar saklayın (bkz. adım 9).

6. Yumurtalık dokusu diseksiyonu

  1. Taze dondurma solüsyonunu 50 mL'lik steril bir tüpte hazırlayın. Dondurma çözeltisi, IVF kültür ortamında 1.5M dimetilsülfoksit (DMSO) ve% 10 insan serum albümini içerir. Yavaşça girdap.
    NOT: Kullanmadan hemen önce hazırlanmalıdır.
  2. Yumurtalık dokusunu kesin ve medullayı mümkün olduğunca çıkarın (Şekil 1, B4).
  3. Tam veya kısmi tek taraflı ooferektomi durumunda yumurtalık korteksini sırasıyla 10 mm x 10 mm x 1 mm veya 0,5 mm x 0,5 mm x 1 mm ölçülerinde dilimler halinde kesin (Şekil 1, A2–B2–B3). Kesim steril cerrahi kesici makas ve atravmatik forseps ile yapılır.
    NOT: Daha ileri histolojik analiz için bir dilim yumurtalık dokusu hem yumurtalık korteksi hem de medulla ile sağlam tutulur (bkz. adım 8).
  4. Diseksiyondan sonra, kanı çıkarmak için 1 mL IVF kültür ortamında her yumurtalık kortikal örneği için iki yıkama adımı (veya gerekirse daha fazla) gerçekleştirin. Yıkamadan sonra, tüm doku örneklerini taze IVF kültür ortamı ile 60 mm'lik yeni bir Petri kabına aktarın.
  5. Her yumurtalık kortikal örneğini 1 mL dondurma çözeltisi içeren bir kriyotüpe yerleştirin.
    NOT: Karıştırma gereksizdir. Daha ileri histolojik analiz için tutulan yumurtalık dokusu dilimi dondurularak saklanmaz (bkz. adım 8).
  6. Dondurma çözeltisi ile dengelemek için numuneleri 4 ° C'de 30 dakika saklayın.
  7. Tüm numuneleri yavaş dondurma tekniği ile kriyoprezervasyon yapın. Soğutma hızı +4 °C ila -9 °C arasında -2 °C/dk, -50 °C/dk ila -30 °C; 1 dakika, +4 °C/dk -15 °C'ye kadar, -2 °C/dk -40 °C'ye kadar basılı tutun; ve son olarak programlanabilir bir dondurucu kullanarak -25 °C/dk'dan -150 °C'ye kadar.
  8. Kriyotüpleri hemen çıkarın ve -196 °C'de sıvı nitrojene daldırın.
  9. Kriyotüplerin yarısını birinci sıvı nitrojen depolama tankına ve kriyotüplerin diğer yarısını ikinci bir sıvı nitrojen tankına yerleştirin.

7. Diseksiyon harcanan ortamdan manuel COC izolasyonu

  1. Mikroskop altında diseksiyon harcanan ortamdan COC'leri tanımlayın (50x–200x büyütme) (Şekil 2).

Oosit olgunlaşma evreleri; etiketli kümülüs, korona radiata, atretik oositler ile mikroskopi görüntüleri.
Şekil 2: Yumurtalık dokusundan alınan olgun ve olgunlaşmamış COC'ler. Yumurtalık dokusundan alınan olgun (A) ve olgunlaşmamış (B1-B3, C1-C2) COC'ler. (A) Olgun bir oosit içeren olgun COC (ilk polar cismin varlığı, Metafaz II evre oosit). (B1) Olgunlaşmamış bir oosit içeren sağlıklı olgunlaşmamış COC (polar cisim yok, Metafaz I-evre oosit). (B2-B3) Olgunlaşmamış Germinal Vezikül evresi oositleri içeren sağlıklı olgunlaşmamış KOK'lar (polar cisim yok, Profaz I evre oositler). (C1-C2) Atretik kahverengi renkli oosit içeren sağlıksız COC'ler. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

  1. Sağlıklı COC'leri bir pipet ile %5 O2 ve% 5 CO 2 atmosferinde 37 ° C'de yağ ile kaplanmış önceden dengelenmiş IVF ortamı içeren yeni bir steril 60 mm IVF Petri Kabınaaktarın (bkz . adım 2.1).
    NOT: Atretik COC'leri atın.
  2. IVF Petri kabını inkübatörde 37 °C'de %5O2 ve %5 CO2 atmosferinde denudasyon aşamasına kadar saklayın (bkz. adım 9).

8. Yumurtalık dokusu histolojik analizi

  1. Kalan yumurtalık dokusu dilimini (hem yumurtalık korteksi hem de medulla içeren) histolojik inceleme için kimyasal temiz bir tezgahta% 3'lük bir formalin çözeltisine sabitleyin.
    NOT: Sadece kortikal numuneler başarılı bir şekilde dondurulduktan ve saklandıktan sonra yapılmalıdır.
    DİKKAT: Formalin çözeltisi tahriş edici, aşındırıcı ve toksiktir. Bu adım dikkatli bir şekilde ve tüp bebek laboratuvarı dışında gerçekleştirilmelidir.
  2. Bu yumurtalık dokusu örneğinin, kötü huylu hücrelerin potansiyel varlığının bir değerlendirmesinin yanı sıra yumurtalık foliküllerinin sayısı ve tipinin bir açıklaması ile tam bir histolojik analizini reçete edin (ör., sırasıyla, birincil, birincil, ikincil ve antral foliküller).

9. Oosit denudasyonu ve seçimi

  1. Oosit denudasyonu gerçekleştirin. COC'leri hyaluronidaz çözeltisine (80 IU / mL veya nihai konsantrasyon 0.1 mg / mL) nazikçe pipetleme ile (tekrarlanan aspirasyon ve COC'lerin denudasyon çözeltisine atılması) büyük çaplı bir pipet ucu (hacim 0.1–20 μL, uzunluk: 40.5 mm, çap çalışma konisi: 6 mm, çap açıklığı: 0.36 mm) kullanarak 30 saniye boyunca kısaca maruz bırakın, hemen ardından fazla enzimi uzaklaştırmak için mineral yağ ile kaplanmış önceden dengelenmiş ortamda iki yıkama adımı uygulayın (bkz. adım 2.1).
  2. Önceden dengelenmiş IVF ortamında 150 μm'lik bir pipet ucu kullanarak nazik pipetleme yoluyla kümülüs ve korona radiata hücrelerinin uzaklaştırılmasını optimize edin (bkz. adım 2.1).
  3. Ters çevrilmiş bir mikroskop (200x–400x büyütme) kullanarak sağlıklı oositlerin bir seçim adımını gerçekleştirin. Sağlıklı oositlerin olgunlaşma evresi GV, MI veya MII evresindeki oositler olabilir (Şekil 3). Sağlıklı oositler aşağıdaki morfolojik özelliklere sahiptir: sağlam ve yuvarlak bir sitoplazma, 100-150 μm arasında bir boyut ve soluk bir renk.
    NOT: Atretik ve sağlıksız oositleri atın (Şekil 3, D1-D3).

Oosit olgunlaşma evrelerinin mikroskop görüntüleri; germinal vezikül (GV) bazı hücrelerde tanımlanır.
Şekil 3: Yumurtalık dokusundan alınan olgun ve olgunlaşmamış oositler. (A) Olgun oosit (Metafaz II evre oosit: ilk polar cismin varlığı (PB, ok), görünür çekirdek yok), (B1-B2) Olgunlaşmamış oositler (Metafaz I-evre oosit: polar cisim yok, görünür çekirdek yok), (C1-C3) Olgunlaşmamış oositler (Germinal Vezikül evresi (VG) oositler: polar cisim yok, sitoplazma içinde nükleollü büyük bir halo varlığı (ok)). C1'de, Germinal Vezikül evreli oositler heterojen boyut gösterir. (D1-D3) Atretik oositler. PB: kutup cisim. GV: Germinal Vezikül. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.

  1. Vitrifikasyon adımına kadar sağlıklı oositleri inkübatör içinde 37 °C, %5O2 ve %5CO2'de inkübe edin (bkz. adım 2.1).

10. Oosit vitrifikasyonu

  1. Hasta/numune kimliğini onaylayın.
  2. Ters çevrilmiş bir mikroskop (200x–400x büyütme) kullanarak sağlıklı oositlerin yeni bir seçim adımını gerçekleştirin.
    NOT: Atretik ve sağlıksız oositleri atın.
  3. Vitrifikasyon adımından hemen önce ters çevrilmiş bir mikroskop kullanarak her sağlıklı oositin bir fotoğrafını çekin. Her oositin olgunlaşma aşamasına dikkat edin.
    NOT: Tüm bu verileri (resim, boyut, olgunlaşma aşaması) hastanın dosyasına ekleyin.
  4. Hasta başına birden fazla pipetin dondurularak saklanması durumunda bunları ayırt etmek için pipet başına farklı kimlik numaraları kullanın.
  5. Saman başına bir veya iki oosit (ler) kriyoprezervasyon yapın.
    NOT: Olgun ve olgunlaşmamış canlı oositler ayrı ayrı dondurularak saklanmalıdır. İki oositi aynı pipette birlikte dondurarak saklarken, benzer morfolojik özelliklere sahip oositlerin seçilmesi önerilir.
  6. Üreticinin talimatlarına göre bir vitrifikasyon kiti kullanarak sağlıklı oositleri kriyoprezerve edin (bkz. Malzeme Tablosu).
  7. Kriyopreserve oositlerini, üreticinin talimatlarına göre sıvı nitrojen içinde kriyo depolama için uygun bir cihaza yükleyin (bkz. Malzeme Tablosu).
  8. Pipetlerin yarısını birinci sıvı nitrojen depolama tankına ve diğer yarısını ikinci bir sıvı nitrojen tankına yerleştirin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

2007-2020 yılları arasında 43 prepubertal kız ve 38 kadın olmak üzere 81 kadın hastadan toplam 81 OTC yapılmıştır. Kadın hastaların (prepubertal kızlar ve kadınlar) ortalama yaşı 14.21 ± 9.61 yıl (standart hata ±) idi. Hastaların en küçüğü 5 aylık, en yaşlısı 33.6 yaşındaydı (Tablo 1). Prepubertal kızların ve kadınların ortalama yaşı sırasıyla 6.84 ± 4.81 yıl (min–max: 0.5–15.1) ve 22.76 ± 5.92 yaş (min–max: 14.2–33.6) idi (Mann-Whitney, p = 3.37 x 10-10).

OTC önces...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Mevcut makale, yumurtalık dokusunun dondurulması ve yumurtalık dokusundan alınan oositlerin dondurulmasını birleştiren, prepubertal kızlarda ve POI riski taşıyan kadınlarda doğurganlık potansiyelini artıran bir protokol sunmaktadır. Korunmuş oositlerin miktarını (yani canlı oosit sayısını) ve kalitesini (yani DNA bütünlüğü ve sitoplazma yeterliliğini) optimize etmek ve klinik kullanım için güvenliklerini optimize etmek için herhangi bir gonadotoksik tedaviye başlamadan önce bu protokolün...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların hiçbirinin rekabet eden çıkarları yoktur.

Teşekkürler

Doğurganlığın korunması faaliyetinde yer alan merkezlerimizin tüm üyelerine (Jinekologlar, Biyologlar, Onkologlar ve Anatomopatologlar) teşekkür ederiz. Çalışma, doğurganlığın korunmasına yönelik rutin prosedürlerin bir parçası olarak yürütülmüştür. Finansman alınmadı.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
1 ml tek kullanımlık şırıngaCDD1323101/7002655Diğer malzeme ve boyutlar da uygun olabilir
21 gauge şırınga iğnesiMerckZ192481Diğer malzeme ve boyutlar da uygun olabilir
35 mm IVF Petri KabıNunc150255Diğer malzeme ve boyutlar da uygun olabilir
60 mm IVF Petri KabıNunc150270Diğer malzeme ve boyutlar da uygun olun
90 mm IVF Petri KabıNunc150360Diğer malzeme ve boyutlar da uygun olabilir
Atravmatik forsepsMedlanePI 299 04Diğer malzeme ve boyutlar da uygun olabilir
Irvine Scientific90165Sürekli Tek KültürVitrifikasyon aşamasına kadar foliküler sıvı toplama, COC inkübasyonu, oosit denudasyonu ve oosit inkübasyonu için IVF kültür ortamı.
KriyotüpTermo Bilimsel368632Diğer ürünler de uygun olabilir
Dimetilsülfoksit (DMSO)MILTENYI BIOTEC SAS170-076-303CryoMACS DMSO 10 (EP)
GT40Hava Sıvısı1,13,517Depolama tankı
HSV Yüksek Güvenlikli Vitrifikasyon SamanIrvine Scientific25251Vitrifikasyon pipetleri,
İnsan serum albüminiVitrolife10064Diğer ürünler de uygun olabilir
Leibovitz L15 ortaEurobioCM1L15000UYumurtalık dokusu toplama, taşıma ve doku diseksiyonu için kültür ortamı
Leibovitz L15 ortaEurobioCM1L15000UDondurma çözeltisi için kültür ortamı
Mars-IVF Sınıf II İş İstasyonu/L126 IVF DualCooperSurgicalWM1500/6-133-911-121İş İstasyonu
Programlanabilir dondurucuPlanlayıcı KRYO 500Kryo 560-16Diğer ekipmanlar da uygun olabilir
Keskin düz bıçaklı ve ince bilenmiş uçlu makaslarMedlaneCI 034 03Diğer malzeme ve boyutlar da uygun olabilir
StripperCooperSurgicalMXL3-STR-CGRDiğer ürünler de uygun olabilir
İpuçları (150&mikro; m) StriptizciCooperSurgicalMXL3-150Diğer ürünler de uygun olabilir
Vitrifikasyon KitiIrvine Scientific90133Protokolleri http://www.irvinesci.com/products/90133-so-vitrification-freeze-solutions adresinde mevcuttur. Diğer ürünler de uygun olabilir
HSA ile Tamamlanmış: , için

Kaynaklar

  1. Ataman, L. M., et al. Creating a global community of practice for oncofertility. Journal of Global Oncology. 2 (2), 83-96 (2016).
  2. Rivas Leonel, E. C., Lucci, C. M., Amorim, C. A. Cryopreservation of human ovarian tissue: a review. Transfusion Medicine and Hemotherapy. 46 (3), 173-181 (2019).
  3. Chae-Kim, J. J., Gavrilova-Jordan, L. Premature ovarian insufficiency: procreative management and preventive strategies. Biomedicines. 7 (1), (2018).
  4. Anderson, R. A., Wallace, W. H. B., Telfer, E. E. Ovarian tissue cryopreservation for fertility preservation: clinical and research perspectives. Human Reproduction Open. 2017 (1), (2017).
  5. Donnez, J., Dolmans, M. M. Fertility preservation in women. The New England Journal of Medicine. 377 (17), 1657-1665 (2017).
  6. Lambertini, M., et al. Ovarian suppression using luteinizing hormone-releasing hormone agonists during chemotherapy to preserve ovarian function and fertility of breast cancer patients: a meta-analysis of randomized studies. Annals of Oncology. 26 (12), 2408-2419 (2015).
  7. Gubbala, K., et al. Outcomes of ovarian transposition in gynaecological cancers; a systematic review and meta-analysis. Journal of Ovarian Research. 7, 69(2014).
  8. Poirot, C., et al. Induction of puberty by autograft of cryopreserved ovarian tissue. Lancet. 379 (9815), 588(2012).
  9. Ernst, E., Kjaersgaard, M., Birkebaek, N. H., Clausen, N., Andersen, C. Y. Case report: stimulation of puberty in a girl with chemo- and radiation therapy induced ovarian failure by transplantation of a small part of her frozen/thawed ovarian tissue. European Journal of Cancer. 49 (4), 911-914 (2013).
  10. Pacheco, F., Oktay, K. Current success and efficiency of autologous ovarian transplantation: a meta-analysis. Reproductive Sciences. 24 (8), 1111-1120 (2017).
  11. Silber, S., Kagawa, N., Kuwayama, M., Gosden, R. Duration of fertility after fresh and frozen ovary transplantation. Fertility and Sterility. 94 (6), 2191-2196 (2010).
  12. Donnez, J., et al. Livebirth after orthotopic transplantation of cryopreserved ovarian tissue. Lancet. 364 (9443), 1405-1410 (2004).
  13. Donnez, J., et al. Restoration of ovarian activity and pregnancy after transplantation of cryopreserved ovarian tissue: a review of 60 cases of reimplantation. Fertility and Sterility. 99 (6), 1503-1513 (2013).
  14. Jensen, A. K., et al. Outcomes of transplantations of cryopreserved ovarian tissue to 41 women in Denmark. Human Reproduction. 30 (12), 2838-2845 (2015).
  15. Abir, R., et al. Occasional involvement of the ovary in Ewing sarcoma. Human Reproduction. 25 (7), 1708-1712 (2010).
  16. Abir, R., et al. Cryopreservation of in vitro matured oocytes in addition to ovarian tissue freezing for fertility preservation in paediatric female cancer patients before and after cancer therapy. Human Reproduction. 31 (4), 750-762 (2016).
  17. Abir, R., et al. Ovarian minimal residual disease in chronic myeloid leukaemia. Reproductive BioMedicine Online. 28 (2), 255-260 (2014).
  18. Dolmans, M. M., Luyckx, V., Donnez, J., Andersen, C. Y., Greve, T. Risk of transferring malignant cells with transplanted frozen-thawed ovarian tissue. Fertility and Sterility. 99 (6), 1514-1522 (2013).
  19. Soares, M., et al. Eliminating malignant cells from cryopreserved ovarian tissue is possible in leukaemia patients. The British Journal of Haematology. 178 (2), 231-239 (2017).
  20. Son, W. Y., Henderson, S., Cohen, Y., Dahan, M., Buckett, W. Immature oocyte for fertility preservation. Frontiers in Endocrinology. 10, 464(2019).
  21. Yang, Z. Y., Chian, R. C. Development of in vitro maturation techniques for clinical applications. Fertility and Sterility. 108 (4), 577-584 (2017).
  22. Imbert, R., et al. Safety and usefulness of cryopreservation of ovarian tissue to preserve fertility: a 12-year retrospective analysis. Human Reproduction. 29 (9), 1931-1940 (2014).
  23. Duncan, F. E., et al. Ovarian tissue transport to expand access to fertility preservation: from animals to clinical practice. Reproduction. 152 (6), 201-210 (2016).
  24. Abir, R., et al. Selection of patients before and after anticancer treatment for ovarian cryopreservation. Human Reproduction. 23 (4), 869-877 (2008).
  25. Yasui, T., et al. Factors associated with premature ovarian failure, early menopause and earlier onset of menopause in Japanese women. Maturitas. 72 (3), 249-255 (2012).
  26. Cobo, A., Diaz, C. Clinical application of oocyte vitrification: a systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials. Fertility and Sterility. 96 (2), 277-285 (2011).
  27. Mohsenzadeh, M., Salehi-Abargouei, A., Tabibnejad, N., Karimi-Zarchi, M., Khalili, M. A. Effect of vitrification on human oocyte maturation rate during in vitro maturation procedure: A systematic review and meta-analysis. Cryobiology. 83, 84-89 (2018).
  28. Anderson, R. A., McLaughlin, M., Wallace, W. H., Albertini, D. F., Telfer, E. E. The immature human ovary shows loss of abnormal follicles and increasing follicle developmental competence through childhood and adolescence. Human Reproduction. 29 (1), 97-106 (2014).
  29. Revel, A., et al. At what age can human oocytes be obtained. Fertility and Sterility. 92 (2), 458-463 (2009).
  30. Margulis, S., et al. morphogenetic protein 15 expression in human ovaries from fetuses, girls, and women. Fertility and Sterility. 92 (5), 1666-1673 (2009).
  31. Kedem, A., et al. Alginate scaffold for organ culture of cryopreserved-thawed human ovarian cortical follicles. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 28 (9), 761-769 (2011).
  32. Lerer-Serfaty, G., et al. Attempted application of bioengineered/biosynthetic supporting matrices with phosphatidylinositol-trisphosphate-enhancing substances to organ culture of human primordial follicles. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 30 (10), 1279-1288 (2013).
  33. Ben-Haroush, A., Sapir, O., Fisch, B. Aspiration of immature oocytes during cesarean section for fertility preservation and future surrogacy. American Journal of Obstetrics and Gynecology. 203 (1), 12-14 (2010).
  34. Farhi, J., Sapir, O., Maman, M., Fisch, B., Ben-Haroush, A. Novel protocol for scheduling oocyte retrieval in IVM cycles in PCOS patients: a case series. Reproductive BioMedicine Online. 23 (6), 765-768 (2011).
  35. Segers, I., et al. In vitro maturation (IVM) of oocytes recovered from ovariectomy specimens in the laboratory: a promising "ex vivo" method of oocyte cryopreservation resulting in the first report of an ongoing pregnancy in Europe. Journal of Assisted Reproduction and Genetics. 32 (8), 1221-1231 (2015).
  36. Ellenbogen, A., Shavit, T., Shalom-Paz, E. IVM results are comparable and may have advantages over standard IVF. Facts, Views & Vision in ObGyn. 6 (2), 77-80 (2014).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Over Yumurtas Dokusu KriyoprezervasyonuOosit KriyoprezervasyonuIn Vitro Mat rasyonOver Dokusu DiseksiyonuOosit AspirasyonuPremat r Over Yetmezli iGonadotoksik TedavilerOver Grefti zmeOosit Vitrifikasyonu
Video yakında

İlgili makaleler