Kemik iliği naklinin (BMT) üç yöntemini tarif ediyoruz: toplam vücut ışınlamalı BMT, korumalı ışınlamalı BMT ve fare modellerinde klonal hematopoez çalışması için ön koşullandırması olmayan BMT yöntemi (benimseyen BMT).
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Klonal Hematopoez Çalışması İçin Farelerde Kemik İliği Nakli İşlemleri
Bu makalede
Özet
Özet
Klonal hematopoez, hematopoetik kök ve progenitör hücrelerde (HSPC) somatik mutasyonların birikmesinden kaynaklanan yaygın bir yaşla ilişkili durumdur. Sürücü genlerindeki mutasyonlar, hücresel zindelik sağlayan, somatik mutasyonu barındıran progeny lökositlere giderek daha fazla yol açan genişleyen HSPC klonlarının gelişmesine yol açabilir. Klonal hematopoez kalp hastalığı, inme ve mortalite ile ilişkili olduğundan, bu süreçleri modelleyen deneysel sistemlerin geliştirilmesi, bu yeni risk faktörünün altında yer alan mekanizmaları anlamanın anahtarıdır. Toplam vücut ışınlama (TBI) gibi farelerde miyeloablatif koşullandırmayı içeren kemik iliği nakli prosedürleri, bağışıklık hücrelerinin kardiyovasküler hastalıklardaki rolünü incelemek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Bununla birlikte, kemik iliği nişine ve kalp ve beyin gibi diğer ilgi alanlarına eşzamanlı hasar, bu prosedürlerle kaçınılmazdır. Bu nedenle laboratuvarımız TBI'ın neden olduğu olası yan etkileri en aza indirmek veya önlemek için iki alternatif yöntem geliştirmiştir: 1) ışınlama kalkanı ile kemik iliği nakli ve 2) koşulsuz farelere benimseyen BMT. Korumalı organlarda, lokal çevre korunarak klonal hematopoez analizine izin verirken, yerleşik bağışıklık hücrelerinin işlevi bozulmamıştır. Buna karşılık, koşullanmamış farelere benimseyen BMT, hem organların yerel ortamlarının hem de hematopoetik nişinin korunması ek avantaja sahiptir. Burada, üç farklı hematopoetik hücre rekonstrüt yaklaşımını karşılaştırıyoruz ve kardiyovasküler hastalıkta klonal hematopoez çalışmaları için güçlü yönlerini ve sınırlamalarını tartışıyoruz.
Giriş
Klonal hematopoez (CH), yaşlı bireylerde sıklıkla gözlenen ve genetik mutasyon taşıyan genişletilmiş hematopoetik kök ve progenitör hücre (HSPC) klonunun bir sonucu olarak ortaya çıkan bir durumdur1. 50 yaşına kadar, çoğu bireyin her HSPC2'deortalama beş eksonik mutasyon elde etmiş olacağı ileri sürülmektedir , ancak bu mutasyonların çoğu birey için çok az fenotipik sonuçlara neden olacaktır. Bununla birlikte, bu mutasyonlardan biri HSPC'ye rekabet avantajı sağlıyorsa (örneğin, çoğalmasını, kendini yenilemesini, hayatta kalmasını veya bunların bir kombinasyonunu teşvik ederek), bu mutant klonun diğer HSPC'lere göre terci....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Hayvan konularını içeren tüm prosedürler Virginia Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır.
1. Ön koşuldan önce
- Alıcı fareleri ışınlamadan önce antibiyotik takviyeli suya (5 mM sülfamethoxazole, 0.86 mM trimethoprim) ~24 saat yerleştirin. Bu, enfeksiyonu önlemek için gereklidir, çünkü bağışıklık sistemi ışınlamadan sonra baskılanacak ve ışınlamadan sonra 2 hafta boyunca korunacaktır. Bu noktada, beslenmeyi teşvik etmek ve ışınlamadan sonra kilo kaybını ve dehidratasyonu önlemek için fareleri bir beslenme / hidrasyon jeli ile destekleyin.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Üç BMT/pre-conditioning yönteminin donör hücre engraftmenti üzerindeki etkisini karşılaştırmak için, donör hücrelerin periferik kan ve kalp dokusundaki fraksiyonları BMT sonrası 1 aylık akış sitometrisi ile analiz edildi. İzole hücreler, lökositlerin farklı alt kümelerini tanımlamak için spesifik lökosit belirteçleri için lekelendi. Bu deneylerde WT B6'ya yabani tip(WT) C57BL/6 (CD45.2) donör kemik iliği hücreleri teslim edildi. SJL-PtprcaPrpcb/.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Klonal hematopoez çalışmaları için üç BMT yöntemi tanımladık: total vücut ışınlamalı BMT, kısmi kalkanlı ışınlamalı BMT ve ön koşullandırma içermeyen daha az yaygın olarak kullanılan bir BMT yöntemi (benimsenen BMT). Bu yöntemler klonal hematopoezin kardiyovasküler hastalık üzerindeki etkisini değerlendirmek için kullanılmıştır. Araştırmacılar bu yöntemleri çalışmalarının özel amacına uyacak şekilde değiştirebilirler.
Klonal hematopoez modelleri
Klonal hematopoez, mutant he.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Teşekkürler
Bu çalışma, ABD Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından K. Walsh'a (HL131006, HL138014 ve HL132564), S. Sano'ya (HL152174), M. A. Evans'a Amerikan Kalp Derneği hibesi (20POST35210098) ve H. Ogawa'ya Japonya Kalp Vakfı hibesi ile desteklendi.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 0.5ml mikrosantrifüj | Fisher Scientific | 05-408-121 | genel tedarik |
| 1.5ml mikrosantrifüj | Fisher Scientific | 05-408-129 | genel tedarik |
| 1/2 cc LO-DOSE İNSÜLİN ŞIRINGA | EXELINT | 26028 | genel tedarik |
| Mutlak Etanol (200 prfof) | Fisher kimyasal | 200559 | genel tedarik |
| BD 1mL Tüberkülin Şırıngalar 25G 5/8 İnç İğne | Becton Dickinson | 309626 | genel tedarik |
| BD PrecisionGlide İğne 18G (1.22mm X 25mm) | Becton Dickinson | 395195 | genel tedarik |
| Sezyum-137 Işınlayıcı | JL Shepherd | Mark IV | ekipmanı |
| DietGel 76A | Şeffaf H2O | 70-01-5022 | genel tedarik |
| Falcon 100 mm TC ile İşlenmiş Hücre Kültürü Kabı | Yaşam Bilimleri | 353003 | genel tedarik |
| Falcon 50 mL Konik Santrifüj Tüpleri | Fisher Scientific | 352098 | genel tedarik |
| Fisherbrand steril hücre süzgeçleri, 70 μ m | Fisher Scientific | 22363548 | genel tedarik |
| Graefe Forseps | Güzel Bilim Araçları | 11051-10 | genel tedarik |
| Sertleştirilmiş İnce Makas | Güzel Bilim Araçları | 14090-09 | genel tedarik |
| Isothesia (Isoflurane) çözeltisi | Henry Schein | 29404 | Çözelti |
| Ketamin | Zoetis | 043-304 | enjeksiyon |
| Kimwipes Hassas Görev Silecekleri | Kimtech Science | KCC34155 | genel tedarik |
| PBS pH7.4 (1X) | Gibco | 10010023 | Çözümü |
| RadDisk – Kemirgen Işınlayıcı Disk | Braintree Scientific | IRD-P M | genel tedarik |
| RPMI Orta 1640 (1X) | Gibco | 11875-093 | Orta |
| Sülfametoksazol ve Trimetoprim | TEVA | 0703-9526-01 | enjeksiyon |
| Xylazine | Akorn | 139-236 | enjeksiyon |
| X-ışını ışınlayıcı | Rad kaynağı | RS-2000 | ekipmanı |
Kaynaklar
- Evans, M. A., Sano, S., Walsh, K. Cardiovascular disease, aging, and clonal hematopoiesis. Annual Review of Pathology: Mechanisms of Disease. 15 (1), 419-438 (2020).
- Welch, J. S., et al. The origin and evolution of mutations in acute myeloid leukemia.....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
