Method Article

Fare Beyninin İşlevsel ve Anatomik Olarak Farklı Bölgelere Mikrodiseksiyonu

DOI:

10.3791/61941

⸱

February 15th, 2021

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1The Geneva Foundation, Medical Readiness Systems Biology, Walter Reed Army Institute of Research, 2Walter Reed Army Institute of Research, Medical Readiness Systems Biology, Center for Military Psychiatry and Neuroscience, 3ORISE Fellow, Medical Readiness Systems Biology, Walter Reed Army Institute of Research, 4Headquarter, Walter Reed Army Institute of Research

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Fare beyninin çıkarılması ve taze beyin dokusundan ayrı bölgelerin diseksiyonu için uygulamalı, adım adım, hızlı bir protokol sunuyoruz. Moleküler analiz için beyin bölgelerinin elde edilmesi birçok sinirbilim laboratuvarında rutin hale gelmiştir. Bu beyin bölgeleri, sistem seviyesi analizi için yüksek kaliteli transkriptomik veriler elde etmek için hemen dondurulur.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Beyin, memeli sinir sisteminin komuta merkezi ve muazzam yapısal karmaşıklığa sahip bir organdır. Kafatasının içinde korunan beyin, serebral korteks olarak bilinen yarımküreler üzerindeki gri cevherin dış kaplamasından oluşur. Bu katmanın altında, varoluş için önemli olan çoklu fenomenler için gerekli olan birçok başka özel yapı bulunur. Belirli brüt beyin bölgelerinin örneklerini elde etmek, hızlı ve hassas diseksiyon adımları gerektirir. Mikroskobik düzeyde, birçok alt bölgenin var olduğu ve muhtemelen bu diseksiyonun amacı için dayattığımız keyfi bölgesel sınırları aştığı anlaşılmaktadır.

Fare modelleri, insan beyninin fonksiyonlarını ve hastalıklarını incelemek için rutin olarak kullanılır. Gen ekspresyon modellerindeki değişiklikler, hastalıklı duruma bağlı olarak belirli bir fenotipi hedef alan belirli beyin bölgeleriyle sınırlı olabilir. Bu nedenle, transkripsiyonun düzenlenmesini iyi tanımlanmış yapısal organizasyonu açısından incelemek büyük önem taşımaktadır. Beynin tam olarak anlaşılması, farklı beyin bölgelerini incelemeyi, bağlantıları tanımlamayı ve bu beyin bölgelerinin her birinin faaliyetlerindeki temel farklılıkları tanımlamayı gerektirir. Bu farklı bölgelerin her birinin daha kapsamlı bir şekilde anlaşılması, sinirbilim alanında yeni ve geliştirilmiş tedavilerin yolunu açabilir. Burada, fare beynini on altı farklı bölgeye ayırmak için adım adım bir metodolojiyi tartışıyoruz. Bu prosedürde, erkek fare C57Bl / 6J (6-8 haftalık) beyin çıkarılmasına ve nöroanatomik işaretleri kullanarak birden fazla bölgeye diseksiyonuna odaklandık. Bu çalışma, sinirbilim alanında güçlü bir temel oluşturmaya yardımcı olacak ve beyin fonksiyonunun daha derin anlaşılmasında daha odaklı yaklaşımlara yol açacaktır.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Beyin, omurilik ve retina ile birlikte, tüm vücutta uzmanlaşmış, hassas bir şekilde konumlandırılmış ve etkileşime giren hücre tipleri tarafından kontrol edilen karmaşık davranışları yürüten merkezi sinir sistemini içerir1. Beyin, milyarlarca birbirine bağlı nöron ve glia'nın sayısız işlevi yerine getiren hassas devrelere sahip karmaşık bir organdır. İki ayrı lob ve çeşitli hücresel bileşenlere sahip iki taraflı bir yapıdır2. Omurilik beyni dış dünyaya bağlar ve kemik, meninksler ve beyin omurilik sıvısı tarafından korunur ve mesajları beyne yönlendirir 2,3,4

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Hayvan elleçleme ve deneysel prosedürler, hayvan bakımı için Avrupa, ulusal ve kurumsal kılavuzlara uygun olarak yürütülmüştür. Tüm hayvan deneyleri, ABD Ordusu Çevre Sağlığı Araştırma Merkezi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylandı ve şimdi Walter Reed Ordu Araştırma Enstitüsü (WRAIR) tarafından onaylandı ve Uluslararası Laboratuvar Hayvan Bakımı Değerlendirme ve Akreditasyon Derneği (AAALAC) tarafından akredite edilmiş bir tesiste gerçekleştirildi.
NOT: Prosedür, servikal çıkık16 ile ötenazi yapılan C57BL / 6j suşunun altı ila sekiz haftalık erkek fareleri üzerinde gerçekleştirilecektir. Laboratuvarım....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Karmaşık beyin yapısı ve işlevi hakkındaki anlayışımız hızla gelişiyor ve gelişiyor. Beyin birden fazla farklı bölge içerir ve moleküler bir harita oluşturmak, beynin nasıl çalıştığını daha iyi anlamamıza yardımcı olabilir. Bu yöntem yazısında, fare beyninin birden fazla farklı bölgeye diseksiyonunu tartıştık (Tablo 1). Bu protokolde, yapılar kritik noktalara göre tanımlanır ve derhal diseksiyon için sağlamlığını koruyarak dokunun tuzlu su çözeltisi ile nemli tutulmasıyla elde edilir. Yöntem, diğer rapor.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Memeli beyni, çeşitli moleküler imzalara ve uzmanlaşmış ve ayrık işlevleri yerine getiren çoklu bölgelere sahip bir dizi morfolojik olarak farklı ve işlevsel olarak benzersiz hücrelerden oluşan karmaşık bir organdır. Burada bildirilen diseksiyon prosedürü, laboratuvarın gereksinimlerine bağlı olarak birden fazla hedefe sahip olabilir. Laboratuvarımızda stres gibi TSSB'ye maruz kalan farelerden toplanan çoklu beyin bölgelerinde transkripsiyonu değerlendirdik16 . Suş genetik arka planı

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyleri yoktur.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Deneysel yardımları için Bayan Seshmalini Srinivasan, Bay Stephen Butler ve Bayan Pamela Spellman'a ve el yazmasını düzenledikleri için Bayan Dana Youssef'e teşekkür ederiz. USAMRDC'nin finansman desteği minnetle kabul edilmektedir. Cenevre Vakfı bu çalışmaya katkıda bulundu ve ABD Ordusu Araştırma Ofisi aracılığıyla Askeri ve Operasyonel Tıp Araştırma Alanı Müdürlüğü III'ten gelen fonlarla desteklendi.

Feragatname:

Materyaller Walter Reed Ordu Araştırma Enstitüsü tarafından gözden geçirilmiştir. Sunumuna ve/veya yayınlanmasına itiraz yoktur. Burada yer alan görüşler veya iddialar yazarın özel gö....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Beyin Kaldırma
Deaver makasıRoboz Cerrahi MağazasıRS-67625.5" düz keskin/keskin
Deaver makasıRoboz Cerrahi MağazasıRS-67635.5" kavisli keskin/keskin
Hassas ameliyat makasıRoboz Cerrahi MağazasıRS-67034.75" kavisli keskin/keskin
Hassas ameliyat makasıRoboz Cerrahi MağazaRS-67024.75" düz keskin/keskin
Hafif ameliyat makasıRoboz Cerrahi MağazaRS-67535" kavisli Keskin/Keskin
Mikro spatula, yarıçap ve konik düz uçlarpaslanmaz çelik ayna kaplaması
Ameliyat makası 6.5"Roboz Cerrahi MağazaRS-6846kavisli keskin/keskin
Doku forsepsRoboz Cerrahi MağazaRS-81604.5 "1X2 diş 2mm uç genişliği
Rongeur (isteğe bağlı)Roboz Cerrahi MağazaRS-8321 seçmek için birçok stilLempert Rongeur 6.5 "2X8mm
Hipofiz Diseksiyonu< / güçlü>
Neşter sapıRoboz Cerrahi MağazaRS-9843Neşter Sapı #3 Katı 4"
ve bıçaklarRoboz Cerrahi MağazaRS-9801-11Steril Neşter Bıçakları: # 11 Kutu 100 40mm
Süper ince forseps InoxRoboz Cerrahi MağazaRS-4955uç boyutu 0.025 X 0.005 mm
< güçlü > Beyin Diseksiyonu < / güçlü >
A büyütme vizörüPenn Tool Col40-178-62.2x Dış ve 3.3x İç Lens Büyütme, Dikdörtgen Büyüteç
Diseksiyon soğuk plakaCellpath.comJRI-0100-00ABuzdağı soğuk plaka ve taban
Graefe forseps, tam eğri ekstra hassasRoboz Cerrahi MağazaRS-51380.5 mm Tip 4 " (10 cm) uzunluğunda
Hafif ameliyat makasıRoboz Cerrahi MağazaRS-67535" kavisli keskin/keskin
Neşter sapıRoboz Cerrahi MağazaRS-9843 (yukarıda tekrarlandı)Neşter Sapı #3 Katı 4"
ve bıçaklar (özellikle #11)Roboz Cerrahi MağazaRS-9801-11 (yukarıda tekrarlandı)Steril Neşter Bıçakları:#11 Kutu 100 40mm
SpatulaAmazonMS-SQRD9-4Çift Uçlu Spatula Kare VE Yuvarlak Uçlu
Doku forsepsRoboz Cerrahi MağazasıRS-8160 (yukarıda tekrarlandı)4.5" 1X2 dişler

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zeisel, A., et al. Molecular Architecture of the Mouse Nervous System. Cell. 174 (4), 999-1014 (2018).
  2. Ackerman, S. Major Structures and Functions of the Brain. 2, National Academies Press. US. (1992).
  3. P, T. L. S.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Mouse Brain DissectionBrain Region IsolationNeuroanatomical LandmarksCerebral Cortex RemovalCerebellum DissectionHypothalamus SeparationThalamus IsolationAmygdala ExtractionHippocampus DissectionSeptal Nuclei Identification

Related Articles