Method Article

Dijital Yüksek Hızlı Siliyer Videomikroskopi Kullanarak Burun Fırçalama Örneklemesi ve İşleme – COVID-19 Pandemisine Adaptasyon

DOI:

10.3791/61949

⸱

November 7th, 2020

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Pneumology laboratory, I3 Group, GIGA Research Center, University of Liège, 2Department of ENT, University Hospital of Liège, 3Department for Occupational Safety and Health, Biosafety and Biosecurity Unit, University of Liège, 4Division of Respirology, Department of Pediatrics, University of British Columbia and British Columbia Children's Hospital, 5Division of Cardiology, Department of Pediatrics, University Hospital of Liège, 6Department of Pneumology, University Hospital of Liège, 7Division of Respirology, Department of Pediatrics, University Hospital of Liège

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

PCD tanısı için başarılı ve yüksek kaliteli siliyer fonksiyonel analizi garanti etmek için, solunum epitel örneklemesi ve işlenmesi için hassas ve dikkatli bir yöntem şarttır. COVID-19 pandemisi sırasında PCD tanı hizmeti vermeye devam etmek için, siliyer videomikroskopi protokolü uygun enfeksiyon kontrol önlemlerini içerecek şekilde güncellenmiştir.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Primer Siliyer Diskinezi (PKH), önemli otosinopulmoner hastalığa yol açan genetik motil bir siliopatidir. PCD tanısı, farklı tanı yöntemlerindeki zorluklar nedeniyle sıklıkla kaçırılır veya gecikir. PCD için tanı araçlarından biri olan Dijital Yüksek Hızlı Videomikroskopi (DHSV) kullanan siliyer videomikroskopi, siliyer vuruş frekansı (CBF) ve vuruş paterni (CBP) analizinden oluşan siliyer fonksiyonel analiz (CFA) yapmak için en uygun yöntem olarak kabul edilir. Bununla birlikte, DHSV, numunelerin işlenmesi ve analiz edilmesi için standartlaştırılmış, yayınlanmış çalışma prosedüründen yoksundur. Ayrıca, COVID-19 pandemisi sırasında önemli bir enfeksiyon kontrol sorunu olan canlı solunum yolu epitelini kullanır. Bu sağlık krizi sırasında tanısal bir hizmet sunmaya devam etmek için, siliyer videomikroskopi protokolü yeterli enfeksiyon kontrol önlemlerini içerecek şekilde uyarlanmıştır.

Burada, siliyer solunum numunelerinin numune alınması ve laboratuvarda işlenmesi için gözden geçirilmiş bir protokolü açıklıyoruz ve COVID-19 enfeksiyon kontrol önlemlerine uymak için yapılan uyarlamaları vurguluyoruz. Bu protokole göre işlenen ve analiz edilen 16 sağlıklı denekten alınan burun fırçalama örneklerinden elde edilen CFA'nın temsili sonuçları açıklanmıştır. Ayrıca, kalite seçim kriterlerini karşılamayan numuneler artık CFA'ya izin verdiğinden, optimum kalitede epitel siliye şeritlerin elde edilmesinin ve işlenmesinin önemini de gösteriyoruz, bu da bu tekniğin tanısal güvenilirliğini ve verimliliğini potansiyel olarak azaltıyor.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Primer siliyer diskinezi (PKH), solunum kirpiklerinin durağan, yavaş veya diskinetik olduğu, mukosiliyer klirens bozukluğuna ve kronik oto-sino-pulmoner hastalığa yol açan kalıtsal heterojen hareketli siliopatidir 1,2,3,4. PKH'nin klinik bulguları erken bebeklik döneminde başlayan kronik ıslak öksürük ve kronik burun tıkanıklığı, bronşektaziye yol açan tekrarlayan veya kronik üst ve alt solunum yolu enfeksiyonları, tekrarlayan veya kronik otitis media ve sinüzittir 5,6,7

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Liege hastanesi-fakülte etik kurulu ve Üniversite İş Yerinde Hijyen ve Sağlığın Korunması Bölümü'nden onay alınmıştır.

1. Solunum siliyer epitel örneklemesi

  1. Örneklemeden önce deneklerin en az 4-6 hafta boyunca enfeksiyondan arındırılmış olduklarından ve burun ve inhale ilaçlardan arındırılmış olduklarından emin olun.
  2. Takviyeli M199 preparatı hazırlayın: Antibiyotik çözeltisi (5 mL streptomisin / penisilin (50 μg / mL)) ve antifungal çözelti (5 mL amfoterisin B (2.5μg / mL)) ile Hücre Kültürü Ortamı 199 (M199) (500 mL) takviyesi).
  3. Kapaklı 2 (her burun deliği için bir tane) 15 mL konik tüp hazırlayın ve her birin....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tekniğin etkinliğini göstermek için, CFA'nın sonuçlarını 16 sağlıklı yetişkin gönüllüden oluşan bir seride sunuyoruz (5 erkek, yaş aralığı 22-54 yaş).

Toplam 16 gönüllüden 14'ünden (4 erkek, yaş aralığı 24-54 yaş) alınan burun fırçalama örnekleri, CFA'yı gerçekleştirmek için gereken seçim kriterlerini karşılayan yeterli uygun epitel kenarları sağlamıştır. Bu 14 burun fırçalama örneğinden toplam 242 siliyer kenar kaydedildi ve 212 kenar tanımlanan dahil etme kriterlerini karşıladı ve analiz edi.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu makale, COVID-19 pandemisi sırasında uygun enfeksiyon kontrolü hususları için yapılan ayarlamalarla birlikte, burun fırçalama örneklerini kullanarak CFA için standart bir çalışma prosedürü sağlamayı amaçlamaktadır. PCD tanısı zordur ve şu anda nazal nitrik oksit ölçümü, DHSV kullanarak CFA, iletim elektron mikroskobu (TEM) kullanarak siliyer ultrayapısal analiz, immünofloresan kullanarak siliyer proteinlerin etiketlenmesi ve PCD'ye neden olan genler için genetik test dahil olmak üzere uluslararası önerilere göre farkl.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu yazarların açıklayacak hiçbir şeyleri yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Jean-François Papon, Bruno Louis, Estelle Escudier ve Paris-Est PCD tanı merkezinin tüm ekip üyelerine, PCD tanı merkezlerini ziyaret ettikleri ve sayısız değişim sırasında müsaitlikleri ve içten karşılamaları için teşekkür ederiz. Ayrıca Robert Hirst'e ve Leicester'ın PCD merkezindeki tüm ekip üyelerine karşılamaları, zamanları, tavsiyeleri ve uzmanlıkları için teşekkür ederiz.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
15 mL konik tüplerFisherScientific35209615 ml Yüksek Berraklıkta Polipropilen Kapaklı Konik Tüp
Amfoterisin BLONZA17-836EAntifungal çözelti
Blakesley-weil burun forsepsNOVO SURGICALE7739-12Burun fırçalamasını gerçekleştirmek için fırçayı tutmak için kullanılır
Bronşiyal sitoloji fırçasıCONMED129Burun için kullanılır fırçalama
Pamuklu çubukNUOVA APTACA2150/SGCOVID-19 testi için kullanılır
Dijital yüksek hızlı video mikroskopi kameraIDDeu Hareket halinde yenilikCrashCam Mini 1510
Cam slaytThermoScientific12372098Görselleştirme odasını oluşturmak için kullanılan mikroskop slaytları
Isıtmalı KutuOdaktaki IBIDI hücreleri10918Isıtmak için kullanılır örnek
Ters Işık mikroskobuZeissAXIO Vert.A1
Lens IsıtıcıTOKAI HITTPiE-LHYağa daldırma lensini ısıtmak için kullanılır
Orta 199 (M199), HEPESTermoFisher Scientific12340030Hücre Kültürü Ortamı
Motion Studio X64IDT Hareketsürümü 2.14.01Yazılım
YağıFischerScientific, Carl Zeiss
Dikdörtgen kapak kaymasıVWR631-0145Görselleştirme odasını örtmek için kullanılır
Ara parça (Ispacer) 0,25 mmSunjinlabIS203Hermetik kapalı görselleştirme odasının oluşturulması için kullanılır
Kare kapak kaymasıVWR631-0122Laboratuvar yapımı açık görselleştirme odası
Streptomisin / Penisilinoluşturmak için kullanılırFisherScientific, Gibco11548876Antibiyotik çözeltisi
11825153: ,

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chilvers, M. A., Rutman, A., O'Callaghan, C. Ciliary beat pattern is associated with specific ultrastructural defects in primary ciliary dyskinesia. Journal of Allergy Clinical Immunology. 112 (3), 518-524 (2003).
  2. Werner, C., Onnebrink, J. G., Omran, H.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Ciliary VideomicroscopyDigital High Speed VideomicroscopyNasal Brushing SamplingCiliary Functional AnalysisCiliary Beat FrequencyCiliary Beat PatternPrimary Ciliary DyskinesiaInfection Control MeasuresEpithelial Ciliated StripsVideo Analysis Software

Related Articles