Uyku yoksunluğu, uyku fonksiyonunu ve düzenlemesini araştırmak için güçlü bir araçtır. Uyku Nullifiye Aparatı'nı kullanarak Drosophila'yı uykudan yoksun bırakmak ve yoksunluğun neden olduğu ribaund uykusunun kapsamını belirlemek için bir protokol açıklıyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Uyku Nullifiye Aparatı: Drosophila'dan Yoksun Uykunun Son Derece Verimli Bir Yöntemi
Bu makalede
Özet
Özet
Uyku homeostazisi, uyku kaybının ardından gözlenen uykudaki artış, hayvanlar alemi boyunca uykuyu tanımlamak için kullanılan belirleyici kriterlerden biridir. Sonuç olarak, uyku yoksunluğu ve uyku kısıtlaması, uyku işlevi hakkında fikir vermek için yaygın olarak kullanılan güçlü araçlardır. Bununla birlikte, uyku yoksunluğu deneyleri, yoksunluk uyaranının fizyoloji ve davranışta gözlenen değişikliklerin nedeni olabileceği için doğası gereği sorunludur. Buna göre, başarılı uyku yoksunluğu teknikleri hayvanları uyanık tutmalı ve ideal olarak, çok sayıda istenmeyen sonuç doğurmadan sağlam bir uyku ribaundu ile sonuçlanmalıdır. Burada, Drosophila melanogasteriçin bir uyku yoksunluğu tekniğini tarif ediyoruz. Uyku Nullifiye Aparatı (SNAP), negatif jeotaksisi teşvik etmek için her 10'da bir uyaran uygular. Uyaran öngörülebilir olsa da, SNAP, yüksek uyku sürücüsüne sahip sineklerde bile gece uykusunun% 95'> etkili bir şekilde önler. Daha da önemlisi, sonraki homeostatik yanıt, el yoksunluğu kullanılarak elde edilene çok benzer. Uyaranların zamanlaması ve aralığı, uyku kaybını en aza indirmek ve böylece uyaranın fizyoloji ve davranış üzerindeki spesifik olmayan etkilerini incelemek için değiştirilebilir. SNAP, uyku kısıtlaması ve uyarılma eşiklerini değerlendirmek için de kullanılabilir. SNAP, uyku işlevini daha iyi anlamak için kullanılabilecek güçlü bir uyku bozulması tekniğidir.
Giriş
Uyku hayvanlarda evrensele yakındır, ancak işlevi belirsizliğini korumaktadır. Uyku homeostazisi, uyku yoksunluğundan sonra uykudaki telafi edici artış, bir dizi hayvanda uyku durumlarını karakterize etmek için kullanılan uykunun belirleyici bir özelliğidir1, 2,3,4,5.
Sinekte uyku, uyku kaybına sağlam bir homeostatik yanıt da dahil olmak üzere insan uykusu ile birçok benzerliğe sahiptir4,5. Sinekte çok sayıda uyku çalışma....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
1. Deneysel hazırlık
- Erkek ve dişi sinekleri ayırarak şişelere dökerken sinekleri toplayın.
NOT: Uyku deneyleri genellikle dişi sineklerle yapılır. Bakire dişileri toplamak önemlidir. Çift çift dişiler, verilerin analizini zorlaştıran larvalara yumurtadan çıkan yumurtaları bırakacaktır. - Ev, <20'lik gruplar halinde tek bir cinsiyetin sinekleri.
NOT: Konutlar sosyal olarak zenginleştirilmiş bir ortamda uçar (>50 grupları) uyku sürücüsü6,13 potansiyel olarak şaşırtıcı ribaund uykusu ölçümlerini modüle eder. Ayrıca, sosyal zenginleşmenin ardından, uyku birkaç gün içinde azalacaktır
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Kanton S (Cs) vahşi tip suş olarak kullanılmıştır. Sinekler 12 saat ışıkta tutuldu: 12 saat karanlık program ve gece boyunca 12 saat uykusuz kaldı. Temel günde Cs sineklerinin uyku profillerinin incelenmesi (bs), uyku yoksunluğu günü (sd) ve iki iyileşme günü (rec1 ve rec2) (Şekil 2A),sineklerin SNAP'te etkili bir şekilde uykusuz kaldığını ve literatürde gözlemlenen raporlarla tutarlı olarak gün içinde iyileştiğini göstermektedir4.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Drosophila'da uyku bağımsız olarak 2000 yılında, iki grup tarafından karakterize edildi4,5. Bu öncü çalışmalarda sinekler nazik bir şekilde ele alarak uykudan mahrum bırakıldı (yani el yoksunluğu) ve gece uykusuzluğuna karşı sağlam bir homeostatik tepki sergiledikleri gösterilmiştir. Daha da önemlisi, herhangi bir uyku yoksunluğu deneyi ile, hayvanı uyanık tutmak için kullanılan yöntemin potansiyel şaşırtıcı etkilerini kontrol etmek çok önemlidir. El yok.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Teşekkürler
Bu çalışma NIH tarafından PJS'ye 5R01NS051305-14 ve 5R01NS076980-08 hibeleri ile desteklendi.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| < güçlü > Lokomotor aktivite tüpleri< / güçlü > | |||
| Fisher Doku Hazırlama Balmumu | Thermo Fisher | 13404-122 | Tüpleri sızdırmaz hale getirmek için kullanılan balmumu |
| Cam tüpler | Wale Aparatı | 244050 | 5mm çapında Pyrex cam kesiyoruz ve nbsp; 65 mm uzunluğundaki tüplere tüpler ve nbsp; uykuyu kaydetmek için. Önceden kesilmiş tüpler ve nbsp; ayrıca satın alınabilir. |
| Nutri Fly Bloomington Formülasyonu sinek yemi | Genesee Scientific | 66-113 | Labs kendi sinek yemi tarifini kullanabilir. Uykunun, sineklerin yetiştirildiği aynı yiyecekler üzerinde kaydedilmesi önemlidir. |
| Döner cam kesme aleti | Dremel Multi Pro | 395 | 65 mm uzunluğundaki cam tüpleri kesmek için kullanılır. |
| Monitoring Sleep | |||
| DAM System ve DAMFileScan yazılımı | DAM monitörlerinden veri almak ve elde edilen verileri uygun bir formatta kaydetmek için kullanılan | Trikinetik | |
| Veri toplama bilgisayarı | Lenovo Fikir Merkezi AIO3 | Herhangi bir üreticinin eşdeğer bir bilgisayarı | |
| Drosophila'nın yerini alabilir Etkinlik Monitörleri | Trikinetik | DAM2 | Bu monitörler sineklerin lokomotor aktivitesini kaydetmek için kullanılır |
| Çevre Monitörü | Trikinetik | DEnM | Gerekli değildir, ancak uykunun kaydedildiği odadaki çevresel koşulları izlemenin kolay bir yolu |
| Işık Kontrol | Trikinetik | LC4 | SNAP'in ne zaman açılıp kapatıldığını kontrol etmenin uygun bir yolu |
| DAM | için Güç Kaynağı Arabirim BirimiTrikinetik | PSIU-9 | Veri toplama bilgisayarlarının Trikinetik lokomotor aktivite verilerini kaydetmesi için gereklidir |
| RJ11 konektörü | 7001-64PC | Multicomp | DAM monitörleri RJ11 jaklarını kabul eder |
| Bölücüler | Trikinetik | SPLT5 | 5 adede kadar DAM monitörü bağlamak için kullanılır |
| Telefon kablosu kablosu kablosu | Radioshack | 278-367 | DAM monitörlerinden |
| veri almak için telefon kabloları< güçlü > Uyku Yoksunluğu< / güçlü > | |||
| Güç kaynağı | Gw INSTEK | GPS-30300 | Aparatı için güç kaynağı |
| Washington Üniversitesi Tıp Fakültesi makine atölyesi |
Kaynaklar
- Nath, R. D., et al. The Jellyfish Cassiopea Exhibits a Sleep-like State. Current Biology. 27 (19), 2984-2990 (2017).
- Vorster, A. P., Krishnan, H. C., Cirelli, C., Lyons, L. C. Characterization of sleep in Aplysia californica. Sleep. 37 (9), 1453-1463 (2014).
- Zhdanova, I. V.....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
