Yöntem makalesi

İnsan Mezenkimal Kök Hücrelerinin İntraspinal Kavite Enjeksiyonu ve Sıçan Beynine Migrasyonlarının İzlenmesi

DOI:

10.3791/62120

⸱

3 Şubat 2021

 ,  ,  ,  ,  , 
1Stem Cell & Regenerative Medicine Institute, Samsung Medical Center, 2Stem Cell Institute, ENCell Co. Ltd, 3Department of Neurosurgery, Samsung Medical Center, Sungkyunkwan University School of Medicine, 4Animal Research and Molecular Imaging Center, Samsung Biomedical Research Institute, Samsung Medical Center, 5Department of Neurology, Samsung Medical Center, Sungkyunkwan University School of Medicine, 6Neuroscience Center, Samsung Medical Center, 7Samsung Alzheimer Research Center, Samsung Medical Center

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mezenkimal kök hücreleri (MSC'ler) beyne iletmek için çeşitli uygulama yolları kullanılabilir. Bu çalışmada, MSC'ler intraspinal kavite enjeksiyonu yoluyla nöraksi ve beyin boyunca verildi. MSC'ler sıçanların omurga boşluklarına enjekte edildi ve kök hücre göçü izlendi ve ölçüldü.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mezenkimal kök hücreler (MSC'ler) çeşitli hastalıkların tedavisi için incelenmiştir. Hem beyinde hem de omurilikte kusurları içeren nörodejeneratif hastalıklarda, uygulama yolu çok önemlidir, çünkü MSC'lerin hem beyne hem de omuriliğe göç etmesi gerekir. Bu makale, bir sıçan modelinde beyni ve omuriliği hedefleyebilen MSC'lerin omurilik kanalına (intraspinal kavite enjeksiyonu) uygulanması için bir yöntemi açıklamaktadır. Sıçanların omurilik kanallarına bel omurları 2-3 seviyesinde bir milyon MSC enjekte edildi. Uygulamadan sonra, sıçanlara enjeksiyondan 0, 6 ve 12 saat sonra ötenazi yapıldı. Enjekte edilen MSC'leri izlemek için optik görüntüleme ve kantitatif gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (qPCR) kullanıldı. Bu çalışmanın sonuçları, omurilik boşluğu yoluyla uygulanan MSC'lerin daha sonra hem beyinde hem de omurilikte 12 saat sonra tespit edilebileceğini göstermiştir. Omurga içi kavite enjeksiyonu, genel anestezi gerektirmeme avantajına sahiptir ve çok az yan etkisi vardır. Bununla birlikte, MSC'lerin beyne düşük göç hızının dezavantajının üstesinden gelinmelidir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Mezenkimal kök hücreler
Hastalık koşulları altında, MSC'ler, bağışıklık tepkilerini düzenlediği, hasarlı dokuları restore ettiği vetoksik maddeleri uzaklaştırdığı bildirilen parakrin eylemler 1 yoluyla hastalığa özgü terapötik maddeler salgılar 2. Bu nedenle, MSC tedavisinin Alzheimer hastalığı ve sarkopeni gibi multifaktöriyel hastalıkların tedavisinde tek hedefli tedaviden daha etkili olduğu düşünülmektedir 3,4,5,6. Ek olarak, farmasötiklerin aksine, MSC'ler vücuttaki enflamatuar sitokinleri veya kemokinleri tanıyarak hasarlı doku bölgesine hareket eden bir hedef arama etkisine sahiptir 7,8. Ne yazık ki, hücrelerin sadece bir alt kümesi hasarlı bölgeye ulaşır ve göç sırasında MSC'lerin canlılığı azalır 9,10,11,12. Bu nedenle, MSC'lerin terapötik etkinliğini en üst düzeye çıkarmak için, canlı hücrelerin hedef bölgeye iletilmesi gerekir. Bu nedenle, MSC'leri uygularken, hedef hastalığın doğasına bağlı olarak uygun uygulama yolunu seçmek önemlidir.

Enjeksiyon yolu
Terapötik ajanların hastalara uygulandığı çok sayıda yol vardır. En yaygın yöntemler sistemik dolaşıma intravenöz enjeksiyon, oral uygulama ve deri altı veya kas içi enjeksiyondur. Nörodejeneratif hastalıklarda, terapötik ajanların beyne iletilmesindeki en büyük engel kan-beyin bariyeridir (BBB). BBB, kan damarları ve beyin parankimi arasındaki sıkı bağlantılar vasıtasıyla beyni dış patojenlerden korur13,14. Bununla birlikte, BBB ayrıca paradoksal olarak terapötik ajanların beyin parankimine girmesini önler. Bu nedenle, BBB'den geçiş, beyin hastalığı tedavilerinin geliştirilmesindeki ana engeldir15,16. İntraserebral enjeksiyon, bu dezavantajın üstesinden gelmek için hedef maddelerin cerrahi operasyonla doğrudan beyne enjekte edilmesiyle gerçekleştirilir 17,18,19. Ancak özellikle iğnenin işlem sırasında nöronal hücrelere zarar vermesi nedeniyle cerrahi müdahalelerin yan etkileri göz önünde bulundurulmalıdır.

İntraspinal kavite uygulaması
İntratekal uygulama - ilaçların omurilik kanalına veya subaraknoid boşluğa uygulanması - ilaçları beyin omurilik sıvısı (BOS) yoluyla beyne veya nöraksiye iletir ve intraserebral enjeksiyona uygun bir alternatiftir. İntratekal enjeksiyonlar, enjeksiyon bölgesine göre alt bölümlere ayrılabilir: lateral ventrikül, cisterna magna ve omurga boşluğu. Her üç yol da ilaçların veya hücrelerin BOS boyunca beyne ve omuriliğe dağılmasına izin verir. Beyne ilaç iletimi, intraserebroventriküler ve intra-cisterna magna enjeksiyonları durumunda, ajan beyne yakın enjekte edildiğinden daha verimli olabilir. Bununla birlikte, intraspinal kavite enjeksiyonu, intraventriküler rezervuar yerleştirmek için genel anestezi veya ameliyat gerektirmeme, genellikle güvenli20 olma avantajlarına sahiptir ve gerekirse tekrar tekrar yapılabilir.

Bu çalışmanın amacı, MSC'leri hem beyne hem de omuriliğe iletmenin bir yolu olarak intraspinal kavite uygulamasını doğrulamaktı. İlk olarak, intraspinal boşluk bir sıçan modelinde kuruldu. Daha sonra, MSC'ler, omuriliğe ve beyne kök hücre göçünün etkinliğini değerlendirmek için lipofilik bir izleyici olan DiD (DiIC18 (5); 1,1-dioktadesil-3,3,3,3-tetrametilindodikarbosiyanin, 4-klorobenzensülfonat tuzu) ile etiketlendi. Hücre dispersiyonunu değerlendirmek için ex vivo optik görüntüleme yapıldı. Bu basit protokol cerrahi müdahale olmadan gerçekleştirilebilir ve sadece kök hücrelerin verilmesi amacıyla değil, aynı zamanda omuriliğe veya beyne iletilmesi amaçlanan ilaçlar, antikorlar, kontrast maddeler ve diğer maddeler için de kullanılabilir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NOT: Bu çalışma, Samsung Tıp Merkezi'ndeki Samsung Biyomedikal Araştırma Enstitüsü'nün (SBRI) Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanımı Komitesi (Onay numarası: 20170125001, Tarih: 25 Ocak 2017) tarafından onaylanmıştır. Uluslararası Laboratuvar Hayvanları Bakımı Değerlendirme ve Akreditasyon Derneği'nin akredite bir tesisi olan SBRI, Laboratuvar Hayvanları Kaynakları Enstitüsü tarafından belirlenen yönergelere uygun olarak hareket eder.

1. İnsan Wharton'un jöle türevi MSC'lerinin hazırlanması

  1. İnsan Wharton'un jöle türevli mezenkimal kök hücrelerinin (WJ-MSC'ler) yetiştirilmesi
    1. Bir şişe insan WJ-MSC'yi 37 ° C'lik bir su banyosunda hızlı bir şekilde çözdürün. WJ-MSC'leri 50 mL'lik konik bir tüpe aktarın ve hücrelerin en az 10 katı (h / h) bir hacimde büyüme ortamı ekleyin. Hücreleri askıya almak için yukarı ve aşağı pipetleyin.
    2. 300 × g'da 5 dakika santrifüjleyin. Süpernatanı dikkatlice atın ve hücreleri yeniden askıya alın.
      NOT: Hücre peletini atmamaya dikkat edin.
    3. T175'teki tohum WJ-MSC'ler 5.000-6.000 hücre /cm2 yoğunlukta şişelenir. WJ-MSC'leri 37 °C CO2 inkübatörde inkübe edin. WJ-MSC'ler %80-90 birleşmeye ulaşana kadar büyüme ortamını her 72 saatte bir değiştirin.
      NOT: Genel olarak, MSC'lerin %80-90 birleşmeye ulaşması 3-4 gün sürer.
  2. İnsan WJ-MSC'lerinin alt yetiştiriciliği
    1. Büyüme ortamını atın ve hücreleri 10 mL fosfat tamponlu salin (PBS) ile yıkayın. PBS'yi çıkarın ve 5 mL %0.25 tripsin-disodyum etilendiamintetraasetik asit (EDTA) ekleyin ( Malzeme Tablosuna bakın). Hücreleri 37 ° C'de bir CO2 inkübatöründe WJ-MSC'ler kültür şişesinden ayrılana kadar 3 dakika inkübe edin.
    2. % 0.25 tripsin-EDTA'yı nötralize etmek için% 10 fetal sığır serumu içeren 5 mL büyüme ortamı ekleyin. Hücre karışımını toplayın ve 50 mL'lik konik bir tüpe aktarın. Hücre kültürü şişesini 10 mL büyüme ortamı ile yıkayın ve hücreleri steril bir serolojik pipet kullanarak 50 mL'lik bir tüpte toplayın.
    3. Hücre karışımını 300 × g'da 5 dakika santrifüjleyin. Süpernatanı atın, hücreleri 10 mL büyüme ortamında yeniden süspanse edin ve WJ-MSC'lerin sayısını sayın.
      DİKKAT: Hücre peletini atmamaya dikkat edin.
    4. Deneye bağlı olarak 4.000-6.000 hücre/cm2 yoğunlukta WJ-MSC'leri tohumlayın.
  3. WJ-MSC'lerin DiD boyası ile etiketlenmesi ve WJ-MSC'lerin intraspinal kavite enjeksiyonu için hazırlanması
    NOT: DiD boya etiketleme prosedürü, üreticinin talimatlarına göre gerçekleştirilmiştir.
    1. Yukarıda belirtilen prosedürü kullanarak WJ-MSC'leri %80 birleşmeye ulaştıklarında ayırın. WJ-MSC'leri fenol kırmızısı içermeyen minimum esansiyel ortamda (MEM) 1 ×10 6 / mL yoğunlukta α serum olmadan askıya alın.
    2. 1 mL hücre süspansiyonu başına 5 μL DiD etiketleme çözeltisi ekleyin; Pipetleme ile nazikçe karıştırın.
    3. 37 ° C'de 15 dakika inkübe edin; Hücre süspansiyonunu 300 × g'da 5 dakika santrifüjleyin.
    4. Süpernatanı çıkarın ve WJ-MSC'leri fenol kırmızısı içermeyen MEM α 1 × 106 / 0.2 mL yoğunlukta yeniden süspanse edin.

2. WJ-MSC'lerin intraspinal boşluk enjeksiyonu

  1. İntraspinal kavite enjeksiyonu için hazırlık
    1. 6 haftalık Sprague-Dawley sıçanlarını% 5 izofluran ile uyuşturun; Ardından, cerrahi prosedür boyunca% 2 izofluran ile anesteziyi koruyun.
      NOT: Deneye başlamadan önce anestezi koşullarını optimize edin.
    2. Küçük hayvanlar için elektrikli tıraş makinesi kullanarak cerrahi bölgeyi tıraş edin.
      NOT: Elektrikli tıraş makinesi, manuel tıraş makinesi ve tıraş jeli ile değiştirilebilir.
    3. Povidon-iyot kullanarak cerrahi alanı dezenfekte edin. Cerrahi bıçakla ciltte 3 cm'lik bir kesi oluşturun. Kalan deri ve kas dokusunu cerrahi bir bıçak ve makas kullanarak rezeke edin. Lomber 2-3'teki (L2-3) spinöz süreçleri ortaya çıkarın.
  2. DiD işaretli WJ-MSC'lerin intraspinal boşluk yoluyla enjeksiyonu
    1. Fareyi yüzüstü pozisyona getirin. Yeterli miktarda kağıt mendil veya uygun pozisyonun korunmasına yardımcı olabilecek diğer malzemeleri kullanarak, bitişik dikenli süreçler arasındaki mesafeyi genişletmek için sıçanın omurgasını uygun şekilde esnetin.
    2. 1 mL'lik bir şırıngayı 0.2 mL DiD etiketli WJ-MSC'lerle doldurun. L2 ve L3'ün dikenli süreçleri arasına dikey olarak 23 G'lik bir şırınga-iğne kombinasyonu yerleştirin ve iğneyi omur gövdesine temas edene kadar sokun.
    3. İğne omur gövdesine temas ettiğinde, iğnenin ucunu omurilik kanalına yerleştirerek yaklaşık 0,5 cm geri çekin. Şırıngayı eğin ve iğnenin ucunu rostral yöne bakacak şekilde yerleştirin. WJ-MSC'leri 1 dakikalık bir süre boyunca omurga boşluğuna enjekte edin.
      NOT: Enjeksiyon hızı önceden optimize edilmelidir.
    4. Enjeksiyondan sonra, şırıngayı omurilik kanalından tamamen çıkarın. İnsizyonu dikin ve ardından povidon-iyot kullanarak cerrahi bölgeyi dezenfekte edin.
  3. İşlem sonrası tedavi
    1. Herhangi bir hareketi önlemek için fareyi stabilize edin ve kısıtlayın, hala anestezi altındayken 15 dakika boyunca 45 ° 'lik bir açıyla baş aşağı yerleştirin. 15 dakika sonra anesteziyi bırakın ve farenin uyanmasını bekleyin.

3. İntraspinal kavite enjeksiyonunun değerlendirilmesi

  1. Sıçanların ötenazisi ve enjeksiyondan 0, 6 ve 12 saat sonra beyin ve omuriliğin izolasyonu
    1. Deney hayvanlarını% 5 izofluran ile uyuşturun; PBS perfüzyonu sırasında% 2 izofluran ile anesteziyi koruyun.
    2. Cerrahi makas kullanarak diyaframın altında bir kesi yapın. Kesiği forseps ile açın ve kalbi ortaya çıkarmak için göğüs kafesini rostral olarak kesin.
    3. Sağ kulakçıkta küçük bir delik açın ve sol kulakçık içine bir kelebek iğne yerleştirin. Karaciğer kandan temizlenene kadar 100 mL soğuk PBS'yi 4-5 dakika boyunca sol ventriküle perfüze edin.
    4. Perfüzyondan sonra, uzunlamasına düzlem boyunca cerrahi bir bıçak kullanarak baştan kuyruğa kadar arka tarafta uzun bir kesi yapın. Cerrahi makas, forseps ve kemik kesici kullanarak kalan beyni ve tüm omurgayı izole edin. Kalan kaburgaları, bağlı kemikleri ve eti çıkarın.
  2. Ex vivo DiD floresan optik görüntüleme
    1. İzole edilen dokuları optik görüntüleme cihazının haznesine yerleştirin.
    2. Parametreleri aşağıdaki gibi ayarlayın: emisyon, 700 nm; uyarma, 605 nm; ve maruz kalma süresi, 2 saniye, steradyan başına santimetre kare başına saniyede foton olarak (p/s/cm2/sr). Optik görüntüleri yakalayın.
      NOT: Tüm görüntüler aynı aydınlatma ayarlarıyla (lamba voltajı, filtreler, f/stop, görüş alanı ve gruplama) elde edilmelidir.
    3. Çizim aracını kullanarak omurilik için eşdeğer boyutta üç dikdörtgen ilgi bölgesi (ROI) ve beyin için bir daire ROI çizin. ROI'lerin floresan yoğunluklarını ölçün.
  3. Omurilik ve beyin dokusundan genomik DNA'nın (gDNA) çıkarılması
    1. Cerrahi forseps, makas ve rongeur kullanarak kafatasını ve omurgayı dikkatlice çıkarın.
    2. Beyni ve omuriliği kafatasından ve omurgadan alın. Omuriliği üç parçaya bölün (servikal, torasik ve lomber).
      NOT: Hasat edilen dokular hemen analiz edilmezlerse -80 °C'de saklanmalıdır.
    3. Dokuları önceden soğutulmuş bir havan, havan tokmağı ve sıvı nitrojen kullanarak öğütün. Üreticinin talimatlarını izleyerek ticari ürünler kullanarak gDNA'yı çıkarın.
  4. Kantitatif gerçek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (qPCR)
    1. Bir spektrofotometre kullanarak her numunedeki gDNA miktarını ölçün.
    2. Örnek başına 10 ng gDNA ve insan Arthrobacter luteus (ALU) primerleri12,21 kullanarak qPCR gerçekleştirin.
    3. ΔΔC T yöntemini22 kullanarak numunelerdeki WJ-MSC'lerin tam sayısını hesaplayın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada MSC'lerin intraspinal kavite enjeksiyonunun etkinliğini değerlendirmek için DiD etiketli MSC'ler kullanıldı. MSC'leri omurga boşluğuna enjekte etmeden önce, etiketleme etkinliği in vitro olarak optik görüntüleme ve floresan mikroskobu kullanılarak değerlendirildi (Şekil 1). Protokol bölüm 3.1'de açıklanan prosedür kullanılarak MSC'lerin DiD etiketleme reaktifi ile boyanmasından sonra, DiD etiketli MSC'lerin tohumlandığı kültür plakalarının optik görüntüleri alındı (

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

MSC'lerle tedavi için en uygun uygulama yolu, hedef hastalığa, hastanın durumuna ve verilecek ilacın türüne bağlı olarak seçilmelidir. MSC tedavisi de dahil olmak üzere hücre tedavilerinde, hücreler BBB19'dan geçemeyeceği için kök hücrelerin beyne veya BOS yoluyla intratekal olarak doğrudan enjeksiyonu düşünülmelidir. İntraspinal kavite enjeksiyonu nispeten non-invazivdir ve intraserebroventriküler enjeksiyonların aksine beyinde nöronal hasara neden olmaz ve düşük...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Milli Eğitim Bakanlığı tarafından finanse edilen Güney Kore Ulusal Araştırma Vakfı (NRF) aracılığıyla Temel Araştırma Programı'ndan alınan hibelerle desteklenmiştir (NRF-2017R1D1A1B03035940) ve Kore Cumhuriyeti Sağlık ve Refah Bakanlığı tarafından finanse edilen Kore Sağlık Endüstrisi Geliştirme Enstitüsü (KHIDI) aracılığıyla Kore Sağlık Teknolojisi Ar-Ge Projesi'nden bir hibe ile desteklenmiştir (hibe sayıları: HI14C3484 ve HI18C0560). İngilizce dil düzenlemesi için Editage'a (www.editage.co.kr) teşekkür ederiz.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
% 0.25 Tripsin-EDTAGibko-invitrojen25200114Hücre kültürü
Fetal sığır serumubiowestS1520Kültür ortamı takviyesi
gentamisinGibco-invitrogen15710-072Kültür ortamı takviyesi
Gentra Puregene Doku KitiQIAGEN158689gDNA izolasyonu
MEM, glutamin yok, fenol kırmızısıyokGibco51200038Enjeksiyon için WJ-MSC fomulasyonu
Miminum Esansiyel Orta alfaGibco-invitrogen12571063WJ-MSC kültür ortamı
Güç SYBR Green PCR Master MixUygulamalı Biyosistemler4368577kantitatif gerçek zamanlı PCR reaktifi
QuantStudio 6 Flex Gerçek Zamanlı PCR SistemiThermo fisher4485694kantitatif gerçek zamanlı PCR
tripan mavisiGibco15250061Enjeksiyonu
Vybrant DiD Hücre Etiketleme ÇözümüinvitrogenV22887Kök hücre etiketleme çözümü
Xenogen IVIS Spektrum sistemiPerkin Elmer124262Optik görüntüleme cihazı

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Gnecchi, M., Danieli, P., Malpasso, G., Ciuffreda, M. C. Paracrine mechanisms of mesenchymal stem cells in tissue repair. Methods in Molecular Biology. 1416, 123-146 (2016).
  2. Liang, X., Ding, Y., Zhang, Y., Tse, H. F., Lian, Q. Paracrine mechanisms of mesenchymal stem cell-based therapy: current status and perspectives. Cell Transplantation. 23 (9), 1045-1059 (2014).
  3. Kang, J. M., Yeon, B. K., Cho, S. J., Suh, Y. H. Stem cell therapy for Alzheimer's disease: a review of recent clinical trials. Journal of Alzheimer's Disease. 54 (3), 879-889 (2016).
  4. Staff, N. P., Jones, D. T., Singer, W. Mesenchymal stromal cell therapies for neurodegenerative diseases. Mayo Clinic Proceedings. 94 (5), 892-905 (2019).
  5. Kim, J., et al. Mesenchymal stem cell therapy and Alzheimer's disease: current status and future perspectives. Journal of Alzheimer's Disease. 77 (1), 1-14 (2020).
  6. Florea, V., Bagno, L., Rieger, A. C., Hare, J. M. Attenuation of frailty in older adults with mesenchymal stem cells. Mechanisms of Ageing Development. 181, 47-58 (2019).
  7. Karp, J. M., Leng Teo, G. S. Mesenchymal stem cell homing: the devil is in the details. Cell Stem Cell. 4 (3), 206-216 (2009).
  8. Regmi, S., Pathak, S., Kim, J. O., Yong, C. S., Jeong, J. H. Mesenchymal stem cell therapy for the treatment of inflammatory diseases: Challenges, opportunities, and future perspectives. European Journal of Cell Biology. 98 (5-8), 151041(2019).
  9. Kim, H. S., et al. Lowering the concentration affects the migration and viability of intracerebroventricular-delivered human mesenchymal stem cells. Biochemical and Biophysical Research Communications. 493 (1), 751-757 (2017).
  10. Kim, D. H., et al. Effect of growth differentiation factor-15 secreted by human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells on amyloid beta levels in in vitro and in vivo models of Alzheimer's disease. Biochemical and Biophysical Research Communications. 504 (4), 933-940 (2018).
  11. Park, S. E., et al. Distribution of human umbilical cord blood-derived mesenchymal stem cells (hUCB-MSCs) in canines after intracerebroventricular injection. Neurobiology of Aging. 47, 192-200 (2016).
  12. Kim, H., et al. Intrathecal injection in a rat model: a potential route to deliver human Wharton's jelly-derived mesenchymal stem cells into the brain. International Journal of Molecular Sciences. 21 (4), 1272(2020).
  13. Daneman, R., Prat, A. The blood-brain barrier. Cold Spring Harbor Perspectives Biology. 7 (1), 020412(2015).
  14. Abbott, N. J., Patabendige, A. A., Dolman, D. E., Yusof, S. R., Begley, D. J. Structure and function of the blood-brain barrier. Neurobiology of Disease. 37 (1), 13-25 (2010).
  15. Banks, W. A. From blood-brain barrier to blood-brain interface: new opportunities for CNS drug delivery. Nature Reviews Drug Discovery. 15 (4), 275-292 (2016).
  16. Pardridge, W. M. CSF, blood-brain barrier, and brain drug delivery. Expert Opinion on Drug Delivery. 13 (7), 963-975 (2016).
  17. Elia, C. A., et al. Intracerebral injection of extracellular vesicles from mesenchymal stem cells exerts reduced Aβ plaque burden in early stages of a preclinical model of Alzheimer's disease. Cells. 8 (9), 1059(2019).
  18. Kim, H. J., et al. Stereotactic brain injection of human umbilical cord blood mesenchymal stem cells in patients with Alzheimer's disease dementia: A phase 1 clinical trial. Alzheimer's & Dementia (N Y). 1 (2), 95-102 (2015).
  19. Park, S. E., Lee, N. K., Na, D. L., Chang, J. W. Optimal mesenchymal stem cell delivery routes to enhance neurogenesis for the treatment of Alzheimer's disease: optimal MSCs delivery routes for the treatment of AD. Histology & Histopathology. 33 (6), 533-541 (2018).
  20. Sandow, B. A., Donnal, J. F. Myelography complications and current practice patterns. American Journal of Roentgenology. 185 (3), 768-771 (2005).
  21. Funakoshi, K., et al. Highly sensitive and specific Alu-based quantification of human cells among rodent cells. Scientific Reports. 7 (1), 13202(2017).
  22. Livak, K. J., Schmittgen, T. D. Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method. Methods. 25 (4), 402-408 (2001).
  23. Glass, J. D., et al. Lumbar intraspinal injection of neural stem cells in patients with amyotrophic lateral sclerosis: results of a phase I trial in 12 patients. Stem Cells. 30 (6), 1144-1151 (2012).
  24. Harris, V. K., et al. Clinical and pathological effects of intrathecal injection of mesenchymal stem cell-derived neural progenitors in an experimental model of multiple sclerosis. Journal of the Neurological Sciences. 313 (1-2), 167-177 (2012).
  25. Janson, C. G., Ramesh, T. M., During, M. J., Leone, P., Heywood, J. Human intrathecal transplantation of peripheral blood stem cells in amyotrophic lateral sclerosis. Journal of Hematotherapy and Stem Cell Research. 10 (6), 913-915 (2001).
  26. Chiu, C., et al. Temporal course of cerebrospinal fluid dynamics and amyloid accumulation in the aging rat brain from three to thirty months. Fluids Barriers CNS. 9 (1), 3(2012).
  27. Bull, E., et al. Stem cell tracking using iron oxide nanoparticles. International Journal of Nanomedicine. 9, 1641-1653 (2014).
  28. Chen, D., et al. Bright polymer dots tracking stem Cell engraftment and migration to injured mouse liver. Theranostics. 7 (7), 1820-1834 (2017).
  29. Lee, N. K., et al. Magnetic resonance imaging of ferumoxytol-labeled human mesenchymal stem cells in the mouse brain. Stem Cell Reviews and Reports. 13 (1), 127-138 (2017).
  30. Bradley, W. G., Haughton, V., Mardal, K. A. Cerebrospinal fluid flow in adults. Handbook Clinical Neurology. 135, 591-601 (2016).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

K k H cre GOmurilikN rodejeneratif Hastal klarOptik G r nt lemeKantitatif PCRK k H cre zlemeSpinal Kanal Enjeksiyonu
Video yakında

İlgili makaleler