Method Article

Murine Dextran Sodyum Sülfat Kaynaklı Kolit Modelinde Bağırsak İltihabı İçin Sistematik Puanlama Analizi

DOI:

10.3791/62135

⸱

February 14th, 2021

 ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pathology, University of Michigan, 2Department of Surgery, Klinikum Rechts der Isar, Technische Universität München, 3Wallenberg Centre for Molecular Medicine, Linköping University, 4Department of Biomedical and Clinical Sciences (BKV), Linköping University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ücretsiz bilgisayar destekli bir sistem kullanılarak bağırsak iltihabının sistematik olarak puanlanması, ülser ve enflamatuar değişikliklerin varlığı ile karakterize kolit modellerindeki histopatolojik değişiklikleri nicel olarak karşılaştırmak için güçlü bir araçtır. Histolojik kolit skoru değerlendirmesi klinik gözlemleri güçlendirir ve veri yorumlamayı kolaylaştırır.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Murine kolit modelleri, enflamatuar bağırsak bozukluklarının patobiyolojisini anlamaya odaklanan çalışmalarda yoğun olarak kullanılan araçlardır. Bununla birlikte, hastalık şiddetinin objektif ve tekrarlanabilir nicelemesi için sağlam standartlar tanımlanmaya devam etmektedir. Kolit analiz yöntemlerinin çoğu, küçük bağırsak segmentlerinin sınırlı histolojik puanlamasına dayanır ve kısmi veya taraflı analizlere yol açar. Burada, dektran sodyum sülfat (DSS) kaynaklı murine kolit modelinde bağırsak yaralanması ve ülserasyonunu ölçmek için tüm kolonun yüksek çözünürlüklü görüntü alımını ve boyuna analizini birleştiriyoruz. Bu protokol, kapsamlı kullanıcı eğitimi olmadan objektif ve tekrarlanabilir sonuçların üretilmesine izin verir. Burada, DSS kaynaklı kolitten elde edilen verilerin örneklerini kullanarak numune hazırlama ve görüntü analizi hakkında kapsamlı ayrıntılar sunuyoruz. Bu yöntem, mukozal yaralanma ile ilişkili önemli inflamasyona sahip diğer murine kolit modellerine kolayca uyarlanabilir. Kolonun tam uzunluğuna göre iltihaplı/yaralı ve aşınmış/ülserli mukoza fraksiyonunun DSS kaynaklı hastalık ilerlemesi sırasında kilo kaybı gibi klinik bulgularla yakından paralellik gösterdiğini gösteriyoruz. Bu histolojik protokol, DSS kolit deneylerinde hastalık aktivitesinin analizlerini tarafsız bir şekilde standartlaştırmak için güvenilir bir zaman ve uygun maliyetli yardım sağlar.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gastrointestinal epitel bariyeri, luminal antijenlerin ve patojenlerin alttaki doku bölmelerinden ayrılmasında önemli bir rol oynar1. İnflamatuvar bağırsak hastalığı (IBD), iskemi veya cerrahi yaralanma gibi patolojik durumlarda görülen epitel yaralanması ve mukozal yaralar ishal, kilo kaybı, dışkıda kan ve karın ağrısı gibi klinik semptomlarla ilişkilidir. Yaralanmaya yanıt olarak, epitel hücreleri mukozal bariyer kusurlarını yeniden epitelleştirmek ve onarmak için göç eder ve çoğalır. enflamasyonun çözülmesi ve mukozal bütünlüğün iadesi, bağırsak mukozal homeostazının ve fonksiyon 2 ,3,

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Açıklanan tüm hayvan deneyleri Michigan Üniversitesi Hayvanların Kullanımı ve Bakımı Komitesi tarafından onaylandı.

1. Doku hasadı

  1. Onaylanan protokollere uygun olarak fareleri izofluran anestezisi ve ardından servikal çıkık kullanarak insanca ötenazi. Tüm hayvan deneyleri için, sertifikalı bir inceleme kurulu tarafından hayvan elleçleme için Ulusal ve Kurumsal yönergelere uygun olarak onay alındı.
  2. Fareyi bir diseksiyon pedi üzerine supine pozisyonunda yerleştirin. 20 G x 1 1/2 inç G iğneler kullanarak fare ekstremitelerini hareketsiz hale getir.
  3. Perten ve makas kullanarak, karın derisinde küçük bir kesi yapın v....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu Histolojik Kolit Skor Analizinin güvenilirliğini DSS meydan okuması ve daha sonra kolitten iyileşmeden sonra mukozal hasar bağlamında göstermek için, 5 gün boyunca sekiz 10 haftalık erkek C57BL6 vahşi tip farelerin içme suyunda% 2.5 DSS uyguladık ve ardından 5 gün boyunca düzenli su ile bir geri kazanım süresi uyguladık. DSS'nin akut yönetimi sırasında vücut ağırlığında 0'dan 5'e kadar bir değişiklik olmadı (Şekil 4A). Vücut ağırlığı, farelerin düzenli mus.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Histolojik Kolit Skor sistemimiz doku iltihabını ve bağırsaktaki hasarı ölçmek için güvenilir bir araçtır. Bu yaklaşım, küçük alanlar veya eksik bölümler seçme önyargısı olmadan tüm organın histopatolojik durumunun daha iyi anlaşılmasını sağlar. Bu protokolü başarıyla yürütmek için kritik adımlar arasında, kolon uzunluğunun en az% 90'ının analizine izin veren İsviçre rulolarının uygun şekilde hazırlanması vardır; epitel mahzenlerinin boyuna görünümlerine sahip düz ve düzgün doku bölümlerini sağlamak için parafin gömme ve.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar NIH'nin DK055679, DK089763, DK079392, DK061739, DK072564 ve Michigan Üniversitesi Patoloji Slayt Tarama Hizmetleri'nden destek almak istemeleridir.

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Aperio AT2 – Yüksek Hacimli, Dijital Tüm Slayt TaramaLeica BiosystemsAperio AT2
Su geçirmez nem bariyerli Emici Alt PedlerVWR International56616-032
American Line 66-0089 Tek Kenar Bıçak, paket başına 100GT MidwestTL5837
BD Luer-Lok İğnesiz Tek Kullanımlık ŞırıngalarFisher scientific14-823-2A
Bonn Şaşılık Makası - ToughCutİnce Bilim aletleri11103-09
Bonn Şaşılık Makası - ToughCutGüzel Bilim aletleri14084-09
Dumont #5 ForsepsGüzel Bilim araçları11251-20
Formalin çözeltisi, nötr tamponlu, %10SigmaHT501640-19L
HistoPrep %70 EaFisherbran%70 denatüre etil alkol
ImageScopeAperioSürüm 12.3.3.5039http://www.leicabiosystems.com/pathology-imaging/aperio-epathology/integrate/imagescope/
LeakBuster Numune Kapları: SterilStarplex ScientificB120210
Fosfat Tamponlu Salin, kalsiyum ve magnezyum içermezCorning21-040-CV
Plastik Besleme tüpleri, 20 GA x 30 mmInstechFTP2030
PrecisionGlide İğnesi, Boyut: 20 G x 1 1/2 inçBD (Becton, Dickinson and Company)305176
PrecisionGlide İğnesi, Boyut: 27 G x 1/2 inçBD (Becton, Dickinson and Company)305109
Şırınga, 10 mlBD (Becton, Dickinson and Company)302995
Unisette Doku KasetleriSimportM505-2

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kagnoff, M. F. The intestinal epithelium is an integral component of a communications network. Journal of Clinical Investigation. 124 (7), 2841-2843 (2014).
  2. Laukoetter, M. G., Nava, P., Nusrat, A. Role of the intestinal barrier in inflam....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Murine Colitis ModelDextran Sodium SulfateIntestinal InflammationHistological ScoringSwiss Roll TechniqueColon Tissue PreparationMucosal InjuryImage AnalysisDisease Severity QuantificationEpithelial Ulceration

Related Articles