Bu çalışmanın amacı, nanopartikül izleme analizinin (NTA) sağlıklı yetişkinlerden gelen nanokristal içeren üriner kalsiyumu tespit edip ölçemediğini belirlemekti. Mevcut çalışmadan elde edilen bulgular, NTA'nın böbrek taşı hastalığı sırasında idrar nanokristallerini tahmin etmek için potansiyel bir araç olabileceğini göstermektedir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Kalsiyum Florofor Etiketleme ve Nanopartikül Takip Analizi Kullanılarak İnsanlarda Üriner Nanokristallerin Tahmini
Bu makalede
Özet
Özet
Böbrek taşları yetişkinlerde ve çocuklarda dünya çapında daha yaygın hale gelmektedir. En yaygın böbrek taşı türü kalsiyum oksalat (CaOx) kristallerinden oluşur. Kristalüri, idrarın minerallerle (örneğin kalsiyum, oksalat, fosfat) doymamış olması ve böbrek taşı oluşumundan önce gelmesiyle ortaya çıkar. Taş eskilerde kristalürisi değerlendirmek için standart yöntemler mikroskopi, filtrasyon ve santrifüjlemedir. Bununla birlikte, bu yöntemler öncelikle nanokristalleri değil mikrokristalleri tespit eder. Nanokristallerin böbrek epitel hücrelerine mikrokristal in vitrodan daha zararlı olduğu ileri sürülmüştür. Burada Nanopartikül Takip analizinin (NTA) insan üriner nanokristallerini tespit etme yeteneğini açıklıyoruz. Sağlıklı yetişkinler, idrar nanokristallerini uyarmak için oksalat yükü içmeden önce kontrollü bir oksalat diyeti ile beslendi. İdrar, oksalat yükünden önce ve sonra 24 saat boyunca toplandı. Numuneler işlendi ve numuneleri arındırmak için etanol ile yıkandı. Üriner nanokristaller kalsiyum bağlayıcı florofor, Fluo-4 ile boyandı. Lekelemeden sonra NTA kullanılarak nanokristallerin büyüklüğü ve sayısı belirlendi. Bu çalışmadan elde edilen bulgular, NTA'nın sağlıklı yetişkinlerde nanokristalüriyi verimli bir şekilde tespit dürebildiğini göstermektedir. Bu bulgular, böbrek taşı hastalığı olan hastalarda NTA'nın nanokristalürinin değerli bir erken teşhis yöntemi olabileceğini göstermektedir.
Giriş
İdrar minerallerle doymamış hale geldiğinde idrar kristalleri oluşur. Bu sağlıklı bireylerde ortaya çıkabilir, ancak böbrek taşı olan bireylerde daha yaygındır1. İdrar kristallerinin varlığı ve birikimi, kişinin böbrek taşı geliştirme riskini artırabilir. Özellikle, kristaller Randall'ın plağında bağlandığında, çekirdeklendiğinde, biriktiğinde ve zamanla büyüdüğünde ortaya çıkar2,3,4. Kristalüri böbrek taşı oluşumundan önce gelir ve kristalürinin değerlendirilmesi böbrek taşı eskilerinde tahmin değerine sahip olabilir3,
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Bu çalışmada özetlenen tüm deneyler Birmingham'daki Alabama Üniversitesi (UAB) Kurumsal İnceleme Kurulu tarafından onaylanmıştır. Sağlıklı yetişkinler (33,6 ± 3,3 yaşında; n=10) normal kan kapsamlı metabolik paneli, tütün dışı kullanıcıları, hamile olmayanları, 20-30 kg/m2arasında bir VKİ'leri varsa ve kronik tıbbi rahatsızlıkları veya akut hastalıkları yoksa çalışmaya alındı. Sağlıklı katılımcılar, çalışmaya başlamadan önce yazılı bir bilgilendirilmiş onay formu imzaladılar.
1. Klinik protokol ve idrar toplama
- Katılımcılar, idrarlarını toplamadan önce UAB Klinik ve Çeviri Bilimleri Biyo besin çekirdeği tarafından hazır....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Bu çalışmadan elde edilen bulgular, NTA'nın insan idrarında idrar nanokristalleri içeren kalsiyumun ortalama boyutunu ve konsantrasyonu olduğunu verimli bir şekilde tespit edebildiği göstermektedir. Bu, florofor, Fluo-4 ve nanopartikül izleme analizi kullanılarak elde edildi. Fluo-4 hem CaOx hem de CaP kristallerine bağlanabildi. Şekil 3A'dagösterildiği gibi, CaOx kristallerinin 50-270 nm arasında olduğu ve ortalama 1.26 x 109 parçacık/ mL konsantrasyona sahip olduğu belirlenmişti.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
NTA, bu çalışmada insan idrarındaki nanokristalleri kalsiyum bağlayıcı bir prob olan Fluo-4 AM kullanarak değerlendirmek için kullanılmıştır. İdrardaki nanokristalleri tespit etmek için standart bir yöntem yoktur. Bazı araştırma grupları idrarda nanokristaller tespit etmiş ve örnekleri ölçme yetenekleri sınırlı olan kapsamlı protokollerin veya yöntemlerin kullanılmasına güvenmektedir27,28. Bu çalışma, yüksek oksalat yükünden oluşan bir diyet besleme çalışmasına k.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan eder.
Teşekkürler
Yazarlar tüm çalışma katılımcılarına ve UAB CCTS Bionutrition Core ve UAB Yüksek Çözünürlüklü Görüntüleme Servis Merkezi'ne katkılarından dolayı teşekkür eder. Bu çalışma NIH tarafından DK106284 ve DK123542 (TM) ve UL1TR003096 (Ulusal Çeviri Bilimleri İlerleyen Merkez) hibeleri ile desteklendi.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Tezgah Üstü Santrifüj | Jouan Santrifüj | CR3-12 | |
| Kalsiyum Oksalat monohidrat | Daha önce açıklandığı gibi laboratuvarda sentezlenir29< / sup>. | RT'de saklayın; Stok 10 mM | |
| Kalsiyum Fosfat kristalleri (hidroksiapatit nanopowder) | Sigma | 677418 | RT'de saklayın; RT'de 10 mM |
| etanol | Fischer Scientific | AC615095000 | Mağazasında stoklayın; Hisse senedi %100 |
| Fluo-4* | AAT Bioquest, Inc. | 20550 | Dondurucuda saklayın (-20&�; C); Stok 5 mM |
| Altın | Nanopartiküller Sigma | 742031 | 2-8 ° C'de saklayın; C |
| NanoSight Enstrüman | Malvern Aletleri, İngiltere | NS300 | |
| Şırınga pompası | Harvard Aparatı | 98-4730 | |
| Virkon Dezenfektan | LanXESS Enerji Veren Şirket, Almanya | LSP | |
| * Floresan boyalar ışığa duyarlıdır; stok ve alikotlar karanlıkta -20 ° C'de saklanmalıdır. |
Kaynaklar
- Fogazzi, G. B. Crystalluria: a neglected aspect of urinary sediment analysis. Nephrology, Dialysis, Transplantation. 11 (2), 379-387 (1996).
- Kuo, R. L. Urine calcium and volume predict coverage of renal papilla by Randall's plaque. <....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
