Burada, farelerde klinik olarak ilgili ancak teknik olarak zorlayıcı bir cerrahi prosedür olan intraportal adacık transplantasyonunun başarılı bir şekilde gerçekleştirilmesi için rafine cerrahi prosedürler sunulmaktadır.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Farelerde İntrahepatik Adacık Transplantasyonu Sırasında İnfüzyon Sonrası Portal Ven Kanamasının En Aza İndirgenmesi
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Karaciğer günümüzde klinik ortamlarda insan adacıkları için birincil transplantasyon alanı olarak kabul edilmekle birlikte, çoğu kemirgen preklinik adacık transplantasyonu çalışmasında adacıklar böbrek kapsülü altında nakledilmektedir. Bu model yaygın olarak kullanılır, çünkü murin intrahepatik adacık transplantasyonu teknik olarak zordur ve farelerin yüksek bir yüzdesi cerrahi komplikasyonlardan, özellikle de nakil sonrası enjeksiyon bölgesinden kanamadan ölebilir. Bu çalışmada, infüzyon sonrası portal ven kanaması insidansını en aza indirgeyebilecek iki prosedür gösterilmiştir. İlk yöntem, enjeksiyon bölgesine emilebilir hemostatik jelatin sünger uygular ve ikinci yöntem, adacık enjeksiyon iğnesinin önce yağ dokusundan sonra da kanamayı durdurmak için fiziksel bir bariyer olarak yağ dokusunu kullanarak portal venin içine nüfuz etmesini içerir. Her iki yöntem de kanamaya bağlı fare ölümünü etkili bir şekilde önleyebilir. Adacık dağılımını gösteren tüm karaciğer kesiti ve intrahepatik adacık transplantasyonu için tipik bir özellik olan transplantasyon sonrası adacık trombozu bulguları sunuldu. Bu geliştirilmiş protokoller, intrahepatik adacık transplantasyon prosedürlerini hassaslaştırır ve laboratuvarların adacık sağkalımını incelemek ve klinik öncesi ortamlarda işlev görmek için prosedürü oluşturmasına yardımcı olabilir.
Giriş
Portal ven yoluyla intraportal adacık transplantasyonu (IIT), klinik ortamlarda insan adacık transplantasyonu için en sık kullanılan yöntemdir. Fare IIT modeli, adacık transplantasyonunu incelemek ve adacık transplantasyonunun etkinliğini artırabilecek umut verici girişimsel yaklaşımları test etmek için harika bir fırsat sunmaktadır1. IIT ilk olarak 1970'lerde tanımlanmış ve birkaç grup tarafından kullanılmıştır1,2,3,4,5. 20006 yılında insan adacık transplantasyonundaki atılımdan son....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Tüm prosedürler, Güney Carolina Tıp Üniversitesi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanım Komitelerinin ve Charleston'daki Ralph H Johnson Tıp Merkezi'nin onayı ile gerçekleştirildi.
1. Streptozotosin (STZ) kullanarak diyabet indüksiyonu
- Alıcı farelerin hazırlanması:
- Tüm fareleri ayrı ayrı tartın.
- Bir glukometre kullanarak kuyruk damarı kan örneğinden kan şekeri seviyelerini kontrol edin.
- Üç farklı senaryo için STZ doz belirleme:
- Yağlı karaciğer hastalığı olan fareler için, art arda 5 gün boyunca bir doz STZ [40 mg / kg / gün, intraperitoneal (i.p.) enjeksiyon] enjekte edin. ....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Portal ven üzerinden sinjenik ve ksenojenik adacık nakilleri gerçekleştirdik. Her iki adacık transplantasyon modelinde de adacık greft fonksiyonu doza bağımlı olarak gözlendi. C57BL / 6 fareleri kullanan sinjenik adacık transplantasyonu modelinde, 250 adacığın transplantasyonu, fareler hiperglisemiye dönmeden önce geçici normoglikemiye yol açtı. 500 adacık alan fareler, transplantasyondan sonraki 30 günden fazla normoglisemine ulaştı ve korudu (Şekil 2A). Her iki gruptaki fareler vücut ağırl.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu çalışmada, fare IIT sırasında kanamayı önleyebilen ve fare mortalitesini azaltabilen iki gelişmiş prosedür gösterilmiştir. Bu çalışma, araştırmacıların transplantasyon sonrası anlık kan aracılı enflamatuar yanıtı incelemede benzersiz olan adacık transplantasyon modelini görselleştirmelerini sağlar. IIT modeli, adacık transplantasyonuna yanıt olarak adacık hücresi sağkalımı ve hepatik iskemik yaralanmaları incelemek için ayırt edici bir modeldir19. Burada, önceki çalışmalara dayanarak prosedürü .......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Tüm yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.
Teşekkürler
Bu çalışma, Gazi İşleri Bakanlığı (VA-ORD BLR & D Merit I01BX004536) ve Ulusal Sağlık Enstitüsü HW'ye # 1R01DK105183, DK120394, DK118529 hibeleri tarafından desteklenmiştir. Dil düzenlemesi için Bay Michael Lee ve Bayan Lindsay Swaby'ye teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| % 10 Nötr tamponlu formalin v / v | Fisher Scientific | 23426796 | |
| 1 mL İğneli Şırınga | AHS | AH01T | |
| 20 mL Şırınga | BD | 301031 | |
| 25G x 5/8 "hipodermik iğneler | BD | 305122 | |
| Alkol hazırlama pedleri, steril | Fisher Scientific | 22-363-750 | |
| Hayvan Anestezisi sistem | VetEquip, Inc. | ||
| Buprenorfin hidroklorür, enjeksiyon | Par Steril Ürünler, LLC | NDC 42023-179-05 | |
| Santrifüj tüpleri, 15 mL | Fisher Scientific | 0553859A | |
| CMRL-1066 | Corning | 15110CV | |
| DMEM | Corning | 10013CV | |
| Etanol, mutlak (200 kanıt), moleküler biyoloji sınıfı | Fisher Scientific | ||
| Ekstra ince Mikro Diseksiyon makası 4 "düz keskin | Roboz Cerrahi Alet A.Ş. | RS-5882 | |
| Fetal sığır serumu (FBS) | Corning | 35011CV | |
| FreeStyle Glikoz ölçer | Abbott | Lite | |
| FreeStyle Kan Şekeri test şeritleri | Abbott | Lite | |
| Jel Köpük (emilebilir jelatin sünger, USP) | Pharmacia & Upjohn Company | 34201 | |
| Graefe forseps 4 "ekstra hassas uç | Roboz Cerrahi Alet A.Ş. | RS-5136 | |
| Isıtmalı ped | Amazon | B07HMKMBKM | |
| Hegar-Baumgartner İğne Tutucu 5.25" | Roboz Cerrahi Alet A.Ş. | RS-7850 | |
| 27 gauge iğneli insülin şırıngası | BD | 879588 | |
| İyot hazırlama pedleri | Fisher Scientific | 19-027048 | |
| İzofluran | Piramal Yoğun Bakım | NDC 66794-017-25 | |
| Penisilin / streptomisin (P / S) | HyClone | SV30010 | |
| Polipropilen Sütür 4-0 | Med-Vet International | MV-8683 | |
| Polipropilen Sütür 5-0 | Med-Vet International | MV-8661 | |
| Sodyum klorür, %0.9 intravenöz solüsyon | VWR | 2B1322Q | |
| Streptozocin (STZ) | Sigma | S0130 | |
| Cerrahi örtü, steril | Med-Vet International | DR1826 | |
| Doku Kaseti | Fisher Scientific | 22-272416 |
Kaynaklar
- Pellegrini, S., Cantarelli, E., Sordi, V., Nano, R., Piemonti, L. The state of the art of islet transplantation and cell therapy in type 1 diabetes. Acta Diabetology. 53 (5), 683-691 (2016).
- Ballinger, W. F., Lacy, P. E. Transplantation of intact pancreatic islets in rats. Surg....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
