Yöntem makalesi

Hemipteran Bağırsaklarda Bitki Virüsü ve Böcek Vektör Proteinlerinin İmmünofloresan Etiketlenmesi

DOI:

10.3791/62605

⸱

14 Mayıs 2021

 ,  , 
1State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests, Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Eksize edilmiş böcek bağırsaklarında hem bitki virüsü proteinlerinin hem de vektör böcek proteinlerinin immünofloresan etiketlenmesi için bu protokol, virüs ve vektör böcekleri, böcek protein fonksiyonları ve virüs bulaşmasının altında yatan moleküler mekanizmalar arasındaki etkileşimleri incelemek için kullanılabilir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Doğadaki çoğu bitki virüsü, hemipteran böcekler tarafından bir bitkiden diğerine bulaşır. Virüs bulaşmasında oldukça etkili olan vektör böceklerinin yüksek popülasyon yoğunluğu, alanlardaki virüs salgınlarında önemli bir rol oynamaktadır. Virüs-böcek vektör etkileşimlerini incelemek, bitki virüslerini ve vektör böceklerini kontrol etmek için yeni stratejiler tasarlamak amacıyla virüs bulaşması ve salgınlar hakkındaki anlayışımızı geliştirebilir. İmmünofloresan etiketleme, patojenler ve konakçılar arasındaki etkileşimleri analiz etmek için yaygın olarak kullanılmaktadır ve burada, midgut epitel hücrelerindeki viryonları ve böcek proteinlerini bulmak için güney pirinç siyah çizgili cüce virüsünü (SRBSDV, cins Fijivirus, aile Reoviridae) verimli bir şekilde ileten beyaz sırtlı planthopper'da (WBPH, Sogatella furcifera) kullanılmaktadır. Lazer taramalı konfokal mikroskopi kullanarak, midgut epitel hücrelerinin morfolojik özelliklerini, böcek proteinlerinin hücresel lokalizasyonunu ve viryonların ve bir böcek proteininin kolokalizasyonunu inceledik. Bu protokol, böceklerdeki virüs aktivitelerini, böcek proteinlerinin işlevlerini ve virüs ile vektör böceği arasındaki etkileşimleri incelemek için kullanılabilir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tanımlanan bitki virüslerinin çoğu, yaprak bitleri, beyaz sinekler, yaprakçıklar, planthoppers vethrips 1,2'yi içeren Hemiptera düzeninden böcekler tarafından bulaşır. Hemipteryen böceklerin delici-emici ağız kısımları, tükürüğü beslemek ve salgılamak için bitki dokusunu deler, aynı zamanda virüsü verimli bir şekilde iletir2. Bitki virüslerinin vektör böcekleri tarafından farklı bulaşma mekanizmaları tanımlanmıştır. Bunlar arasında kalıcı olmayan, yarı kalıcı ve kalıcı bulunur. Kalıcı tip ya yayılmaz ya da çoğaltıcı 3,4'tür, ancak bu türlerin her ikisi için de bulaşan virüs böceğin vücudu boyunca hareket etmelidir. Kalıcı-yayılım modunda, virüsler başlangıçta böceğin bağırsağının epitel hücrelerinde enfekte olur ve çoğalır, daha sonra farklı dokulara ve sonunda tükürük bezlerine yayılır, buradan daha sonra böcek besleme sırasında tükürük yoluyla bir bitkiye sokulabilirler 5,6. Kalıcı olarak bulaşan virüsler farklı organlardan geçer ve böcek vektörlerinde çoğalırlar, bu da farklı aşamalarda virüs ve vektör bileşenleri arasında spesifik etkileşimler gerektirir 7,8.

Viral proteinler ve böcek proteinleri, vektör böceklerinde virüs tanıma, enfeksiyon, replikasyon veya yayılma için kritik süreçleri kolaylaştırmak için etkileşime girmelidir 9,10. Optik mikroskopi böceklerdeki hücresel yapıları gözlemlemek için kullanılabilse de, virion dağılımını, viral proteinlerin ve böcek proteinlerinin hücresel lokalizasyonunu veya kolokalizasyonunu veya böcek dokularının ve hücrelerinin ultrayapısını gösteremez. İmmünofloresan etiketleme ilk olarak Coons ve ark. tarafından farenin fagositik hücrelerinde spesifik floresein antikorlarının etiketlenmesi yoluyla gerçekleştirilmiştir ve şimdi yaygın olarak kullanılmaktadır11. Floresan antikor tekniği olarak da bilinen immünofloresan tekniği, geliştirilen en eski immünolojik etiketleme tekniklerinden biridir ve antijen ile antikor11,12 arasındaki spesifik bağlanma reaksiyonuna dayanır. Bilinen antikor ilk olarak, hücrelerde veya dokularda karşılık gelen antijenleri tespit etmek için bir prob olarak kullanılan floresein ile etiketlenir13,14. Floresein etiketli antikor, hücrelerdeki veya dokulardaki karşılık gelen antijene bağlandıktan sonra, prob, uyarma dalga boyları ile ışınlandığında ve antijen15'i lokalize etmek için bir floresan mikroskobu ile görüntülendiğinde parlak floresan yayar.

Bitki virüslerinin çoğu vektör böcekleri hemipteranlardır. Bitki virüsü için yüksek bulaşma verimliliğine sahip vektör böceklerinin daha yüksek popülasyon yoğunluğu, virüs salgınlarına yol açabilir5. Pirincin en ciddi patojenlerinden biri olan Güney pirinç siyah çizgili cüce virüsü (SRBSDV, Fijivirus cinsi, Reoviridae familyası), Doğu ve Güneydoğu Asya'da pirinç yetiştirme alanlarına hızla yayılmış ve 2010 yılından bu yana ciddi verim kayıplarına neden olmuştur16,17. Beyaz sırtlı planthopper'ın yetişkinleri ve nimfleri (WBPH, Sogatella furcifera Horváth), SRBSDV'yi pirince yüksek verimlilikle kalıcı-yayılıcı bir şekilde iletir. Saha çalışmaları, SRBSDV kaynaklı pirinç siyah çizgili cüce hastalığının salgınlarının genellikle SRBSDV salgınlarında çok önemli bir faktör olan WBPH'lerin kitlesel uzun mesafeli göçü ile çakıştığını göstermiştir 7,8,18. Vezikülle ilişkili membran proteini 7 (VAMP7), vezikül füzyonu yoluyla maddelerin taşınmasına aracılık edebilen çözünür bir N-etilmaleimide duyarlı faktör bağlanma proteini reseptörüdür (SNARE). VAMP7, SRBSDV'nin in vitro dış majör kapsid proteini ile etkileşime girer, bu da VAMP7'nin virüs iletimi ile yakından ilişkili olabileceğini gösterir16.

Burada sunulan protokolde, midgut epitel hücrelerinde SRBSDV viryonlarını ve VAMP7'yi etiketlemek için örnek olarak virülifer WBPH'den bağırsakları eksize ettik16. Virüsün ilk istila yeri olan midgut epiteli, virüs enfeksiyonu, replikasyonu ve bulaşmasında hayati rol oynar. İlk olarak, bağırsakları nimflerden ve WBPH'lerin yetişkinlerinden çıkarma adımlarını detaylandırdık. İkincisi, bağırsak epitel hücrelerinde SRBSDV viryonlarını ve VAMP7'yi etiketlemek için spesifik floresein etiketli antikorlar kullandık. Daha sonra epitel hücrelerini ve viryonların ve VAMP7'nin hücresel lokalizasyonunu lazer taramalı konfokal mikroskopla gözlemledik. Sonuçlar, SRBSDV viryonlarının ve VAMP7'nin midgut epitel hücrelerinin sitoplazmasında kolokalize olabileceğini gösterdi, bu da VAMP7'nin spesifik işlevinin viryonların midgut epitel hücrelerinden yayılmasıyla ilişkili olabileceğini düşündürdü.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Virülifer olmayan böcek yetiştiriciliği

  1. WBPH'leri pirinç tarlalarından toplayın ve 1 L cam beherlerde pirinç fideleri ile arkadan toplayın, böceklere dayanıklı ağ ile kaplanmış, 28 ° C'de bir inkübatörde 16 saat ışık ve 8 saat karanlık. SRBSDV yumurta yoluyla bulaşmadığından, yeni yumurtadan çıkmış nimfler virülifer değildir.
  2. Bir fırça kalemiyle, WBPH perileri yumurtadan çıkana kadar her hafta taze pirinç fidelerinin yeni bir kabına beher, böcekleri yetiştiren böceklerden böcekleri nazikçe fırçalayın. Bu yumurtadan çıkmış virülifer olmayan nimfleri 2 veya 3 instar'a yetiştirmeye devam edin.
    NOT: WBPH'lerin beherden uçmasını veya zarar görmesini önlemek için dikkatlice fırçalayın.

2. Virüs edinimi ve virülifer böceklerin toplanması

  1. Bitkilerle beslenerek virülifer olmayan böcekleri cam beherlerden 2 boyutlu virüs edinme erişim süresi (AAP) için böcek geçirmez bir ağ ile kaplanmış taze SRBSDV ile enfekte olmuş pirinç bitkilerine aktarın. Daha sonra, böcekleri taze pirinç fideleri içeren cam beherlerde toplayın.
  2. 2 d'den sonra, bağırsakların diseksiyonu ve eksizyonu için böcekleri manuel bir aspiratör ile cam beherlerden toplayın.
    NOT: SRBSDV'nin minimum AAP'si hem WBPH perileri hem de yetişkinler için 5 dakikadır, ancak böceklerin% 80'e kadar elde etme verimliliği elde etmek için 2 d boyunca taze SRBSDV ile enfekte olmuş pirinç bitkilerinde beslenmelerine izin verilmelidir.

3. Reaktif hazırlama

  1. 0.01 M fosfat tamponlu salin (PBS) çözeltisi hazırlamak için8.5 g NaCl, 3.5 g Na 2 HPO 4 · 12H 2 O ve 0.25 g NaH 2 PO4'ü 1 mL ddH 2O içinde çözün.
  2. PBS'de %4 (m/v) paraformaldehit hazırlamak için 100 mL PBS'ye 4 g paraformaldehit ekleyin.
  3. %2 (v/v) Triton X-100 hazırlamak için 98 mL PBS'ye 2 mL Triton X-100 ekleyin.

4. Yetişkinlerin diseksiyonu ve bağırsakların eksizyonu

  1. Cam slayt üzerine 100 μL PBS yerleştirmek için bir pipetleyici kullanın. Slaytı optik mikroskop sahnesine yerleştirin.
  2. SRBSDV ile enfekte olmuş yetişkinleri manuel aspiratörlü cam beherlerden toplayın ve 1,5 mL tüplere yerleştirin. Böcekleri felç etmek için tüpleri buzun üzerine yerleştirin ve daha sonra felçli bir yetişkini karın yukarı doğru slayttaki 100 μL PBS'ye aktarın.
    NOT: Böcekler buz üzerinde 5 dakika sonra tamamen felç olacaktır.
  3. Vücudu sıkıştırmak için bir elinizde cımbız kullanın ve ardından diğer elinizde başka bir cımbız seti ile kafayı çıkarın.
  4. Karın kenarlarını bir cımbız seti ile sıkıştırın ve ovipozitörü veya kuyruğun çiftleşme organını diğer setle sıkıştırın. Daha sonra bir karın segmentinin intersegmental zarını dikkatlice çekin ve bağırsakları karın içinde yavaşça açığa çıkarın.
  5. Zarı yırtmaya devam edin ve yavaş yavaş tüm bağırsağı karnından çıkarın. Tüm bağırsağı çıkarmak için bağırsağın ucuna bağlı kuyruğu yavaşça çekin.
    NOT: Çok dikkatli çekin, aksi takdirde bağırsak hasar görür.
  6. Eksize edilmiş bağırsakları 200 μL'lik bir santrifüj tüpüne yerleştirin, tüpe 200 μL PBS ekleyin ve bağırsakları iyice yıkamak için çözeltiyi bir pipetle yavaşça emerek serbest bırakın.

5. Perileri diseksiyonu ve bağırsakların eksizyonu

NOT: Perisi cisimleri yetişkin vücutlarından daha kırılgandır ve kuyruktan çekildiğinde bağırsak kolayca zarar görür. Bu nedenle, nimf bağırsağını dışlamak için en güvenilir yöntem kafadan çekmektir.

  1. Cam slayt üzerine 100 μL PBS yerleştirmek için bir pipetleyici kullanın. Slaytı optik mikroskop sahnesine yerleştirin.
  2. SRBSDV ile enfekte olmuş nimfleri manuel aspiratörlü cam beherlerden toplayın ve 1,5 mL tüplere yerleştirin. Böcekleri felç etmek için tüpleri buzun üzerine yerleştirin. Daha sonra, felçli bir perisini, karın yukarı bakacak şekilde slayttaki 100 μL tampona aktarın.
  3. Perisinin kuyruğunu ayırmak için cımbız kullanın. Daha sonra hafifçe sabitlemek için böcek gövdesini kelepçeleyin ve kafayı sıkıştırmak için diğer seti kullanın. Başın vücuttan ayrılması için bağırsaklara bağlanmasını sürdürürken kafayı yavaşça vücuttan uzaklaştırın, ancak bağırsak hala göğüs kafesine ve karnına bağlanır.
    NOT: Kafa ayrıldıktan sonra, nimfin korpus adipozumu dışarı akacak ve PBS'yi bulanık hale getirecektir. Bulanık PBS çözeltisini çıkarın ve 100 μL taze PBS ile değiştirin.
  4. Cımbızlar hala vücudu sıkıştırırken, kafayı dikkatlice hareket ettirmek için diğer seti kullanın ve bağırsağı yavaş yavaş dışarı çekin.
  5. Bağırsağı kafadan cımbızla yavaşça ayırın ve sonunda planthopper'ın gövdesine zarar vermeden sağlam bir bağırsak elde edin.
  6. Eksize edilmiş bağırsakları 200 μL'lik bir santrifüj tüpüne yerleştirin, tüpe 200 μL PBS ekleyin ve bağırsakları iyice yıkamak için çözeltiyi bir pipetle yavaşça emerek serbest bırakın.
    NOT: Eksize edilen bağırsaklar, karın boşluğundan kirletici yağ gövdelerini çıkarmak için PBS ile iyice temizlenmelidir; boyama protokolüne müdahale edebilirler.

6. SRBSDV viryonları ve bir böcek proteini için etiketleme protokolleri

  1. Bu tahlilde kullanılan antikorları ve montaj ortamını hazırlayın. Antikorlar, SRBSDV viryonları 18'e karşı Dylight 549 (kırmızı) ile etiketlenmiş anti-SRBSDV antikoru, böcek proteini VAMP716,19'a karşı Dylight 488 (yeşil) ile etiketlenmiş anti-VAMP7 antikoru, Dylight 633 falloidin (mavi) ve 4,6-diamidino-2-fenilindol (DAPI, mavi) içeren montaj ortamıdır.
  2. Yeni eksize edilmiş ve PBS ile yıkanmış WBPH bağırsaklarını derhal 200 μL'lik bir santrifüj tüpüne 100 μL% 4 (m / v) paraformaldehit içine yerleştirin ve oda sıcaklığında 2 saat bekletin.
    NOT: Yeni eksize edilen WBPH bağırsakları PBS'ye daha uzun süre batırılmamalıdır, aksi takdirde epitel hücreleri hasar görür.
  3. Bir pipetör ile %4 (m/v) paraformaldehiti çıkarın ve ardından 200 μL santrifüj tüpüne 200 μL PBS ekleyin. 10 dakika sonra, herhangi bir paraformaldehiti ortadan kaldırmak için PBS'yi bir pipetleyici kullanarak çıkarın.
  4. Bu PBS yıkama adımını iki kez tekrarlayın.
  5. PBS'yi çıkarın ve 200 μL noniyonik deterjan Triton X-100 (%2, v/v) ekleyin. Noniyonik deterjandaki numuneleri oda sıcaklığında 30 dakika geçirgenleştirin.
  6. %2 (v/v) Triton X-100'ü bir pipettörle çıkarın ve kalan deterjanı 200 μL PBS ile üç adet 10 dakikalık yıkama ile yıkayın (bkz. adım 6.3 ve 6.4).
  7. Dylight 549 (kırmızı) ile etiketlenmiş anti-SRBSDV antikoru ve Dylight 488 (yeşil) 1:50 ile etiketlenmiş anti-VAMP7 antikoru 50 μL boğa serum albümini (%3, m/v) ile seyreltin.
  8. Seyreltilmiş antikorları tüpe ekleyin ve numuneleri gece boyunca 4 ° C'de inkübe edin.
  9. Antikor seyrelticiyi bir pipettörle çıkarın ve ardından kalan antikor seyrelticiyi 200 μL PBS ile üç adet 10 dakikalık yıkama ile yıkayın.
  10. 1 μL Dylight 633 falloidini 50 μL PBS ile seyreltin.
  11. Tüpe 50 μL seyreltilmiş faloidin ekleyin ve numuneleri oda sıcaklığında 2 saat boyunca inkübe edin.
  12. Phalloidin seyrelticiyi bir pipettörle çıkarın ve ardından kalan falloidini 200 μL PBS ile üç 10 dakikalık yıkama ile yıkayın.
    NOT: Kapsamlı yıkamalar, arka planı ve spesifik olmayan bağlamayı azaltmak için kritik öneme sahiptir.
  13. Bir mikroskop slaydına DAPI içeren bir damla montaj ortamı yerleştirin ve bağırsakları ortama aktarın.
    NOT: Her bağırsağı cımbızla yavaşça açın ve kabarcık oluşturmaktan kaçının. Slayt başına yaklaşık 15 bağırsak vardır.
  14. Kabarcıklar oluşturmadan numunelerin üzerine yavaşça bir kapak camı yerleştirin.
    NOT: Lazer taramalı konfokal mikroskopla gözlemden önce floresan söndürmeyi engellemek için slayt karanlıkta 4 °C'de tutulmalıdır.
  15. Tüm örnekleri lazer taramalı konfokal mikroskopla görüntüleyin. Mavi ışığı kullanarak görüntüleri yakalayın ve dosyaları bir bilgisayara kaydedin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Şekil 1, bu protokoldeki tüm adımları göstermektedir: böcek yetiştiriciliği, virüs edinimi, bağırsağın eksizyonu, immünofloresan etiketleme ve slaytın yapılması.

Yetişkinlerden eksize edilen WBPH bağırsakları% 4 (m / v) paraformaldehit içinde sabitlendi,% 2 (v / v) Triton X-100 ile geçirgenleştirildi ve% 2 (v / v) Triton X-100 ile permeabilize edildi ve daha sonra Dylight 633 phalloidin10,18 ile inkübe edi...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

En iyi sonuçlar için, birkaç önemli nokta dikkate alınmalıdır. İlk olarak, toplam popülasyon arasında yüksek oranda virülifer böcek gereklidir. WBPH perileri ve yetişkinler tarafından SRBSDV için minimum AAP 5 dakika17 olmasına rağmen, böceklerin% 80'e varan bir kazanım verimliliği elde etmek için 2 gün boyunca taze SRBSDV ile enfekte olmuş pirinç bitkileriyle beslenmelerine izin verilmelidir. SRBSDV viryonları, midgutların18'inin% 80'inde tespit edilebildiğinden, bu protok...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı'ndan (31630058 X.W.'ye ve 31772134 W.L.'ye verilen hibelerle desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
% 3 Boğa serum albümini (BSA)CoolaberSL1331Seyreltik antikorlar
Kapak camıSolarbioYA0771-18 * 18mmSlayt yapımı için
Diseksiyon mikroskobuBeitjaXTL-7045B1Böcek diseksiyonu için
Lazer taramalı konfokal mikroskopZeissLSM880Floresan sinyalini gözlemleyin
Mikroskop slaytlarıSolarbioZBP-7105Slayt yapımı için
4'6-diamidino-2-fenilindol (DAPI) ile montaj ortamıAbcamAB104139Etiket hücresi necleus
Paraformaldehit,Sigma158127Doku fiksasyonu için
Phalloidin  InvitrogenA22284Midgut epitiellerinin etiket aktini
Triton X-100Amresco0290C484Doku geçirgenliği için
Cımbız (5-SA)AsOne6-7905-40Böcek diseksiyonu için
, , ,

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Nault, L. R. Arthropod transmission of plant viruses: a new synthesis. Annals of the Entomological Society of America. 90 (5), 521-541 (1997).
  2. Mitchell, P. L. Heteroptera as vectors of plant pathogens. Neotropical Entomology. 88 (3), 519-545 (2004).
  3. Gautam, S., et al. Virus-virus interactions in a plant host and in a hemipteran vector: Implications for vector fitness and virus epidemics. Virus Research. 286, 198069(2020).
  4. Ghanim, M. A review of the mechanisms and components that determine the transmission efficiency of Tomato yellow leaf curl virus (Geminiviridae; Begomovirus) by its whitefly vector. Virus Research. 186, 47-54 (2014).
  5. Hogenhout, S. A., et al. Insect vector interactions with persistently transmitted viruses. Annual Review of Phytopathology. 46, 327-359 (2008).
  6. Whitfield, A. E., Falk, B. W., Rotenberg, D. Insect vector-mediated transmission of plant viruses. Virology. 479, 278-289 (2015).
  7. Wu, N., Zhang, L., Ren, Y., Wang, X. Rice black-streaked dwarf virus: from multiparty interactions among plant-virus-vector to intermittent epidemics. Molecular Plant Pathology. 21, 1007-1019 (2020).
  8. Zhang, L., Wu, N., Ren, Y., Wang, X. Insights into insect vector transmission and epidemiology of plant-infecting fijiviruses. Frontiers in Microbiology. 12, 628262(2021).
  9. Liu, W., Hajano, J. U., Wang, X. New insights on the transmission mechanism of tenuiviruses by their vector insects. Current Opinion in Virology. 33, 13-17 (2018).
  10. Qin, F., et al. Invasion of midgut epithelial cells by a persistently transmitted virus is mediated by sugar transporter in its insect vector. PLOS Pathogens. 14, 1007201(2018).
  11. Coons, A. H., Creech, H. J., Jones, R. N., Berliner, E. The demonstration of pneumococcal antigen in tissues by the use of fluorescent antibody. Journal of Immunology. 45, 159-170 (1942).
  12. Barnard, G. The development of fluorescence immunoassays. Progress in Clinical and Biological Research. 285, 15-37 (1988).
  13. Wang, W., et al. The c-Jun N-terminal kinase pathway of a vector insect is activated by virus capsid protein and promotes viral replication. eLife. 6, 26591(2017).
  14. Huo, Y., et al. Insect tissue-specific vitellogenin facilitates transmission of plant virus. PLoS Pathogens. 14 (2), 1006909(2018).
  15. Zhang, Y., et al. TurboID-Based proximity labeling for in planta identification of protein-protein interaction networks. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (159), e60728(2020).
  16. Than, W., Qin, F. L., Liu, W. W., Wang, X. Analysis of Sogatella furcifera proteome that interact with P10 protein of southern rice black-streaked dwarf virus. Scientific Reports. 6, 32445(2016).
  17. Pu, L., et al. Transmission characteristics of Southern rice black-streaked dwarf virus by rice planthoppers. Crop Protection. 41, 71-76 (2012).
  18. Jia, D., Chen, H., Mao, Q., Liu, Q., Wei, T. Restriction of viral dissemination from the midgut determines incompetence of small brown planthopper as a vector of southern rice black-streaked dwarf virus. Virus Research. 167, 404-408 (2012).
  19. Zhang, X., Zhang, L., Liu, W., Li, L., Wang, X. Preparation and application of the antibodies of Sogatella furcifera VAMP7 and Vti1a proteins in expressed in Escherichia coli. Plant Protection. 47, 55-60 (2021).
  20. Ammar, E. D. Internal morphology and ultrastructure of leafhoppers and planthoppers. Nault, L. R., Rodriquez, J. G. , Wiley. New York. 1(1985).
  21. Tsai, J., Perrier, J. L. Morphology of the digestive and reproductive systems of Dalbulus maidis and Graminella nigrifrons (Homoptera: Cicadellidae). Fla Entomology. 79, 563(1996).
  22. Wei, T., Li, Y. Rice reoviruses in insect vectors. Annual Review of Phytopathology. 54, 99-120 (2016).
  23. Kruse, A., et al. Combining'omics and microscopy to visualize interactions between the Asian citrus psyllid vector and the Huanglongbing pathogen Candidatus Liberibacter asiaticus in the insect gut. PLoS ONE. 12, 0179531(2017).
  24. Koga, R., Tsuchida, T., Fukatsu, T. Quenching autofluorescence of insect tissues for in situ detection of endosymbionts. Applied Entomology and Zoology. 44, 281-291 (2009).
  25. King, R. S., Newmark, P. A. In situ hybridization protocol for enhanced detection of gene expression in the planarian Schmidtea mediterranea. BMC Developmental Biology. 13, 8(2013).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Bitki Vir s ProteinleriVir s B cek Etkile imiKonfokal MikroskopiOrta Ba rsak Epitel H creleriVir s letimiProtein KolokalizasyonuBa rsak Diseksiyonu

İlgili makaleler