Yöntem makalesi

Farelerde Kalsiyum Geçici Araştırma için Objektif Lens ile Önceden Sabitlenmiş Bir Taban Kaplaması ve Miniskop Kullanımı

DOI:

10.3791/62611

⸱

5 Haziran 2021

 ,  ,  , 
1Department of Veterinary Medicine, School of Veterinary Medicine, National Taiwan University

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kürleme sırasında diş çimentosunun büzülmesi, taban plakasının yerini alır. Bu protokol, taban plakasını çimentolamak için yer bırakan diş çimentosunun ilk temelini oluşturarak sorunu en aza indirir. Haftalar sonra, taban plakası bu iskele üzerinde çok az yeni çimento kullanılarak yerinde çimentolanabilir, böylece büzülme azalır.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sinirbilimciler, serbestçe davranan hayvanlarda nöronal aktiviteyi gözlemlemek için minyatür mikroskoplar (miniskoplar) kullanırlar. Kaliforniya Üniversitesi, Los Angeles (UCLA) Miniscope ekibi, araştırmacıların miniskopları kendileri oluşturmaları için açık kaynaklar sağlar. V3 UCLA Miniscope, şu anda kullanımda olan en popüler açık kaynaklı miniskoplardan biridir. Genetiği değiştirilmiş nöronlardan yayılan floresan geçicilerinin, yüzeysel korteks üzerine implante edilmiş objektif bir lens (tek lensli bir sistem) aracılığıyla veya derin beyin bölgelerinde, derin beyne implante edilmiş bir röle lensi ve aktarılan görüntüyü gözlemlemek için miniskopta önceden sabitlenmiş objektif bir lensin (iki lensli bir sistem) bir kombinasyonu yoluyla görüntülenmesine izin verir. En uygun koşullar altında bile (nöronlar floresan göstergelerini ifade ettiğinde ve röle lensi düzgün bir şekilde implante edildiğinde), taban plakası arasındaki diş çimentosunun hacimsel bir değişimi ve çimento kürlemesi üzerine kafatasına tutturulması, objektif ve röle lensleri arasındaki değişen bir mesafe ile yanlış hizalamalara neden olabilir ve bu da düşük görüntü kalitesine neden olabilir. Taban plakası, miniskobun kafatasına monte edilmesine yardımcı olan ve objektif ile röle lensleri arasındaki çalışma mesafesini sabitleyen bir plakadır. Böylece, taban plakası etrafındaki diş çimentosunun hacmindeki değişiklikler, lensler arasındaki mesafeyi değiştirir. Mevcut protokol, diş çimentosundaki hacim değişikliklerinden kaynaklanan yanlış hizalama problemini en aza indirmeyi amaçlamaktadır. Protokol, röle lens implantasyonu sırasında diş çimentosunun ilk temelini oluşturarak yanlış hizalamayı azaltır. İmplantasyondan sonraki iyileşme süresi, diş çimentosunun temelinin taban plakasını tamamen kürlemesi için yeterlidir, bu nedenle taban plakası mümkün olduğunca az yeni çimento kullanılarak bu iskele üzerine çimentolanabilir. Bu makalede, miniskopa tutturulmuş objektif bir lens ile nöronal aktivitenin görüntülenmesini sağlamak için farelerde baz kaplama stratejilerini açıklayacağız.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Floresan aktivite raporlayıcıları, nöronal aktivitenin görüntülenmesi için idealdir, çünkü hassastırlar ve geniş dinamik aralıklara sahiptirler 1,2,3. Bu nedenle, giderek artan sayıda deney, nöronal aktiviteyi doğrudan gözlemlemek için floresan mikroskobu kullanmaktadır 1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15 <....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmada yapılan tüm prosedürler Ulusal Tayvan Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi tarafından onaylanmıştır (Onay No.: NTU-109-EL-00029 ve NTU-108-EL-00158).

1. Diş çimentosunun hacim değişiminin değerlendirilmesi

NOT: Diş çimentosu hacmindeki değişiklikler, kürleme işlemi sırasında meydana gelir. İmplantasyon ve baz kaplamadan önce diş çimentosunun hacim değişikliklerini test edin. Araştırmacılar, herhangi bir diş çimentosu markasını test edebilir ve taban plakasını çimentolamak için en düşük hacim değişikliğine sahip markayı kullanabilirler. Bir örnek

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dental çimento hacim değişiminin değerlendirilmesi
Kürleme işlemi sırasında diş çimentosunun hacmi değiştiğinden, GRIN lensin çalışma mesafesinin yaklaşık 50 ila 350 μm4,8 olduğu göz önüne alındığında, görüntüleme kalitesini önemli ölçüde etkileyebilir. Bu nedenle, bu olguda, implantasyon ve baz kaplama prosedüründen önce ticari olarak temin edilebilen iki diş çimentosu, Tempron ve Tokuso test edilmiştir (Şekil 5).......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu rapor, iki lensli UCLA Miniskop sistemini kullanan araştırmacılar için ayrıntılı bir deneysel protokolü açıklamaktadır. Protokolümüzde tasarlanan araçlar, in vivo kalsiyum görüntülemeyi denemek isteyen herhangi bir laboratuvar için nispeten uygundur. Viral enjeksiyon, lens implantasyonu, kukla baz kaplama ve baz kaplama gibi bazı protokoller, kalsiyum görüntülemenin başarı oranını artırmak için miniskop sisteminin diğer versiyonları için de kullanılabilir. Viral enjeksiyon ile ilgili genel problemler ve minis.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu endüstri destekli bir çalışma değildir. Yazarlar finansal çıkar çatışması olmadığını bildirmektedir.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma Tayvan Bilim ve Teknoloji Bakanlığı (108-2320-B-002 -074, 109-2320-B-002-023-MY2) tarafından desteklenmiştir.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
0,7 mm matkap ucu #19008-07Güzel Bilim Aletleri; Ameliyatiçin
0.1– 10 & mu; l pipet uçları104-Q; QSPFisher Bilimsel; Dişçimentosu 20
G IV kateter testi#SR-OX2032CATerumo Corporation; Tokyo, Japonyaameliyat için
27 G iğneAGANI, AN*2713RTerumo Corporation; Tokyo, Japonyaameliyat için
AAV9-syn-jGCaMP7s-WPRE#104487-AAV9; 1.5*10^13Addgene viral hazırlığı; MA, ABDviral enjeksiyon için
Atropin sülfatAstart; Hsinchu, Tayvanameliyat/kukla taban kaplaması/taban kaplaması için
Taban plakasıV3http://miniscope.orgkukla taban kaplaması/taban kaplaması
için BLU TACK# 30840350Bostik; Chelsea, Massachusetts, ABDYeniden kullanılabilir yapışkan kil; ameliyat/kukla taban kaplaması/taban kaplaması için
Bone Rongeur Friedman13 cmDiener; Tuttlingen, Almanya,
BuprenorfinINDIVIOR'un baz kaplaması için; Ameliyat için İngiltere:
CarprofenRimadylZoetis; Exton, PAanaljezi
CeftazidimeTayvan Biyoteknoloji; Tayvanenfeksiyonu önledi
UCLA Miniscope için Veri Toplama PCB'sitaban kaplaması içinhttps://www.labmaker.org/collections/neuroscience/products/data-aquistion-system-daq'da
Diş çimentosu setiTempronGC Corp; Tokyo, Japonyadiş çimentosunu test etmek için
Diş çimentosu setiTokuso CurefastTokuyama Dental Corp.; Tokyo, Japonyadiş çimentosu / cerrahisi / kukla taban kaplaması / taban kaplaması testi için
Fare ve Sıçan Adaptörleri ile Çift Laboratuvar Standardı# 51673Stoelting Co; Illinois, ABDameliyat/kukla taban kaplama/taban kaplama
için Duratear merhemAlcon; Cenevre, İsviçreameliyat/kukla taban kaplama/taban kaplama
IbuprofenYungShin için; Tayvananaljezi
İzofluranPanyon & BF Biyoteknoloji A.Ş.; Taoyuan, Tayvanameliyat/kukla taban kaplama/taban kaplama
için InscopixnVista SystemInscopix; V3 UCLA Miniscope
KetamineCA; Ötenazi için NY, NY
Ameliyat içinnormal salin
Mikro bulldog kelepçeleri# 12.102.04Dimedo; Lens implantasyonu için Tuttlingen, Almanya
Mikrolitre Şırıngalar, 2.0 ve mikro; L, 25 ölçer# 88400Hamilton; Bonaduz, İsviçreviral enjeksiyon
kalıplama silikon kauçukZA22 ThixoZhermack için; Badia Polesine, İtalyasahte taban kaplaması için
Objektif Gradyan indeksi (GRIN) lens# 64519Edmund Optics; NJ, ABD,sahte taban kaplama/taban kaplama Parafilm için
#PM996Bemis; Neenah, ABDkukla taban kaplaması için
TaşınabilirEmme#DF-750Doktorun Arkadaşı Medical Instrument Co., Inc., Taichung, Tayvanameliyat için
Röle GRIN lens# 1050-002177Inscopix; Palo Alto, CA, ABDsahte taban kaplaması/taban kaplaması için
Paslanmaz çelik ankraj vidaları1,00 mm çap, ameliyat için toplam uzunluk 3,00 mm
Stereo mikroskop#SL720Sage Vison; Yeni Taipei Şehri, Tayvanameliyat/kukla taban kaplama/taban kaplama
için Stereotaksik aparat51673Çalma; IL, ABDcerrahi / kukla taban kaplama / taban
kaplama UV Kür Yapıştırıcı# 3321Loctite; Dü sseldorf, Almanyadiş çimentosu testi için
V3 UCLA Miniscopehttps://www.labmaker.org/products/miniscope-complete-set-of-components'daameliyat/kukla taban kaplaması/taban kaplaması için
XylazineX1126Sigma-Aldrich; St. Louis, ötenaziiçin
Ksilokain pompa spreyi%AstraZeneca; Sö Dertä lje, ameliyatiçin
ABD için Singapur , satın alındı Pfizer ile karşılaştırma için Palo Alto, #satın alındıMO 10 İsveç

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Tian, L., Hires, S. A., Looger, L. L. Imaging neuronal activity with genetically encoded calcium indicators. Cold Spring Harbor Protocols. 2012 (6), 647-656 (2012).
  2. Grienberger, C., Konnerth, A. Imaging calcium in neurons. Neuron. 73 (5), 862-885 (2012).
  3. Dana, H., et a....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Miniskop G r nt lemeKalsiyum Ge i leriFarelerin Kafatas na Taban Plakas Yerle tirilmesiR le Merce i mplantasyonuDental SimanFloresan SinyallerStereotaksik CerrahiN ral Aktivite G r nt lemeViral Vekt r Enjeksiyonu

İlgili makaleler