$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Miyokard enfarktüsü (MI) dünya çapında ağır bir hastalıktır. Kardiyovasküler hastalıklar (CVD' ler) dünya çapında önde gelen ölüm nedenidir ve 20191,2'de yaklaşık 18,6 milyon ölüme neden olmaktadır. CvD'lerin toplam mortalitesi son yarım yüzyıl içinde azaldı. Bununla birlikte, bu eğilim bazı gelişmemiş ülkelerde yavaşlatıldı ve hatta tersine çevrildi1, bu da CVD'lerin daha etkili tedavilerini gerektiriyor. CVD'nin ölümcül tezahürlerinden biri olarak MI, Amerika Birleşik Devletleri'ndeki CVD'lere atfedilen tüm ölümlerin yaklaşık yarısını oluşturmaktadır2. İskemi sırasında, koroner arterlerin bloke edilmesi ve hem besin hem de oksijenin sınırlı tedariki ile miyokard ciddi metabolik değişikliklere uğrar, kardiyomiyositlerin (CM' ler) sistolik işlevini bozar ve CM ölümüne yol açar3. Kalp yaralanmasını onarmak ve yaralı kalbin işlevini geri kazandırmak için kardiyovasküler araştırmalarda çok sayıda yaklaşım araştırıldı4. Doğrudan kardiyak yeniden programlama, hasarlı kalbi onarmak ve işlevini geri kazandırmak için umut verici bir strateji olarak ortaya çıkmıştır5,6. Mef2c, Gata4, Tbx5 (MGT) tanıtılarak fibroblastlar iCM'lere in vitro ve in vivo olarak yeniden programlanabilir ve bu iCM'ler yara bölgesini azaltabilir ve kalp fonksiyonunu iyileştirebilir7,8.
Kardiyak yeniden programlama MI tedavisi için umut verici bir strateji olsa da, bir dizi zorluk devam etmektedir. İlk olarak, yeniden programlama verimliliği, saflığı ve kalitesi her zaman beklendiği kadar yüksek değildir. MGT indüksiyonu, in vitro7'deki iCM'lere yeniden programlanacak toplam CF'lerin sadece% 8.4'ünü (cTnT+) veya% 24.7'sini (αMHC-GFP +) veya uygulamasını sınırlayan% 35'e kadar in vivo8 elde edebilir. Hand29 veya Akt1/PKB10 gibi sistemde daha fazla faktör indüklenmiş olsa bile, yeniden programlama verimliliği klinik bir ortamda kullanılmak üzere hala tatmin edici değildir. Bu nedenle, bu alanda yeniden programlama verimliliğini artırmaya odaklanan daha fazla çalışmaya ihtiyaç vardır. İkincisi, iCM'lerin elektrik bütünlüğü ve kasılma özellikleri kalp fonksiyonunun verimli bir şekilde iyileştirilmesi için önemlidir, ancak bunların değerlendirilmesi zordur. Şu anda, bazı önemli CD genlerinin ekspresyonunun akış sitometrisi, immünositokimya ve qPCR dahil olmak üzere alanda yaygın olarak kullanılan değerlendirme yöntemleri, iCM'lerin ve CD'lerin benzerliğine odaklanmıştır, ancak iCM'lerin fonksiyonel özellikleriyle doğrudan ilişkili değildir. Ayrıca, bu yöntemler nispeten karmaşık prosedürlere sahiptir ve zaman alıcıdır. Yeniden programlama çalışmaları genellikle iCM'lerin olgunlaşmasını teşvik eden potansiyel yeniden programlama faktörlerinin taranması içerir11, kardiyak yeniden programlama iCMs işlevine dayalı hızlı ve kullanışlı bir yöntem gerektirir.
CD'ler, her büzülme döngüsü sırasında sitomembran üzerindeki voltaj kapılı kalsiyum iyon kanallarını açar ve bu da miyofilament kasılmasına katılmak için hücreler arası sıvıdan sitoplazmaya geçici bir kalsiyum iyonu (Ca2+) akınına yol açar. Böyle bir Ca2+ akını ve dış döngü miyokard kasılmasının temel özelliğidir ve CMs12'nin normal işlevini oluşturur. Bu nedenle, Ca2+ akınını algılayan bir yöntem, iCM'ler de dahil olmak üzere CD'lerin ve CM benzeri hücrelerin işlevini ölçmenin potansiyel bir yolu olabilir. Ayrıca, iCM'ler için, böyle bir yöntem yeniden programlama verimliliğini değerlendirmek için başka bir yol sağlar.
Genetik olarak kodlanmış kalsiyum göstergeleri (GECI'ler) geliştirilmiş ve başta eylem potansiyelleri olmak üzere hücre aktivitelerini belirtmek için yaygın olarak kullanılmaktadır. Genellikle, GECI'ler calmodulin gibi bir Ca2+ bağlama etki alanından ve GFP gibi floresan bir etki alanından oluşur ve GCaMP3 yüksek benzeşim ve floresan yoğunluğuna sahip bir etki alanıdır. GCaMP3'ün floresan etki alanı, lokal kalsiyum konsantrasyonu değiştiğinde etkinleştirilecektir13. Bu makalede, Myh6+ hücrelerinde özellikle bir GCaMP3 muhabirini ifade eden bir fare suşu açıklanmıştır. MGT'yi bu türün yenidoğanlarından izole edilmiş NCF'lere tanıtarak, yeniden programlama, başarılı bir şekilde yeniden programlanan iCM'lerin sergileyeceği floresan ile izlenebilir. Böyle bir fare zorlanması ve yöntemi, kardiyak yeniden programlamayı araştırmak için değerli bir platform sağlayacaktır.