Yöntem makalesi

makrofaj Farklılaşması ve Polarizasyonu, İnsan Monosit Benzeri THP-1 Lösemi Hücre Hattı Kullanarak M2 Benzeri Bir Fenotipe Dönüştür

DOI:

10.3791/62652

⸱

2 Ağustos 2021

 ,  ,  ,  , 
1Price Institute of Surgical Research, Department of Surgery, University of Louisville

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

M2 benzeri tümör ilişkili makrofajlar (TAM) tümör ilerlemesi ve kanserde zayıf prognoz ile ilişkilidir. Bu protokol, THP-1 monosit benzeri hücreleri 14 gün içinde M2 benzeri makrofajlara yeniden ayırt etmek ve polarize etmek için ayrıntılı bir kılavuz görevi görür. Bu model, TAM'ın tümör mikroçevriciliği içindeki antienflamatuar etkilerini araştırmak için temel oluşturur.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tümörle ilişkili makrofajlar (TAM) dış uyaranlara göre ekspresyonlarını ve sitokin profillerini değiştirebilir. Bu olağanüstü plastisite, TAM'ın tümör mikroçevriciliği içinde devam eden değişikliklere uyum sağlamasını sağlar. Makrofajlar öncelikle pro-enflamatuar (M1 benzeri) veya antienflamatuar (M2 benzeri) özelliklere sahip olabilir ve bu iki ana durum arasında sürekli geçiş yapabilir. Tümör ortamındaki M2 benzeri makrofajlar, çeşitli kanser türlerinde kanser ilerlemesi ve zayıf prognoz ile ilişkilidir. THP-1 hücrelerinin farklılaşmasını ve polarizasyonunu teşvik etmek için hücresel ve hücreler arası mekanizmaları ve TAM'ın tümörlerin mikroçevrasyonu içindeki etkilerini araştırmak için birçok farklı yöntem kullanılmaktadır. Şu anda, THP-1 hücre hattı kullanılarak M2 benzeri makrofaj polarizasyonu için belirlenmiş bir model yoktur ve bazı in vitro uyaranlara bağlı makrofajların ekspresyon ve sitokin profillerinin sonuçları çalışmalar arasında değişmektedir. Bu protokol, THP-1 monosit benzeri hücreleri M0 makrofajlarına ayırt etmek ve hücreleri 14 gün içinde M2 benzeri bir fenotipe daha da polarize etmek için ayrıntılı rehberlik görevi görür. Işık mikroskopisi kullanarak THP-1 monosit benzeri hücrelerin, farklılaştırılmış makrofajların ve polarize M2 benzeri makrofajların morfolojik değişimlerini gösteriyoruz. Bu model, TAM'ın antienflamatuar etkilerini ve tümör mikroçevresinin diğer hücre popülasyonlarıyla etkileşimlerini araştıran hücre hattı modellerinin temelidir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tümör ilişkili makrofajlar (TAM) ve kronik inflamasyondaki rolleri, kanserin başlangıcı ve tümör gelişimi son araştırmalarda önemli hedeflerdir1,2. Gelişmekte olan tümörün doku mikroçevresine alınan periferik kan monositleri makrofajlara farklılık gösteren ve makrofajların iki ana alt tipine polarize edilebilen3. Klasik olarak aktive edilen makrofaj, öncelikle pro-enflamatuar M1 benzeri fenotipi temsil eder ve alternatif olarak aktive edilen M2 benzeri alt tip ağırlıklı olarak antienflamatuar özellikler gösterir4. Makrofajlar, hücresel metabolizmalarına bağlı olarak bu iki ana fenotip arasında dinamik olarak geçiş yapabilir, ara alt tipler hem enflamatuar hem de antienflamatuar özelliklere sahiptir5. TAM, her iki fenotipin heterojen popülasyonunu temsil eder. Bununla birlikte, farklı kanser türlerinde tümör teşvik edici bir işlev ve zayıf prognoz, özellikle M2 benzeri makrofajlar6,7,8ile ilişkilidir.

Makrofajların fonksiyonel profilleri ve tümör mikroçevrİmİ içindeki diğer hücrelerle etkileşimleri, devam eden tümör gelişimi sırasında sürekli değişen bir ortamda yakalanması karmaşık ve zordur. Hücre hatları, tanımlanmış hücresel ve hücreler arası mekanizmaları gösterme sürecini kolaylaştırabilen, kültürde istikrarlı canlılığa sahip homojen bir hücre popülasyonu sağlayabilir. Monosit benzeri THP-1 hücre hattı, birincil insan monositleri9için meşru bir model sistemidir. Kendiliğinden ölümsüzleşen bu hücre hattı, akut monositik lösemi9,10olan bir yaşındaki bir bebeğin periferik kanından elde edilmiştir. THP-1 hücrelerinin farklılaşması ve polarizasyonu çeşitli çalışmalarla rapor edilmiş ve birden fazla farklı şekilde gerçekleştİrilmiştir11,12,13,14. Aktivasyon ve bu nedenle, makrofajların M1 benzeri bir fenotipe polarizasyonunu, interleukin 6 (IL-6) veya itaconate15,16gibi enflamatuar makrofajlar tarafından üretilen sitokinler yoluyla M2 benzeri bir fenotip teşvik eden telafi edici bir anti-enflamatuar ribaund mekanizması izler. Bu, hücre aktivasyonundan sonra aşırı çekim enflamatuar yanıtı zayıflamak için bir kesme mekanizması olarak hizmet edebilir17. Monositleri ve THP-1 monosit benzeri hücreleri anti-enflamatuar M2 benzeri bir fenotipe ayırma ve polarize etme sürecine, üstesinden gelinmesi gereken pro-enflamatuar uyaranlar da eşlik eder. Enflamatuar sitokin yanıtı mekanik stresten kaynaklanabilir18Hücreleri yeniden beslenmek için ortam değiştirmek gibi, veya phorbol 12-myristate 13-asetat (PMA) gibi THP-1 hücrelerini ayırt etmek için kimyasal bileşikler eklemek ve tümör nekroz faktörü α (TNFα), interlökin 1β (IL-1β) veya IL-619üretimine neden olmak. PMA'ya yanıt olarak bu değiştirilmiş sitokin ekspresyon profili, sonraki makrofaj polarizasyonunu etkileyebilir ve önleyebilir20. PMA tedavisinden önce bildirildiği gibi yeterli istirahat süreleri, bu enflamatuar yanıtların azalmasına izin verir ve hücre polarizasyonunu farklı bir M2 benzeri fenotip21'ekolaylaştırır.

Bu protokol, THP-1 monosit benzeri hücreleri 14 gün içinde makrofajların M2 benzeri bir fenotipine ayırt etmek ve polarize etmek için bir yöntem göstermektedir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

NOT: Bu iletişim kuralında açıklanan adımlara genel bakış Şekil 1'de gösterilmiştir. İnsan monosit benzeri lösemi hücre hattı THP-1 satın alındı. THP-1 hücre hattının kimliğini doğrulamak için kısa tandem tekrar analizi yapıldı. Tüm adımları steril koşullar altında gerçekleştirin. THP-1 monositik hücre hattı süspansiyonda büyür ve hücre kültürü yüzeylerine bağlanmaz. Bağlılık, monositlerin makrofaj benzeri hücrelere ayırt edilmesiyle, örneğin mekanik stres veya PMA ile spesifik tedavi yoluyla indüklenebilir.

1. THP-1 monosit benzeri hücrelerin kültleme ve bakımı

  1. 150 sn için bir zamanlayıcı ayarlayın. THP-1 hücre hattını(Malzeme Masası)içeren donmuş şişeyi sıvı azottan çıkarın ve temiz bir su banyosunda (37 °C) hemen çözün. Şişe su banyosuna konur konulmaz zamanlayıcıyı başlatın. Çözülme işlemi nedeniyle biriken basıncı serbest bırakmak için kapağı gevşetin, ancak kirlenmeyi önlemek için tüp açıklığın suya temas etmediğinden emin olun. Hücrelerin çözülmesi için en uygun zaman dilimi 120-150 s arasındadır. Şişenin içinde yaklaşık 4 mm büyüklüğünde bir buz parçası kalana kadar hücre süspansiyonunun çözülmesine devam edin; ardından, hemen bir sonraki adıma geçin.
  2. Hücre süspansiyonunun sıvı fazını 9 mL sıcak (37 °C) büyüme ortamı (Malzeme Tablosu) içeren 15 mL'lik birtüpe aktarın. Daha sonra, sıcak orta hücre süspansiyonunun 1 mL'lik kısmını THP-1 şişesine aktarın ve kalan buz çipini eritmek ve geride hücre kalmamasını sağlamak için şişeyi yıkamak için 15 mL'lik tüpe geri aktarın.
  3. Süspansiyonu 1000 μL pipetle yukarı ve aşağı pipetle yukarı ve aşağı borulayarak hafifçe karıştırın. Hücreleri canlılık için saymak için küçük bir örnek (yaklaşık 10 μL) çıkarın (dışlama için trippan mavisi kullanarak) döndürülürken. 200 x g'daki sıcak hücre süspansiyonu 37 °C'de 7 dakika boyunca aşağı çevirin.
  4. 5 x 105/mL hücre yoğunluğu elde etmek için süpernatant tamamen çıkarın ve belirli bir hacimde sıcak büyüme ortamı ile yeniden dirilin. Süspansiyonu hafifçe karıştırın ve 22 mL hacmi T-75 hücre kültürü şişelerine(Malzeme Masası) aktarın. Şişeleri % 5 karbondioksit (CO2)konsantrasyonu ile 37 °C'de bir inkübatörde dik olarak saklayın. Büyüme medyasını her 3-4 günde bir değiştirin.

2. THP-1 hücrelerinin tohumlanması ve M0 makrofajlarına farklılaştırılması

  1. İlgili hücre yoğunluğuna sahip büyüme ortamını içeren hücreyi 3 x 105/mL/well yoğunluğunda tohum hücrelerine 24 kuyu hücre kültürü plakalarınahazırlayın( Malzeme Tablosu ). Ortayı hafifçe karıştırın ve her biri 50 mL'lik bir tüpe konulan 26 mL'lik aliquots hazırlayın. Hücreleri ilgili bir tabağa tohumlamak için her 26 mL aliquot kullanın.
  2. Hücre içeren ortamın 1 mL'lik kısmını 24 kuyulu bir plakanın her kuyusuna aktarın. Aktarımlar arasında yukarı ve aşağı pipetleme yaparak ortamı hafifçe karıştırın.
  3. Bir PMA stok çözeltisi hazırlayın (100 μL Dimetil Sülfit (DMSO) = DMSO'da ~16 mM PMA çözeltisinde 1 mg PMA çözün) ve hücre tedavisinden hemen önce 10 ng/μL'lik son çalışma konsantrasyonuna kadar soğuk Fosfat Tamponlu Salin (PBS) ileseyreltin. Çözeltiyi buzda tutun ve hemen kullanın. Tekrar donma. Kuyu başına 100 ng PMA ekleyin. Her hücre plakasının 72 saat boyunca başka bir tedaviye yer vermeden inkübatörde oturmasına izin verin.
  4. 72 saat sonra, büyüme ortamını çıkarın ve 1 mL taze büyüme ortamı ile değiştirin. Pipet uçları ile kuyuların dibine dokunmayın. Hücrelerin inkübatörde 96 saat daha dinlenmesine izin verin.
  5. 96 saat sonra, 2.4 adımını (ortam değişikliği) tekrarlayın ve hücrelerin 24 saat daha dinlenmesine izin verin.
    NOT: M0 makrofajları artık denemeler için kullanılmaya hazırdır (Şekil 2). Hücrelerin diğer deneylerin bir parçası olarak ele alınmasından hemen önce, büyüme ortamı takviyeleri hücre tedavisi için eklenen reaktiflerle parazite neden olabileceğinden, yalnızca RPMI (Malzeme Tablosu)ile bir medya değişikliği düşünün. M2 benzeri makrofajlara ihtiyaç duyulması durumunda bölüm 3'e geçin.

3. M0 makrofajlarının M2 benzeri makrofajlara polarizasyonu

  1. IL-4 ve IL-13 stok çözeltisi hazırlayın (200 μL çekirdeksiz suda 20 μg IL-4 veya IL-13 çözün) ve hücre tedavisinden hemen önce PBS ile 2 ng/μL'lik son çalışma konsantrasyonuna seyreltin. Çözeltiyi buzda tutun ve hemen kullanın. Tekrar donma.
  2. Büyüme ortamını çıkarın ve 1 mL taze büyüme ortamı ile değiştirin. Kuyu başına 20 ng interleukin 4 (IL-4) ve 20 ng interleukin 13 (IL-13) ekleyin. Hücrelerin inkübatörde 48 saat dinlenmesine izin verin.
  3. 48 saat sonra, 3.2 adımlarını yineleyin. Hücrelerin inkübatörde 48 saat daha dinlenmesine izin verin.
  4. Büyüme ortamını çıkarın ve 1 mL taze büyüme ortamı ile değiştirin. Hücrelerin inkübatörde 48 saat dinlenmesine izin verin.
    NOT: M2 benzeri makrofajlar artık denemeler için kullanılmaya hazırdır (Şekil 2). Hücrelerin diğer deneylerin bir parçası olarak ele alınmasından hemen önce, büyüme ortamı takviyeleri parazite neden olabileceğinden, yalnızca RPMI (Malzeme Tablosu) ile bir medya değişikliği düşünün.

4. Akış sitometrisi için makrofajların derli ve hasat

NOT: Akış sitometrisi için polarize makrofajları plakalardan ayırmak ve toplamak için soğuk şoklama ve hücre kazıma birleştirmek için mekanik bir yöntem kullanın.

  1. Ilık hücre ortamını çıkarın ve buz gibi PBS (kalsiyum ve magnezyum olmadan) ve% 5 fetal sığır serumu (FBS), kuyu başına 1 mL karışımı ile değiştirin. Bundan hemen sonra, hücre plakasını 45 dakika boyunca buza yerleştirin. Sıcak hücre ortamı çıkarılmadan önce hücre plakasını buza yerleştirmeyin, çünkü bu hücre canlılığını önemli ölçüde azaltacaktır. Hücreleri sadece buz gibi PBS/%5 FBS karışımı ile soğuk şoka neden olduktan sonra buzda tutun.
  2. Buzda 45 dakika sonra, mini hücre sıyırıcıları (Malzeme Masası) kullanarak hücrelerikazıyın. Soğuk PBS/%5 FBS'deki ayrılmış makrofajları 15 mL'lik bir tüpe hafifçe aktarın. Hücreler lekelenene kadar tüpü her zaman buzda tutun.
    NOT: Boyama için yeterli hücre sayısına ulaşmak için sekiz hücre kuyularını bir kenara ayırın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

M2 benzeri makrofajlar karakterize edildi ve M2 polarizasyonu, Farklılaşma İşaretçileri Kümesi (CD) CD14, CD11b, CD80 (M1 benzeri işaretleyici) ve CD206 (M2 benzeri işaretleyici) için akış sitometrisi kullanılarak doğrulandı. Akış sitometrisi boyama işlemi üreticinin talimatlarına göre gerçekleştirildi. Makrofajlar PBS/%5 FBS ile yıkandı ve spesifik olmayan bağlanmayı önlemek için Fcφ-reseptör bloğu ile inkübe edildi. Hücreler daha sonra FITC konjuge fare anti-insan CD14 ve CD80 antikorları, PE-konjuge fare anti-insan CD...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

THP-1 monosit benzeri hücrelerin 14 gün içinde ayırt edilmesi ve polarize edilmesi ile ilgili bu protokol, adımlar arasında yeterli dinlenme sürelerine sahip hücrelerin uzun tedavi inkübasyonu nedeniyle M2 benzeri belirgin bir fenotip ile makrofaj elde etmek için bir yöntem sağlar.

Bazı adımlar bu protokol için kritik öneme sahiptir. THP-1 monositlerinin iki katına çıkması yaklaşık 26 saattir. Hücreler 9 x 105/mL hücre yoğunluğunda bölünebilir ve her bölme sırasında 3 x 105

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarlar potansiyel çıkar çatışması olmadığını beyan eder.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Louisville Üniversitesi Cerrahi Araştırma Fiyat Enstitüsü, John W. Price ve Barbara Thruston Atwood Price Trust tarafından finansal olarak desteklenmektedir. Fon kaynaklarının çalışmanın tasarımında ve yürütülmesinde ve verilerin toplanmasında, yönetiminde, analizinde ve yorumlanmasında hiçbir rolü yoktu.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
% 0.4 tripan mavisiVWR, Radnor, ABD152-5061
1.5 mL mikrosantrifüj tüpüUSA Scientific, Ocala, ABD1615-5510
10 mL serolojik pipetVWR, Radnor, USA  89130-898
1000 μ L TipOne pipet uçlarıUSA Scientific, Ocala, ABD1111-2821
15 mL  Santrifüj tüpüVWR, Radnor, ABD89039-664
20 & mu; L TipOne pipet uçlarıUSA Scientific, Ocala, USA1120-1810
200 μ L TipOne pipet uçlarıUSA Scientific, Ocala, USA1120-8810
25 mL serolojik pipetVWR, Radnor, USA  89130-900
5 mL serolojik pipetVWR, Radnor, ABD  89130-896
50 mL Santrifüj tüpüVWR, Radnor, ABD89039-662
Accutase solüsyonu 500 mLSigma, St. Louis, ABDA6964
Antibiyotik Antimikotik Solüsyon (100x), stabilizeSigma, St. Louis, ABDA5955-100 mL10.000 ünite penisilin, 10 mg streptomisin ve 25 μ mL başına g amfoterisin B, steril filtreli, BioReagent, hücre kültürü için uygun
Bağlayıcı CO2 İnkübatörüVWR, Radnor, ABDC170-ULE3
CytoOne T-75cm filtre kapaklı şişeABD Bilimsel, Ocala, ABDCC7682-4875
Dulbecco' s Fosfat Tamponlu Tuzlu Su (PBS)Sigma, St. Louis, ABDD8537-500 mLPBS kullanılmalıdır, çünkü her ikisi de makrofaj polarizasyonunu değiştirebilir
Eppendorf Santrifüj 5804 R (soğutmalı)Eppendorf, Enfield, ABD-Etil
alkol (%70)-
FACSCalibur akış sitometresiBD Biosciences, San Diego, ABD-Akış sitometresi CellQuest yazılımı ile çalışır (BD Biosciences)
Falcon 24 kuyulu plakaVWR, Radnor, ABD353504
Fetal Sığır Serumu (FBS)ATCC, Manassas, ABD30-2020
FITC Fare Anti-İnsan CD14BD Biosciences, San Diego, ABD555397Akış sitometrisi, miyeloid hücre belirteci (100 test)
FITC Fare Anti-İnsan CD80BD Pharmingen, San Diego, ABD557226Akış sitometrisi, M1 markörü (100 test)
FITC Mouse IgG1 & kappa; İzotip KontrolüBD Pharmingen, San Diego, ABD555748Akış sitometrisi, CD80 için izotip kontrolü (100 test)
FITC Mouse IgG2a, κ İzotip KontrolüBD Biosciences, San Diego, ABD553456Akış sitometrisi, CD14 için izotip kontrolü (100 test)
İnsan BD Fc BloğuBD Biosciences, San Diego, ABD564220Akış sitometrisi, Fc bloğu (0.25 mg)
İnsan interlökin 13 (IL-13)R& D, Minneapolis, ABDIL-771-10 μ g
İnsan interlökin 4 (IL-4)R & D, Minneapolis, ABDSRP3093-20 μ g
Labconco Biyogüvenlik Kabini (Delta Serisi 36212/36213)Labconco, Kansas City,
Çözeltisi, 200 mMATCC, Manassas, ABD30-2214
E. coli'den lipopolisakkarit (LPS) 0111:B4Sigma, St. Louis, ABDL2630-100 mg
Mini Hücreli SıyırıcılarBiotium, Fremont, ABD22003
Neubauer hemositometreFisher Scientific, Waltham, ABD02-671-5
Nikon Eclipse ters mikroskop TS100Nikon, Melville,ABD-Nükleaz
içermeyen suInvitrogen, Carlsbad, ABDAM9937
Olympus Işık Mikroskobu RH-2Mikroskop Central, Feasterville, ABD40888
P10 değişken pipet- GilsonVWR, Radnor, ABD76180-014
P1000 değişken pipet-GilsonVWR, Radnor, ABD76177-990
P200 değişken pipet- GilsonVWR, Radnor, ABD76177-988
PE Fare Anti-İnsan CD11bBD Biosciences, San Diego, ABD555388Akış sitometrisi, miyeloid hücre belirteci (100 test)
PE Fare IgG1, κ İzotip KontrolüBD Biosciences, San Diego, ABD555749Akış sitometrisi, CD11b için izotip kontrolü (100 test)
PE-Cy 5 Fare Anti-İnsan CD206BD Pharmingen, San Diego, ABD551136Akış sitometrisi, M2 markörü (100 test)
PE-Cy 5 Fare IgG1 ve kappa; İzotip KontrolüBD Pharmingen, San Diego, ABD555750Akış sitometrisi, CD206 için izotip kontrolü (100 test)
Phorbol 12-miristat 13-asetat (PMA)Sigma, St. Louis, ABDP8139
Powerpette Plus pipetleyiciVWR, Radnor, ABD75856-448
Hassas Su banyosu (model 183)Precision Scientific, Chicago, ABD66551
RPMI-1640 Orta ATCC, Manassas, ABD30-2001
THP-1 hücre hattı, Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonu (ATCC)ATCC, Manassas, ABDTIB-202
Kalsiyum klorür ve magnezyum klorür içermeyen ABD-L-Glutamin

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Zhang, R., et al. Cancer-associated fibroblasts enhance tumor-associated macrophages enrichment and suppress NK cells function in colorectal cancer. Cell Death and Disease. 10 (4), 273(2019).
  2. Wang, J., Li, D., Cang, H., Guo, B. Crosstalk between cancer and immune cells: Role of tumor-associated macrophages in the tumor microenvironment. Cancer Medicine. 8 (10), 4709-4721 (2019).
  3. Soncin, I., et al. The tumor microenvironment creates a niche for the self-renewal of tumor-promoting macrophages in colon adenoma. Nature Communications. 9 (1), 582(2018).
  4. Mosser, D. M., Edwards, J. P. Exploring the full spectrum of macrophage activation. Nature Reviews Immunology. 8 (12), 958-969 (2008).
  5. Mazzone, M., Menga, A., Castegna, A. Metabolism and TAM functions-it takes two to tango. Federation of European Biochemical Societies Journal. 285 (4), 700-716 (2018).
  6. Eum, H. H., et al. Tumor-promoting macrophages prevail in malignant ascites of advanced gastric cancer. Experimental and Molecular Medicine. 52 (12), 1976-1988 (2020).
  7. Qian, B. Z., Pollard, J. W. Macrophage diversity enhances tumor progression and metastasis. Cell. 141 (1), 39-51 (2010).
  8. Scheurlen, K. M., Billeter, A. T., O'Brien, S. J., Galandiuk, S. Metabolic dysfunction and early-onset colorectal cancer - how macrophages build the bridge. Cancer Medicine. 9 (18), 6679-6693 (2020).
  9. Bosshart, H., Heinzelmann, M. THP-1 cells as a model for human monocytes. Annals of Translational Medicine. 4 (21), 438(2016).
  10. The American Type Culture Collection (ATCC). , Available from: https://www.atcc.org/products/all/TIB-202.aspx#generalinformation (2021).
  11. Baxter, E. W., et al. Standardized protocols for differentiation of THP-1 cells to macrophages with distinct M(IFNgamma+LPS), M(IL-4), and M(IL-10) phenotypes. Journal of Immunological Methods. 478, 112721(2020).
  12. Genin, M., Clement, F., Fattaccioli, A., Raes, M., Michiels, C. M1 and M2 macrophages derived from THP-1 cells differentially modulate the response of cancer cells to etoposide. BMC Cancer. 15, 577(2015).
  13. Starr, T., Bauler, T. J., Malik-Kale, P., Steele-Mortimer, O. The phorbol 12-myristate-13-acetate differentiation protocol is critical to the interaction of THP-1 macrophages with Salmonella Typhimurium. PLoS One. 13 (3), 0193601(2018).
  14. Lund, M. E., To, J., O'Brien, B. A., Donnelly, S. The choice of phorbol 12-myristate 13-acetate differentiation protocol influences the response of THP-1 macrophages to a pro-inflammatory stimulus. Journal of Immunological Methods. 430, 64-70 (2016).
  15. Yin, Z., et al. IL-6/STAT3 pathway intermediates M1/M2 macrophage polarization during the development of hepatocellular carcinoma. Journal of Cellular Biochemistry. 119 (11), 9419-9432 (2018).
  16. O'Neill, L. A. J., Artyomov, M. N. Itaconate: the poster child of metabolic reprogramming in macrophage function. Nature Reviews Immunology. 19 (5), 273-281 (2019).
  17. Luig, M., et al. Inflammation-induced IL-6 functions as a natural brake on macrophages and limits gn. Journal of the American Society of Nephrology. 26 (7), 1597-1607 (2015).
  18. Maruyama, K., Nemoto, E., Yamada, S. Mechanical regulation of macrophage function - cyclic tensile force inhibits NLRP3 inflammasome-dependent IL-1beta secretion in murine macrophages. Inflammation and Regeneration. 39, 3(2019).
  19. Gatto, F., et al. PMA-Induced THP-1 Macrophage Differentiation is Not Impaired by Citrate-Coated Platinum Nanoparticles. Nanomaterials (Basel). 7 (10), (2017).
  20. Maess, M. B., Wittig, B., Cignarella, A., Lorkowski, S. Reduced PMA enhances the responsiveness of transfected THP-1 macrophages to polarizing stimuli. Journal of Immunological Methods. 402 (1-2), 76-81 (2014).
  21. Daigneault, M., Preston, J. A., Marriott, H. M., Whyte, M. K., Dockrell, D. H. The identification of markers of macrophage differentiation in PMA-stimulated THP-1 cells and monocyte-derived macrophages. PLoS One. 5 (1), 8668(2010).
  22. Raggi, F., et al. Regulation of human macrophage M1-M2 polarization balance by hypoxia and the triggering receptor expressed on myeloid cells-1. Frontiers in Immunology. 8, 11097(2017).
  23. Neutelings, T., Lambert, C. A., Nusgens, B. V., Colige, A. C. Effects of mild cold shock (25 degrees C) followed by warming up at 37 degrees C on the cellular stress response. PLoS One. 8 (7), 69687(2013).
  24. Kurashina, Y., et al. Enzyme-free release of adhered cells from standard culture dishes using intermittent ultrasonic traveling waves. Communications Biology. 2, 393(2019).
  25. Chen, S., So, E. C., Strome, S. E., Zhang, X. Impact of Detachment Methods on M2 Macrophage Phenotype and Function. Journal of Immunological Methods. 426, 56-61 (2015).
  26. Bailey, J. D., et al. Isolation and culture of murine bone marrow-derived macrophages for nitric oxide and redox biology. Nitric Oxide. 100-101, 17-29 (2020).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

M2 Benzeri MakrofajlarTHP 1 H cre HattMakrofaj PolarizasyonuT m rle li kili MakrofajlarAnti nflamatuar MakrofajlarAk SitometrisiCD14 Mark rCD206 Mark rnterl kin 4

İlgili makaleler