Bu protokol, farelerdeki hız yapma kusurlarını tanımlamak için tüm sinoatriyal düğüm dokusunun mikroelekrod dizi kaydını kullanarak içsel kardiyak ateşleme hızını ölçmek için yeni bir metodoloji tanımlamayı amaçlamaktadır. Farmakolojik ajanlar, içsel tempo yapımı üzerindeki etkilerini incelemek için bu yöntemde de tanıtılabilir.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Farelerde İçSel Kardiyak Pacemaking Kusurlarını Belirlemek için Sinoatrial Düğüm Ateşleme Hızının Mikroelekrod Dizisi Kaydı
Bu makalede
Özet
Özet
Sağ kulakçıkta bulunan sinoatriyal düğüm (SAN), kalbin kalp pili hücrelerini içerir ve bu bölgenin işlev bozukluğu taşikardi veya bradikardiye neden olabilir. Kardiyak tempo oluşturma kusurlarının güvenilir bir şekilde tanımlanması, oran açıklarını maskeleyebilen otonom sinir sisteminin etkisini büyük ölçüde önleyerek iç kalp atışlarının ölçülmesini gerektirir. İntrinsic kardiyak kalp pili fonksiyonunu analiz etmek için geleneksel yöntemler, in vivo kalp atış hızlarını ölçmek için ilaç kaynaklı otonomik blokajı, içsel kalp atışlarını ölçmek için izole kalp kayıtlarını ve sponyatrial kalp pili hücrelerinin sinoatrial şeridini veya tek hücreli patch-clamp kayıtlarını spontan eylem potansiyel ateşleme hızlarını ölçmek için içerir. Ancak, bu daha geleneksel teknikler teknik olarak zor ve gerçekleştirilmesi zor olabilir. Burada, farelerden tüm montajlı sinoatriyal düğüm preparatlarının mikroelekrod dizisi (MEA) kayıtlarını gerçekleştirerek içsel kardiyak ateşleme hızını ölçmek için yeni bir metodoloji sunuyoruz. MEA'lar, in vitro hücre dışı alan potansiyellerini kaydetmek için ızgara benzeri bir desende düzenlenmiş birden fazla mikroelekroddan oluşur. Burada açıklanan yöntem, içsel kalp atış hızlarını kaydetmek için önceki yaklaşımlardan nispeten daha hızlı, daha basit ve daha kesin olmanın ve aynı zamanda kolay farmakolojik sorgulamaya izin vermenin birleşik avantajına sahiptir.
Giriş
Kalp, beyinden kaynaklananlar gibi hem kardiyak hem de dışsal etkiler tarafından yönetilen karmaşık bir organdır. Sinoatrial düğüm (SAN), kalp pili hücrelerini (sinoatrial hücreler veya SA hücreleri olarak da adlandırılır) memeli kalp atışının başlatılmasından ve sürekliliğinden sorumlu olan kalp pili hücrelerini barındıran tanımlanmış bir bölgedir1,2. İç kalp atış hızı, kalp pili hücrelerinin diğer kardiyak veya nöro-humoral etkilerden etkilenmeden yönlendirdiği hızdır, ancak insanlarda ve elektrokardiyogramlar gibi canlı hayvanlarda geleneksel kalp atış hızı önlemleri kalp üzerindeki hem kalp pilini hem de s....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Burada açıklanan tüm deneysel prosedürler, Güney Metodist Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylandığı şekilde Ulusal Sağlık Enstitüleri'nin (NIH) yönergelerine uygun olarak gerçekleştirilmiştir.
1. Kayıt için multielekrod dizisinin (MEA) kaplanması
- 25 mM borat tamponu yapın.
- 0.953 g Na2B4O7·10 H2O'nu 80 mL damıtılmış suda çözün.
- pH'ı HCl ile 8,4'e ayarlayın ve ardından 100 mL'lik son hacme damıtılmış su ekleyin.
- %0,1 stok polietilenimin (PEI) çözeltisi yapın.
- %1 PEI çözeltisi yapmak için 4,9 mL d....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
Dokunun 15 dakika boyunca çanağa alışmasına izin verdikten sonra, 10 bir dakikalık izler kaydedilir. Şu anki protokolümüz bir saatten fazla bir süredir aktivite kaydediyor, ancak burada gösterilmeyen yayınlanmamış verilerde ≥4 saat boyunca kararlı atış düzenleri kaydettik. Deneysel bir hazırlık veri toplama için iyiyse, her kayıt kanalı belirli bir kanal için tekdüze şekilde tutarlı ve eşit aralıklı yinelenen dalga formları (yani sivri) sergilemelidir (Şekil 11D). Bu dalga şekilleri, içsel k.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Doku kırılgan olduğundan ve başarılı bir kayıt için sağlıklı doku gerektiğinden, SAN diseksiyon sürecini uygulamak ve mastering yapmak zorunludur. SAN diseksiyonu sırasında, dokunun uygun bölgesini elde etmek için doğru yönlendirme esastır. Bununla birlikte, diseksiyon işlemi sırasında kalbin orijinal yönelimi kolayca kaybolabilir, bu da bu çabayı zorlaştırır. Bu nedenle, doğru sol-sağ yönlendirmesini sağlamak için, atria görsel olarak denetlenmelidir. Tipik olarak, sağ atriyum daha şeffaf olma eğilimindedir, sol atriyum.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.
Teşekkürler
Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri, R01NS100954 ve R01NS099188 hibe numaraları tarafından finanse edildi.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 4-Aminopiridin | Sigma | A78403-25G | |
| 22 gauge şırınga iğnesi | Fisher Scientific | 14-826-5A | Diseksiyon için kullanılır |
| 23 gauge şırınga iğnesi | Fisher Scientific | 14-826-6C | Diseksiyon için kullanılır |
| 60mm Petri Kapları | Genesee Scientific | 32-105G | |
| 500mL Pyrex Şişe | Fisher Scientific | 06-414-1C | Çözeltileri depolamak için kullanılır |
| 1000 mL Pyrex Şişe | Fisher Scientific | 06-414-1D | Çözeltileri depolamak için kullanılır |
| Kemik Forseps | Güzel Bilim Araçları | 16060-11 | |
| Kalsiyum klorür dihidrat (CaCl2· 2H < alt > 2 < / alt >) | Sigma-Aldrich | C5080-500G | |
| Karbojen (% 95 O< alt >2 < / alt >,% 5 CO< alt > 2 < / alt >) | |||
| Castroviejo Makas, 4 " | Güzel Bilim Araçları | 15024-10 | |
| D - (+) - Glikoz | Sigma-Aldrich | G7021-1KG | |
| Veri Toplama Bilgisayarı | CPU: Intel Xeon veya Intel Core i7, Bellek: 8GB, HDD: 1TB, Grafik Kartı: NVIDIA veya Yerleşik, Ekran: 1920x1080 | ||
| Diseksiyon Mikroskobu | Jenco | ||
| Diseksiyon Pimleri | Güzel Bilim Araçları | 26002-20 | |
| Dumont #2 Laminektomi Forseps | Güzel Bilim Araçları | 11223-20 | |
| Dumont #55 Forseps | Güzel Bilimler Araçları | 11295-51 | |
| Ekstra İnce Graefe Forseps | Güzel Bilim Araçları | 11152-10 | |
| Cam Hazneli | Grainger | 49WF30 | Fare ötenazi için kullanılır |
| Arp Ankraj | Kiti Warner Instruments | SHD-22CL / 15 WI 64-0247 | |
| HCl | Fisher Chemicals | SA48-4 | pH dengeleme için kullanılır |
| Hemostat | Güzel Bilim Araçları | 13013-14 | |
| Heparin | Aurobindo Pharma Limited IDA, Pashamylaram | NDC 63739-953-25 | |
| HEPES | Sigma-Aldrich | H3375-250G | |
| Ters Mikroskop | Motic | AE2000 | |
| İzofluran | Patterson Veteriner | 07-893-1389 | |
| Laboratuvar Bandı | Fisher Scientific | 15-950 | |
| Diseksiyon Mikroskobu için Işık | Dolan-Jenner | MI150DG 660000391014 | |
| Magnezyum klorür (MgCl2) | Sigma-Aldrich | 208337-100G | |
| MED64 Kafa Amplifikatörü | MED64 | MED-A64HE1S | |
| MED64 Ana Amplifikatör | MED64 | MED-A64MD1A | |
| MED64 Perfüzyon Kapağı | MED64 | MED-KCAP01 | |
| MED64 Perfüzyon Boru Tutucu Kiti | MED64 | MED-KPK02 | |
| MED64 ThermoConnector | MED64 | MED-CP04 | |
| Mesh | Warner Instruments | 640246 | |
| Mikroelektrot dizisi (MEA) | Alpha Med Scientific | MED-R515A | |
| Mobius Yazılımı | WitWerx Inc. | MED64 | |
| NaOH | Fisher Chemicals | S320-500 | pH dengeleme için kullanılır |
| Normal Salin | Ultigiene | NDC 50989-885-17 | |
| Boya Fırçası | Fisher Scientific | NC1751733 | |
| Parafilm | Genesee Scientific | PM-996 | |
| Peristaltik Pompa | Gilson | F155009 | |
| Peristaltik Pompa Borusu | Fisher Scientific | 14-171-298 | 1/8 '' İç Çap |
| Polietilenimin | Sigma | P3143 | |
| Potasyum klorür (KCl) | Sigma-Aldrich | P9333-500G | |
| Potasyum fosfat monobazik (KH2< / sub>PO < sub>4< / sub>) | Sigma-Aldrich | P5655-500G | |
| Sodyum Bikarbonat | Sigma | S6297 | |
| Sodyum klorür (NaCl) | Fisher Scientific | S671-3 | |
| Sylgruard Elastomer Kiti | Dow Corning | 184 SIL ELAST KITI 0.5KG | |
| Sodyum Fosfat Monobazik | Sigma | S6566 | |
| Sodyum tetraborat | Sigma | S9640 | |
| Cerrahi Makas | Güzel Bilim Araçları | 14074-09 | |
| Transfer Pipetleri (3 mL dereceli) | Samco Scientific | 225 |
Kaynaklar
- Marionneau, C., et al. Specific pattern of ionic channel gene expression associated with pacemaker activity in the mouse heart. Journal of Physiology. 562 (1), 223-234 (2005).
- Josea, A. D., Collison, D. The normal ran....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
