Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

Hidrofilik Etkileşim ile Glikoproteinlerin N-glikan Profili, Floresan ve Kütle Spektrometrik Tespiti ile Sıvı Kromatografisi

1.3K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/62751

⸱

25 Eylül 2021

 , 
1Department of Biomedical Engineering, Karabuk University, 2Department of Chemistry, Hacettepe University

Bu makalede

Özet

Glikoproteinlerin N-glikan profili, yeni biyobelirteçleri keşfetmek ve hücresel olaylardaki glikan fonksiyonlarını anlamak için gereklidir. Ek olarak, protein biyofarmasötiklerinin N-glikan analizi insan kullanımı için çok önemlidir. Bu güncel makalede, HILIC-FLD-MS/MS tekniği kullanılarak N-glikan yapılarının tanımlanması ve miktarının belirlenmesi için yüksek verimli bir strateji sunulmuştur.

Özet

Glikozilasyon, proteinlerde bulunan hayati bir modifikasyondur. Glikoproteinlerin N-glikan profili, yeni biyobelirteç adaylarını tespit etmek ve hastalıklardaki glikan değişikliklerini belirlemek için gereklidir. Ticari olarak temin edilebilen biyofarmasötik proteinlerin çoğu glikoproteinlerdir. Bu ilaçların etkinliği glikozilasyon modellerinden etkilenir. Bu nedenle, N-glikanlar için derinlemesine bir karakterizasyon yöntemi gereklidir. Burada, floresan algılama ve tandem kütle spektrometresi (HILIC-FLD-MS/MS) ile donatılmış hidrofilik etkileşim sıvı kromatografisi kullanarak N-glikanların kalitatif ve kantitatif analizi için kapsamlı bir yaklaşım sunuyoruz. N-glikanlar, glikoproteinlerden basit bir yöntemle salındı ve stratejide bir prokainamid florofor etiketi ile etiketlendi. Daha sonra, prokainamid etiketli N-glikanlar bir HILIC-FLD-MS/MS tekniği ile analiz edildi. Bu yaklaşımda, N-glikan yapıları tandem kütle spektrometrik analizi ile doğrulanırken, kantitatif analiz için floresan tespiti kullanılmıştır. Çalışmada, tespit edilen N-glikan piklerinin veri analizi için bir uygulama açıklanmaktadır. Bu protokol, çeşitli türlerden ekstrakte edilen herhangi bir glikoproteine uygulanabilir.

Giriş

Glikozilasyon, proteinlerdegözlenen hayati bir translasyon sonrası modifikasyondur 1. Çoklu enzimatik süreçler, hücresel organizmalarda glikozilasyon modifikasyonunu düzenler. Glikanlar bu enzimatik işlemlerle proteinlere bağlanır ve bu modifikasyona tabi tutulan proteinlere glikoproteinler1 denir. Proteinlerde yaygın olarak iki glikozilasyon türü gözlenir. O-glikosilasyon, O-glikanların serin veya treonin amino asit kalıntılarının yan zincirine bağlanmasıdır. N-glikosilasyon, N-glikanların bir proteindeki asparagin amino asit kalıntısının yan zincirine bağlanmasıdır.

Proteinlerin yapısı, stabilitesi ve katlanması glikan eklerindenetkilenir 2. Glikozilasyon işlemi, proteinlerin işlevlerini önemli ölçüde etkiler ve glikoproteinler, organizmalardaki birçok hücresel işlevi düzenler 3,4. Örneğin, ağır glikosile edilmiş proteinler, glikoproteinlerini proteolitik bozulmadankorur 5. Başka bir örnek, Tg taşınmasını ve hormon sentezini düzenleyen tiroid bezi proteinlerinin glikanlarıdır 6,7. Hücresel olaylardaki rollerini açıklamak için, glikoproteinlerin derinlemesine bir karakterizasyonu gereklidir8.

Glikoproteinlerin N-glikan profilleri hastalık durumlarında değişir 9,10,11,12. Önemli glikoproteinlerden veya vücut sıvılarından türetilen N-glikanların profillenmesi, yeni biyobelirteçleri keşfetmek ve hastalık vakalarındaki enzimatik aktivite değişikliklerini anlamak için gereklidir. Öte yandan, çoğu protein biyofarmasötiki glikoproteindir ve glikan profilleri ilaç etkinliğini etkiler13. Bu nedenle, insan kullanımı için uygun protein biyofarmasötiklerinin geliştirilmesinde kabul edilebilir bir N-glikan profilleme yöntemi gerçekleştirilmelidir14.

Glisimik, glikosile edilmiş moleküllerin15,16 glikan yapılarını tanımlamak ve ölçmek için kullanılan gelişmekte olan bir disiplindir. NMR17 ve MS18 dahil olmak üzere glikosile edilmiş türlerin glikanlarının profilini çıkarmak için birçok yöntem kullanılmıştır. Floresan Algılamalı Hidrofilik Etkileşim Sıvı Kromatografisi (HPLC-HILIC-FLD), glikoproteinlerden19 türetilen N-glikanların profillenmesi için altın standart yöntemdir. Bu strateji kütle spektrometrik algılama ile birleştirildiğinde, N-glikan yapılarının tanımlanması daha kolay ve daha güvenilir olabilir. Kütle spektrometresi ile N-glikan analizinde kullanılan çoğu floresan etiketi düşük iyonlaşma verimliliğine sahiptir. Buna karşılık, prokainamid, N-glikan yapılarının20,21 verimli tandem kütle spektrumlarını elde etmek için kullanılan N-glikanların iyonizasyon verimlerini arttırır. Bu stratejiden, çekirdek fukosile22 (proc-HexNAc1Fuc1) ve ikiye bölünen tipler23 (proc-Hex1HexNAc3, proc-Hex1HexNAc3Fuc1) gibi N-glikanların yapısal tanımlanması için tandem kütle spektrometresi ile spesifik fragmanlar elde edilebilir.

Bu çalışma, HILIC-FLD-MS/MS ile glikoproteinlerin N-glikan profillemesi için basit bir protokol göstermektedir. Sunulan yöntem dört adım içerir: (1) glikoproteinlerden N-glikanların salınması, (2) N-glikanların bir prokainamid etiketi ile etiketlenmesi, (3) N-glikanlar etiketli prokainamidin saflaştırılması ve (4) veri analizi.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

NOT: Kullanılan insan plazması ticari olarak temin edilebilir (Malzeme Tablosu). İnsanlardan elde edilen başka biyolojik örnekler kullanılmadı.

1. Glikan salınımı

  1. (Gliko-) proteinlerin denatürasyonu
    1. DeiyonizeH2O'da10 μg·μL-1 konsantrasyonunda glikoprotein standartlarını (örneğin, IgG, bir monoklonal antikor) hazırlayın. İnsan plazması için kullanılan konsantrasyon 70 μg·μL-1'dir.
      NOT: Numuneler, tüm katı proteinler çözülene kadar vortekslenmelidir. Plazma örneklerinin hazırlanması için insan plazması (liyofilize) kullanıldı.
    2. 20 μL glikoprotein örneği (200 μg) ve liyofilize insan plazması (1.4 mg) alın.
    3. 40 μL %2 SDS (sodyum dodesil sülfat) (a/h) ekleyin.
    4. (Gliko-) proteinleri denatüre etmek için numuneleri 60 °C'de 10 dakika inkübe edin.
      NOT: Numuneler, inkübasyon sırasında bir termomikser ile 500 rpm'de karıştırılabilir. Alternatif olarak çalkalanan bir su banyosu da kullanılabilir.
  2. Glikan salınımı
    1. Adım 1.1.4'teki numunelere 20 μL %4 Igepal-CA630 ekleyin.
    2. 20 μL 5x PBS (fosfat tampon salin) ekleyin.
    3. Deiyonize suda 1 U·μL-1 konsantrasyonunda PNGase F enzimini hazırlayın.
    4. Glikoprotein standartları için 1 U enzim ve insan plazma örnekleri için 2 U enzim ekleyin.
    5. Numuneleri 37 °C'de 16 saat inkübe edin.
  3. Prokainamid etiketleme
    1. Prokainamid hidroklorik asit (DMSO/AA (dimetil sülfoksit /buzlu asetik asit) 7/3, v/v) içinde 110 mg·mL-1 ) kullanarak etiketleme çözeltisi hazırlayın.
    2. Sodyum siyanoborohidrit (DMSO / AA, 7/3, v / v'de 65 mg · mL-1 ) kullanarak indirgeyici aminasyon çözeltisi hazırlayın.
      DİKKAT: Sodyum siyanoborohidrit çok toksik ve yanıcıdır. Göz siperi takın. 2-pikolin boran kompleksi (DMSO'da 107 mg · mL-1 ) alternatif olarak kullanılabilir.
    3. Etiketleme karışımını hazırlamak için bu çözeltileri 1:1, v/v oranında karıştırın.
    4. Bu etiketleme karışımından 100 μL'yi adım 1.2.5'ten glikan salınan numuneye ekleyin.
    5. Numuneleri 65 °C'de 2 saat inkübe edin.

2. Prokainamid Etiketli N-glikanların Katı Faz Ekstraksiyon (SPE) Kartuşu ile Saflaştırılması

  1. Deiyonize suda bir mikrokristalin selüloz çözeltisi (100 mg·mL-1) hazırlayın.
  2. 300 μL mikrokristalin selüloz alın ve mikrosantrifüj tüplerine yerleştirin.
  3. Mikrokristalin selülozu 1 mL deiyonize H2O ile yıkayın.
  4. Mikrokristalin selülozu şartlandırma için 1 mL ACN/MQ (asetonitril/dH2O), 85/15, v/v ile yıkayın.
    NOT: Yıkama solüsyonlarını dikkatli bir şekilde atmak için mikrosantrifüj 1 dakika kullanılmalıdır.
  5. 120 μL glikan salım çözeltisi alın ve uygun yükleme koşullarını elde etmek için 680 μL ACN ile karıştırın (85/15, v/h, ACN/numune).
  6. Bu karışımı mikrosantrifüj tüplerinde mikrokristalin selüloz ile karıştırın.
  7. Oda sıcaklığında bir termomikserde 500 rpm'de 15 dakika çalkalayarak inkübe edin.
  8. Bulamacı bir SPE kartuşuna (1 mL hacim kapasitesi) aktarın.
    NOT: Kartuş ambalajına hava girmesine izin vermeyin.
  9. Yükleme solüsyonlarını yavaşça geçirerek (1 damla/saniye) atın.
    NOT: SPE sisteminin vakum pompasına bağlı olduğundan emin olun. Çözücüler yerçekimi ile akabilir. Gerektiğinde, bir vakum pompası ile vakum uygulayın. Uygulanan vakum basıncı, sıvıları yavaşça aşağı aktarmak için uygun şekilde ayarlanmalıdır.
  10. 1 mL ACN/MQ/TFA (asetonitril/dH2O/trifloroasetik asit) solüsyonunu (85/14/1, v/v/v) iki kez geçirerek numuneyi yıkayın.
  11. 1 mL ACN/MQ karışımını (85/15, h/v) iki kez geçirerek numuneyi yıkayın.
  12. Prokainamid etiketli N-glikanları 0.75 mL su ile elute edin.
  13. Elüsyon çözeltisini gece boyunca bir yoğunlaştırıcı ile kurutun.
    NOT: Kurutma için 45 °C'lik bir yoğunlaştırıcı sıcaklığı kullanın.
  14. Kurutulmuş numuneleri 100 μL ACN/MQ (75/25, v/v) karışımı içinde çözün ve bu çözeltiyi bir ek dahil olmak üzere şişelere aktarın.
    NOT: Yeniden çözünen numuneler 20 saniye boyunca girdaplanmalıdır.

3. HILIC-FLD-MS/MS Analizi

  1. Akışı iki eşit hacme ayırmak için Tee (T) adaptörlerini HILIC sütununa yerleştirin. Her ikisini de FLD dedektörüne, diğerini MS dedektörüne bağlayın.
    NOT: Akış çizgileri aynı uzunluklarda olmalıdır.
  2. Ek Şekil 1'de gösterildiği gibi prokainamid etiketli N-glikanların HILIC ayrımları için bir gradyan programı ayarlayın. Mobil Faz A: 50 mM amonyum formatı kullanın (pH: 4.4 ve Mobil Faz B: %100 ACN).
    NOT: Gradyan programı, numunelerin glikan heterojenliğine bağlı olarak daha da optimize edilebilir.
  3. Örnekleyici düğmesine tıklayın ve enjeksiyon hacmini 10 μL'ye ayarlayın.
  4. Sütun Kompozisyonu'na tıklayın ve sütun sıcaklığını 60 °C'ye ayarlayın.
  5. FLD'ye tıklayın ve FLD uyarma ve emisyon dalga boylarını sırasıyla 310 nm ve 370 nm olarak ayarlayın.
  6. MS kaynağını, ayarını ve MS/MS parametrelerini Ek Şekil 2'de gösterildiği gibi ayarlayın.
    NOT: MS ve MS/MS parametreleri, analizde kullanılan kütle spektrometresine bağlı olarak değiştirilebilir.

4. Veri Analizi

  1. Prokainamid etiketli N-glikanların tanımlanması
    1. MS/MS verilerini veritabanı aramaları için uygun bir formatta dışa aktarın (örneğin, .mgf, .xml).
    2. N-glikanların tanımlanması için bunları bir veritabanı arama aracına ekleyin.
    3. Yazılımda listelenen numune adını seçin ve verilen parametrelerle Carbbank veritabanını kullanarak prokainamid etiketli N-glikanların tanımlanması için Glikan Arama düğmesine tıklayın (Ek Şekil 3).
    4. Ham veriler için veri analiz yazılımındaki kromatogramları düzenle düğmesini açın ve tüm MSn'lerde filtreleyerek ekstrakte edilen iyon kromatogram türünü seçin.
    5. Çekirdek-fukosile edilmiş fragman proc-N1F1 (m/z 587.3+) ve ikiye bölünmüş fragmanlar proc-H1N3 (m/z 1009.5+) ve proc-H1N3F1 (m/z 1155.5+) için spesifik kütleler ekleyin.
    6. Çekirdek fukosile edilmiş ve ikiye bölünmüş N-glikan yapı parçaları içeren öncüleri belirleyin.
    7. Tanımlanan N-glikan yapılarını yazılım tarafından dışa aktarın (Ek Tablo 1-3).
    8. Çekirdek-fukosile edilmiş ve ikiye bölünmüş N-glikan yapılarının belirlenmesi için manuel olarak tespit edilen öncüleri kontrol edin.
  2. N-glikanlar etiketli prokainamid miktarının açık kaynaklı bir yazılımla belirlenmesi24
    1. Kromatogramlarda FLD kromatogramını seçin ve yazılımdaki yönteme tıklayın. Kromatogramları .xy dosya formatı olarak dışa aktarmak için bir yöntem açın.
    2. Dışa aktarılan kromatogramların .xy dosya biçimini .txt dosyalarına dönüştürün.
    3. Kantitatif analiz yazılımını açın.
      NOT: Çalışmada kullanılan yazılım bir Github kaynağından (https://github.com/Tarskin/HappyTools) indirilebilir.
    4. Geliştirici tarafından sunulan programın talimatlarını ve öğreticilerini izleyin.
      NOT: Göreli alanları dışa aktarmak için bir toplu işlem kullanılması önerilir.
    5. Ayar parametrelerini ayarlayın (Ek Şekil 4). Kalibrasyonlar için minimum dört tepe noktası ve 27 sinyal/gürültü oranı tanımlayın.
    6. Daha fazla değerlendirme için sonuç dosyasını Microsoft Excel gibi uygun bir yazılımla açın.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Sunulan bu yaklaşımda, N-glikanlar ilk olarak salındı, prokainamid etiketi ile etiketlendi ve selüloz içeren SPE kartuşları ile saflaştırıldı. Daha sonra, IgG, trastuzumab ve insan plazmasının N-glikan analizi bir HPLC-HILIC-FLD-MS/MS sistemi ile gerçekleştirildi. IgG ve trastuzumab'dan elde edilen belirlenen N-glikan yapılarının MS (baz pik) ve FLD kromatogramları sırasıyla Şekil 1'de gösterilmiştir. Bu analizlerden elde edilen MS/MS verileri yazılıma aktarıldı ve...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Glikoproteinlerin N-glikan profillemesi zorlu adımları içerir. Bu amaç için birçok farklı metodoloji olmasına rağmen, N-glikan yapılarının hem tanımlanması hem de miktarının belirlenmesi için uygun bir yaklaşım seçilmelidir14. HILIČ-FLD, N-GLIKANLARIN MIKTAR TAYINI IÇIN ALTIN STANDART BIR YAKLAŞIMDIR. Bununla birlikte, FLD tespiti ile tüm N-glikan tiplerinin tanımlanması sağlanamamıştır. Bu nedenle, glikoproteinlerden türetilen ...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların ifşa edecek hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

Bu çalışma, T.C. Kalkınma Bakanlığı tarafından 2016 K121230 proje numarası ile kısmen desteklenmiştir. Bekir Salih, Türkiye Bilimler Akademisi'ne (TÜBA) kısmi mali destek için teşekkür eder.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
LC/MSCarlo Erba Reaktifleri
1260 Serisi FLD dedektörlüAgilent Technologies
Amonyak FormatCarlo Erba Reaktifleri419741LC/MS
Bruker TIMS-TOF (Q-TOF) Kütle SpektrometresiBruker Daltonics
SelülozSigma Aldrich310697mikrokristalin, toz, 20 & mu; m
Deiyonize SuCarlo Erba Reaktifleri412111LC/MS
Dimetil sülfoksitSigma Aldrich41639BioUltra için, moleküler biyoloji için, & ge için; %99,5 (GC)
PE fritli boş polipropilen SPE TüpüSigma Aldrich5422020 & m gözeneklilik, hacim 1 mL
Ekstraksiyon Manifoldu, 20 konumluSularWAT20060713 x 100 mm tüpler için raf ile komple
İnsan PlazmasıSigma AldrichP9523liyofilize
IGEPAL CA-630Sigma AldrichI8896
IgG SigmaAldrichI4506liyofilize toz
Fosfat tamponlu salinSigma AldrichP4417Tablet
PNGase F enzimiPromegaV483A
Prokainamid hidroklorürabcamab120955
Sodyum siyanoborohidritSigma Aldrich156159reaktif sınıfı, %95
Sodyum dodesil sülfatSigma Aldrich71725
trastuzumabRoche Teşhis
trifloroasetik asitSigma Aldrich302031; %99,9
Asetonitril Merck 1000292500 LC-MS LiChrosolv için Asetik asit 401413 Buzul RS için Moleküler biyoloji için HPLC, &ge için

Kaynaklar

  1. Dwek, R. A. Glycobiology: Toward understanding the function of sugars. Chemical Reviews. 96 (2), 683-720 (1996).
  2. Varki, A. Biological roles of glycans. Glycobiology. 27 (1), 3-49 (2016).
  3. Spiro, R. G. Protein glycosylation: nature, distribution, enzymatic formation, and disease implications of glycopeptide bonds. Glycobiology. 12 (4), 43(2002).
  4. Apweiler, R., Hermjakob, H., Sharon, N. On the frequency of protein glycosylation, as deduced from analysis of the SWISS-PROT database. Biochimica et Biophysica Acta. 1473 (1), 4-8 (1999).
  5. Stavenhagen, K., et al. and O-glycosylation Analysis of Human C1-inhibitor Reveals Extensive Mucin-type O-Glycosylation. Molecular & Cellular Proteomics. 17 (6), 1225-1238 (2018).
  6. Ząbczyńska, M., Kozłowska, K., Pocheć, E. Glycosylation in the Thyroid Gland: Vital Aspects of Glycoprotein Function in Thyrocyte Physiology and Thyroid Disorders. International Journal of Molecular Sciences. 19 (9), (2018).
  7. Mallet, B., et al. N-Glycans Modulate in Vivo and in Vitro Thyroid Hormone Synthesis: Study at the N-Terminal Domain Of Thyroglobulin. Journal of Biological Chemistry. 270 (50), 29881-29888 (1995).
  8. Dong, X., et al. Advances in mass spectrometry-based glycomics. Electrophoresis. 39 (24), 3063-3081 (2018).
  9. Ohtsubo, K., Marth, J. D. Glycosylation in cellular mechanisms of health and disease. Cell. 126 (5), 855-867 (2006).
  10. Koçak, ÖF., et al. N-glycan profiling of papillary thyroid carcinoma tissues by MALDI-TOF-MS. Analytical Biochemistry. 584, 113389(2019).
  11. Peng, W., et al. Clinical application of quantitative glycomics. Expert Review of Proteomics. 15 (12), 1007-1031 (2018).
  12. Yaman, M. E., Kayili, H. M., Albayrak, M., Kadioglu, Y., Salih, B. Differential N-glycosylation profiling of formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) invasive ductal carcinoma tissues using MALDI-TOF-MS. Molecular Omics. 17 (3), 394-404 (2021).
  13. Liu, L. Antibody Glycosylation and Its Impact on the Pharmacokinetics and Pharmacodynamics of Monoclonal Antibodies and Fc-Fusion Proteins. Journal of Pharmaceutical Sciences. 104 (6), 1866-1884 (2015).
  14. Zhang, L., Luo, S., Zhang, B. Glycan analysis of therapeutic glycoproteins. mAbs. 8 (2), 205-215 (2016).
  15. Hart, G. W., Copeland, R. J. Glycomics Hits the Big Time. Cell. 143 (5), 672-676 (2010).
  16. West, C. M., Malzl, D., Hykollari, A., Wilson, I. B. H. Glycomics, Glycoproteomics, Glycogenomics: An Inter-Taxa Evolutionary Perspective. Molecular & Cellular Proteomics. 20, 100024(2021).
  17. Unione, L., et al. Glycoprofile Analysis of an Intact Glycoprotein As Inferred by NMR Spectroscopy. ACS Central Science. 5 (9), 1554-1561 (2019).
  18. Morelle, W., Michalski, J. -C. Analysis of protein glycosylation by mass spectrometry. Nature Protocols. 2 (7), 1585-1602 (2007).
  19. Reusch, D., et al. Comparison of methods for the analysis of therapeutic immunoglobulin G Fc-glycosylation profiles--part 1: separation-based methods. mAbs. 7 (1), 167-179 (2015).
  20. Keser, T., Pavić, T., Lauc, G., Gornik, O. Comparison of 2-Aminobenzamide, Procainamide and RapiFluor-MS as Derivatizing Agents for High-Throughput HILIC-UPLC-FLR-MS N-glycan Analysis. Frontiers in Chemistry. 6, 324(2018).
  21. Kozak, R. P., Tortosa, C. B., Fernandes, D. L., Spencer, D. I. R. Comparison of procainamide and 2-aminobenzamide labeling for profiling and identification of glycans by liquid chromatography with fluorescence detection coupled to electrospray ionization-mass spectrometry. Analytical Biochemistry. 486, 38-40 (2015).
  22. Nwosu, C., Yau, H. K., Becht, S. Assignment of Core versus Antenna Fucosylation Types in Protein N-Glycosylation via Procainamide Labeling and Tandem Mass Spectrometry. Analytical Chemistry. 87 (12), 5905-5913 (2015).
  23. Kayili, H. M. Identification of bisecting N-glycans in tandem mass spectra using a procainamide labeling approach for in-depth N-glycan profiling of biological samples. International Journal of Mass Spectrometry. 457, 116412(2020).
  24. Jansen, B. C., et al. HappyTools: A software for high-throughput HPLC data processing and quantitation. PLOS ONE. 13 (7), 0200280(2018).
  25. Ruhaak, L. R., et al. Glycan labeling strategies and their use in identification and quantification. Analytical and bioanalytical chemistry. 397 (8), 3457-3481 (2010).
  26. Rojas-Macias, M. A., et al. Towards a standardized bioinformatics infrastructure for N- and O-glycomics. Nature Communications. 10 (1), 3275(2019).
  27. Everest-Dass, A. V., Abrahams, J. L., Kolarich, D., Packer, N. H., Campbell, M. P. Structural feature ions for distinguishing N- and O-linked glycan isomers by LC-ESI-IT MS/MS. Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 24 (6), 895-906 (2013).
  28. Li, X., Xu, Z., Hong, X., Zhang, Y., Zou, X. Databases and Bioinformatic Tools for Glycobiology and Glycoproteomics. International Journal of Molecular Sciences. 21 (18), 6727(2020).
  29. Qing, G., Yan, J., He, X., Li, X., Liang, X. Recent advances in hydrophilic interaction liquid interaction chromatography materials for glycopeptide enrichment and glycan separation. TrAC Trends in Analytical Chemistry. 124, 115570(2020).
  30. Reiding, K. R., et al. Human Plasma N-glycosylation as Analyzed by Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization-Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance-MS Associates with Markers of Inflammation and Metabolic Health. Molecular & Cellular Proteomics. 16 (2), 228-242 (2017).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Glikoprotein AnaliziHidrofilik Etkile im KromatografisiFloresan DeteksiyonuGlikozilasyon DesenleriProkainamid EtiketlemeTandem K tle SpektrometrisiBiyobelirte Ke fiGlikan Kantifikasyonu

Bu makale yayımlandı

Video yakında

Bize ulaşın
Kütüphaneye tavsiye et

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Telif hakkı © 2026 MyJoVE Corporation. Tüm hakları saklıdır.