Yöntem makalesi

Bitki Konağındaki Bir Yaprakçık Vektörünün Virüs ve Tükürük Proteinlerinin Tespiti

2.7K görüntüleme

⸱

DOI:

10.3791/63020

⸱

14 Eylül 2021

 ,  ,  , 
1Vector-borne Virus Research Center, Fujian Province Key Laboratory of Plant Virology, Institute of Plant Virology, Fujian Agriculture and Forestry University

Bu makalede

Özet

Bu protokol, yaprak haznesinin tükürük proteinlerini ve yaprak haznesi vektörleri tarafından salınan bitki viral proteinlerini tespit etmek için bitki konağının nasıl kullanılacağını göstermektedir.

Özet

Böcek vektörleri yatay olarak tarımsal öneme sahip birçok bitki virüsünü iletir. Bitki virüslerinin yarısından fazlası, delici emici ağız kısımlarına sahip hemipteran böcekler tarafından bulaşır. Viral bulaşma sırasında, böcek tükürüğü virüs-vektör-konakçıyı köprüler, çünkü tükürük vektörleri virüsleri ve böcek proteinleri, bitkilerin böceklerden bitki konakçılarına bağışıklık tepkisini tetikler veya bastırır. Tükürük proteinlerinin tanımlanması ve fonksiyonel analizleri, arbovirüs-konakçı etkileşimlerinin araştırma alanında yeni bir odak alanı haline gelmektedir. Bu protokol, bitki konağını kullanarak yaprakçıkların tükürüğündeki proteinleri tespit etmek için bir sistem sağlar. Pirinç cüce virüsü (RDV) ile enfekte olmuş yaprak vektörü Nephotettix cincticeps buna bir örnek teşkil eder. N. cinctiacps'ın tükürüğü tarafından vektörleştirilen RDV'nin vitellogenin ve majör dış kapsid proteini P8, N. cinctiacps'ın beslendiği pirinç bitkisinde aynı anda tespit edilebilir. Bu yöntem, böcek beslemesinden sonra bitki konakçısında geçici olarak tutulan tükürük proteinlerini test etmek için geçerlidir. Bu tespit sisteminin hemipteran-virüs-bitki veya hemipteran-bitki etkileşimlerinin incelenmesine fayda sağlayacağına inanılmaktadır.

Giriş

Temel bir problem olan arbovirüslerin vektör-konakçı iletim modu, biyoloji biliminin sınırındadır. Tarımsal öneme sahip birçok bitki virüsü, böcek vektörleri1 tarafından yatay olarak bulaşır. Bitki virüslerinin yarısından fazlası, yaprak bitleri, beyaz sinekler, yaprakçıklar, planthoppers ve thrips dahil olmak üzere hemipteran böcekler tarafından vektörleştirilir. Bu böcekler, bitki virüslerini verimli bir şekilde iletmelerini sağlayan farklı özelliklere sahiptir1. Delici emici ağız kısımlarına sahiptirler ve floem ve ksilemden gelen özsu ile beslenirler ve tükürüklerini 1,2,3,4 salgılarlar. Tekniklerin geliştirilmesi ve iyileştirilmesiyle, tükürük bileşenlerinin tanımlanması ve fonksiyonel analizleri yoğun araştırmaların yeni bir odağı haline gelmektedir. Tükürükteki bilinen tükürük proteinleri, diğerlerinin yanı sıra pektinesteraz, selülaz, peroksidaz, alkali fosfataz, polifenol oksidaz ve sukraz gibi çok sayıda enzim içerir 5,6,7,8,9,10,11,12,13 . Tükürükteki proteinler ayrıca konakçı savunma tepkisini tetikleyen, böylece böceklerin performansını değiştiren elisitörleri ve konakçı savunmasını baskılayan efektörleri içerir, bu da böcek uygunluğunu arttırır ve konakçı patolojik yanıtlarını indükleyen bileşenler14,15,16,17. Bu nedenle, tükürük proteinleri böcekler ve konakçılar arasındaki iletişim için hayati öneme sahip malzemelerdir. Virüslerin bulaşması sırasında, delici emici virülifer böceklerin tükürük bezleri tarafından salgılanan tükürük de viral proteinler içerir. Viral bileşenler, onları böcekten bitki konağına serbest bırakmak için tükürük akışını kullanır. Bu nedenle, böcek tükürüğü virüs-vektör-konakçı tritrofik etkileşimini köprüler. Virülifer böcekler tarafından salgılanan tükürük proteinlerinin biyolojik fonksiyonunun araştırılması, virüs-vektör-konakçı ilişkisinin anlaşılmasına yardımcı olur.

Hayvan virüsleri için, sivrisineklerin tükürüğünün Batı Nil virüsü (WNV) ve Dang virüsünün (DENV) bulaşmasına ve patojenitesine aracılık ettiği bildirilmektedir. Tükürük proteini AaSG34, dang humması-2 virüsü replikasyonunu ve iletimini teşvik ederken, tükürük proteini AaVA-1, otofajiyi aktive ederek DENV ve Zika virüsü (ZIKV) bulaşmasını teşvik eder18,19. Sivrisineklerin tükürük proteini D7, DENV viryonları ve rekombinant DENV zarf proteini20 ile doğrudan etkileşim yoluyla in vitro ve in vivo DENV enfeksiyonunu inhibe edebilir. Bitki virüslerinde, begomovirüs domates sarı yaprak kıvrılma virüsü (TYLCV), beyaz sineklerin tercihini ve performansını arttırmak için bitki konağının WRKY33 aracılı bağışıklığını baskılayan beyaz sinek tükürük proteini Bsp9'u indükler ve sonunda virüslerin bulaşmasını arttırır21. Böcek tükürük proteinlerinin bitki konakçılarında oynadığı rol üzerine yapılan çalışmalar, hayvan konakçılarınınkinin gerisinde kaldığından, bitki konakçılarındaki tükürük proteinlerini tespit etmek için kararlı ve güvenilir bir sisteme acilen ihtiyaç duyulmaktadır.

Pirinç cüce virüsü (RDV) olarak bilinen bitki virüsü, yaprak haznesi Nephotettix cincticeps (Hemiptera: Cicadellidae) tarafından yüksek verimlilikle ve sürekli çoğalan bir şekilde bulaşır22,23. RDV'nin ilk olarak bir böcek vektörü tarafından bulaştığı ve Asya'da ciddi bir pirinç hastalığına neden olduğu bildirilmiştir24,25. Virion ikosahedral ve çift katmanlı küreseldir ve dış tabaka P8 dış kapsid proteini22'yi içerir. N. cinctiaceps'te RDV'nin dolaşım süresi 14 gün 26,27,28,29,30'dur. RDV tükürük bezlerine ulaştığında, virionlar ekzositoz benzeri bir mekanizma 23 aracılığıyla tükürük bezlerindeki tükürük depolanan boşluklara salınır. Vitellogenin (Vg), dişi böceklerde oosit gelişimi için gerekli olan yumurta sarısı proteini öncüsüdür31,32,33. Çoğu böcek türü, yaklaşık 220 kDa'lık bir öncü proteini kodlayan 6-7 kb'lik en az bir Vg transkriptine sahiptir. Vg'nin protein öncülleri genellikle yumurtalık 18,19'a girmeden önce büyük (140 ila 190 kDa) ve küçük (<50 kDa) parçalara ayrılabilir. Önceki proteomik analiz, Vg'den türetilen peptitlerin, işlevleri bilinmemekle birlikte, yaprakçık Recilia dorsalis'in salgılanan tükürüğünde varlığını ortaya koymuştur (yayınlanmamış veriler). Bitkilerden ağızdan salgılanan Vg'nin, bitkilerin savunmalarına zarar vermek için bir efektör olarak işlev gördüğü yeni bildirilmiştir34. N. cinctiaces'in Vg'sinin tükürük akışıyla bitki konakçısına da salınıp bırakılamayacağı ve daha sonra bitki savunmasına müdahale etmek için bitkide rol oynayıp oynayamayacağı bilinmemektedir. N. cinctiaceps'in bitki savunmasını inhibe etmek veya aktive etmek için Vg gibi tükürük proteinlerini kullanıp kullanmadığını ele almak için ilk adım, beslenme sırasında bitkiye salınan proteinleri tanımlamaktır. Bitkide bulunan tükürük proteinlerini tanımlama yöntemini anlamak, tükürük proteinlerinin işlevini ve Hemiptera ile bitkiler arasındaki etkileşimleri açıklamak için potansiyel olarak gereklidir.

Burada sunulan protokolde, N. cinctiacps , böcek besleme yoluyla tanıtılan bitki konakçısında tükürük proteinlerinin varlığını incelemek için bir yöntem sağlamak için bir örnek olarak kullanılmıştır. Protokol öncelikle tükürük proteinlerinin toplanmasını ve tespitini detaylandırır ve çoğu hemipteran üzerinde daha fazla araştırma için yararlıdır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Virülifer olmayan yetişkin yaprakçıklar, Çin'deki Fujian Tarım ve Ormancılık Üniversitesi'ndeki Vektör Kaynaklı Virüs Araştırma Merkezi'nde çoğaltıldı.

1. Virülifer olmayan böcek yetiştiriciliği

  1. Yetişkinleri pirinç fideleri üzerinde 40 cm x 35 cm x 20 cm (uzunluk x genişlik x yükseklik) olan bir küp kafeste arkadan yerleştirin. Havalandırma için kafesin bir tarafını böcek geçirmez bir ağ ile örtün.
    1. Yaprakçıklı kafesleri, 16 saat ışık ve 8 saat karanlık fotoperiyot altında% 60-75 bağıl nem ile 26 ° C'de dahili bir nem kontrolörü içeren bir inkübatörde saklayın.
  2. Tüm yetişkinleri kafeslerinden her hafta taze pirinç fideleri içeren yeni bir kafese nazikçe aktarmak için bir aspiratör kullanın.
    1. 200'den fazla yetişkinin çiftleşmesine ve pirincin içine yumurta bırakmasına izin verin.
    2. Perileri ortaya çıkarmak için eski pirinç fidelerini saklayın. Bu yeni virülifer olmayan nimfleri 2-instar aşamasına kadar destekleyin.

2. Virüs edinimi ve virülifer böceklerin toplanması

  1. 2-instar nonviruliferous nimfleri, aspiratör kullanarak açlık için 1-2 saat boyunca bir cam kültür tüpüne (2,5 cm çapında 15 cm yüksekliğinde) dikkatlice aktarın.
    1. Perileri bir tencerede yetişen RDV ile enfekte olmuş bir pirinç bitkisi içeren bir kafese bırakın.
    2. Perileri enfekte olmuş pirinç bitkisinde 2 gün boyunca beslenmelerine izin verin.
      NOT: Pirinç bitkisini dikkatlice sulayın ve nimfleri yıkamaktan kaçının. 2 yıldızlı nimfler yaklaşık 1.6-2 mm uzunluğundadır.
  2. Bu nimfleri, 16 saat ışık ve 8 saat karanlık fotoperiyot altında% 60-75 bağıl neme sahip taze virüssüz pirinç fideleri içeren yeni bir kafese dikkatlice aktarın. RDV'nin dolaşım iletim süresini tamamlamak için nimflerin enfekte olmuş pirinç bitkisinde 12 gün boyunca beslenmelerine izin verin.

3. Bir besleme kafesi kullanarak tükürük proteinlerinin toplanması

  1. Bir ucunun böcek geçirmez ağ ile kaplandığı beş küçük boru benzeri besleme kafesi (2,5 cm çapında ve 4 cm yüksekliğinde) hazırlayın.
  2. Her besleme kafesinde 15-20 yaprak haznesini sınırlayın ve ardından kafesin diğer ucunu ince bir köpük paspasla örtün.
    1. Bir pirinç fidesini (5-6 cm yüksekliğinde) kafesin ucu ile bantlı bir köpük paspas arasına sabitleyin. Besleme kafesindeki yaprakçıkların, kafesin içine maruz kalan pirinç fideleriyle beslenebildiğinden emin olun.
  3. Fide köklerini suya batırın, böylece pirinç bitkisi canlı kalır. Yaprakçıkların 2 gün boyunca onlarla beslenmesine izin verin.
  4. Yaprakçıkları besleme kafeslerinden çıkarın ve beslendikleri pirinç fidelerini toplayın. Fidelerin parçalarını kafesin dışına kesin ve fidelerin beslenme bölgelerini geri kazanın.
    NOT: Bu numune, algılama için anında kullanılmadığı takdirde -80 °C'de en fazla 3 ay saklanabilir.

4. Reaktif hazırlama

  1. 5xTris-glisin tamponu hazırlamak için 15.1 g Tris-baz, 94 g glisin ve 5 g SDS'yi 1 L steril suda çözün. 1xTris-glisin tamponu hazırlamak için 200 mL 5xTris-glisin tamponunu 800 mL steril su ile seyreltin (tampon bileşimi için Tablo 1'e bakınız).
  2. 10xTris tamponlu salin (TBS) tamponu hazırlamak için 80 g NaCl, 30 g Tris baz ve 2 g KCl'yi 1 L steril suda çözün. Çözeltiyi 121 ° C'de 15 dakika boyunca otoklavlayın.
  3. 4x protein numune tamponu hazırlamak için 8 g SDS, 4 mL ß-merkaptoetanol, 0.02 g bromofenol mavisi ve 40 mL gliserol 40 mL 0.1 M Tris-HCl (pH 6.8) içinde çözün.
  4. Transfer tamponunu hazırlamak için 800 mL Tris-glisin tamponunu 200 mL metanol ile karıştırın.
  5. TBS tamponunu Tween 20 (TBST) çözeltisiyle hazırlamak için 100 mL 10xTBS çözeltisi ve 3 mL Tween 20 ila 900 mL steril su ekleyin.

5. Tükürük ve viral proteinleri tespit etmek için Batı lekelenmesi

  1. Pirinç numunelerinin 0,1 gramını, doku toz haline gelene kadar sıvı azotla öğütün. Numuneye 200 μL 4x protein numune tamponu ekleyin ve 10 dakika kaynatın. Numuneleri oda sıcaklığında 10 dakika boyunca 12.000 x g'de santrifüj edin.
    1. Süpernatantı çıkarın ve yeni bir şişeye yerleştirin. Numunenin 10 μL'sini bir SDS-PAGE jeline yükleyin ve 45-60 dakika boyunca 150 V'ta Tris-glisin tamponunda çalıştırın.
      NOT: Santrifüjleme sonrası kalıntı atılabilir.
  2. 0,45 μm nitroselüloz membranı ve diğer sandviç malzemelerini Transfer tamponuna 30 dakika boyunca koyun.
    NOT: Bu adım, jel çalışmasını tamamlamadan önce yapılabilir.
  3. Jeli sandviçleyin ve Transfer tamponunda 100 V'ta 90-120 dakika boyunca aktarın.
  4. Membranı alın ve 20 dakika boyunca TBST çözeltisinde% 7 yağsız kuru süt bloke edici çözeltiye yerleştirin. RDV, P8 veya Vg'ye karşı spesifik antikoru, TBST'de% 7'lik bir yağsız kuru süt çözeltisine ekleyin. Membranı 2 saat veya gece boyunca boyamak için antikor ile inkübe edin.
  5. Membranı TBST çözeltisi ile üç kez, her seferinde 5 dakika yıkama ile yıkayın.
  6. Keçi anti-tavşan IgG'yi, TBST ile% 7 yağsız kuru süte ikincil bir antikor olarak ekleyin. Oda sıcaklığında 60-90 dakika boyunca antikor ile inkübe edin.
  7. Membranı TBST çözeltisi ile her seferinde 5 dakika boyunca üç kez yıkayın.
  8. Kemilüminesan yöntemi için ECL Western kitini kullanın. Kitteki Karışım Algılama Reaktifleri 1 ve 2, bir tüpte 1: 1 oranında. Karışık reaktifi membranın üzerine koyun ve lekeyi 5 dakika boyunca inkübe edin.
  9. Fazla reaktifi boşaltın ve kemilüminesan resmin kolorimetrik bir resmini çekin. Merdiveni protein bantlarıyla görmek için bunları birleştirin.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

Şekil 1, bu protokoldeki tüm adımları göstermektedir: böcek yetiştiriciliği, virüs edinimi, pirinç besleme yoluyla tükürük proteinlerinin toplanması ve batı lekesi. Batı lekeleri sonuçları, Vg'ye karşı antikorlarla inkübe edilen zardaki böceklerin pirinç ve tükürük bezlerinin beslenme örneklerinde yaklaşık 220 kDa'lık spesifik ve beklenen bantların gözlendiğini göstermiştir. Buna karşılık, beslenmeyen pirinç örneğinde bant gözlenmemiştir. Şekil 2'deki s...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Delici emici böceklerin tükürük bezleri tarafından doğrudan salgılanan tükürük çok önemli bir rol oynar, çünkü konakçı dokuları ve vektörlerin krallıklar arası biyolojik faktörlerini konakçılara önceden sindirir ve detoksifiye eder 1,3,4. Elicitors, efektörler ve küçük RNA dahil olmak üzere krallıklar arası biyolojik faktörler, böcek-konakçı iletişimi için kritik öneme sahiptir14,15,16

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyi yok.

Teşekkürler

Bu çalışma, Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (31772124 ve 31972239) ve Fujian Tarım ve Ormancılık Üniversitesi'nden (Grant KSYLX014) gelen hibelerle desteklenmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
< güçlü > Reaktifler< / güçlü >
Tris bazRocheD609K690325 kez; Tris-glisin tamponu ve 10 kez; TBS tampon hazırlama
glisinSigma-AldrichWXBD0677V5 kez; Tris-glisin tampon hazırlama
SDSSigma-AldrichSLCB43945 kez; Tris-glisin tampon hazırlama
NaClSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd1001931810 kez; TBS tampon hazırlama
KClSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd1001631810 kez; TBS tampon hazırlama
ve szlig; - merkaptoetanolXiya ReaktifB144924 kez; protein numunesi tampon hazırlama
bromofenol mavisiSigma-AldrichSHBL36684 kez; protein numunesi tampon hazırlama
gliserolSinopharm Kimyasal Reaktif Co, Ltd100106184 kez; protein örnek tampon hazırlama
metanolSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10014118Transfer tamponu hazırlığı için
Tween 20Coolaber BİLİM & TeCHNoLoGYCT30111220TBST hazırlığı için
yağsız kuru sütBecton.Dickinso ve şirket252038Membran blokajı, antikorlar için seyreltme
keçi tavşan önleyici IgGSangon BiotechD110058-0001Birincil andibody
ECL Western kitininThermoFisher Scientific32209Kemilüminesan substrat
nitroselüloz membranPall Corporation25312915Protein transferi için
Tamponlar ve Çözeltiler
TamponKompozisyonYorumlar/Açıklama
  5&kez; Tris-glisin tamponu15.1 g Tris baz
94 g glisin
  1 L steril suda		  Stok çözeltisi
1 ve kez; Tris-glisin tamponu200 mL 5 & kez; Tris-glisin tamponu
800 mL steril su		Çalışma solüsyonu, SDS-PAGE
10× için; Tris tamponlu tuzlu su (TBS) tamponu80 g NaCl
30 g Tris baz
2 g KCl
1 L steril suda
Tween 20 (TBST) çözeltisi ileTBS 100 mL 10&/kez; TBS çözeltisi
3 mL Tween 20
900 mL steril su		Çalışma çözeltisi
4 kez; protein numune tamponu8 g SDS
4 mL ß-merkaptoetanol
0.02 g bromofenol mavi
40 mL gliserol
40 mL'de 0.1 M Tris-HCl (pH 6.8)		Protein ekstraksiyonu için
Transfer tamponu800 mL Tris-glisin tamponu
200 mL metanol		İçin protein
transferi Aletler< / güçlü >
Bromofenol mavisiSigma-AldrichSHBL36684x protein numunesi için Tampon hazırlama
Sabit sıcaklık inkübatörüNingbo Saifu Experimental Instrument Co., Ltd.PRX-1200BYaprak zararlısı yetiştirmek için
ElektroforezTanon Science & Teknoloji Co., Ltd.SDS-PAGE içinTanon EP300
BIO-RAD1703935SDS-PAGE
gliseroliçin Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd.100106184x protein numunesi tampon hazırlama
glisinSigma-AldrichWXBD0677V5x Tris-glisin tampon hazırlama
keçi anti-tavşan IgGSangon BiotechiçinD110058-0001Birincil andtikor
Yüksek geçişli doku öğütme aletininShanghai Jingxin Industrial Development Co., Ltd.JXFSIPRP-24Bitki dokularını öğütmek için
KClSinopharm Chemical Reactive Co., Ltd1001631810x TBS tampon hazırlama için
metanolSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10014118Transfer tamponu hazırlama için
Mini ıslak ısı transfer teknesiSDS-PAGE
NaClSinopharm Kimyasal Reaktif Co., Ltdiçin BIO-RAD 170393010019318 10x TBS tampon hazırlama nitroselüloz
membraniçin Pall Corporation25312915Proteinler için
yağsız kuru sütBecton.Dickinso ve şirket252038Membran blokajı, antikor seyreltmesi için
Pierce ECL Western kitiThermoFisher Scientific32209Kemilüminesan substrat
Protein renk aletiGE Sağlık biyo-bilimleri ABAmersham lmager 600Proteinleri tespit etmek için
SDSSigma-AldrichSLCB43945x Tris-glisin tampon hazırlığı için
Tris bazRocheD609K690325x Tris-glisin tamponu ve 10 kez; TBS tampon hazırlama
Tween 20Coolaber BİLİM & TBST hazırlığı için TeCHNoLoGYCT30111220SDS-PAGE
dikey plaka elektroforez tankıBIO-RAD
1658001 Su banyosuShanghai Jinghong Experimental equipment Co., Ltd.XMTD-8222Protein örneklerini kaynatmak için
beta;-merkaptoetanolXiya ReaktifiB144924x protein örneği tampon hazırlığı için
tanınması 5 g SDS stok çözeltisi SDS-PAGE gliserol için için tanınması transferi için

Kaynaklar

  1. Hogenhout, S. A., Ammar el, D., Whitfield, A. E., Redinbaugh, M. G. Insect vector interactions with persistently transmitted viruses. Annual Review of Phytopathology. 46, 327-359 (2008).
  2. Cranston, P. S., Gullan, P. J. Phylogeny of insects. Encyclopedia of Insects. Resh, V. H., Carde, R. T. , Academic. Amsterdam. (2003).
  3. Ammar el, D., Tsai, C. W., Whitfield, A. E., Redinbaugh, M. G., Hogenhout, S. A. Cellular and molecular aspects of rhabdovirus interactions with insect and plant hosts. Annual Review of Entomology. 54, 447-468 (2009).
  4. Wei, T., Li, Y. Rice reoviruses in insect vectors. Annual Review of Phytopathology. 54, 99-120 (2016).
  5. Hattori, M., Konishi, H., Tamura, Y., Konno, K., Sogawa, K. Laccase-type phenoloxidase in salivary glands and watery saliva of the green rice leafhopper, Nephotettix cincticeps. Journal of Insect Physiology. 51 (12), 1359-1365 (2005).
  6. Ma, R., Reese, J. C., William, I. V., Bramel-Cox, P. Detection of pectinesterase and polygalacturonase from salivary secretions of living greenbugs, schizaphis graminum (Homoptera: aphididae). Journal of Insect Physiology. 36 (7), 507-512 (1990).
  7. Miles, P. W. Dynamic aspects of the chemical relation between the rose aphid and rose buds. Entomologia Experimentalis et Applicata. 37 (2), 129-135 (2011).
  8. Urbanska, A., Tjallingii, W. F., Dixon, A., Leszczynski, B. Phenol oxidising enzymes in the grain aphid's saliva. Entomologia Experimentalis et Applicata. 86 (2), 197-203 (1998).
  9. Miles, P. W., Peng, Z. Studies on the salivary physiology of plant bugs: detoxification of phytochemicals by the salivary peroxidase of aphids. Journal of Insect Physiology. 35 (11), 865-872 (1989).
  10. Will, T., van Bel, A. Physical and chemical interactions between aphids and plants. Journal of Experimental Botany. 57 (4), 729-737 (2006).
  11. Ma, R. Z., Reese, J. C., Black, W. C., Bramel-Cox, I. Chlorophyll loss in a greenbug-susceptible sorghum due to pectinases and pectin fragments. Journal of the Kansas Entomological Society. 71 (1), 51-60 (1998).
  12. Madhusudhan, V. V., Miles, P. W. Mobility of salivary components as a possible reason for differences in the responses of alfalfa to the spotted alfalfa aphid and pea aphid. Entomologia Experimentalis et Applicata. 86 (1), 25-39 (1998).
  13. Funk, C. J. Alkaline phosphatase activity in whitefly salivary glands and saliva. Archives of Insect Biochemistry & Physiology. 46 (4), 165-174 (2010).
  14. Hogenhout, S. A., Bos, J. I. Effector proteins that modulate plant-insect interactions. Current Opinion in Plant Biology. 14 (4), 422-428 (2011).
  15. Tomkins, M., Kliot, A., Maree, A. F., Hogenhout, S. A. A multi-layered mechanistic modelling approach to understand how effector genes extend beyond phytoplasma to modulate plant hosts, insect vectors and the environment. Current Opinion in Plant Biology. 44, 39-48 (2018).
  16. Huang, H. J., Lu, J. B., Li, Q., Bao, Y. Y., Zhang, C. X. Combined transcriptomic/proteomic analysis of salivary gland and secreted saliva in three planthopper species. Journal of Proteomics. , (2018).
  17. Hogenhout, S. A., Bos, J. I. Effector proteins that modulate plant--insect interactions. Current Opinion in Plant Biology. 14 (4), 422-428 (2011).
  18. Sun, P., et al. A mosquito salivary protein promotes flavivirus transmission by activation of autophagy. Nature Communications. 11 (1), 260(2020).
  19. Sri-In, C., et al. A salivary protein of Aedes aegypti promotes dengue-2 virus replication and transmission. Insect Biochemistry and Molecular Biology. 111, 103181(2019).
  20. Conway, M. J., et al. Aedes aegypti D7 saliva protein inhibits dengue virus infection. Plos Neglected Tropical Diseases. 10 (9), 0004941(2016).
  21. Wang, N., et al. A whitefly effector Bsp9 targets host immunity regulator WRKY33 to promote performance. Philosophical Transactions of the Royal Society of London. Series B, Biological Sciences. 374 (1767), 20180313(2019).
  22. Omura, T., Yan, J. Role of outer capsid proteins in transmission of phytoreovirus by insect vectors. Advances in Virus Research. 54, 15-43 (1999).
  23. Chen, Q., Liu, Y., Long, Z., Yang, H., Wei, T. Viral release threshold in the salivary gland of leafhopper vector mediates the intermittent transmission of rice dwarf virus. Frontiers in Microbiology. 12, 639445(2021).
  24. Fukushi, T. Further studies on the dwarf disease of rice plant. Journal of the Faculty of Agriculture, Hokkaido Imperial University. 45 (3), 83-154 (1940).
  25. Miyazaki, N., et al. The functional organization of the internal components of rice dwarf virus. Journal of Biochemistry. 147, 843-850 (2010).
  26. Wei, T., Shimizu, T., Hagiwara, K., Kikuchi, A., Omura, T. Pns12 protein of rice dwarf virus is essential for formation of viroplasms and nucleation of viral-assembly complexes. Journal of General Virology. 87, 429-438 (2006).
  27. Chen, Q., Zhang, L., Chen, H., Xie, L., Wei, T. Nonstructural protein Pns4 of rice dwarf virus is essential for viral infection in its insect vector. Virology Journal. 12, 211(2015).
  28. Chen, Q., et al. Nonstructural protein Pns12 of rice dwarf virus is a principal regulator for viral replication and infection in its insect vector. Virus Research. 210, 54-61 (2015).
  29. Chen, Q., Zhang, L., Zhang, Y., Mao, Q., Wei, T. Tubules of plant reoviruses exploit tropomodulin to regulate actin-based tubule motility in insect vector. Scientific Reports. 7, 38563(2017).
  30. Wei, T., et al. The spread of Rice dwarf virus among cells of its insect vector exploits virus-induced tubular structures. Journal of Virology. 80 (17), 8593-8602 (2006).
  31. Mao, Q., et al. Insect bacterial symbiont-mediated vitellogenin uptake into oocytes to support egg development. mBio. 11 (6), 01142(2020).
  32. Tufail, M., Takeda, M. Molecular characteristics of insect vitellogenins. Journal of Insect Physiology. 54 (12), 1447-1458 (2008).
  33. Sappington, T. W., Raikhel, A. S. Molecular characteristics of insect vitellogenins and vitellogenin receptors. Insect Biochemistry and Molecular Biology. 28 (5-6), 277-300 (1998).
  34. Ji, R., et al. Vitellogenin from planthopper oral secretion acts as a novel effector to impair plant defenses. New Phytologist. , (2021).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

Bitki Vir s TespitiPirin C ce Vir sWestern BlotSDS PAGEHemiptera ile letimVitellogenin TespitiVir s Bitki Etkile imiProtein Ekstraksiyonu

İlgili makaleler