İğnesiz su jeti teknolojisi ile hücre enjeksiyonu yöntemini, hücresel canlılık, proliferasyon ve elastikiyet ölçümleri açısından doğum sonrası araştırmaların bir sekeli ile birlikte sunuyoruz.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Domuz Yağ Dokusundan Türemiş Stroma Hücrelerinin Su Jeti Teknolojisi ile Enjeksiyonu
* These authors contributed equally
Bu makalede
Özet
Özet
Üriner inkontinans (UI), üretral sfinkter kasının eksikliği ile karakterize oldukça yaygın bir durumdur. Rejeneratif tıp dalları, özellikle hücre tedavisi, üretral sfinkter fonksiyonunu iyileştirmek ve restore etmek için yeni yaklaşımlardır. Aktif fonksiyonel hücrelerin enjeksiyonu rutin olarak klinik ortamlarda iğne ve şırınga ile yapılsa da bu yaklaşımların önemli dezavantajları ve kısıtlılıkları vardır. Bu bağlamda, iğnesiz su jeti (WJ) teknolojisi, üretral sfinkterde görsel rehberli sistoskopi ile canlı hücreleri enjekte edebilen uygulanabilir ve yenilikçi bir yöntemdir. Bu çalışmada, domuz yağ dokusu kaynaklı stromal hücreleri (pADSC'ler) kadavra üretral dokusuna vermek için WJ'yi kullandık ve daha sonra WJ doğumunun hücre verimi ve canlılığı üzerindeki etkisini araştırdık. Ayrıca biyomekanik özellikleri (yani elastikiyeti) atomik kuvvet mikroskobu (AFM) ölçümleri ile değerlendirdik. WJ tarafından verilen pADSC'lerin hücresel elastikiyetlerinde önemli ölçüde azaldığını gösterdik. Canlılık kontrollere kıyasla önemli ölçüde daha düşüktü, ancak hala% 80'in üzerinde.
Giriş
Üriner inkontinans (UI), Avrupa popülasyonlarında prevalansı %1.8-30.5 arasında değişen yaygın bir hastalıktır1 ve öncelikle üretral sfinkterin fonksiyon bozukluğu ile karakterizedir. Klinik açıdan bakıldığında, cerrahi tedavi genellikle konservatif tedaviler veya fizyoterapi ortaya çıkan semptomları ele almadığında ve hafifletemediğinde hastalara sunulmaktadır.
Sfinkter kompleksi fonksiyon bozukluğunun potansiyel rejeneratif onarımı için hücre tedavisi, UI patolojisinin tedavisinde avangard bir yaklaşım olarak ortaya çıkmaktadır 2,3. Başlıca hedefleri, hasar....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Domuz yağ dokusu örnekleri Tuebingen Üniversitesi Deneysel Cerrahi Enstitüsü'nden alındı. Tüm prosedürler yerel hayvan refahı yetkilileri tarafından CU1/16 hayvan deney numarası altında onaylanmıştır.
1. Domuz yağ dokusu kaynaklı stromal hücrelerin izolasyonu
- Deneysel Cerrahi Enstitüsü'nden laboratuvara 50 mL'lik bir santrifüj tüpünde verilen domuz yağ dokusunu kullanın.
- Dokuyu steril tezgahın altındaki steril bir Petri kabına aktarın ve iki neşterle (No. 10) küçük parçalara ve çamura kıyın.
NOT: Makas, küçük parçalar elde etmek için de kullanılabilir. Parçalar ne kadar küçük olursa, bir sonraki sindi....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
İki yaklaşımla hücre dağıtımını takiben, WN yoluyla verilen hücrelerin yaşayabilirliği (97.2 ±% 2, n = 10, p <0.002), E60-10 ayarları (85.9 ±% 0.16, n = 12) kullanılarak WJ tarafından yapılan enjeksiyonlara kıyasla daha yüksekti (Şekil 2). Biyomekanik değerlendirme sonuçları şunu göstermiştir: Yakalama sıvısındaki hücrelerin WN enjeksiyonları, kontrollere (1.176 kPa; 0.176 kPa; Şekil 3A), WJ enjeksiyonları hücresel EM'de önemli bir azalmayı tetikledi (0.440 k.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Bu çalışmada, WJ hücre dağıtım prosedürü için adım adım bir yaklaşım gösterdik ve sunduk ve WJ dağıtımının hücresel özellikler üzerindeki etkisini değerlendirmek için nicel araştırmaların bir sekelini kullandık: hücresel canlılık ve biyomekanik özellikler (yani, EM). WJ enjeksiyonunu takiben, hasat edilen hücrelerin% 85.9'u yaşayabilirdi. WN enjeksiyonu açısından, hücrelerin% 97.2'si enjeksiyondan sonra canlılıklarını korudu. Bu nedenle, WJ yaklaşımı klinik bir uygulama için mutlak bir gereksinimi yerine getirir: doğumda.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarların J.K., M.D, T.A., A.S., W.K. A.'nın açıklayacak hiçbir şeyi yoktur. Yazarlar W.L. ve M.D.E., ERBEJet2'nin üreticisi ve bu çalışmada kullanılan WJ prototipi olan ERBE Medizintechnik Lt. Tübingen'in çalışanlarıdır.
Teşekkürler
Orijinal yayınlardan ortak yazarlarımıza yardım ve destekleri için teşekkür ederiz.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| 50 mL santrifüj tüpü | Greiner BioOne | 227261 | |
| 1 mL BD Luer-LokTM Şırınga | BD Plastik A.Ş | n.a.100 | |
| & mikro; m hücreli elek | Greiner BioOne | 542000 | |
| 15 mL santrifüj tüpü | Greiner BioOne | 188271 | |
| 75 cm2 doku kültürü şişesi | Corning Incorporated | 353136 | |
| AFM kafası | (CellHesion 200) JPK | JPK00518 | |
| AFM işleme yazılımı | Bruker | JPK00518 | |
| AFM yazılımı | Bruker | JPK00518 | |
| AFM sistemi Cell Hesion 200 | Bruker | JPK00518 | |
| Hepsi Bir Arada konsol | Bütçe Sensörleri | AIO-10 | tip A, Bağlantı Modu, Şekil: Işın Kuvvet Sabiti: 0,2 N/m (0,04 - 0,7 N/m) Rezonans Frekansı: 15 kHz (10 - 20 kHz) Uzunluk: 500 &mikro; m (490 - 510 &mikro; m) Genişlik: 30 & mikro; m (35 - 45 &mikro; m) < br / > Kalınlık: 2.7 ve mikro; m (1.7 - 3.7 &mikro; m) |
| Amfoterisin B çözeltisi | Sigma | A2942 | 250 ve mikro; g/ml |
| Atomik Kuvvet Mikroskobu (AFM) | CellHesion 200, JPK Instruments, Berlin, Almanya | JPK00518 | |
| BD Microlance 3 18G | BD | 304622 | |
| sığır serum albümini | Gibco | A10008-01 | |
| Konsol | Hepsi Bir Arada AleTl, Bütçe Sensörleri, Sofya, Bulgaristan | AIO-TL-10 | tip A, k ¼ 0.2 N/m |
| C-chip tek kullanımlık hemositometre | NanoEnTek | 631-1098 | |
| santrifüj: Rotina 420R | Hettich Zentrifugen | ||
| Kollajenaz, Tip I, toz | Gibco | 17100-017 | |
| Dulbecco' s Modifiye Kartal' s Orta - düşük glikoz | Sigma | D5546 | |
| Tüy tek kullanımlık neşter (No. 10) | Tüy | 02.001.30.010 | |
| fetal sığır serumu (FBS) | Sigma | F7524 | |
| HEPES sodyum tuzu çözeltisi (1 M) | Sigma | H3662 | |
| Ters faz kontrast mikroskobu (AFM ile entegre) | AxioObserver D1, Carl Zeiss Mikroskopi, Jena, Almanya | L201306_ 03 | |
| laboratuvar çantaları | Marka | 759705 | |
| Leibovitz'in l-glutamin içermeyen L-15 ortamı | Merck | F1315 | |
| Leibovitz'in L-glutamin içermeyen L-15 ortamı | (Merck KGaA, Darmstadt, Almanya) | F1315 | |
| L-glutamin | Lonza BE 17-605C1 | 200 mM | |
| LIVE/DEADTM Canlılık/Sitotoksisite Kiti | Bu kitten Invitrogen by Thermo Fisher Scientific | L3224 | Calcein ve EthD-1 kullanılır. |
| Mikroskop yazılımı: Zen 2.6 | Zeiss | ||
| Mikroskop: AxioVertA.1 | Zeiss | ||
| Nelaton-Kateter dişi | Bıçakçılar | 19512051 | |
| Penisilin-Streptomisin | Gibco | 15140-122 | 10000 U/ml Penisilin 10000 &mikro; g/ml Streptomisin |
| Bruker | ile ilişkili Petri bulaşık ısıtıcısı | T-05-0117 | |
| ile ilişkili Petri bulaşık ısıtıcısı | , Berlin, Almanya | T-05-0117 | |
| Fosfat tamponlu salin (PBS) | Gibco | 10010-015 | |
| İstatistiksel Yazılım: SPSS Statistics 22 | IBM | ||
| Steril Petri kabı - CellStar | Greiner BioOne | 664160 | |
| Doku kültürü kapları | TPP AG | TPP93040 | |
| Doku kültürü kapları | TPP Techno Plastic Products AG, Trasadingen, İsviçre | TPP93040 | |
| Tripan Mavisi %0,4 %0,85 NaCl | Lonza | 17-942E | |
| Tripsin-EDTA çözeltisi | Sigma | T3924 | |
| Su Jeti: ERBEJET2 cihazı | Erbe Elektromedizin GmbH | ||
| Williams Sistoskopik Enjeksiyon İğnesi Cook | Medical | G14220 | 23G, 5.0 Fr, 35 cm |
Kaynaklar
- Milsom, I., et al. Global prevalence and economic burden of urgency urinary incontinence: a systematic review. European Urology. 65 (1), 79-95 (2014).
- Lee, J. Y., et al.
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
