Islatılmış Boncuk Tahlili Kullanılarak Tavuk Embriyogenezi Sırasında Hücre Farklılaşması, Morfogenez ve Desenleme Analizi

Summary

Islatılmış boncuk testi, hücre farklılaşmasının ve morfogenezinin düzenlenmesini incelemek için herhangi bir gelişimsel zaman noktasında test reaktifinin hedeflenmiş olarak verilmesini içerir. Üç farklı tipte ıslatılmış boncuk hazırlamak ve bunları bir tavuk embriyosunun ara rakamlarına implante etmek için herhangi bir deneysel hayvan modeline uygulanabilir ayrıntılı bir protokol sunulmaktadır.

Abstract

Embriyonik gelişim sırasında, şaşırtıcı bir somatik hücre, doku ve organ çeşitliliği oluşturmak için hücre farklılaşmasını düzenleyen çok sayıda genetik program aktive edilir. Bu genetik programların kesin aktivasyonu, hücre kaderini farklı eşiklerde yönlendiren difüzyon molekülleri olan morfojenler tarafından düzenlenir. Genetik aktivasyonun morfogenezi nasıl koordine ettiğini anlamak, gelişim sırasında morfojenler tarafından tetiklenen yerel etkileşimlerin incelenmesini gerektirir. Proteinlere batırılmış boncukların veya embriyonun farklı bölgelerine implante edilmiş ilaçların kullanılması, belirli moleküllerin rakamların ve diğer gelişimsel süreçlerin oluşturulmasındaki rolünün incelenmesini sağlar. Bu deneysel teknik, hücre indüksiyonunun kontrolü, hücre kaderi ve desen oluşumu hakkında bilgi sağlar. Bu nedenle, bu ıslatılmış boncuk testi, diğer embriyonik modellere uygulanabilir son derece güçlü ve değerli bir deneysel araçtır.

Introduction

Embriyonik gelişim sırasında gen ekspresyonunu kontrol eden moleküler mekanizmalardaki atılımlar, hücre kaderinin nasıl belirlendiğini anlamamızı sağlamıştır. Farklı hücre soylarına bağlılık, hücreler transkripsiyon faktörlerinin moleküler ekspresyonuna başladığında ortaya çıkar¹. Bu ifade paterni uzay ve zamanda oldukça koordine edilir ve böylece hücrelerin, dokuların ve organların şekillendirilmesini, konumlandırılmasını ve modellenmesini yönlendirir ^1,2,3,4,5. Embriyonik indüksiyo....

Protocol

Bu araştırma, Instituto de Investigaciones Biomédicas, Universidad Nacional Autónoma de México'nun (UNAM, Mexico City, Meksika) Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı için Kurumsal İnceleme Kurulu tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır.

1. Yumurta inkübasyonu ve embriyo evrelemesi

NOT: Döllenmiş tavuk yumurtaları yerel çiftliklerden elde edilebilir. Döllenmiş Beyaz Leghorn tavuk yumurtası en yaygın olarak kullanılır. Taze döllenmiş tavuk yumurtalarını kuluçkadan önce 1 haftaya kadar 15 ° C'de saklayın.

1. Döllenmiş tavuk yumurtalarını, nemlendirilmiş bir inkübatörde 38 ° C'de....

Results

Embriyonik civciv uzuvlarındaki hücre davranışını değerlendirmek için ıslatılmış boncukların kullanılması
Bu tahlilin etkinliğini sağlamak için, boncuk tutarlı ve kesin olarak doğru yere yerleştirilmelidir; bu durumda, apikal ektodermal sırt AER'nin altındaki üçüncü interdigitin distal-en büyüğü (Şekil 1A). Bu konumlandırma, söz konusu molekülün interdigital doku boyunca eşit olarak yayılmasına izin verir. Dahası, AER'nin altındaki bölge, tedaviye kolayca yanıt veren fark.......

Discussion

Bu protokolde ayrıntılı olarak açıklanan deneysel aracın temel avantajı, belirli bir deneysel moleküle batırılmış boncuklara maruz kalma süresini ve yerini kontrol edebilmektir. Doğru konumlandırmayı hassas gelişimsel zamanlama ile birleştirmek, hücre farklılaşma süreçlerini incelemek için muazzam olanaklar sağlar. Bu deneylerin farklılaşmamış dokuda yapılması, hücresel soydaki ilk önemli olayların araştırılmasını sağlar. Örneğin, embriyonik uzuvların interdigital dokusuna TGFß ile ıslatılmış bir boncuk yerleştirmek 28 H.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Affi-Jel Mavi Jel boncuk	Bio-Rad	153-7302
AG1-X2 boncuk	Bio-Rad	1400123
Yumurta kuluçka makinesi	Incumatic de Mexico	Incumatic 1000
İnce cerrahi forseps	Güzel Bilim Araçları	9115-10
Heparin Sefaroz boncuk	Abcam	ab193268
Petri kabı	Yuva
Stereomikroskop	Zeiss	Stemi DV4
Bant	NA	NA
Tungsten iğne	GoodFellow	E74-15096/01