Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.

Yöntem makalesi

B Grubu Streptokok (GBS) Tarafından Tetiklenen Korioamniyonitin Klinik Öncesi Hayvan Modelinin C-bölümü

1.2K görüntülenme

DOI:

10.3791/63221

29 Aralık 2021

* These authors contributed equally

Bu makalede

Özet

Bu protokolün amacı, Grup B Streptokok (GBS) ile indüklenen koryoamniyonitin klinik öncesi bir hayvan modelini tanımlamaktır. Çalışma, mekanik süreçleri, gelişimsel bozukluklarla potansiyel nedensel bağlantıları araştırmak ve son olarak translasyonel anti-inflamatuar plasenta ve nöro-koruyucu tedaviler geliştirmek için tasarlanmıştır.

Özet

Grup B Streptokok (GBS), insan hamileliği sırasında izole edilen en yaygın bakterilerden biridir. Koryoamniyonit olarak adlandırılan plasenta enfeksiyonu / iltihabının önde gelen bir nedenidir. Koryoamniyonit, gelişmekte olan fetüsü yüksek organ yaralanmaları, perinatal morbidite ve mortalite riskinin yanı sıra yaşam boyu nörodavranışsal bozukluklar ve diğer nörolojik olmayan gelişimsel sorunlara maruz bırakır. Maternal ve fetal dokulardan GBS izolatlarının en sık görülen iki alt tipi Ia (%13-%23) ve III (%25-%53) serotipleridir. Laboratuvarımız, gelişmekte olan fetüsün merkezi sinir sistemi üzerindeki müteakip etkilerini incelemek ve altta yatan mekanik yönleri anlamak için GBS'nin neden olduğu koryoamniyonitin bir sıçan modelini geliştirdi ve karakterize etti. Bu makale, insanlarda GBS'nin neden olduğu koryoamniyonitin ayırt edici özelliğini yakından yeniden üreten klinik öncesi sıçan modelinin tasarımını ve kullanımlarını sunmaktadır. Bu makale, bilim insanlarının deney tasarımını yeniden üretmelerine yardımcı olmanın yanı sıra sorun giderme örnekleri aracılığıyla destek sağlamayı amaçlamaktadır. Mevcut model, koryoamniyonitten kaynaklanan birçok gelişimsel bozuklukta çözülmemiş olan nedenleri, mekanizmaları ve yeni terapötik yolları ortaya çıkararak potansiyel keşiflere de katkıda bulunabilir. Ayrıca, bu modelin kullanımı, örneğin retina, bağırsak, akciğer ve böbreği etkileyen perinatal nörolojik olmayan yaygın ve ciddi morbiditelerin çalışmalarına genişletilebilir. Bu araştırmanın temel ilgi alanı, serebral palsi (SP), dikkat eksikliği hiperaktivite bozukluğu (DEHB) ve otizm spektrum bozukluğu (OSB) gibi GBS'ye bağlı fetal nörogelişimsel bozukluklar alanındadır. Bu modeli destekleyen gerekçe bu makalede sunulmuş, ardından prosedürler ve sonuçlar verilmiştir.

Giriş

Maternal immün aktivasyon (MIA), döllerde erken doğum, fetal ölüm ve yaşam boyu bilişsel ve davranışsal bozukluklar için en kritik bağımsız risk faktörlerinden biri olarak tanımlanmıştır 1,2,3,4. Gebelik inflamasyonunun plasental ve gelişimsel sonuçlar üzerindeki rolü ile ilgili mevcut preklinik araştırmaların çoğu, E. coli'den lipopolisakkarit (LPS) ve viral çift sarmallı RNA'nın sentetik analogu olan poliinosinik: polisitidlik asit (Poli[I: C]) gibi viral enfeksiyonları taklit eden patojen bileşen....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

Tüm deneyler McGill Üniversitesi Sağlık Merkezi Araştırma Enstitüsü (RI-MUHC) tarafından onaylandı. Tüm deneyler Kanada Hayvan Bakımı Konseyi'ne göre yapıldı.

1. Hamile Lewis fareleri

  1. Lewis sıçanlarını gebelik gününde (G) 14 ticari kaynaklardan elde edin. Onları uygun bir hayvan tesisinde (RI-MUHC hayvan tesisi) 20-23 ° C'de 12 saatlik aydınlık / karanlık döngüsü ile kontrollü bir ortamda barındırın ve su ve yiyeceğe ad libitum17.
  2. G14'ten (yani varış günü) G22'ye (yani sezaryen günü) kadar herhangi bir hastalık davranışını tespit etmek ....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

GBS'nin IP aşılaması plasenta enfeksiyonu ile sonuçlandı
İmmünohistokimya (IHC) (GBS serotip Ia'yı hedef alan poliklonal antikorlar kullanılarak) boyanması, GBS enfeksiyonunun plasentanın desidual kompartmanına ulaştığını gösterdi. Enfeksiyon ayrıca desiduadan labirente, koryonik plakaya ve bazı durumlarda fetüslere yayılır ve fetal ölüme yol açar (GBS'ye maruz kalanlarda 5,8 ± 0,8 vs. Kontrol (CTL) yavrularında 9,3 ± 0,6 yavru)18. Bu nedenle, GBS'ye maruz kalan fetüsler arasın.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

Protokoldeki kritik adımlar
Protokolün birkaç adımı kritiktir ve bazı kalite kontrolleri gerektirir. Örneğin, GBS stoğunun diğer patojenler tarafından kontaminasyon riski vardır. Bu, BHI agar üzerindeki koloni yönü (örneğin, boyut, şekil, renk), β-hemolitik GBS dozunun Columbia kan agarında% 5 koyun kanı ortamı ve GBS taraması için seçici bir kromojenik ortam olan CHROMID Strepto B agar üzerinde çift olarak kaplanması gibi uygun GBS mikrobiyal tanımlama tekniği kullan.......

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

Yazarların herhangi bir finansal çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

Bu çalışma, McGill Üniversitesi Sağlık Merkezi (RI-MUHC) Araştırma Enstitüsü, Kanada Sağlık Araştırmaları Enstitüleri (CIHR) tarafından desteklenmiştir. Bu çalışma, aşağıdaki finansman kuruluşları, kurumları ve vakıfları tarafından mümkün kılınmıştır: Kanada Sağlık Araştırmaları Enstitüsü (CIHR), Yıldızlar Vakfı, Fonds de Recherche Québec-Sciences (FRQS), McGill Üniversitesi ve Sherbrooke Üniversitesi. GBS'nin cömert hediyeleri için Fransa Denis Diderot Üniversitesi'nden (Paris VII) Dr. Claire Poyart'a ve Kanada Montréal Üniversitesi'nden Dr. Mariela Segura'ya çok teşekkürler.

....

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
5 mL steril tüpBD Biosciences
50 ml falcon tüpleriThermo Fisher339652
Bıçak veya neşterBD Medical371716
Beyin Kalp İnfüzyonu Etsuyu kriteri (Hardy teşhis)C5141
CHROMID Strepto B agar plakasıBioMérieux, Saint-Laurent43461
Columbia kan agar %5 koyun kanı ortamı ileThermo ScientificR01215
İleri astar5' - TAC AGC CTG AGG ACA TAT TA3'Sigma
İnsülin şırıngasıBecton, Dickinson ve Co(BD)324702
Lewis sıçanlarıCharles Nehri Laboratuvarları
MetilbutanSigma AldrichM32631
Microtainer kan alma tüpleriBecton, Dickinson ve Co(BD)365965
Ters astar5' - GCA CTT TAA CCC TTC GAT GA -3'Sigma
Serolojik Pipetler 1 MLThermo Fisher170353N
Serolojik Pipetler 10 MLThermo Fisher170356N
Serolojik Pipetler 25 MLThermo Fisher170357N
Serolojik Pipetler 5 MLThermo Fisher170355N
Superfrost Plus Mikro Slayt, PremiumVWRCA48311-703

Kaynaklar

  1. Hui, C. W., et al. Prenatal immune challenge in mice leads to partly sex-dependent behavioral, microglial, and molecular abnormalities associated with schizophrenia. Frontiers in Molecular Neuroscience. 11, 13(2018).
  2. Costa, A., et al.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Etiketler

Koryoamniyonit ModeliPlasental EnfeksiyonFetal NörogelişimSıçan ModeliPerinatal MorbiditeSerotip III GBSFetal Organ HasarıNörodavranışsal Bozukluklar

Bu makale yayımlandı

Video yakında