Yöntem makalesi

Entomopatojenik mantarları toprak örneklerinden izole etme yöntemlerinin karşılaştırılması

DOI:

10.3791/63353

⸱

6 Ocak 2022

 ,  ,  ,  ,  , 
1Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias, Instituto de Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, 2Laboratório de Taxonomia Bioquímica e Bioprospecção de Fungos/Coleção de Cultura de Fungos Filamentosos, Instituto Oswaldo Cruz, Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ), 3Departamento de Parasitologia Animal, Instituto de Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro

Bu makalede

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Entomopatojenik mantar kolonileri, Tenebrio yemi, Galleria yemi ve seçici yapay ortam, yani kloramfenikol, tiyabendazol ve sikloheksimid (CTC ortamı) ile desteklenmiş maya özü ile zenginleştirilmiş patates dekstroz agarı kullanılarak tropikal toprak örneklerinden izole edilir.

Özet

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışmanın amacı, entomopatojenik mantarları (EPF) toprak örneklerinden izole etmek için böcek yemlerinin yapay seçici ortama karşı kullanılmasının etkinliğini karşılaştırmaktır. Toprak, özellikle eklembacaklı zararlılarını düzenleyebilen Metarhizium ve Beauveria cinslerine ait EPF de dahil olmak üzere mikroorganizmalar için zengin bir yaşam alanıdır. Mantarlara dayalı biyolojik ürünler, esas olarak tarımsal eklembacaklı haşere kontrolü için piyasada mevcuttur. Bununla birlikte, yüksek endemik biyoçeşitliliğe rağmen, dünya çapında ticari biyoürünlerde sadece birkaç suş kullanılmaktadır. Bu çalışmada, kloramfenikol, tiyabendazol ve sikloheksimid (CTC ortamı) ile desteklenmiş maya ekstresi ile zenginleştirilmiş patates dekstroz agar üzerinde 524 toprak örneği kültüre alınmıştır. Mantar kolonilerinin büyümesi 3 hafta boyunca gözlendi. Tüm Metarhizium ve Beauveria EPF, cins düzeyinde morfolojik olarak tanımlanmıştır. Ek olarak, bazı izolatlar tür düzeyinde moleküler olarak tanımlanmıştır. Bu 524 toprak örneğinden yirmi dördü, böcek yemi yöntemi (Galleria mellonella ve Tenebrio molitor) kullanılarak EPF oluşumu için de araştırılmıştır. 524 toprak örneğinden toplam 51 EPF suşu (41 Metarhizium spp. ve 10 Beauveria spp.) izole edildi. Tüm mantar suşları ya ekili alanlardan ya da otlaklardan izole edildi. Karşılaştırma için seçilen 24 numunenin% 91.7'si Galleria yemi kullanan EPF, Tenebrio yemi kullanan% 62.5 ve CTC kullanarak% 41.7'si pozitifti. Sonuçlarımız, EPF'yi topraktan izole etmek için böcek yemlerinin kullanılmasının, CTC ortamını kullanmaktan daha verimli olduğunu göstermiştir. EPF'nin tanımlanması ve korunmasına ek olarak izolasyon yöntemlerinin karşılaştırılması, biyolojik çeşitlilik hakkındaki bilgiler üzerinde olumlu bir etkiye sahiptir. EPF koleksiyonunun iyileştirilmesi bilimsel gelişmeyi ve teknolojik yeniliği desteklemektedir.

Giriş

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Toprak, entomopatojenik mantarlar (EPF) dahil olmak üzere çeşitli mikroorganizmaların kaynağıdır. Bu özel mantar grubu, eklembacaklı konakçıları, özellikle de böceklerikolonileştirme ve sıklıkla öldürme yetenekleriyle tanınır 1. İzolasyon, karakterizasyon, virülan suşların seçimi ve tescilden sonra, EPF, ekonomik alaka düzeylerini destekleyen eklembacaklı-haşere kontrolü için seri olarak üretilir2. Buna göre, EPF'nin izolasyonu, bir biyopestisit gelişiminin ilk adımı olarak kabul edilir. Beauveria spp. (Hypocreales: Cordycipitaceae) ve Metarhizium spp. (Hypocreales: Clavicipitaceae) eklembacaklı-haşere kontrolü için kullanılan en yaygın mantarlardır3. EPF topraktan, görünür mikozlu eklembacaklılardan, kolonize bitkilerden ve bitki rizosferinden başarıyla izole edilmiştir 4,5.

EPF'nin izolasyonu, bu belirli grubun çeşitliliğini, dağılımını ve ekolojisini incelemek için de yararlı olabilir. Son literatür, EPF'nin bitki büyümesini iyileştirmekapasiteleri 4, topraktan toksik kirleticileri uzaklaştırma ve tıpta kullanılma kapasiteleri gibi EPF'nin birkaç geleneksel olmayan uygulamasına atıfta bulunarak EPF kullanımının hafife alındığını bildirmiştir6. Bu çalışma, böcek yemleri kullanarak EPF'yi topraktan izole etmenin verimliliğini yapay kültür ortamı 7,8,9 ile karşılaştırmayı amaçlamaktadır. Galleria mellonella L.'nin (Lepidoptera: Phyralidae) EPF izolasyonu bağlamında bir böcek yemi olarak kullanılması iyi kabul edilmiştir. Bu larvalar dünya çapında bilimsel topluluk tarafından konakçı-patojen etkileşimlerini incelemek için deneysel bir model olarak kullanılmaktadır10,11. Tenebrio molitor L. (Coleoptera: Tenebrionidae) larvası, virülans içeren çalışmalar ve EPF'nin izolasyonu için başka bir böcek modeli olarak kabul edilir, çünkü bu böceğin laboratuvarda düşük maliyetle nadir görülmesi kolaydır 7,12.

Toprak13,14 dahil olmak üzere substratlarındaki EPF'yi tespit etmek ve ölçmek için çeşitli PCR teknikleri kullanmak gibi kültürden bağımsız yöntemler uygulanabilir. Bununla birlikte, bu mantar kolonilerini uygun şekilde izole etmek için, substratları seçici bir yapay ortam9 üzerine kültürlenmelidir veya örneklerde bulunan mantarlar hassas böcekler kullanılarak yemlenebilir15. Bir yandan, CTC, kloramfenikol, tiyabendazol ve sikloheksimid ile desteklenmiş maya özü ile zenginleştirilmiş patates dekstroz agarından oluşan dodin içermeyen yapay bir ortamdır. Bu ortam Fernandes ve ark. tarafından geliştirilmiştir. 9 Doğal olarak oluşan Beauveria spp. ve Metarhizium spp.'nin topraktan geri kazanımını en üst düzeye çıkarmak. Öte yandan, G. mellonella ve T. molitor larvaları, topraktan EPF izolatları elde etmek için yem olarak başarıyla kullanılabilir. Bununla birlikte, Sharma ve ark.15'e göre, daha az sayıda çalışma, bu iki yem böceğinin eşzamanlı kullanımını ve karşılaştırmasını bildirmiştir. Portekiz üzüm bağları toprakları, Metarhizium robertsii'nin (Metscn.) önemli geri kazanımlarını sergiledi. T. kullanarak Sorokin molitör larvaları G. mellonella larvalarına kıyasla; Buna karşılık, Beauveria bassiana (Bals. -Criv.) Vuill izolasyonu, G. mellonella yemleri15'in kullanımıyla bağlantılıydı. Bu nedenle, hangi EPF izolasyon yönteminin kullanılacağına dair karar (örneğin, G. mellonella-yem, T. molitor-yem veya CTC ortamı) çalışmanın amacına ve laboratuvar altyapısına göre düşünülmelidir. Bu çalışmanın amacı, EPF'yi toprak örneklerinden izole etmek için böcek yemlerinin yapay seçici ortama karşı kullanılmasının etkinliğini karşılaştırmaktır.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Protokol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma Brezilya genetik mirasına eriştiğinden, araştırma AA47CB6 kodu altında Ulusal Genetik Miras ve İlişkili Geleneksel Bilgi Yönetimi Sistemi'ne (Sisgen) kaydedildi.

1. Toprak örneklemesi

  1. Küçük bir kürek kullanarak 10 cm derinliğe kadar 800 g toprak (tesadüfi ikincil bitki kökleri olsun veya olmasın) toplayın. Deneyin başlangıcına kadar oda sıcaklığında polipropilen torbalarda saklayın.
    NOT: EPF'nin rizosfer yeterliliğine sahip olduğu bildirildiği için küçük kökler de toplanabilir. Numunelerin işlenmesi ne kadar hızlı olursa, o kadar iyi olur, çünkü mantar sporları zamanla daha az uygulanabilir olabilir. Bu çalışmada, örnekler toplandıktan en fazla 7 gün sonra analiz edilmiştir.
  2. Toplanan örneklerin enlem ve boylamdaki konumunu belirlemek ve toplanan alanı toprak türüne göre sınıflandırmak için bir GPS kullanın (örneğin, otlaklar, doğal yağmur ormanları, göl kıyıları veya ekim alanları).

2. Entomopatojenik mantarlar için izolasyon yöntemleri

  1. CTC seçici yapay ortam kullanılarak izolasyon.
    1. CTC ortamını hazırlamak için [0.5 g / L kloramfenikol, 0.001 g / L tiyabendazol ve 0.25 g / L sikloheksimid9 ile desteklenmiş patates dekstroz agar artı maya ekstresi (PDAY)], tüm reaktifleri ayrı ayrı tartın, damıtılmış suda karıştırın ve ortamı otoklavda sterilize edin. Bir biyogüvenlik kabininde, ortamın 23 mL'sini 60 mm x 15 mm Petri plakalara tabaklayın.
      DİKKAT: CTC reaktiflerini tararken bir laboratuvar önlüğü, maske, eldiven ve gözlük kullanın çünkü sikloheksimid ve kloramfenikol toksiktir.
    2. Her toprak örneğinin 0,35 ± 0,05 g ağırlığında (köklü veya köksüz) ve 1,5 mL'lik bir mikrotüpe yerleştirin.
    3. Bir biyogüvenlik kabininde, 30 s boyunca toprak ve vorteks içeren mikrotüpe 1 mL steril% 0.01 (hacim / hacim) polioksietilen sorbitan monooleat sulu süspansiyon ekleyin.
    4. Süpernatantın 50 μL'sini çıkarın ve CTC ortamına sahip Petri plakalarının ortasına pipetleyin. Steril bir Drigalski spatula (6 mm çapında) kullanarak süspansiyonları ortamın yüzeyine homojen olarak dağıtın.
      NOT: Her toprak örneği için en az üç replika hazırlanmalıdır.
    5. Plakaları iklim odalarında (25 ± 1 ° C, bağıl nemi ≥% 80) karanlıkta inkübe edin ve 7, 14 ve 21 günlük inkübasyondan sonra mantar kolonilerinin büyümesini gözlemleyin.
    6. EPF arayan mantar kolonilerinin makromorfolojisini ve mikromorfolojisini gözlemleyin. EPF kültürlerini, saf kültürler elde edilene kadar patates dekstroz agar ortamına artı% 0.05 kloramfenikol (PDAC) aktarın.
      NOT: EPF kolonilerinin tanımlanması için adım 3'te aşağıda sunulan açıklama anahtarlarını kullanın.
  2. Böcek yemleri kullanarak izolasyon
    1. Yüzeyden dezenfekte edilmiş G. mellonella ve T. molitor geç evre larvaları kullanın. Larvaları sterilizasyon için 1 dakika boyunca% 0.5 sodyum hipoklorite batırın. Larvaları steril su kullanarak iki kez yıkayın.
      NOT: Bu çalışmada dördüncü evreden G. mellonella larvaları kullanılmıştır. T. molitor larva evreleri standartlaştırılmamıştır.
    2. Yemleri monte etmek için plastik kaplar kullanın. Her plastik tencereye 250 g toplanan toprak ekleyin (98 mm genişlik x 47 mm yükseklik x 142 mm uzunluk). Her türün 15 larvasını ayırın (T. molitor ve G. mellonella) ve plastik tencere başına beş larva biriktirin. Saksıları 25 ± 1 °C'de ve bağıl nemde karanlıkta% 80 ≥ saklayın.
      NOT: Havalandırmaya izin vermek için tencere kapaklarına 10 küçük delik (2 mm çapında) açın. Delikleri delmek için keskin bir ısıtılmış demir cihaz kullanılabilir.
    3. Larvaların toprakla maksimum temasına izin vermek için toprağı her gün homojenize edin.
      NOT: Larvaların mantar enfeksiyonunu desteklemek için nem önemlidir. Topraktaki nemi korumak için, gerektiğinde toprak yüzeyine steril damıtılmış su püskürtün. Toprak örneğini suya batırmayın.
    4. Ölü böcekleri arayan saksıları günlük olarak analiz edin.
      NOT: Böceklerin enfekte olmadığından emin olmak için omurgasız patolojik belirtiler için kolonide kalan larvaları günlük olarak gözlemleyin. Alternatif olarak, böcek larvalarının sağlık durumunu kontrol etmek için steril topraklı kontrol saksıları çalışmaya dahil edilebilir.
    5. Ölü böcekleri çıkarın ve yüzeysel olarak 1 dakika boyunca% 0.5 sodyum hipoklorit ile sterilize edin. Entomopatojenik mantarların (mikoz) dışsallaşmasını desteklemek için steril böcekleri nemli bir odaya (bağıl nem ≥% 80) 7 gün boyunca 25 ± 1 ° C'de yerleştirin.
    6. Mikoz üzerine, konidiayı böcek yüzeyinden toplayın. Konidiayı stereoskopik mikroskop altında PDAC ortamına yerleştirmek için mikrobiyolojik bir döngü kullanın. Alternatif olarak, enfekte olmuş larvaların tamamını PDAC ortamına yerleştirin. Kültür plakalarını bir iklim odasında 25 ± 1 ° C'de ve bağıl nem% 80'≥ inkübe edin.
    7. EPF'nin kimliğini doğrulamak için plakalardaki mantar kolonilerinin makromorfolojisini ve mikromorfolojisini gözlemleyin. Saf mantar kolonileri elde edilene kadar PDAC üzerinde kültürlemeyi tekrarlayın.
      NOT: EPF kolonilerinin tanımlanması için adım 3'te aşağıda sunulan açıklama anahtarlarını kullanın.

3. EPF'nin tanımlanması (Metarhizium spp. ve Beauveria spp.)

  1. Plakalardaki mantar kültürlerinin makromorfolojik özelliklerini (yani, kolonilerin yüzeyi ve tersi, şekilleri, kenarları, büyüme hızları, renkleri, dokuları, yayılabilir pigmentleri, eksüdaları ve hava konidiaları) 14 gün sonra 25 ± 1 ° C'de ve bağıl nem% 80'≥ analiz edin.
  2. Hava konidiasını 25 ± 1 °C'de 3 gün boyunca slayt kültürlerine (mikrokültür tekniği)16 aktarın ve bağıl nem% 80'≥ ve mikroskobik özellikleri (yani, konidia, konidioforların, şeklin ve konidia'nın boyutu) gözlemlemek için laktofenol mavisi ile lekeleyin17,18,19,20.
  3. EPF tanımlamasını doğrulamak için optik mikroskop kullanarak mikroskobik mantar yapılarını 400x'te gözlemleyin.
    NOT: EPF için morfolojik anahtarlar Bischoff ve ark., Rehner ve ark., Seifert ve ark. ve Humber17,18,19,20 tarafından hazırlanan raporlarda açıklanmıştır. Mantar kolonilerinin makro ve mikromorfolojisi, filamentli mantarları cins düzeyinde tanımlamak için kullanılan en sık kriterlerdir. EPF'nin cinsine bağlı olarak, bu morfolojik özellikler değişecektir. Humber20, fungal entomopatojenlerin ana cinsleri için bir tanımlama anahtarı sunar. Metarhizium spp. kolonileri, örneğin, genellikle dairesel, tozludur, yeşilin değişen tonlarını sergiler ve eksüda sunabilir. Mikroskobik olarak, bu koloniler geniş dallı, yoğun iç içe geçmiş konidioforlar üzerinde apikal kompakt bir kızlık zarı oluşturan konidiojenik hücrelere ve sütunlar veya plaka benzeri kütleler oluşturan paralel zincirlerde silindirik ila elipsoid konidiaya sahiptir. Beauveria spp. kolonileri genellikle beyaz, toz veya pamuk benzeridir. Apikal olarak zikzak yönde uzanan genişlemiş bazal kısmı olan konidiojen hücreler sergilerler. Beauveria konidioforları, küre şeklindeki konidiaların yoğun kümelerini oluşturur. EPF'nin tür düzeyinde tanımlanması için moleküler analizlere ihtiyaç vardır.
  4. Tür düzeyinde taksonomik tanımlama için izolatlar üzerinde moleküler analizler yapın. Bu çalışmada izole edilen EPF suşları için, yani Metarhizium spp. ve Beauveria spp., Bischoff ve ark.17 ve Rehner ve ark.18'in raporlarına dayanarak moleküler analizler gerçekleştirin.
  5. İzolatların EPF olduğunu doğruladıktan sonra, izolatları bir mantar kültürleri koleksiyonuna koyun. Bu çalışmada, izolatlar, Rio de Janeiro Federal Kırsal Üniversitesi'ndeki Mikrobiyal Kontrol Laboratuvarı'ndan (LCM) toplanan entomopatojenik mantar kültürlerinde biriktirilmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Sonuçlar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Otlaklardan toplam 524 toprak örneği toplanmıştır: Brezilya'nın Rio de Janeiro Eyaleti'nde 2015 ve 2018 yılları arasında hayvancılık merası (165 örnek), yerli tropikal orman (90 örnek), göl kenarı (42 örnek) ve ekili / ekili / ekili arazi (227 örnek). EPF için pozitif olan örneklerin coğrafi koordinatlarının ayrıntıları Ek Tablo 1'de verilmiştir.

524 toprak örneğinden 500 örnek sadece CTC ortamı kullanılarak analiz edildi ve 24 numune üç izolasyon formu (Galleria-yem,...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Tartışma

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Doğal ve tarımsal toprak habitatları, EPF22 için tipik ortamlar ve mükemmel bir doğal rezervuardır. Bu çalışmada, böcek yemlerine karşı seçici ortam kullanan iki EPF izolasyon yöntemi ele alınmıştır. İzolasyon için ilk adım, toprak örneklerinin toplanmasıdır. Toprak örneklerinin uygun şekilde depolanması ve tanımlanması çok önemlidir. Enlem, boylam, toprak tipi ve biyom hakkında bilgi, epidemiyolojik, modelleme ve jeo-uzamsal konuları içeren çalışmalar için gereklidir23,24<...

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Açıklamalar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Yazarların çıkar çatışması yoktur.

Teşekkürler

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Bu çalışma kısmen Brezilya'dan Coordenacão de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES), finans kodu 001, Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro (FAPERJ) (proje numarası E-26/010.001993/2015) ve Brezilya'dan Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) tarafından finanse edilmiştir.

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Malzemeler

Bu makalede kullanılan malzemelerin listesi
AdŞirketKatalog numarasıYorumlar
OtoklavPhoenix Luferco9451
Biyogüvenlik kabiniAirstream ESCOAC2-4E3
KloramfenikolSigma-AldrichC0378
İklim odalarıEletrolabEL212/3
LamelRBR3871
SikloheksimidSigma-AldrichC7698
Drigalski spatulaMarienfeld1800024
GPS uygulamasıCoğrafi konum uygulaması2.1.2005
Laktofenol mavisi çözeltisiSigma-Aldrich61335
MikroskopZeiss Axio star plus1169 149
Mikroskop kamerasıZeiss Axiocam 105 renk426555-0000-000
Mikroskop yazılımıZen lite Zeiss 3.0
Mikroskop lamıOlenk5-7105-1
MikrotüpMARKAZ336769-1PAK
Petri plakalarıKasviK30-6015
Pipet ucuVattenVT-230-200C/VT-230-1000C
PippetteHTL - LabmateproLMP 200 / LMP 1000
Plastik kaplarPrafesta descartá veis8314
Polipropilen torbalarExtrusa38034273/5561
Patates dekstroz agarKasviK25-1022
Prizma yazılımı 9.1.2Grafik Pedi
KürekTramontina77907009
Tenebrio mollitorSafariQP98DLZ36
ThiabendazoleSigma-AldrichT8904
Tween 80Vetec60REAVET003662
VorteksBiyokarıştırıcıQL-901
Maya özüKasviK25-1702

Kaynaklar

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Roberts, D. W., St. Leger, R. J. Metarhizium spp., cosmopolitan insect-pathogenic fungi: Mycological aspects. Advances in Applied Microbiology. 54, 1-70 (2004).
  2. do Nascimento Silva, J., et al. New cost-effective bioconversion process of palm kernel cake into bioinsecticides based on Beauveria bassiana and Isaria javanica. Applied Microbiology and Biotechnology. 102 (6), 2595-2606 (2018).
  3. Faria, M. R., Wraight, S. P. Mycoinsecticides and Mycoacaricides: A comprehensive list with worldwide coverage and international classification of formulation types. Biological Control. 43 (3), 237-256 (2007).
  4. Vega, F. V. The use of fungal entomopathogens as endophytes in biological control: a review. Applied Mycology. 110 (1), 4-30 (2018).
  5. Sharma, L., et al. Advances in entomopathogen isolation: A case of bacteria and fungi. Microorganisms. 9 (1), 1-28 (2021).
  6. Litwin, A., Nowak, M., Różalska, S. Entomopathogenic fungi: unconventional applications. Reviews in Environmental Science and Bio/Technology. 19, 23-42 (2020).
  7. Kim, J. C., et al. Tenebrio molitor-mediated entomopathogenic fungal library construction for pest management. Journal of Asia-Pacific Entomology. 21 (1), 196-204 (2018).
  8. Meyling, N., Eilenberg, J. Ocurrence and distribution of soil borne entomopathogenic fungi within a single organic agroecosystem. Agriculture, Ecosystems and Environment. 113 (1), 336-341 (2006).
  9. Fernandes, E. K. K., Keyser, C. A., Rangel, D. E. N., Foster, R. N., Roberts, D. W. CTC medium: A novel dodine-free selective medium for isolating entomopathogenic fungi, especially Metarhizium acridum, from soil. Biological Control. 54 (3), 197-205 (2010).
  10. Ortiz-Urquiza, A., Keyhani, N. O. Molecular genetics of Beuveria bassiana infection of insects. Advantages in Genetics. 94, 165-249 (2016).
  11. Pereira, M. F., Rossi, C. C., Silva, G. C., Rosa, J. N., Bazzolli, M. S. Galleria mellonella as infection model: an in depth look at why it works and practical considerations for successful application. Pathogens and Disease. 78 (8), (2020).
  12. Souza, P. C., et al. Tenebrio molitor (Coleoptera: Tenebrionidae) as an alternative host to study fungal infections. Journal of Microbiological Methods. 118, 182-186 (2015).
  13. Canfora, L., et al. Development of a method for detection and quantification of B. brongniartii and B. bassiana in soil. Scientific Reports. 6, 22933(2016).
  14. Garrido-Jurado, I., et al. Transient endophytic colonization of melon plants by entomopathogenic fungi after foliar application for the control of Bemisia tabaci Gennadius (Hemiptera: Aleyrodidae). Journal of Pest Science. 90, 319-330 (2016).
  15. Sharma, L., Oliveira, I., Torres, L., Marques, G. Entomopathogenic fungi in Portuguese vineyards soils: suggesting a 'Galleria-Tenebrio-bait method' as bait-insects Galleria and Tenebrio significantly underestimate the respective recoveries of Metarhizium (robertsii) and Beauveria (bassiana). MycoKeys. 38, 1-23 (2018).
  16. Riddell, R. W. Permanent stained mycological preparations obtained by slide culture. Mycologia. 42 (2), 265-270 (1950).
  17. Bischoff, J., Rehner, S. A., Humber, R. A. A multilocus phylogeny of the Metarhizium anisopliae lineage. Mycologia. 101 (4), 512-530 (2009).
  18. Rehner, S. A., et al. Phylogeny and systematics of the anamorphic, entomopathogenic genus Beauveria. Mycologia. 103 (5), 1055-1073 (2011).
  19. Seifert, K. A., Gams, W. Anamorphs of Clavicipitaceae, Cordycipitaceae and Ophiocordycipitaceae. The Genera of Hyphomycetes. CBS Biodiversity Series. CBS-KNAW Fungal Biodiversity Centre. Seifert, K. A., Morgan-Jones, G., Gams, W., Kendrick, B. 9, 903-906 (2011).
  20. Humber, R. A. Identification of entomopathogenic fungi. Manual of Techniques in Invertebrate Pathology., 2nd ed. Lacey, L. A. , Academic Press. Washington. 151-187 (2012).
  21. Mesquita, E., et al. Efficacy of a native isolate of the entomopathogenic fungus Metarhizium anisopliae against larval tick outbreaks under semifield conditions. BioControl. 65 (3), 353-362 (2020).
  22. St Leger, R. J. Studies on adaptations of Metarhizium anisopliae to life in the soil. Journal of Invertebrate Pathology. 98 (3), 271-276 (2008).
  23. Mar, T. T., Suwannarach, N., Lumyong, S. Isolation of entomopathogenic fungi from Nortern Thailand and their production in cereal grains. World Journal of Microbiology and Biotechnology. 28 (12), 3281-3291 (2012).
  24. Rocha, L. F. N., Inglis, P. W., Humber, R. A., Kipnis, A., Luz, C. Occurrence of Metarhizium spp. in central Brazilian soils. Journal of Basic Microbiology. 53 (3), 251-259 (2013).
  25. Quesada-Moraga, E., Navas-Cortés, J. A., Maranhao, E. A. A., Ortiz-Urquiza, A., Santiago-Álvarez, C. Factors affecting the occurrence and distribution of entomopathogenic fungi in natural and cultivated soils. Mycological Research. 111 (8), 947-966 (2007).
  26. Mora, M. A. E., Rouws, J. R. C., Fraga, M. E. Occurrence of entomopathogenic fungi in atlantic forest soils. Microbiology Discovery. 4 (1), 1-7 (2016).
  27. Goble, T. A., Dames, J. F., Hill, M. P., Moore, S. D.The effects of farming system, habitat type and bait type on the isolation of entomopathogenic fungi from citrus soils in the Eastern Cape Province, South Africa. BioControl. 55 (3), 399-412 (2010).
  28. Medo, J., Cagáň, L. Factors affecting the occurrence of entomopathogenic fungi in soils of Slovakia as revealed using two methods. Biological Control. 59 (2), 200-208 (2011).
  29. Chase, A. R., Osborne, L. S., Ferguson, V. M. Selective isolation of the entomopathogenic fungi Beauveria bassiana and Metarhizium anisopliae from an artificial potting medium. Florida Entomologist. 69, 285-292 (1986).
  30. Liu, Z. Y., Milner, R. J., McRae, C. F., Lutton, G. G. The use of dodine in selective media for the isolation of Metarhizium spp. from soil. Journal of Invertebrate Pathology. 62, 248-251 (1993).
  31. Rangel, D. E. N., Dettenmaier, S. J., Fernandes, E. K. K., Roberts, D. W. Susceptibility of Metarhizium spp. and other entomopathogenic fungi to dodine-based selective media. Biocontrol Science and Technology. 20 (4), 375-389 (2010).
  32. Keller, S., Kessler, P., Schweizer, C. Distribution of insect pathogenic soil fungi in Switzerland with special reference to Beauveria brongniartii and Metharhizium anisopliae. BioControl. 48 (3), 307-319 (2003).
  33. Enkerli, J., Widmer, F., Keller, S. Long-term field persistence of Beauveria brongniartii strains applied as biocontrol agents against European cockchafer larvae in Switzerland. Biological Control. 29 (1), 115-123 (2004).
  34. Imoulan, A., Alaoui, A., El Meziane, A. Natural occurrence of soil-borne entomopathogenic fungi in the Moroccan endemic forest of Argania spinosa and their pathogenicity to Ceratitis capitata. World Journal of Microbiology and Biotechnology. 27 (11), 2619-2628 (2011).
  35. Keyser, C. A., De Fine Licht, H. H., Steinwender, B. M., Meyling, N. V. Diversity within the entomopathogenic fungal species Metarhizium flavoviride associated with agricultural crops in Denmark. BMC Microbiology. 15 (1), 1-11 (2015).

Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.

Yeniden basım ve izinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya şekillerini yeniden kullanmak için izin iste

İzin iste

Etiketler

B cek Yemi Y ntemiYapay Se ici BesiyeriMetarhizium T rleriBeauveria T rleriCTC BesiyeriFungal zolasyonMorfolojik Tan mlamaBiyokontrol Ajanlar

İlgili makaleler